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雨生红球藻八氢番茄红素合成酶基因的克隆及表征(英文) 被引量：9
1
作者 梁成伟 赵方庆 +3 位作者 秦松 檀琮萍 魏炜 孟春晓 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第9期854-860,共7页
雨生红球藻是一种单细胞绿藻,在多种逆境胁迫条件下能够大量合成并迅速积累虾青素,其积累量最高可达细胞干重的4%,从而成为目前最理想的天然虾青素合成工具.八氢番茄红素合成酶(PSY)是虾青素合成途径中第一个限速酶.分离了八氢番茄红素... 雨生红球藻是一种单细胞绿藻,在多种逆境胁迫条件下能够大量合成并迅速积累虾青素,其积累量最高可达细胞干重的4%,从而成为目前最理想的天然虾青素合成工具.八氢番茄红素合成酶(PSY)是虾青素合成途径中第一个限速酶.分离了八氢番茄红素合成酶基因(psy)的全长cDNA及基因组DNA.其全长cDNA包括1200个碱基,编码400个氨基酸,基因组DNA包括5个外显子,4个内含子.系统发育分析结果显示,绿藻的八氢番茄红素合成酶基因形成一个进化枝,它们与高等植物的psy亲缘关系比较近.通过GenomeWalking的方法,分离了psy基因约1kb的5′侧翼序列.将含有TATA-box和CAAT-box的297bp的序列与LacZ报告基因构成嵌合的表达载体,用基因枪法转化雨生红球藻.lacZ的瞬间表达检测结果表明,这段上游序列能够驱动lacZ表达,具有启动子活性. 展开更多
关键词 雨生红球藻 八氢番茄红素合成酶 5’侧翼序列 系统发育分析 启动子
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反向PCR技术克隆猪H-FABP基因5'侧翼序列 被引量：3
2
作者 凌飞 李加琪 +2 位作者 梅盈洁 吴雪艳 陈瑶生 《广东农业科学》 CAS CSCD 2007年第6期75-76,共2页
H-FABP被作为猪肥胖性状的候选基因之一。利用反向PCR技术克隆得到猪H-FABP 5′侧翼启动子远端上游174 bp序列,将获得的序列与已有的相关序列进行核苷酸序列同源性比对,获得71 bp新序列,为猪H-FABP基因功能的进一步研究提供理论基础。
关键词 反向PCR 猪H—FABP基因 5’侧翼序列
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团头鲂PGPH α亚基基因5’端侧翼序列克隆及其表达载体的构建 被引量：3
3
作者 曲宪成 周正峰 +4 位作者 崔严慧 刘颖 胡萍华 金一春 尚婧瑨 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期550-558,共9页
首先运用PCR-末端加尾法克隆了团头鲂（Megalobrama amblycephala）脑下垂体糖蛋白激素α亚基（Pituitary glycoprotein hormone α subunit,PGPH α）基因5’端侧翼序列;然后利用生物信息学理论对该序列进行了序列分析;最后在序列分析... 首先运用PCR-末端加尾法克隆了团头鲂（Megalobrama amblycephala）脑下垂体糖蛋白激素α亚基（Pituitary glycoprotein hormone α subunit,PGPH α）基因5’端侧翼序列;然后利用生物信息学理论对该序列进行了序列分析;最后在序列分析结果的基础上,构建了荧光素酶质粒表达载体。序列分析结果显示,克隆所得到的团头鲂PGPH α亚基基因5’端侧翼序列长1399bp;其序列中包含潜在的TATA盒、GC盒,以及ERE、TRE、CRE、PGBE等对PGPH α亚基基因转录调控起重要作用的转录因子结合位点;启动子区域位于-40-10bp处。利用PCR方法扩增得到了全长1439bp以及1120bp、532bp、173bp均包含转录起始位点下游40bp序列的缺失片段,并将其连接至pGL3-Basic报告基因载体,成功构建了团头鲂PGPH α亚基基因5’端侧翼序列的表达载体,为进一步研究、分析其转录调控机制提供了基础。 展开更多
关键词 团头鲂 垂体糖蛋白激素α亚基 5’侧翼序列 启动子 表达载体
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团头鲂促性腺激素GtH Iβ亚基基因5′端启动子区克隆及表达载体构建 被引量：2
4
作者 曲宪成 崔严慧 +5 位作者 周正峰 刘颖 金一春 胡萍华 薛婷君 王琼 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期558-567,共10页
本研究利用改进的锚定PCR方法克隆了团头鲂(Megalobrama amblycephala)促性腺激素Iβ(GtH Iβ)亚基基因5′端侧翼序列,并在生物信息学方法分析的基础上构建了荧光素酶质粒表达载体。序列分析结果显示:克隆得到的GtHIβ亚基基因5′端侧... 本研究利用改进的锚定PCR方法克隆了团头鲂(Megalobrama amblycephala)促性腺激素Iβ(GtH Iβ)亚基基因5′端侧翼序列,并在生物信息学方法分析的基础上构建了荧光素酶质粒表达载体。序列分析结果显示:克隆得到的GtHIβ亚基基因5′端侧翼序列长度为479bp,其中包括TATA盒、ARE、PRE、ERE、SF-1、Ptx1等可能对GtH Iβ亚基基因转录调控起重要作用的功能转录因子结合位点。利用PCR方法在基因组中扩增得到了3个缺失片段,并同全长片段一起分别连接至pGL3-Basic报告基因载体,成功构建了团头鲂GtH Iβ亚基基因5′端侧翼序列的表达载体,为进一步研究、分析其转录调控机制提供了基础。 展开更多
关键词 团头鲂 促性腺激素Iβ亚基 5’侧翼序列 启动子 表达载体
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甘蔗UGPase5'侧翼序列克隆及缺失表达分析 被引量：1
