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氯离子通道阻滞剂对人眼小梁细胞增生及凋亡的影响 被引量：1
1
作者 尹元 郑雅娟 +1 位作者 王霁雪 梁巍 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期12-16,共5页
背景氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-（3-苯丙胺）苯甲酸（NPPB）对家兔心肌细胞缺血-再灌注损伤时的细胞凋亡有促进作用，而小梁细胞上也存在C1C型氯离子通道及容积敏感性氯离子通道，但NPPB究竟会对小梁细胞的形态和功能产生什么影响尚不... 背景氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-（3-苯丙胺）苯甲酸（NPPB）对家兔心肌细胞缺血-再灌注损伤时的细胞凋亡有促进作用，而小梁细胞上也存在C1C型氯离子通道及容积敏感性氯离子通道，但NPPB究竟会对小梁细胞的形态和功能产生什么影响尚不清楚。目的探讨氯离子通道阻滞剂NPPB对人眼小梁细胞增生及细胞周期、细胞凋亡的影响。方法将处于对数生长期的永生株人眼小梁细胞进行培养并以1×10^6个／ml的密度接种于96孔培养板，将不同浓度（10、50、100μmol／L）的NPPB分别加入小梁细胞培养基中，通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各组小梁细胞的增生情况以吸光度（A）值表示；采用流式细胞术测定小梁细胞的细胞周期。将100mg／L5-氟尿嘧啶（5-Fu）加入培养的细胞中，而另-组培养的细胞中加入100mg／L5-FU＋100μmol／LNPPB，用AnnexinV—PI法检测各组小梁细胞的凋亡情况；罗丹明123法检测细胞线粒体膜电位（Adam），分别评估各浓度NPPB对培养的人小梁细胞生长和存活的影响。结果3种不同浓度的NPPB与小梁细胞共同孵育48h后4个组小梁细胞的增生率差异有统计学意义（F=7．230，P=0．006），50Izmol／L、100Fxmol／LNPPB作用后小梁细胞的A值明显低于10μmol／LNPPB组，50μmol／LNPPB组、100μmol／LNPPB组与空白对照组比较差异均有统计学意义（t=1．610，P=0．025；t=12．270，P=0．001）。小梁细胞培养基中加入NPPB48h后，G0／G1期的细胞比例增多，S期细胞比例减少，各细胞周期小梁细胞的比例与未加NPPB的组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。用5-FU作用24h及48h后，100mg／L5-Fu组和100mg／L5-FU＋100μmol／LNPPB组的细胞凋亡率均较其各自空白对照组增加（t24h=2．130，P=0．023；t48h=4．810，P=0．011）；100mg／L5-Fu＋100μmol／LNPPB组细胞凋亡率明显高于100mg／L5-Fu组，差异均有统计学意义（t 展开更多
关键词 氯离子通道阻滞剂 5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸 小梁细胞 凋亡 增生
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氯通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸在内皮素-1对体外培养牛角膜内皮细胞增殖中的影响
2
作者 胡维琨 谢二娟 +2 位作者 张虹 李贵刚 刘荣 《新乡医学院学报》 CAS 2010年第6期541-545,共5页
目的观察氯通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)在内皮素-1(ET-1)对体外培养牛角膜内皮细胞增殖中的作用。方法实验设7组,对照组、1g·L-1二甲基亚砜(DMSO)组、200pmol·L-1ET-1组、200pmol·L-1ET-1+1g·L-1DMS... 目的观察氯通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)在内皮素-1(ET-1)对体外培养牛角膜内皮细胞增殖中的作用。方法实验设7组,对照组、1g·L-1二甲基亚砜(DMSO)组、200pmol·L-1ET-1组、200pmol·L-1ET-1+1g·L-1DMSO组和200pmol·L-1ET-1+50、100、200μmol·L-1NPPB3个实验组。采用倒置光学显微镜观察牛角膜内皮细胞形态。