毛白杨4-CL cDNA的克隆、表达及活性分析 被引量：6

1

作者 杨向东 王汉中 +2 位作者 胡赞民 刘贵华 沈金雄 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期101-105,共5页

从毛白杨(Populus tomentosa)木质化茎中提取总RNA,利用RT-PCR技术进行cDNA扩增,获得1条1 621 bp的片段。测序结果表明:该片段编码536个氨基酸组成的多肽,序列中包含所有已知4-CL蛋白的2个特征序列boxⅠ(SSGTTGLPKGV)和boxⅡ(GEICIRG)。... 从毛白杨(Populus tomentosa)木质化茎中提取总RNA,利用RT-PCR技术进行cDNA扩增,获得1条1 621 bp的片段。测序结果表明:该片段编码536个氨基酸组成的多肽,序列中包含所有已知4-CL蛋白的2个特征序列boxⅠ(SSGTTGLPKGV)和boxⅡ(GEICIRG)。将cDNA克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,并转化大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞BL21(DE3)。IPTG诱导后,经SDS-PAGE和Western-blot分析表明,4-CL基因在大肠杆菌BL21中获得表达,所表达融合蛋白的分子量约为70 ku。酶活性分析表明:该重组蛋白对底物PA、FA、CA均表现出催化活性,其偏爱性顺序为PA>FA>CA,对SA则没有活性。 展开更多

关键词 毛白杨 4-香豆酰辅酶A连接酶 原核表达 偏爱性

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链格孢菌侵染采后伽师瓜抗病关键酶活性变化规律 被引量：3

2

作者 曾禹睿慷 白羽嘉 +4 位作者 王乾乾 迪娜拉·海拉提 蒋莉莹 刘阳 冯作山 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2022年第16期8-17,共10页

该文将链格孢菌无损接种于采后伽师瓜大、小、无网纹处,通过研究苯丙烷代谢相关酶及细胞壁降解酶活性变化规律,比较伽师瓜不同网纹处、不同组织抗病性差异。结果表明:大网纹组发病率显著高于其他组,在侵染18 d时病害发生率为大网纹组89.... 该文将链格孢菌无损接种于采后伽师瓜大、小、无网纹处,通过研究苯丙烷代谢相关酶及细胞壁降解酶活性变化规律,比较伽师瓜不同网纹处、不同组织抗病性差异。结果表明:大网纹组发病率显著高于其他组,在侵染18 d时病害发生率为大网纹组89.00%、小网纹组83.33%、无网纹组78.00%。苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia lyase,PAL)、4-香豆酰辅酶A连接酶(4-coumaroyl-Coa ligase,4CL)、几丁质酶(chitinase,CHT)、β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-glucanase,GLU)均呈先上升后下降的趋势,接种组均高于对照组,差异显著(p<0.05);无网纹组外、内果皮的PAL活性峰值均高于大网纹组和小网纹组,活性为135.16、221.81 U/g,小网纹组果肉处PAL峰值高于大网纹组和无网纹组,活性为44.42 U/g;无网纹组外、内果皮及果肉的4CL活性峰值均高于小网纹组和大网纹组,活性为44.42、131.28、221.13 U/g;无网纹组外、内果皮及果肉的CHT及GLU活性峰值均高于大网纹组和小网纹组,CHT活性分别为170.30、153.60、121.48 U/g,GLU活性分别为29.84、19.27、15.71 U/g。PAL、4CL、CHT、GLU活性可以在一定程度上反映伽师瓜对于链格孢菌侵染的抵抗能力,无网纹最强,小网纹次之,大网纹最弱;外果皮最强,内果皮次之,果肉最弱。 展开更多

关键词 链格孢菌 无损侵染 伽师瓜 苯丙氨酸解氨酶 4-香豆酰辅酶A连接酶 几丁质酶 β-1 3葡聚糖酶

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重组大肠杆菌发酵生产树莓酮 被引量：3

3

作者 王程程 郑璞 +1 位作者 陈鹏程 杨波 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期9-14,共6页

