腺病毒介导microRNA-99a过表达抑制肝癌细胞生长 被引量：4

1

作者 张敬磊 金华君 +5 位作者 刘辉 吕赛群 杨远 傅思源 钱其军 周伟平 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期267-271,共5页

目的:利用腺病毒介导microrRNA-99a(miR-99a)的过表达,观察miR-99a对肝癌细胞生长的抑制作用,探讨一种腺病毒介导miRNA治疗肿瘤的新方法。方法:qRT-PCR检测正常肝细胞系L-02和肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、Hep3B和Huh7细胞中miR-99a的表... 目的:利用腺病毒介导microrRNA-99a(miR-99a)的过表达,观察miR-99a对肝癌细胞生长的抑制作用,探讨一种腺病毒介导miRNA治疗肿瘤的新方法。方法:qRT-PCR检测正常肝细胞系L-02和肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、Hep3B和Huh7细胞中miR-99a的表达,构建含miR-99a的重组5型腺病毒Ad5-miR-99a。用空载腺病毒Ad-blank和Ad5-miR-99a分别感染Huh7细胞,MTT法和集落形成实验检测miR-99a过表达对Huh7细胞生长的抑制作用。结果:与正常肝细胞L02和其他肝癌细胞相比,miR-99a在肝癌Huh7细胞中表达量相对最低(P<0.01)。成功构建重组腺病毒Ad5-miR-99a,Ad5-miR-99a感染Huh7细胞后,miR-99a可在Huh7细胞中稳定高表达。集落形成实验和MTT实验显示,相对于Ad-blank组,Ad5-miR-99a可显著抑制Huh7细胞的生长和集落形成(P<0.01)。结论:成功构建重组腺病毒Ad5-miR-99a,miR-99a能有效抑制肝癌细胞的增殖,Ad5-miR-99a有可能成为治疗肝癌的新药物。 展开更多

关键词 miRNA-99a 5型腺病毒 肝细胞癌 靶向基因治疗

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重组腺病毒Ad5/F11p-GFP对不同肿瘤细胞系感染效率的比较研究 被引量：1

2

作者 曹晓培 肖凤君 +5 位作者 高瞻 杨月峰 张群伟 王立生 王恒湘 王华 《中国医药生物技术》 2015年第2期102-108,共7页

目的以Ad5-GFP及Ad5/F35-GFP为对照,评价Ad5/F11p-GFP对不同肿瘤细胞系的感染效率。方法制备并纯化Ad5-GFP、Ad5/F11p-GFP及Ad5/F35-GFP三种重组腺病毒,以不同的感染复数(MOI)感染乳腺癌细胞系SKBR-3、MCF-7及肾癌细胞系786O。48 h后,... 目的以Ad5-GFP及Ad5/F35-GFP为对照,评价Ad5/F11p-GFP对不同肿瘤细胞系的感染效率。方法制备并纯化Ad5-GFP、Ad5/F11p-GFP及Ad5/F35-GFP三种重组腺病毒,以不同的感染复数(MOI)感染乳腺癌细胞系SKBR-3、MCF-7及肾癌细胞系786O。48 h后,荧光显微镜观察GFP的表达,流式细胞仪检测感染效率及不同细胞表面柯萨奇腺病毒受体(CAR)、CD46和桥粒芯糖蛋白质2的表达。结果 Ad5/F35-GFP对SKBR-3、MCF-7及786O均具有很高的感染效率,且其在较低的MOI时就具有较高的感染效率;Ad5/F11p-GFP对CD46高表达的MCF-7及786O具有较高的感染效率,5 MOI感染即可达到60%以上的感染效率;而Ad5-GFP仅对CAR高表达的细胞系786O具有较高的感染效率,且感染效率随着MOI的增加而升高。Ad5/F11p-GFP和Ad5/F35-GFP对三种肿瘤细胞系的感染效率明显高于Ad5-GFP。结论对5型腺病毒进行纤维顶球的改造,可增强对肿瘤细胞的感染效率。 展开更多

关键词 5型腺病毒 纤维顶球 感染效率 柯萨奇病毒-腺病毒受体 抗原 CD46 桥粒芯糖蛋白质2

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人5型腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：1

3

作者 潘庆军 朱学芝 叶玲 《检验医学与临床》 CAS 2013年第21期2785-2787,共3页

目的制备抗人5型腺病毒(HAdV5)六邻体(Hexon)蛋白的单克隆抗体并对其进行鉴定。方法用纯化的Hexon蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经ELISA间接法筛选和克隆化培养,获得4株分泌抗HAdV5的Hexon蛋白单克隆抗体的杂交瘤细... 目的制备抗人5型腺病毒(HAdV5)六邻体(Hexon)蛋白的单克隆抗体并对其进行鉴定。方法用纯化的Hexon蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经ELISA间接法筛选和克隆化培养,获得4株分泌抗HAdV5的Hexon蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。纯化获得单克隆抗体,使用ELISA和Western blot鉴定单克隆抗体的敏感性和特异性。结果 ELISA和Western blot结果表明这4株单克隆抗体与HAdV5的Hexon蛋白可以特异性结合。单克隆抗体株4A9-HRP标记和8D6建立的ELISA夹心法具备较高灵敏度和特异性。结论获得4株抗HAdV5的Hexon蛋白的单克隆抗体,为HAdV5相关的疫苗研制和HAdV5感染性疾病的早期快速诊断奠定了基础。 展开更多