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析法观察细胞增殖,计算细胞存活率。采用免疫细胞化学检测细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达,并采用计算机图像分析测定平均光吸收值。应用流式细胞仪检测细胞周期时相的变化,计算细胞增殖指数。结果 NPPB能够使细胞形态发生异常,细胞内分裂相减少。50、100μmol·L-1NPPB使培养牛角膜内皮细胞MTT光吸收值、细胞存活率和PCNA阳性细胞的平均光吸收值较200pmol·L-1ET-1组均显著降低,并具有浓度依赖性。而NPPB浓度达到200μmol·L-1时,细胞趋于死亡。经100μmol·L-1的NPPB处理后,与对照组和200pmol·L-1ET-1组相比,出现明显的凋亡峰,G1期细胞比例明显增高,S期及G2/M期细胞比例则明显降低,增殖指数明显下降。结论 NPPB浓度依赖性抑制ET-1对培养BCECs的增殖作用,使细胞周期停滞在G1期。 展开更多
关键词 内皮素-1 5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸 氯通道 增殖 牛 角膜内皮细胞
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氯离子通道阻滞剂对人眼小梁细胞吞噬作用的影响
3
作者 梁巍 郑雅娟 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期906-908,共3页
目的探讨氯离子通道阻滞剂—5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸5-nitro-2-(3-phenyl-propylamino)-benzoic acid,NPPB对人眼小梁细胞吞噬功能的影响。方法培养人眼小梁细胞,对其进行免疫化学染色鉴定,采用RT-PCR技术检测小梁细胞CLC-2mRNA的表... 目的探讨氯离子通道阻滞剂—5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸5-nitro-2-(3-phenyl-propylamino)-benzoic acid,NPPB对人眼小梁细胞吞噬功能的影响。方法培养人眼小梁细胞,对其进行免疫化学染色鉴定,采用RT-PCR技术检测小梁细胞CLC-2mRNA的表达,然后应用流式细胞仪定量检测不同浓度NPPB作用下,小梁细胞对乳胶株的吞噬指数。结果体外培养的人眼小梁细胞NES染色阳性,且成功检测出CLC-2mRNA表达。当加入10μmol/L的NPPB作用6h后,小梁细胞对乳胶株的吞噬指数与对照组相比无明显改变(P>0.05),而50μmol/L的NPPB作用后,小梁细胞对乳胶株的吞噬作用明显降低(P<0.01),低于对照组,且随着加入NPPB浓度的增加,吞噬指数逐渐降低。结论氯离子通道阻滞剂浓度依赖的抑制小梁细胞的吞噬功能,且氯离子通道CLC-2可能参与调节小梁细胞吞噬过程。 展开更多
关键词 5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸 小梁细胞 吞噬
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氯离子通道阻滞剂对人眼小梁细胞增殖的影响 被引量：1
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作者 尹元 郑雅娟 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第24期3165-3166,共2页
目的探讨氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-（3-苯丙胺）苯甲酸〔5-nitro-2-（3-phenyl-propylamino）-benzoic acid,NPPB〕对体外培养人眼小梁细胞增殖的影响。方法RT-PCR检测体外培养人眼小梁细胞ClC-3mRNA表达,用不同浓度的NPPB作用体外培... 目的探讨氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-（3-苯丙胺）苯甲酸〔5-nitro-2-（3-phenyl-propylamino）-benzoic acid,NPPB〕对体外培养人眼小梁细胞增殖的影响。方法RT-PCR检测体外培养人眼小梁细胞ClC-3mRNA表达,用不同浓度的NPPB作用体外培养的人眼小梁细胞,台盼蓝染色细胞计数法检测细胞存活率,四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测其增殖能力。结果体外培养人眼小梁细胞存在ClC-3mRNA表达;不同浓度NPPB作用后小梁细胞存活率无显著差异;在一定浓度范围内（50-100μmol/L）,NPPB均可使体外培养的人眼小梁细胞增殖能力下降,其中100μmol/LNPPB的作用最强。结结论一定浓度的NPPB可降低体外培养的人眼小梁细胞增殖能力。 展开更多