5
作者 叶冰莹 王婷 +2 位作者 何文锦 邱思 陈由强 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期62-67,共6页
以甘蔗(FN95;-1702)为材料,通过接头连接PCR方法克隆该基因不同长度5'侧翼序列。将不同长度的5'侧翼序列连同UGPase基因的外显子片段定向插入到GUS基因上游,在保证其后GUS编码框不发生偏移的情况下,插入的UGPase外显子融合GUS... 以甘蔗(FN95;-1702)为材料,通过接头连接PCR方法克隆该基因不同长度5'侧翼序列。将不同长度的5'侧翼序列连同UGPase基因的外显子片段定向插入到GUS基因上游,在保证其后GUS编码框不发生偏移的情况下,插入的UGPase外显子融合GUS表达成为新的报告基因。根据此策略,构建了一系列表达结构为5'Flanking Sequence-UGPase Exon-GUS-Nos polyA的5'侧翼序列缺失表达载体,进行启动子活性分析。注射法转染烟草叶片组织检测GUS瞬时表达,分析结果表明,所克隆到的UGPase基因5'端侧翼序列不具有启动子活性。 展开更多
关键词 5’侧翼序列 缺失表达 甘蔗 UGPASE
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恶性疟原虫GBP130基因5′近端侧翼序列调控功能的研究(英文) 被引量：2
6
作者 王宪锋 缪军 +3 位作者 刘忠湘 李珣 甄荣芬 薛采芳 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期65-71,共7页
目的　对GBP130的 5′近端侧翼序列进行分析 ,发现可能的强度和期特异性调控元件。　方法　构建含有不同长度GBP130启动子的质粒载体。用pGBPCATΔ 2、pGBPΔ2 /4 0 0和 pGBPΔ2 /80 0分别转染疟原虫 ,在转染后 48h收集虫体制备细胞抽提... 目的　对GBP130的 5′近端侧翼序列进行分析 ,发现可能的强度和期特异性调控元件。　方法　构建含有不同长度GBP130启动子的质粒载体。用pGBPCATΔ 2、pGBPΔ2 /4 0 0和 pGBPΔ2 /80 0分别转染疟原虫 ,在转染后 48h收集虫体制备细胞抽提物 ,检测报告分子CAT活性 ,分析近端侧翼序列不同区域的强度调控功能。另将 pGBPΔ2 /4 0 0和pGBPΔ2 /80 0分别同时转染疟原虫 ,分别于转染后 5h、15h和 46h收集虫体 ,制备细胞抽提物 ,检测CAT活性 ,分析近端侧翼序列不同区域的期特异性调控功能。　结果　强度分析中 ,当从转录起始点下游删除较小的片段 ( pGBPΔ2 /80 0 ) ,CAT表达水平与pGBPCATΔ 2中CAT水平无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,当删除近端较大片段 ( pGBPΔ2 /4 0 0 )时 ,CAT表达水平明显下降 (P <0 .0 5 )。同时 pGBPΔ2 /4 0 0的转录活性与对照组也有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;期特异性分析 ,pGBPΔ2 /4 0 0与pGBPΔ2 /80 0相比 ,在 5h时前者转录活性高于后者 ,但在 15h和 46h时 ,后者转录活性高于前者 ,提示 2种质粒在疟原虫不同生活阶段具有期特异性调控。　结论　推测不同GBP130启动子活性强度的差异是因为 5′UTR长度的不同 ,较长的UTR可促进基因的转录表达 ,可能GBP130基因近端侧翼序列中 2个同聚 展开更多
关键词 恶性疟原虫 GBP130基因 5'近端侧翼序列 调控功能 研究 血型糖蛋白结合蛋白130 基因调控
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Sqt-1的5'端侧翼序列在旋毛虫rol6基因中的启动功能验证
7
作者 李爽 路佳琦 +5 位作者 万悦 毛贻贤 孔令杰 武文浩 黄大鹏 路义鑫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期781-784,共4页
为验证秀丽隐杆线虫(C.elegans)sqt-1的5'端侧翼序列(5'-FSsqt-1)是否具有启动旋毛虫(T.spiralis)基因表达的功能,本研究采用PCR方法从C.elegans全基因组DNA中扩增5'-FSsqt-1,并将其克隆至以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的C... 为验证秀丽隐杆线虫(C.elegans)sqt-1的5'端侧翼序列(5'-FSsqt-1)是否具有启动旋毛虫(T.spiralis)基因表达的功能,本研究采用PCR方法从C.elegans全基因组DNA中扩增5'-FSsqt-1,并将其克隆至以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的C.elegans启动子验证载体p PD95.77中,构建重组质粒p PD-sqt-GFP。将T.spiralis表皮胶原蛋白rol6编码序列克隆至5'-FSsqt-1下游,构建重组质粒p PD-sqt-rol6-GFP。通过显微注射法将p PD-sqt-GFP和p PD-sqt-rol6-GFP分别转入C.elegans体内,进行荧光观察及western blot鉴定。结果显示,T.spiralis表皮胶原蛋白Rol6能够在C.elegans体内获得表达。研究表明,5'-FSsqt-1具有启动T.spiralis基因表达的功能,为T.spiralis基因在C.elegans体内表达奠定了基础。 展开更多
关键词 秀丽隐杆线虫 sqt-1的5'端侧翼序列 旋毛虫rol6基因 显微注射
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