关键词 5型腺病毒 六邻体 单克隆抗体

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虫荧光色素酶报告基因重组腺病毒表达载体的构建与鉴定

4

作者 马春玲 王芳 +1 位作者 刘琳琳 王法权 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期900-904,共5页

目的:构建表达虫荧光色素酶报告基因重组腺病毒载体,为腺病毒中和抗体流行水平的定量检测奠定基础。方法:采用腺病毒表达系统(ViraPower Adenoviral Expression System)构建重组腺病毒表达载体。首先利用PCR的方法扩增虫荧光色素酶基因... 目的:构建表达虫荧光色素酶报告基因重组腺病毒载体,为腺病毒中和抗体流行水平的定量检测奠定基础。方法:采用腺病毒表达系统(ViraPower Adenoviral Expression System)构建重组腺病毒表达载体。首先利用PCR的方法扩增虫荧光色素酶基因使其具备特定的CACC接头,以连接、转化、提取质粒等方法克隆入载体pENTR/D-TOPO以获得入门克隆,经PCR及测序鉴定正确后,用重组酶(LR ClonaseTM Ⅱ Enzyme Mix)进行入门克隆与表达载体(pAd-CMV/V5-DEST)间的重组反应,以获得表达克隆rAd-Luci。表达克隆鉴定后,用限制性内切酶PacⅠ线性化后转染HEK293A包装细胞得到重组腺病毒。经过扩增后,用极限稀释法检测病毒滴度,用Western blot法检测rAd-Luci载体是否能正确表达虫荧光色素酶蛋白,并检测此酶蛋白的功能活性。结果:用PCR的方法扩增到具有CACC接头的虫荧光色素酶基因,其重组入门和腺病毒表达克隆经PCR和测序鉴定构建正确,重组表达克隆转染HEK293A细胞并扩增后获得的病毒滴度为1.8×1011 pfu/ml,此病毒能正确表达虫荧光色素酶蛋白,并且具有较强的功能活性。结论:成功构建了虫荧光色素酶报告基因重组腺病毒载体,为此重组载体用于腺病毒中和抗体的定量检测奠定基础。 展开更多

关键词 虫荧光色素酶报告基因 5型腺病毒 腺病毒表达载体 定量检测 中和抗体

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不同途径感染后5型腺病毒在C57BL/6J小鼠体内的分布

5

作者 陈伟盛 高亚奇 +4 位作者 梁宁 陈海宇 陈兴致 詹纯列 张修彦 《实验动物与比较医学》 CAS 2020年第4期334-338,共5页

目的通过4种途径感染后检测5型腺病毒(Ad5)在C57BL/6J体内的分布。方法 112只C57BL/6J小鼠分为4组,以滴鼻、灌胃、尾静脉及腹腔注射方式每只小鼠给予1×10~9 pfu/m L的Ad5溶液100μL,分别在感染后1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d和7 ... 目的通过4种途径感染后检测5型腺病毒(Ad5)在C57BL/6J体内的分布。方法 112只C57BL/6J小鼠分为4组,以滴鼻、灌胃、尾静脉及腹腔注射方式每只小鼠给予1×10~9 pfu/m L的Ad5溶液100μL,分别在感染后1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d和7 d每组处死雌雄小鼠各2只,取淋巴结、睾丸、附睾、子宫、卵巢、脾脏、肾脏、肝脏、肺、心脏、脑、血液和骨髓组织进行荧光定量PCR检测。结果滴鼻组在肺和脊髓组织中检测到Ad5,肺组织中Ad5在感染后4 d下降比较多;灌胃组在所有组织中均没有检测到Ad5;尾静脉注射组在肝脏和脾脏中检测到Ad5,且下降速度比较慢;腹腔注射组在脊髓、脾脏、附睾和睾丸中检测出Ad5。腹腔注射组脊髓中Ad5的含量比滴鼻组约高10倍,脾脏中Ad5的含量与尾静脉注射组脾脏中的含量相当,附睾和睾丸中Ad5含量只有其他阳性组织中检测出含量的1%~10%。结论 Ad5的肺部感染实验,可每3 d滴鼻一次;肝脏感染实验,可以用尾静脉注射方法;脾脏感染实验,可以采用尾静脉注射或腹腔注射方法;脊髓感染实验,可以采用腹腔注射方法。 展开更多

