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b-Boule基因5′调控序列的克隆与睾丸组织DMR甲基化分析 被引量：6
1
作者 李明桂 徐洪涛 +6 位作者 李隐侠 于莎莉 赵兴波 潘增祥 朱翔 谢庄 李齐发 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第18期3859-3867,共9页
【目的】研究b-Boule基因5′调控序列的序列特征,以及牦牛、黄牛与犏牛睾丸组织b-Boule基因DMR甲基化状态的差异,为揭示b-Boule基因的表达调控和犏牛雄性不育的表观遗传机制提供依据。【方法】采用PCR扩增和克隆测序技术获得牦牛b-Boul... 【目的】研究b-Boule基因5′调控序列的序列特征,以及牦牛、黄牛与犏牛睾丸组织b-Boule基因DMR甲基化状态的差异,为揭示b-Boule基因的表达调控和犏牛雄性不育的表观遗传机制提供依据。【方法】采用PCR扩增和克隆测序技术获得牦牛b-Boule基因5′调控序列,利用生物信息学方法分析b-Boule基因5′调控序列的序列特征,采用亚硫酸氢钠测序法检测牦牛、黄牛与犏牛睾丸组织中b-Boule基因DMR的甲基化状态。【结果】b-Boule基因5′调控序列长度为1 352 bp,核心启动子区含有SP1等甲基化敏感位点,5′端存在一个CpG岛。犏牛b-Boule基因DMR的甲基化水平(17.78%)高于牦牛(7.50%)和黄牛(6.94%)(P<0.01),特别是CpG位点33—35的甲基化水平差异更明显。【结论】犏牛b-Boule基因DMR的甲基化水平高于牦牛和黄牛,结合前期mRNA表达水平和组织学观察结果,认为DMR甲基化在b-Boule基因的表达调控中发挥关键作用,犏牛b-Boule基因可能是通过DMR区的高甲基化抑制其mRNA表达来阻滞精子发生减数分裂过程。 展开更多
关键词 牦牛 犏牛 b-Boule基因 5′调控序列 甲基化
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荔枝LcVSP1基因5′调控序列的克隆及功能初步鉴定 被引量：3
2
作者 钟廷琼 李辉亮 +1 位作者 田维敏 彭世清 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1507-1512,共6页
利用Genome Walker法获得了荔枝营养贮藏蛋白质Lc VSP1基因的5′调控序列,构建了含有该序列的植物表达载体并转化烟草,通过PCR和GUS染色对转化植株进行了鉴定.序列分析表明,Lc VSP1基因的5′调控序列中除含有真核生物典型的核心启动子... 利用Genome Walker法获得了荔枝营养贮藏蛋白质Lc VSP1基因的5′调控序列,构建了含有该序列的植物表达载体并转化烟草,通过PCR和GUS染色对转化植株进行了鉴定.序列分析表明,Lc VSP1基因的5′调控序列中除含有真核生物典型的核心启动子区域和保守的TATA box序列外,还发现了一些与真核生物启动子中相似的顺式调控元件.对获得的转基因植株的GUS染色发现,在转基因植株的茎、叶柄和主叶脉呈现蓝色,表明Lc VSP1的5′调控序列可以启动GUS基因的表达,具有启动子的活性,并具有组织特异性. 展开更多
关键词 荔枝 营养贮藏蛋白质 5′调控序列 顺式调控元件
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巴西橡胶树小橡胶粒子蛋白基因5'调控序列的克隆及功能初步鉴定 被引量：1
3
作者 郭冬 李辉亮 彭世清 《热带农业工程》 2010年第6期37-42,共6页
在橡胶树中小橡胶粒子蛋白是催化和调控天然橡胶生物合成的重要蛋白因子。根据小橡胶粒子蛋白基因(HbSRPP)的mRNA序列(GenBank登陆号:AF051317)设计引物,利用Genome Walking方法克隆了HbSRPP起始密码子上游1159bp的5′调控序列。序列分... 在橡胶树中小橡胶粒子蛋白是催化和调控天然橡胶生物合成的重要蛋白因子。根据小橡胶粒子蛋白基因(HbSRPP)的mRNA序列(GenBank登陆号:AF051317)设计引物,利用Genome Walking方法克隆了HbSRPP起始密码子上游1159bp的5′调控序列。序列分析表明,该序列A/T含量为68.25%,含有典型的真核生物核心启动子区域(-141bp-99bp),一些与真核生物典型的顺式调控元件相似的TATA-box、增强子元件、CAAT-box、GATA-box也存在序列中,此外还发现一些与激素、转录因子、光调节和胁迫诱导相关的顺式作用元件。构建了含有该序列的植物表达载体并转化烟草,通过PCR和GUS染色对转化植株进行了鉴定。对获得的转基因烟草T0代植株GUS染色发现,在转基因植株的茎、叶和根呈现蓝色,表明HbSRPP的5′调控序列可以启动GUS基因的表达,具有启动子的活性。 展开更多
