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具有极高热稳定性的β-(2,6)果聚糖蔗糖酶的挖掘、鉴定及应用
1
作者
张晓琦
徐炜
+3 位作者
倪大伟
张文立
光翠娥
沐万孟
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第4期57-68,共12页
挖掘具有高热稳定性的β-(2,6)果聚糖蔗糖酶(levansucrase,LS)并进行β-(2,6)果聚糖的高效合成。以分子动力学模拟的方式筛选出具有潜在高热稳定性的β-(2,6)果聚糖蔗糖酶。将目的酶在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行重组及...
挖掘具有高热稳定性的β-(2,6)果聚糖蔗糖酶(levansucrase,LS)并进行β-(2,6)果聚糖的高效合成。以分子动力学模拟的方式筛选出具有潜在高热稳定性的β-(2,6)果聚糖蔗糖酶。将目的酶在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行重组及诱导表达,并通过镍柱亲和层析进行纯化。在不同温度下进行保温实验以验证LS的热稳定性,并通过条件优化获得产物的高转化率。Cedi-LS在65℃时显示出最高活性,远高于已鉴定的其他LS。同时,在45℃下保温72 h,重组酶Cedi-LS能够保留90%以上的相对活性;在55℃下保温60 h,其保留活性仍可达到初始活性的60%以上,表现出优异的热稳定性。在反应过程中,Cedi-LS可同时生成低聚糖、低相对分子质量的β-(2,6)果聚糖和高相对分子质量的β-(2,6)果聚糖。当温度从65℃降至35℃时,Cedi-LS倾向于产生HMW-levan,其相对分子质量可达8.4×10^(6)。在pH 5.5和35℃的条件下,以质量分数30%的蔗糖为底物,加酶量为20μg/mL,蔗糖转化为β-(2,6)果聚糖的平衡转化率为41.4%。作者挖掘了一株具有高热稳定性的LS,其能够高效生产一系列具有不同相对分子质量的果聚糖。
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关键词
β-(2
6
)果聚糖蔗糖酶
热稳定性
β-(2
6
)果聚糖
产物特异性
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职称材料
题名
具有极高热稳定性的β-(2,6)果聚糖蔗糖酶的挖掘、鉴定及应用
1
作者
张晓琦
徐炜
倪大伟
张文立
光翠娥
沐万孟
机构
食品科学与技术国家重点实验室
江南大学食品安全国际合作联合实验室
出处
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第4期57-68,共12页
基金
国家自然科学基金项目(31922073)
江苏省自然科学基金项目(BK20210463)。
文摘
挖掘具有高热稳定性的β-(2,6)果聚糖蔗糖酶(levansucrase,LS)并进行β-(2,6)果聚糖的高效合成。以分子动力学模拟的方式筛选出具有潜在高热稳定性的β-(2,6)果聚糖蔗糖酶。将目的酶在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行重组及诱导表达,并通过镍柱亲和层析进行纯化。在不同温度下进行保温实验以验证LS的热稳定性,并通过条件优化获得产物的高转化率。Cedi-LS在65℃时显示出最高活性,远高于已鉴定的其他LS。同时,在45℃下保温72 h,重组酶Cedi-LS能够保留90%以上的相对活性;在55℃下保温60 h,其保留活性仍可达到初始活性的60%以上,表现出优异的热稳定性。在反应过程中,Cedi-LS可同时生成低聚糖、低相对分子质量的β-(2,6)果聚糖和高相对分子质量的β-(2,6)果聚糖。当温度从65℃降至35℃时,Cedi-LS倾向于产生HMW-levan,其相对分子质量可达8.4×10^(6)。在pH 5.5和35℃的条件下,以质量分数30%的蔗糖为底物,加酶量为20μg/mL,蔗糖转化为β-(2,6)果聚糖的平衡转化率为41.4%。作者挖掘了一株具有高热稳定性的LS,其能够高效生产一系列具有不同相对分子质量的果聚糖。
关键词
β-(2
6
)果聚糖蔗糖酶
热稳定性
β-(2
6
)果聚糖
产物特异性
Keywords
β-(2
6
)
levan
sucrase
thermostability
β-(2
6
)
levan
product specificity
分类号
Q814 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
具有极高热稳定性的β-(2,6)果聚糖蔗糖酶的挖掘、鉴定及应用
张晓琦
徐炜
倪大伟
张文立
光翠娥
沐万孟
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
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