关键词 5型腺病毒 荧光定量PCR 滴鼻 灌胃 尾静脉注射 腹腔注射 小鼠

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5型腺病毒E1A基因通过调控GP73的表达抑制肝癌细胞增殖的初步研究

6

作者 李栋宇 魏从文 +2 位作者 宫静 钟辉 汪浩勇 《生物技术通讯》 CAS 2019年第4期486-489,共4页

目的:研究5型腺病毒(Ad5)E1A基因通过调控高尔基蛋白73(GP73)的表达水平,抑制肝癌细胞HepG2的增殖。方法:以腺病毒为模板、pcDNA-flag-Vector为载体,构建真核表达载体pcDNA3-Flag-Ad5E1A;免疫印迹实验鉴定重组蛋白Ad5E1A的表达;免疫印... 目的:研究5型腺病毒(Ad5)E1A基因通过调控高尔基蛋白73(GP73)的表达水平,抑制肝癌细胞HepG2的增殖。方法:以腺病毒为模板、pcDNA-flag-Vector为载体,构建真核表达载体pcDNA3-Flag-Ad5E1A;免疫印迹实验鉴定重组蛋白Ad5E1A的表达;免疫印迹实验验证Ad5E1A对GP73表达水平的影响;将Ad5E1A基因转染HepG2细胞,用CCK-8试剂盒检测HepG2细胞的增殖情况。结果:免疫印迹实验结果证实,真核表达载体pcDNA3-Flag-Ad5E1A在HEK293细胞中得到表达;Ad5E1A可明显抑制GP73的表达。酶标仪检测发现,与转染Flag-GP73组相比,Ad5E1A组的抑制率为17.5%,差异无统计学意义(P>0.05);而与转染Flag-GP73组比,共转Ad5E1A和GP73组的抑制率为37.8%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Ad5E1A基因通过调控GP73的表达抑制了肝癌细胞HepG2的增殖。为研究肝癌发生机制,开发新型治疗方案提供了实验基础。 展开更多

关键词 5型腺病毒 E1A基因 高尔基蛋白73 细胞增殖

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K562/ADR细胞的5型腺病毒感染率研究

7

作者 牛娜 贾晓渊 +3 位作者 路巧然 李新 陈磊 陈侃 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2010年第5期795-798,804,共5页

腺病毒是目前肿瘤基因治疗研究的常用载体,而5型腺病毒(Ad5)以其复制效率高、载体容量大等优势而被广泛用于基因治疗的相关研究。比较5型腺病毒对人白血病细胞K562及其耐药株K562/ADR的感染效率,并分析引起这种差异的分子机制。流式细... 腺病毒是目前肿瘤基因治疗研究的常用载体,而5型腺病毒(Ad5)以其复制效率高、载体容量大等优势而被广泛用于基因治疗的相关研究。比较5型腺病毒对人白血病细胞K562及其耐药株K562/ADR的感染效率,并分析引起这种差异的分子机制。流式细胞术及荧光显微镜观察,结果显示,5型腺病毒对K562/ADR的感染效率明显高于K562;Real time PCR定量分析表明K562/ADR细胞株表面的CAR表达水平约为K562的1.33倍(P<0.05),而整合素αν表达则是K562的4.36倍(P<0.01)。 展开更多

关键词 5型腺病毒 K562 K562/ADR CAR 整合素αν

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小鼠NKT细胞在5型腺病毒感染所致肝损伤早期的免疫调节作用

8

作者 虞涛 王佳 +3 位作者 曾叶 宋娜 鲍连生 游上游 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1004-1009,共6页

目的使用5型腺病毒（Ad5）感染小鼠模型来研究肝脏NKT细胞（natural killer Tcell）在肝损伤早期的免疫调节机制。方法C57BL／6小鼠尾静脉注射1．5×10^9PFU和3×10^9PFU Ad5病毒以构建两个剂量组病毒感染的小鼠肝损伤模型，通... 目的使用5型腺病毒（Ad5）感染小鼠模型来研究肝脏NKT细胞（natural killer Tcell）在肝损伤早期的免疫调节机制。方法C57BL／6小鼠尾静脉注射1．5×10^9PFU和3×10^9PFU Ad5病毒以构建两个剂量组病毒感染的小鼠肝损伤模型，通过观察病毒感染后5d内小鼠肝组织病理学及小鼠血清丙氨酸转氨酶／天门冬氨酸转氨酶（ALT／AST）水平改变来判断肝损伤程度，使用流式细胞术（FACS）分析感染5d内肝单个核细胞亚群比例、NKT细胞表面FasL表达水平以及NKT细胞合成IL-4和IFN-γ水平的变化，应用RT—PCR检测小鼠肝内趋化因子及趋化因子受体表达水平。结果高滴度（3×10^9 PFU）的Ad5病毒感染小鼠1d后，小鼠肝脏内NKT细胞明显增加，其表面FasL表达上调，肝脏NKT细胞合成IL-4和IFN-γ的水平明显增加，肝组织内淋巴细胞浸润明显；低滴度AdS病毒（1．5×10^9PFU）感染小鼠后，肝脏NKT细胞比例变化不明显，CD8^＋T细胞在肝脏的浸润明显弱于高滴度Ad5病毒感染；RT—PCR检测结果显示：3×10^2PFU Ad5病毒感染2d后，小鼠肝内活化后可调节的及正常的T细胞分泌的趋化因子（RANTES）、人干扰素诱导蛋白10（IP-10）以及巨噬细胞炎症蛋白（MIP）-1β表达增加，3d后相关趋化因子受体CCR5、CCR1、CXCR3表达上调。结论NKT细胞在淋巴细胞向肝脏趋化的过程中起重要的作用，这种作用与病毒感染诱导NKT细胞合成IL-4和IFN-γ及上调其表面的FasL，从而促进肝细胞内IP-10、Mig等趋化因子的产生有关。 展开更多