关键词 巴西橡胶树 小橡胶粒子蛋白 5′调控序列 顺式作用元件
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夜来香SAMT基因的分离与原核表达 被引量：3
4
作者 杨华丽 吕恃衡 +4 位作者 蔡韡韡 郑鸿昌 潘东明 李子真 陈桂信 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2015年第10期1831-1838,共8页
为探究夜来香(Cestrum nocturnum)花香基因SAMT在花香代谢中的调控作用,以花瓣为材料,采用RTPCR和RACE技术相结合,克隆夜来香SAMT基因的全长c DNA。结果表明:该c DNA的序列长度为1 493 bp,编码365个氨基酸,其中包含1 098 bp ORF、130 b... 为探究夜来香(Cestrum nocturnum)花香基因SAMT在花香代谢中的调控作用,以花瓣为材料,采用RTPCR和RACE技术相结合,克隆夜来香SAMT基因的全长c DNA。结果表明:该c DNA的序列长度为1 493 bp,编码365个氨基酸,其中包含1 098 bp ORF、130 bp 5′UTR和265 bp 3′UTR,将其命名为Cn SAMT;生物信息学分析结果表明:该基因所编码的氨基酸序列与烟草、番茄的同源性分别为98%和98%,属于甲基转移酶-7家族;原核表达结果表明:Cn SAMT的蛋白表达产物约为42 ku,与软件预测的结果大致相同。采用染色体步移技术,克隆夜来香Cn SAMT的5′端调控序列,结果表明:该序列长度为993 bp,且该序列除了含有TATA-box、CAAT-box等启动子核心元件外,还含有光、生长素、脱落酸、热胁迫、缺氧胁迫等外界环境条件响应的顺式作用元件。 展开更多
关键词 夜来香 SAMT基因 原核表达 5′端调控序列
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柑橘青霉菌CYP51B基因和上游调控区克隆及生物信息学分析 被引量：1
5
作者 牛玉慧 刘婧 +8 位作者 齐婷 伍志 秦婷婷 李青 钟靖然 张恒 王崇武 袁永泽 刘德立 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期76-87,共12页
【目的】克隆柑橘青霉菌(意大利青霉菌,Penicillium italicum)CYP51的同源基因,并对基因序列进行生物信息学分析。【方法】通过PCR及染色体步移技术得到基因的完整序列及上下游调控序列。通过生物信息学手段对基因的结构进行分析:使用N... 【目的】克隆柑橘青霉菌(意大利青霉菌,Penicillium italicum)CYP51的同源基因,并对基因序列进行生物信息学分析。【方法】通过PCR及染色体步移技术得到基因的完整序列及上下游调控序列。通过生物信息学手段对基因的结构进行分析:使用NNPP分析软件预测转录起始位点,并利用TFSEARCH1.3软件分析转录因子结合位点。利用SWISS-MODEL在线软件对蛋白进行同源模建。【结果】克隆得到了意大利青霉菌CYP51的同源基因,命名为Pi CYP51B。获得的Pi CYP51B及上下游调控区序列总长为3 496 bp,包括上游910 bp和下游834 bp的序列。Pi CYP51B基因的开放阅读框全长1 575 bp,编码524个氨基酸。该基因含有3个分别为74、51、52 bp的内含子,分别位于247 bp与320 bp之间,519 bp与569 bp之间,1 635 bp与1 686 bp之间。Pi CYP51B 5′上游调控区序列的总长为579 bp。生物信息学分析结果显示:转录起始位点位于上游458 bp处;上游调控区不仅包含启动子的核心结构序列TATA盒(位于-25 bp处),也包含多个转录因子结合位点,如Abd-B、ADR1、AP-4、GATA-1、Cdx A、Clox和Oct-1等。在上游调控序列中嘌呤含量高,而且从+387 bp处开始存在4个连续高嘌呤含量的热激转录因子特异性结合位点(HSF);在+106 bp处开始存在3个连续的Cdx A转录因子结合位点。选用人CYP51晶体结构(PDB ID:3LD6)为模板,利用SWISS-MODEL在线软件构建了意大利青霉菌CYP51B蛋白的结构模型。【结论】克隆了意大利青霉Pi CYP51B基因,其上游含有多个热激应答转录因子特异性结合位点(HSF)表明其参与逆境应答。该基因作为意大利青霉菌CYP51的同源基因,可能与青霉菌对真菌药物的抗药性密切相关。 展开更多
关键词 意大利青霉菌 PI CYP51B 5′上游调控序列 同源模建
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