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杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5′上游序列驱动bar基因的表达
1
作者 闫红霞 李杰 +3 位作者 王莉莉 冯英才 曲东京 薛乐勋 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2008年第6期1129-1133,共5页
目的:探讨杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5′上游序列(Pnr)是否可以驱动外源基因在杜氏盐藻中的表达。方法:利用改进的重叠区扩增基因拼接法(SOEing),将杜氏盐藻NR基因5′上游序列(Pnr)与除草剂抗性基因bar融合。同时将NR基因3′端序列(T... 目的:探讨杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5′上游序列(Pnr)是否可以驱动外源基因在杜氏盐藻中的表达。方法:利用改进的重叠区扩增基因拼接法(SOEing),将杜氏盐藻NR基因5′上游序列(Pnr)与除草剂抗性基因bar融合。同时将NR基因3′端序列(Tnr)与克隆载体pEGM-7zf连接,构成中间载体pEGM-7zf-Tnr。最后将融合片段Pnr-Tnr与中间载体连接,构建含Pnr-bar-Tnr表达盒的盐藻真核表达载体p7NBT。电击法转化杜氏盐藻,通过草丁膦培养筛选转化藻株后对其进行分析。结果:转化藻株总RNA的RT-PCR结果扩增出与bar基因序列完全一致的目的片段。结论:杜氏盐藻NR基因Pnr能够驱动外源基因bar的转录。 展开更多
关键词 杜氏盐藻 硝酸还原酶 5′上游序列 BAR基因
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巴夫杜氏藻1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亚基基因的克隆和分析 被引量：7
2
作者 尚常花 朱顺妮 +2 位作者 袁振宏 吕鹏梅 王忠铭 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期668-674,共7页
1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)是光合作用中的一个关键酶,其小亚基rbcS具有调控羧化反应催化效率和影响该酶对二氧化碳/氧气底物特异性的功能。从巴夫杜氏藻中克隆rbcS基因及其5′-上游序列,并对基因及5′-上游序列进行了分... 1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)是光合作用中的一个关键酶,其小亚基rbcS具有调控羧化反应催化效率和影响该酶对二氧化碳/氧气底物特异性的功能。从巴夫杜氏藻中克隆rbcS基因及其5′-上游序列,并对基因及5′-上游序列进行了分析。根据已知rbcS基因保守核苷酸序列设计引物,分别克隆到1 841 bp的DNA和380 bp的cDNA序列。以此为基础,使用染色体步移(Genome walking)和cDNA末端快速扩增(RACE)技术,获得了799bp的5′端DNA序列和500 bp的3′端cDNA序列。序列分析发现,巴夫杜氏藻rbcS DNA全长为2 031 bp(不包括476 bp 5′-上游序列),cDNA全长包括570 bp开放读码框(GenBank登录号:HQ315783)和294 bp 3′端非翻译区。5′-上游序列区域存在一系列预测的顺式作用元件。该研究旨在为后继的rbcS基因的功能和表达研究、Rubisco的遗传改造奠定基础。同时,rbcS启动子因其可驱动基因高效表达而引起广泛关注,因此获得的rbcS 5′-上游序列经验证和优化后,可用于在嗜盐微藻中驱动转基因的高效表达以及完善微藻转化系统。 展开更多
关键词 巴夫杜氏藻 基因克隆 5′-上游序列分析 RBCS 1 5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶
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柑橘青霉菌CYP51B基因和上游调控区克隆及生物信息学分析 被引量：1
3
作者 牛玉慧 刘婧 +8 位作者 齐婷 伍志 秦婷婷 李青 钟靖然 张恒 王崇武 袁永泽 刘德立 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期76-87,共12页
【目的】克隆柑橘青霉菌(意大利青霉菌,Penicillium italicum)CYP51的同源基因,并对基因序列进行生物信息学分析。【方法】通过PCR及染色体步移技术得到基因的完整序列及上下游调控序列。通过生物信息学手段对基因的结构进行分析:使用N... 【目的】克隆柑橘青霉菌(意大利青霉菌,Penicillium italicum)CYP51的同源基因,并对基因序列进行生物信息学分析。【方法】通过PCR及染色体步移技术得到基因的完整序列及上下游调控序列。通过生物信息学手段对基因的结构进行分析:使用NNPP分析软件预测转录起始位点,并利用TFSEARCH1.3软件分析转录因子结合位点。利用SWISS-MODEL在线软件对蛋白进行同源模建。【结果】克隆得到了意大利青霉菌CYP51的同源基因,命名为Pi CYP51B。获得的Pi CYP51B及上下游调控区序列总长为3 496 bp,包括上游910 bp和下游834 bp的序列。Pi CYP51B基因的开放阅读框全长1 575 bp,编码524个氨基酸。该基因含有3个分别为74、51、52 bp的内含子,分别位于247 bp与320 bp之间,519 bp与569 bp之间,1 635 bp与1 686 bp之间。Pi CYP51B 5′上游调控区序列的总长为579 bp。生物信息学分析结果显示:转录起始位点位于上游458 bp处;上游调控区不仅包含启动子的核心结构序列TATA盒(位于-25 bp处),也包含多个转录因子结合位点,如Abd-B、ADR1、AP-4、GATA-1、Cdx A、Clox和Oct-1等。在上游调控序列中嘌呤含量高,而且从+387 bp处开始存在4个连续高嘌呤含量的热激转录因子特异性结合位点(HSF);在+106 bp处开始存在3个连续的Cdx A转录因子结合位点。选用人CYP51晶体结构(PDB ID:3LD6)为模板,利用SWISS-MODEL在线软件构建了意大利青霉菌CYP51B蛋白的结构模型。【结论】克隆了意大利青霉Pi CYP51B基因,其上游含有多个热激应答转录因子特异性结合位点(HSF)表明其参与逆境应答。该基因作为意大利青霉菌CYP51的同源基因,可能与青霉菌对真菌药物的抗药性密切相关。 展开更多
关键词 意大利青霉菌 PI CYP51B 5′上游调控序列 同源模建
原文传递
绵羊β-乳球蛋白基因5′端及上游调控序列的PCR扩增的方法学研究
4
作者 李雪玲 郭继彤 +2 位作者 于海泉 王达珍 张肇英 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期79-82,共4页
本文对绵羊 β-乳球蛋白基因 5′端及上游调控序列的 PCR方法扩增进行了研究 .经比较分析 ,将从羊血中提取的绵羊基因组 DNA的模板用量定为 4μl( 0 .4μg/μl) ,Taq DNA聚合酶用量为 0 .83μl( 3u/μl) ,变性为 94℃ 1 min,退火为 64℃... 本文对绵羊 β-乳球蛋白基因 5′端及上游调控序列的 PCR方法扩增进行了研究 .经比较分析 ,将从羊血中提取的绵羊基因组 DNA的模板用量定为 4μl( 0 .4μg/μl) ,Taq DNA聚合酶用量为 0 .83μl( 3u/μl) ,变性为 94℃ 1 min,退火为 64℃ 1 m in,72℃延伸 2 min,循环次数为32次 ,获得的 PCR产物经电泳检测 ,条带明亮 ,特异性高 ,大小为 898bp.经序列分析发现 ,与已知基因组序列一致性达 99%以上 ,可用于指导外源基因在转基因动物乳腺中表达 . 展开更多
关键词 绵羊β-乳球蛋白基因(BLG)5′端及上游调控序列 PCR
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