关键词 NKT细胞 5型腺病毒 肝损伤 免疫调节

原文传递

PDXl与PAX4双基因表达腺病毒载体的构建与表达

9

作者 霍震 沈进 +11 位作者 许礼发 张福健 刘良 蒋青林 王晓瑜 张明玮 庙二川 陈丽 刘婷婷 姚爱霞 朱永强 唐小龙 《安徽理工大学学报（自然科学版）》 CAS 2016年第2期80-86,共7页

运用pADxsi系统制备可表达人PDX1与PAX4双基因的重组5型腺病毒。从pEGFP-N1-PDX1质粒上酶切下目的基因PDX1并酶连到腺病毒穿梭质粒pShuttle-EGFP-CMV上,替换EGFP而得到pShuttle-CMV-PDX1;再将PAX4从pEGFP-N1-PAX4质粒上酶切下连到pShutt... 运用pADxsi系统制备可表达人PDX1与PAX4双基因的重组5型腺病毒。从pEGFP-N1-PDX1质粒上酶切下目的基因PDX1并酶连到腺病毒穿梭质粒pShuttle-EGFP-CMV上,替换EGFP而得到pShuttle-CMV-PDX1;再将PAX4从pEGFP-N1-PAX4质粒上酶切下连到pShuttle-CMV-PDX1的多克隆酶切位点而得到穿梭质粒pShuttle-CMV-PDX1/CMV-PAX4;双酶切pShuttle-CMV-PDX1/CMV-PAX4将CMV-PDX1/CMV-PAX4转移到ADxsi骨架质粒上,得到pADxsi-CMV-PDX1/CMV-PAX4腺病毒质粒,然后在293细胞中进行包装并扩增重组腺病毒,并进行病毒滴度测定;体外感染人间充质干细胞。依据酶切、测序和PCR的结果均证明重组人PDX1与PAX4双基因表达腺病毒载体构建正确;而RTPCR与WB结果也显示目的基因在细胞中稳定表达。应用重组技术成功构建人PDX1与PAX4双基因表达5型腺病毒载体,转录因子PDX1与PAX4在间充质干细胞内稳定表达且定位于细胞核内。 展开更多

关键词 5型腺病毒 间充质干细胞(MSCs) 胰腺十二指肠同源框蛋白1(PDX1) 成对盒基因4(PAX4) 转录因子

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重新燃起的希望:艾滋病疫苗的研究现状

10

作者 杨臻峥 《药学进展》 CAS 2012年第1期46-48,共3页

艾滋病疫苗的研发一直是各国科研人员重视的课题。然而，艾滋病疫苗的研发之路充满了坎坷，目前在研的该类疫苗多达40多种，却没有一种可以完全预防艾滋病，由美国制药巨头默克公司开发、曾被誉为艾滋病疫苗中的“希望之星”的V520（又... 艾滋病疫苗的研发一直是各国科研人员重视的课题。然而，艾滋病疫苗的研发之路充满了坎坷，目前在研的该类疫苗多达40多种，却没有一种可以完全预防艾滋病，由美国制药巨头默克公司开发、曾被誉为艾滋病疫苗中的“希望之星”的V520（又称MRKAd5 HIV-1 gag／pol／nef）疫苗，也因一项名为STEP的临床研究显示其既不能帮助未携带病毒者有效预防病毒感染也不能减少病毒携带者的病毒载量而于2007年被迫宣告失败， 展开更多

关键词 艾滋病 HIV-1 猴免疫缺陷病毒 疫苗 5型腺病毒

原文传递

胸腔内注射重组人5型腺病毒治疗晚期肺癌恶性胸腔积液的疗效观察 被引量：15

11

作者 杨帆 卢斌 +5 位作者 胡春燕 李学成 刘志鹏 邹利全 陈陵 朱波 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第17期2885-2886,共2页