树莓酮是一种在工业上有多种用途的重要香料物质。将来源于不同植物的4-香豆酰辅酶A连接酶(4-coumarate:Co A ligase,4CL1)、苄基丙酮合酶(benzalacetone synthase,BAS)和苄基丙酮还原酶(raspberry ketone/zingerone synthase,RZS1)基... 树莓酮是一种在工业上有多种用途的重要香料物质。将来源于不同植物的4-香豆酰辅酶A连接酶(4-coumarate:Co A ligase,4CL1)、苄基丙酮合酶(benzalacetone synthase,BAS)和苄基丙酮还原酶(raspberry ketone/zingerone synthase,RZS1)基因分别克隆到载体p CDF-DUET-1和p ET-DUET-1中,构建重组质粒并转入大肠杆菌W3110(DE3)中,成功获得了以对香豆酸为前体发酵生产覆盆子酮的重组菌株WCC-1。该菌摇瓶发酵培养2 h后,添加0. 8 mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG),30℃诱导,发酵72 h条件下,产覆盆子酮的质量浓度达到125. 86 mg/L;在3 L发酵罐中进行补料分批发酵68 h,覆盆子酮的质量浓度提高到178. 13 mg/L。该研究展现了微生物发酵生产树莓酮的前景。 展开更多

关键词 覆盆子酮 对香豆酸 4-香豆酰辅酶A连接酶 苄基丙酮合酶 苄基丙酮还原酶 发酵

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丝瓜果实发育过程中4-香豆酰辅酶A连接酶在管状分子分化中的作用 被引量：3

4

作者 王隆华 姜宁 颜季琼 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1997年第S1期154+149-153,149-153,共6页

对丝瓜果实发育过程中４－香豆酰辅酶Ａ连接酶作为初步纯化，并对它的一些理化性质作了研究．结果表明４－ＣＬ含有两个同工酶，酶Ⅰ纯化１５．６８倍含量为２２．６３％；酶Ⅱ纯化４４．２３倍含量为３．９１％．酶Ⅰ对香豆酸和咖啡酸... 对丝瓜果实发育过程中４－香豆酰辅酶Ａ连接酶作为初步纯化，并对它的一些理化性质作了研究．结果表明４－ＣＬ含有两个同工酶，酶Ⅰ纯化１５．６８倍含量为２２．６３％；酶Ⅱ纯化４４．２３倍含量为３．９１％．酶Ⅰ对香豆酸和咖啡酸的亲合性大于酶Ⅱ的，酶Ⅰ的最适温度为４０℃，最适ｐＨ为８．０．研究表明４－ＣＬ活性与木质素的生物合成和管状分子分化密切相关，它们之间存在一种顺序关系。 展开更多

关键词 丝瓜果实 4-香豆酰辅酶A连接酶 管状分子 细胞分化

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白藜芦醇在酿酒酵母中的组合表达 被引量：2

5

作者 孙萍 郭丽琼 +3 位作者 梁景龙 林俊芳 黄晓燕 黄佳俊 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期7-12,共6页

将克隆自拟南芥的4cl基因和巨峰葡萄的rs基因,利用降落重叠延伸PCR的方法,成功构建了含有G418抗性筛选标记的酵母表达载体pRS42K-4CL以及含有潮霉素抗性筛选标记的酵母表达载体pRS42H-RS。采用LiAc/SS carrier DNA/PEG法将含有目的基因... 将克隆自拟南芥的4cl基因和巨峰葡萄的rs基因,利用降落重叠延伸PCR的方法,成功构建了含有G418抗性筛选标记的酵母表达载体pRS42K-4CL以及含有潮霉素抗性筛选标记的酵母表达载体pRS42H-RS。采用LiAc/SS carrier DNA/PEG法将含有目的基因的2个载体共同转化至酿酒酵母工业菌株EC1118中,通过PCR及酶切鉴定等方法验证重组工程菌。以对香豆酸为底物,将获得的酿酒酵母工程菌于YPD液体培养基中发酵(25℃,150 r/min,96 h),发酵液用乙酸乙酯抽提后采用高效液相色谱(HPLC)法进行检测,其结果显示发酵产物中白藜芦醇的含量为0.78 mg/L。这表明,拟南芥的4cl基因与巨峰葡萄的rs基因在酿酒酵母工程菌中成功得到了表达,并且表达产物利用对香豆酸为前体物质合成了目标产物白藜芦醇。该研究为进一步实现白藜芦醇在酵母中的工业化生产奠定了基础。 展开更多

关键词 白藜芦醇 酿酒酵母 组合表达 4-香豆酰辅酶A连接酶 白藜芦醇合酶

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尾叶桉GLU4中4-香豆酰辅酶A连接酶基因克隆及原核表达 被引量：1

6

作者 陈博雯 潘俊霞 +2 位作者 蔡文侠 付珊 姜伟 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期150-155,共6页

