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小亚璃眼蜱4D8基因的克隆与原核表达 被引量：5
1
作者 赵金国 曾巧英 +3 位作者 殷宏 刘爱红 李有全 罗建勋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期461-464,共4页
根据GenBank上登录的边缘革蜱4D8基因序列设计1对引物,采用PCR技术自半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺cDNA表达文库中扩增获得了4D8基因;将其连入pMD18-T载体,构建重组克隆载体pMD18-Hyaa4D8。测序分析表明,克隆的小亚璃眼蜱4D8基因与边... 根据GenBank上登录的边缘革蜱4D8基因序列设计1对引物,采用PCR技术自半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺cDNA表达文库中扩增获得了4D8基因;将其连入pMD18-T载体,构建重组克隆载体pMD18-Hyaa4D8。测序分析表明,克隆的小亚璃眼蜱4D8基因与边缘革蜱4D8基因的核苷酸序列的同源性为89.2%。将此片段定向亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-Hyaa4D8,表达并纯化重组蛋白,通过免疫印迹试验鉴定该重组蛋白的生物学活性。结果显示,该重组蛋白是分子质量为45ku的融合蛋白,且表达产物能被半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺抗原免疫兔血清识别。 展开更多
关键词 小亚璃眼蜱 4D8基因 克隆 原核表达
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长角血蜱4D8基因的克隆与原核表达 被引量：3
2
作者 罗金 刘光远 +3 位作者 田占成 谢俊仁 沈辉 田美媛 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期551-556,共6页
根据GenBank上登录的蜱4D8基因序列设计引物,用PCR技术从长角血蜱雌蜱研磨组织cDNA中扩增出4D8基因,将其连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T-4D8,并对检测为阳性的克隆进行测序。将该基因重组至原核表达载体pGEX-4T-1,经表达... 根据GenBank上登录的蜱4D8基因序列设计引物,用PCR技术从长角血蜱雌蜱研磨组织cDNA中扩增出4D8基因,将其连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T-4D8,并对检测为阳性的克隆进行测序。将该基因重组至原核表达载体pGEX-4T-1,经表达纯化后,进行Western-blot试验鉴定其生物学活性。结果,长角血蜱4D8基因的氨基酸序列与青海血蜱、肩突硬蜱的同源性分别为90%、81%。表达的重组蛋白是分子质量约为41ku的融合蛋白。Western-blot试验证明,该重组蛋白能很好地识别兔抗长角血蜱全蜱阳性血清。结果表明,4D8基因作为一种重要的分子标记基因在蜱的流行病学调查方面有着重要的价值,同时作为潜在的候选抗原基因在疫苗的研究方面也有重要意义。 展开更多
关键词 长角血蜱 4D8基因 克隆 原核表达
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微小牛蜱4D8基因原核表达及免疫原性分析
3
作者 刘军龙 关贵全 +5 位作者 李有全 马米玲 刘爱红 任巧云 殷宏 罗建勋 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第10期11-14,共4页
按GenBank已知微小牛蜱的4D8基因核苷酸序列设计1对表达引物。提取微小牛蜱幼蜱总RNA,反转录合成双链cDNA,用设计的表达引物扩增出4D8基因,扩增得到的核苷酸长486 bp,编码161个氨基酸,该蛋白预计分子质量为18 ku。将该基因亚克隆到原核... 按GenBank已知微小牛蜱的4D8基因核苷酸序列设计1对表达引物。提取微小牛蜱幼蜱总RNA,反转录合成双链cDNA,用设计的表达引物扩增出4D8基因,扩增得到的核苷酸长486 bp,编码161个氨基酸,该蛋白预计分子质量为18 ku。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX4T-1,构建重组原核表达载体pGEX4T-1-4D8,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导,可成功表达。重组融合蛋白分子质量为45 ku左右,与预期大小一致。Western blot显示,兔抗微小牛蜱唾液腺、肠道和卵巢抗体能够识别重组表达蛋白。 展开更多
关键词 微小牛蜱 4D8基因 原核表达
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麻类脱胶高效菌株DCE01的Pel4I8基因克隆与表达 被引量：1
4
作者 李琦 成莉凤 +2 位作者 曾洁 刘朝阳 刘正初 《中国麻业科学》 2015年第4期206-210,共5页
从麻类脱胶高效菌株DCE01中克隆出一个果胶酶基因Pel4I8,采用表达载体p ET-28a,在E.coli BL21(DE3)中成功表达。实验结果表明,底物(橘子果胶)的酯化度对酶活有较大影响,用酯化程度在55%-70%的橘子果胶作底物时酶活最高(酶活为17.5U/ml)... 从麻类脱胶高效菌株DCE01中克隆出一个果胶酶基因Pel4I8,采用表达载体p ET-28a,在E.coli BL21(DE3)中成功表达。实验结果表明,底物(橘子果胶)的酯化度对酶活有较大影响,用酯化程度在55%-70%的橘子果胶作底物时酶活最高(酶活为17.5U/ml);胞内酶最适反应温度为55℃,最适反应p H为9.5。该结果可为深入发掘DCE01菌株的基因资源提供重要科学依据。 展开更多
关键词 基因 克隆 表达 麻类脱胶 果胶酶 Pel4I8基因
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小亚璃眼蜱4D8基因在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析 被引量：1
5
作者 赵金国 刘爱红 +1 位作者 殷宏 罗建勋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期375-379,共5页
为进行抗小亚璃眼蜱疫苗的研究,采用PCR方法从重组质粒pGEM-T-pHyaa4D8中克隆了pHyaa4D8分子的基因片段,构建了真核融合表达载体pPIC9K-pHyaa4D8,在毕赤酵母中进行表达,并对重组酵母菌的发酵条件进行了优化。结果表明,表达出约19ku的目... 为进行抗小亚璃眼蜱疫苗的研究,采用PCR方法从重组质粒pGEM-T-pHyaa4D8中克隆了pHyaa4D8分子的基因片段,构建了真核融合表达载体pPIC9K-pHyaa4D8,在毕赤酵母中进行表达,并对重组酵母菌的发酵条件进行了优化。结果表明,表达出约19ku的目的蛋白,诱导表达的最佳时间是72h。Western-blot分析结果显示,表达产物能被半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺抗原免疫兔血清识别,在19ku左右出现目的条带,说明表达的目的蛋白具有反应活性。 展开更多
关键词 小亚璃眼蜱 4D8基因片段 真核表达 毕赤酵母
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