目的:观察胸腔内注射重组人5型腺病毒(安柯瑞)治疗肺癌恶性胸腔积液的有效性和安全性。方法:将我院52例肺癌恶性胸腔积液患者随机分为安柯瑞治疗组(26例)和顺铂对照组(26例),胸腔内分别注射安柯瑞或顺铂,观察治疗有效率、不良反应。结果... 目的:观察胸腔内注射重组人5型腺病毒(安柯瑞)治疗肺癌恶性胸腔积液的有效性和安全性。方法:将我院52例肺癌恶性胸腔积液患者随机分为安柯瑞治疗组(26例)和顺铂对照组(26例),胸腔内分别注射安柯瑞或顺铂,观察治疗有效率、不良反应。结果:安柯瑞治疗组和顺铂对照组治疗有效率分别为69.23%及53.84%,两组间比较具有显著差异(P<0.05),两组均出现不同程度的白细胞减少,但较之顺铂对照组,安柯瑞治疗组不良反应明显较轻。结论:安柯瑞胸腔内注射治疗晚期肺癌恶性胸腔积液疗效较好,毒副反应轻。 展开更多

关键词 肺肿瘤 恶性胸腔积液 重组人5型腺病毒 顺铂

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重组人5型腺病毒注射液介入途径给药治疗恶性肿瘤的安全性研究 被引量：12

12

作者 李玉 李文刚 张素静 《上海医药》 CAS 2013年第1期24-26,共3页

目的:观察并总结重组人5型腺病毒通过介入给药后的不良反应并分析其安全性。方法:入选82例实体肿瘤患者,包括原发性肝癌、肺癌、前列腺癌、喉癌、食管癌等。随机分成3组,观察组在介入化疗同时通过导管注入重组人5型腺病毒注射液,对照组... 目的:观察并总结重组人5型腺病毒通过介入给药后的不良反应并分析其安全性。方法:入选82例实体肿瘤患者,包括原发性肝癌、肺癌、前列腺癌、喉癌、食管癌等。随机分成3组,观察组在介入化疗同时通过导管注入重组人5型腺病毒注射液,对照组在介入化疗同时瘤内注射重组人5型腺病毒注射液,空白对照组为单纯介入化疗。观察治疗后不良反应。结果:观察组发热的发生比例为100%,持续时间(5.2±1.2)d,与对照组相比无差异;畏寒、寒战发生比例为31.4%,持续时间(0.52±0.1)h,与对照组相比有统计学意义;食欲减退的发生比例为85.7%,持续时间(8.3±2.1)d,与对照组相比有统计学意义;恶心、呕吐的发生比例为71.4%,持续时间(0.8±1.2)d天,与对照组相比无统计学意义。结论:重组人5型腺病毒通过介入及局部注射途径给药均可出现发热、寒战、恶心等不良反应,但持续时间短,经对症处理后均可消失,治疗肿瘤安全性好。 展开更多

关键词 重组人5型腺病毒注射液 给药途径 肿瘤 安全性

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AD5/F35腺病毒载体对不同来源造血系统恶性细胞转染效率的研究 被引量：6

13

作者 王凯 彭建强 +1 位作者 袁振华 吴小兵 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期525-528,共4页

本研究比较AD5/F35腺病毒载体对不同来源的血液系统恶性细胞系感染效率的差异和细胞毒性反应。用AD5/F35-EGFP以不同MOI(感染复数)感染不同来源的血液恶性细胞系并用AD5-EGFP作为对照;用流式细胞术检测荧光阳性细胞比例,进行荧光显微镜... 本研究比较AD5/F35腺病毒载体对不同来源的血液系统恶性细胞系感染效率的差异和细胞毒性反应。用AD5/F35-EGFP以不同MOI(感染复数)感染不同来源的血液恶性细胞系并用AD5-EGFP作为对照;用流式细胞术检测荧光阳性细胞比例,进行荧光显微镜照相并用MTT法检测病毒对感染靶细胞的杀伤作用。结果表明:对于髓系来源的细胞在MOI为30时,AD5/F35载体的感染效率大于99%,AD5载体在MOI为1000时感染效率为26.4%;对于B系来源的细胞在MOI为1000时,AD5/F35载体感染效率为11.7%,AD5载体为5.7%;AD5/F35和AD5载体都不能有效地感染T系来源细胞,在MOI达到1000也未检测到荧光阳性细胞。在MOI为1000的情况下AD5/F35载体对感染靶细胞也无明显杀伤作用。结论:AD5/F35载体对不同来源的血液恶性细胞的感染具有一定的选择性,对髓系来源细胞感染能力强,对B系来源细胞有一定感染能力,而且对感染靶细胞毒性小。AD5/F35载体优于常用的5型腺病毒载体,在以髓系细胞为靶细胞的基因治疗中有着较好的应用前景。 展开更多