关键词 5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB) 小梁细胞 青光眼 RT-PCR MTT法
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NPPB在大鼠肝细胞分离中的应用效果及其机制
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作者 梁珊 石詠中 +3 位作者 聂盛丹 黄韧 徐伟 李灼日 《山东医药》 CAS 北大核心 2015年第32期14-16,共3页
目的观察5-硝基-2(3-苯丙胺)-苯甲酸(NPPB)在大鼠肝细胞分离中的应用效果,并探讨其可能的机制。方法将12只SD大鼠随机分为观察组和对照组各6只。两组分离肝细胞后,采用改良的四步胶原酶分离技术进行消化,制备肝细胞悬液。观察组在使用... 目的观察5-硝基-2(3-苯丙胺)-苯甲酸(NPPB)在大鼠肝细胞分离中的应用效果,并探讨其可能的机制。方法将12只SD大鼠随机分为观察组和对照组各6只。两组分离肝细胞后,采用改良的四步胶原酶分离技术进行消化,制备肝细胞悬液。观察组在使用灌注液进行消化的过程中加入NPPB。采用血细胞计数板计算肝细胞收获量,PAS染色后计算纯度,0.4%台盼蓝染色后计算成活率。细胞无血清培养24 h后,采用全自动生化分析仪检测上层清液中的白蛋白(ALB)、ALT。采用紫外线分光光度法检测LDH吸光度,并计算LDH释放率。采用RT-PCR法检测细胞线粒体氯通道蛋白4(CLIC4)mRNA表达,Western blotting法检测细胞CLIC4蛋白表达。结果观察组与对照组肝细胞收获量分别为(4.41±0.20)×108、(4.40±0.26)×108个,纯度分别为90%±1%、89%±2%,成活率分别为88%±2%、85%±1%;两组比较,P均>0.05。观察组与对照组ALB分别为(43.8±5.0)、(25.2±3.0)g/L,ALT分别为(47.8±6.0)、(104.3±11.7)U/L,LDH释放率分别为21.0%±2.7%、34.0%±2.4%;两组比较,P均<0.05。观察组与对照组CLIC4 mRNA相对表达量分别为1.01±0.02、1.62±0.01,CLIC4蛋白相对表达量分别为0.38±0.02、0.52±0.03;两组比较,P均<0.05。结论肝细胞分离过程中应用NPPB可以在不影响分离细胞收获量、纯度及成活率的情况下,减轻肝细胞膜结构和功能损伤,其机制可能与抑制CLIC4表达有关。 展开更多
关键词 肝细胞分离 氯通道阻断剂 5-硝基-2(3-苯丙胺)-苯甲酸 氧化应激 线粒体氯通道蛋白4
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NPPB对心室肌细胞容积敏感性氯通道的影响
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作者 徐洪涛 高连如 +1 位作者 王军 臧益民 《海军总医院学报》 2005年第1期1-4,共4页
目的　观察氯通道阻断剂对小鼠心室肌容积敏感性氯通道的影响。方法　采用急性分离的小鼠心 室肌细胞,低渗溶液激活容积敏感性氯通道电流,膜片钳全细胞记录法记录电流。结果　低渗溶液激活了一 个明显的容积敏感性氯通道电流,该... 目的　观察氯通道阻断剂对小鼠心室肌容积敏感性氯通道的影响。方法　采用急性分离的小鼠心 室肌细胞,低渗溶液激活容积敏感性氯通道电流,膜片钳全细胞记录法记录电流。结果　低渗溶液激活了一 个明显的容积敏感性氯通道电流,该电流具有明显的外向整流特征,能被5 硝基 2(3 苯丙胺) 苯甲酸可逆性 明显抑制,对内外向电流的抑制率几乎相等[(79.1±2.5)%比(77.1±2.2)%]。结论　小鼠心室肌细胞容积 敏感性氯通道电流具有外向整流性及时间依赖性失活特性,能被氯通道阻断剂所抑制,且该抑制作用具有一 定的电压依赖性。 展开更多
关键词 容积敏感性氯通道 心室肌 5-硝基-2(3-苯丙胺)-苯甲酸
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