关键词 AD5/F35型腺病毒载体 AD5型腺病毒载体 感染效率 细胞毒作用 造血系统肿瘤细胞

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攻癌利水散外敷联合重组人5型腺病毒注射液胸腔内灌注治疗肺癌恶性胸水的临床疗效 被引量：9

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作者 王维 李枋霏 +1 位作者 肖彩芝 陈红 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2018年第21期5184-5186,共3页

目的观察外敷攻癌利水散联合重组人5型腺病毒注射液胸腔内灌注治疗肺癌恶性胸腔积液的临床疗效。方法120例肺癌恶性胸水患者随机分为中药组、顺铂(DDP)组、重组人5型腺病毒组及联合治疗组,每组30例,均行胸腔穿刺彻底引流胸水,中药组给... 目的观察外敷攻癌利水散联合重组人5型腺病毒注射液胸腔内灌注治疗肺癌恶性胸腔积液的临床疗效。方法120例肺癌恶性胸水患者随机分为中药组、顺铂(DDP)组、重组人5型腺病毒组及联合治疗组,每组30例,均行胸腔穿刺彻底引流胸水,中药组给予单纯外敷攻癌利水散;DDP组及重组人5型腺病毒组分别予胸腔灌注DDP或重组人5型腺病毒注射液;联合治疗组予外敷攻癌利水散联合胸腔灌注重组人5型腺病毒注射液,4 w后根据胸水量的变化进行疗效评价。结果每组生活质量均得到改善,其中联合治疗组改善最明显。联合治疗组总有效率显著高于中药组及重组人5型腺病毒组,差异有统计学意义(P<0. 05);而中药组及重组人5型腺病毒组显著高于DDP组,差异有统计学意义(P<0. 05);中药组与重组人5型腺病毒组差异无统计学意义(P>0. 05)。结论重组人5型腺病毒注射液胸腔内灌注联合攻癌利水散外敷对肺癌伴恶性胸水疗效最佳,同时显著提高患者生活质量。 展开更多

关键词 攻癌利水散 重组人5型腺病毒注射液 外敷 恶性胸水

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重组人5型腺病毒胸腔灌注治疗肺癌恶性胸腔积液 被引量：7

15

作者 刘先军 彭吉霞 +2 位作者 卢进昌 熊畅 刘玉全 《临床肺科杂志》 2010年第11期1539-1540,共2页

目的观察重组人5型腺病毒注射液胸腔灌注对肺癌恶性胸腔积液的临床治疗效果。方法 45例肺癌恶性胸腔积液患者随机分为观察组(23例)和对照组(22例),两组均应用微创置管胸腔闭式引流结合局部注药,观察组胸腔内局部灌注重组人5型腺病毒注射... 目的观察重组人5型腺病毒注射液胸腔灌注对肺癌恶性胸腔积液的临床治疗效果。方法 45例肺癌恶性胸腔积液患者随机分为观察组(23例)和对照组(22例),两组均应用微创置管胸腔闭式引流结合局部注药,观察组胸腔内局部灌注重组人5型腺病毒注射液,对照组局部灌注顺铂,观察胸腔积液控制情况、毒副反应。结果观察组胸液控制有效率为82.61%,完全缓解率47.83%;对照组有效率为40.91%,完全缓解率为18.18%,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组和对照组均无严重不良反应。结论胸腔内局部灌注重组人5型腺病毒注射液在有效控制肺癌恶性胸腔积液方面明显优于顺铂,值得推广应用。 展开更多

关键词 恶性胸腔积液 肺癌 重组人5型腺病毒 基因治疗

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表达SFTSV Gn基因的重组5型腺病毒的构建与鉴定

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作者 张璇 王新宇 +4 位作者 刘宇婷 涂影叶 梁耀文 易昌华 殷国平 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第9期8-12,17,共6页

为了构建出表达新布尼亚病毒(SFTSV)Gn基因的重组5型腺病毒,试验根据GenBank上发表的SFTSV Gn基因序列(登录号为ADZ04482.1)设计合成引物,采用特异性PCR方法在Gn基因前添加了KOZAK序列和tPA信号肽序列;然后通过酶切、连接等方法构建重... 为了构建出表达新布尼亚病毒(SFTSV)Gn基因的重组5型腺病毒,试验根据GenBank上发表的SFTSV Gn基因序列(登录号为ADZ04482.1)设计合成引物,采用特异性PCR方法在Gn基因前添加了KOZAK序列和tPA信号肽序列;然后通过酶切、连接等方法构建重组穿梭质粒PGA-KOZAK-tPA-Gn,与腺病毒骨架质粒pAd5-ΔE1ΔE3-5E4在BJ5183感受态细胞中进行同源重组,得到重组腺病毒质粒rAd5-KOZAK-tPA-Gn,用PacⅠ酶酶切重组腺病毒质粒,并将线性化的质粒转染至HEK 293细胞中进行病毒包装、扩繁和纯化;采用PCR扩增、Western-blot等技术检测病毒基因的表达情况,并测定重组腺病毒效价。结果表明:通过PCR扩增获得了1 546 bp的KOZAK-tPA-Gn基因,并成功构建了重组穿梭质粒;SFTSV Gn基因在重组腺病毒传代过程中稳定存在;重组腺病毒在HEK 293细胞中表达出分子量约为61 ku的SFTSV Gn蛋白;测得重组腺病毒效价为1×10^(-7.63)/0.1 mL TCID_(50)。说明试验成功构建出表达SFTSV Gn基因的重组5型腺病毒。 展开更多

关键词 新布尼亚病毒 Gn基因 重组5型腺病毒 质粒构建 HEK 293细胞

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顺铂联合重组人5型腺病毒腹腔灌注治疗胃癌合并恶性腹腔积液的临床疗效

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作者 刘宏根 赵林林 +2 位作者 杨佩颖 赵成 孔凡铭 《癌症进展》 2024年第5期520-523,539,共5页

目的探讨顺铂联合重组人5型腺病毒(H101)腹腔灌注治疗胃癌合并恶性腹腔积液的临床疗效。方法采用随机数字表法将68例胃癌合并恶性腹腔积液患者分为顺铂组(n=34,顺铂腹腔灌注)和顺铂联合H101组(n=34,顺铂联合H101腹腔灌注)。比较两组患... 目的探讨顺铂联合重组人5型腺病毒(H101)腹腔灌注治疗胃癌合并恶性腹腔积液的临床疗效。方法采用随机数字表法将68例胃癌合并恶性腹腔积液患者分为顺铂组(n=34,顺铂腹腔灌注)和顺铂联合H101组(n=34,顺铂联合H101腹腔灌注)。比较两组患者的腹腔积液缓解情况、腹腔积液间隔时间、生存情况、生活质量及不良反应发生情况。结果顺铂联合H101组患者腹腔积液总缓解率为73.5%,高于顺铂组患者的50.0%,差异有统计学意义(P﹤0.05)。顺铂联合H101组患者腹腔积液间隔时间为(34.02±9.79)天,明显长于顺铂组患者的(27.56±9.36)天,差异有统计学意义(P﹤0.01)。顺铂联合H101组患者的中位总生存期长于顺铂组(P﹤0.05)。两组患者的不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论顺铂联合H101腹腔灌注治疗胃癌合并恶性腹腔积液患者,能够安全有效地控制腹腔积液生成,改善患者的生活质量,延长患者的生存期。 展开更多

关键词 胃癌 恶性腹腔积液 重组人5型腺病毒 顺铂 临床疗效

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综合护理干预在瘤内注射重组人5型腺病毒联合化疗治疗复发性宫颈癌患者中的应用 被引量：5

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作者 唐文 叶付连 李仕红 《护理实践与研究》 2016年第12期80-81,共2页

目的 ：探讨综合护理干预在瘤内注射重组人5型腺病毒联合化疗治疗复发性宫颈癌患者的应用效果。方法 ：选取我院2013年4月-2015年4月收治的复发性宫颈癌患者82例,所有患者均给予瘤内注射重组人5型腺病毒联合化疗治疗,将患者随机等分为... 目的 ：探讨综合护理干预在瘤内注射重组人5型腺病毒联合化疗治疗复发性宫颈癌患者的应用效果。方法 ：选取我院2013年4月-2015年4月收治的复发性宫颈癌患者82例,所有患者均给予瘤内注射重组人5型腺病毒联合化疗治疗,将患者随机等分为对照组和观察组,对照组患者给予常规护理,观察组患者在上述基础上给予综合性护理措施。比较两组患者生活质量评分、满意度、疼痛评分、不良反应发生率。结果：护理后观察组患者生活质量评分高于对照组（P〈0.05）,疼痛评分、不良反应发生率低于对照组（P〈0.05）。结论 ：对于复发性宫颈癌行瘤内注射重组人5型腺病毒联合化疗治疗的患者行综合性护理干预,有效改善患者生活质量及疼痛程度,降低不良反应,值得推广。 展开更多

关键词 复发性宫颈癌 重组人5型腺病毒 化疗 护理

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表达CDV F蛋白和H蛋白的重组人5型腺病毒的构建及评价

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作者 时子淇 阚龙飞 +7 位作者 孟宪踊 王建忠 赵永坤 闫飞虎 王铁成 冯娜 高玉伟 夏咸柱 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期858-867,共10页

旨在构建表达犬瘟热弱毒疫苗株CDV11融合蛋白(F)和血凝素蛋白(H)的复制缺陷型重组腺病毒,对重组病毒目的蛋白表达进行鉴定,并研究其免疫原性。利用无缝克隆技术将绿色荧光蛋白基因(EGFP)和CDV11F/CDV11H基因连接到入门载体pENTRTM/D-TOP... 旨在构建表达犬瘟热弱毒疫苗株CDV11融合蛋白(F)和血凝素蛋白(H)的复制缺陷型重组腺病毒,对重组病毒目的蛋白表达进行鉴定,并研究其免疫原性。利用无缝克隆技术将绿色荧光蛋白基因(EGFP)和CDV11F/CDV11H基因连接到入门载体pENTRTM/D-TOPO中,获得重组入门质粒pENTR-EGFP-CDV11F和p ENTR-EGFP-CDV11H。随后使用Gateway技术分别将EGFP-CDV11F和EGFP-CDV11H插入到腺病毒骨架载体中,获得重组质粒pAd-EGFP-CDV11F和pAd-EGFP-CDV11H;将重组质粒经PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞以拯救重组腺病毒rAd-EGFP-CDV11F和rAd-EGFP-CDV11H。经荧光显微镜观察、间接免疫荧光鉴定以及蛋白免疫印迹鉴定,重组腺病毒rAd-EGFP-CDV11F和rAd-EGFP-CDV11H可分别在293A细胞、Vero细胞中表达F蛋白和H蛋白,rAd-EGFP-CDV11F滴度可达1.62×10^(9)IFU/mL,rAd-EGFPCDV11H滴度可达1.5×10^(9)IFU/mL。重组腺病毒rAd-EGFP-CDV11F和rAd-EGFP-CDV11H分别通过肌肉注射和滴鼻途径免疫小鼠,并评价免疫后35 d内小鼠体内CDV中和抗体以及IgG的变化情况。结果表明,重组腺病毒rAd-EGFP-CDV11F和rAd-EGFP-CDV11H通过肌肉注射和滴鼻途径免疫均能诱导小鼠产生CDV中和抗体以及IgG,CDV中和抗体水平可达1×22~1×26,IgG抗体效价最高可达1∶3 200~1∶25 600;此外通过肌肉注射途径单独免疫重组腺病毒rAd-EGFP-CDV11H后小鼠体内产生CDV中和抗体水平最高。结论:本研究成功构建了两株携带EGFP标签、能表达CDV11 F和H蛋白的重组腺病毒rAd-EGFPCDV11F和rAd-EGFP-CDV11H,它们具有良好的免疫原性,肌肉注射及滴鼻免疫均可诱导机体产生CDV中和抗体以及特异性IgG。这一结果为进一步研究CDV重组腺病毒载体疫苗及黏膜免疫疫苗提供了理论依据。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 CDV11疫苗株 人5型腺病毒 F蛋白 H蛋白

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利用Gibson DNA组装技术构建人5型腺病毒感染性克隆 被引量：4

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作者 邹小辉 夏百成 +3 位作者 郭小娟 王敏 鲁茁壮 洪涛 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期349-355,共7页

为了构建人5型腺病毒（HAdV-5）的感染性克隆,我们使用了Gibson DNA组装技术。设计1对引物用于扩增质粒骨架（包含卡那霉素抗性基因和质粒的复制起点,KAN-ORI）,在引物的5’端添加HAdV-5基因组末端序列（约30NT）和Pac I位点,以携带卡... 为了构建人5型腺病毒（HAdV-5）的感染性克隆,我们使用了Gibson DNA组装技术。设计1对引物用于扩增质粒骨架（包含卡那霉素抗性基因和质粒的复制起点,KAN-ORI）,在引物的5’端添加HAdV-5基因组末端序列（约30NT）和Pac I位点,以携带卡那霉素抗性基因的pShuttle-CMV质粒为模板,PCR扩增得到KAN-ORI片段,该片段的两端均含有约30bp的HAdV-5基因组序列。将KAN-ORI片段与利用野毒扩增纯化的HAdV-5基因组混合,进行Gibson DNA组装反应;反应产物直接转化E.coli感受态细胞,涂布含卡那霉素的LB琼脂平板。挑取菌落,提取质粒,命名为pKAd5。限制性酶切鉴定的结果显示,所鉴定的质粒均含有完整的HAdV-5基因组。使用Pac I酶切线性化pKAd5,利用脂质体转染293细胞,转染4d后单层细胞出现病毒噬斑。拯救的病毒能够在HEp-2细胞扩增;电子显微镜观察呈现典型的腺病毒形态;提取病毒DNA,酶切鉴定的结果与预期的HAdV-5基因组相同,证实HAdV-5得到成功拯救。上述研究结果说明使用Gibson DNA组装技术构建HAdV-5感染性克隆简便易行,为其他DNA病毒基因组的克隆提供了新思路。 展开更多

关键词 人5型腺病毒(HAdV-5) GIBSON DNA组装 感染性克隆 病毒拯救 透射电子显微镜

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