4-香豆酰辅酶A连接酶(4-coumarate:coenzyme A ligase,4CL)是木质素合成中的关键酶,根据植物中4CL保守序列设计引物,以尾叶桉GLU4嫩茎为材料克隆到其4CL基因,命名为Eu4CL。该基因gDNA长5 534 bp,cDNA长1 640 bp,CDS区编码544个氨基酸。E... 4-香豆酰辅酶A连接酶(4-coumarate:coenzyme A ligase,4CL)是木质素合成中的关键酶,根据植物中4CL保守序列设计引物,以尾叶桉GLU4嫩茎为材料克隆到其4CL基因,命名为Eu4CL。该基因gDNA长5 534 bp,cDNA长1 640 bp,CDS区编码544个氨基酸。Eu4CL核酸序列与GenBank已登录的桉属植物4CL基因同源性达到98%,与毛竹等其他科属植物4CL的同源性达77%以上,其编码的氨基酸序列经比对发现具有完整4CL结构域及AMP结合位点、CoA结合位点,与土肉桂等植物中4CL基因编码序列同源性也在79%以上,确定为4CL基因。对Eu4CL编码蛋白序列理化性质及结构进行生物信息学分析,利用MEGA软件对基因序列进行系统进化树分析。采用pQE30/M15系统对Eu4CL进行原核表达,重组质粒成功表达目的蛋白,分子量约60 ku。本研究从尾叶桉GLU4中克隆得到Eu4CL基因并原核表达,为该基因的酶学分析以及利用该基因转化调控尾叶桉木质素合成奠定基础。 展开更多

关键词 尾叶桉 4-香豆酰辅酶A连接酶 生物信息学分析 原核表达

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植物酶催化组合合成黄酮及4-羟基-δ-内酯类化合物

7

作者 莫婷 王娟 +5 位作者 高博闻 张乐 刘晓 王晓晖 屠鹏飞 史社坡 《有机化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2015年第5期1052-1059,共8页

以黄酮类化合物生物合成过程中的两个关键酶:4-香豆酰辅酶A连接酶(4-coumarate coenzyme A ligase,4CL)和查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)为工具酶,探讨酶催化组合合成在合成"非天然的天然产物"群(库)中的应用.结果发现... 以黄酮类化合物生物合成过程中的两个关键酶:4-香豆酰辅酶A连接酶(4-coumarate coenzyme A ligase,4CL)和查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)为工具酶,探讨酶催化组合合成在合成"非天然的天然产物"群(库)中的应用.结果发现在4CL和CHS的共同作用下,仅利用8个简单的有机酸就可以产生包括8个黄酮类似物、16个4-羟基-δ-内酯和1个苄基丙酮共计25个"非天然的天然产物"群,为构建结构多样的小分子化合物群(库)提供方法学参考. 展开更多

关键词 植物聚酮合成酶 非天然的天然产物 4-香豆酰辅酶A连接酶 黄酮 4-羟基-δ-内酯

原文传递

苯丙氨酸代谢途径关键酶:PAL、C4H、4CL研究新进展 被引量：82

8

作者 李莉 赵越 马君兰 《生物信息学》 2007年第4期187-189,共3页

主要阐述了苯丙氨酸代谢途径中三种关键酶:苯丙氨酸解氨酶(PAL)、肉桂酸4-羟基化酶(C4H)、4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)的研究进展,希望能为研究植物次生代谢途径的研究工作者提供一些帮助。

关键词 次生代谢 苯丙氨酸解氨酶(PAL) 肉桂酸4-羟基化酶(C4H) 4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)

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棉花4-香豆酸辅酶A连接酶基因克隆及原核表达 被引量：28

9

作者 倪志勇 王娟 +3 位作者 吕萌 李波 白岩 范玲 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期429-436,共8页

本研究从棉花中克隆了一个4CL基因,命名为Gh4CL2(GenBank登录号为FJ848870)。研究结果表明:Gh4CL2基因cDNA全长2332bp,具有一个1725bp的开放阅读框,5′非编码区为64bp,3′非编码区为543bp,编码574个氨基酸,预测分子量约为62.106kD,等电... 本研究从棉花中克隆了一个4CL基因,命名为Gh4CL2(GenBank登录号为FJ848870)。研究结果表明:Gh4CL2基因cDNA全长2332bp,具有一个1725bp的开放阅读框,5′非编码区为64bp,3′非编码区为543bp,编码574个氨基酸,预测分子量约为62.106kD,等电点为5.94。氨基酸同源性分析发现,Gh4CL2与来自白杨、大豆和紫草的4CL一致性较高。进一步研究Gh4CL2基因的功能,构建了该基因的原核表达载体pET-28a-4CL2,经酶切鉴定后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。SDS-PAGE分析表明,最佳诱导表达条件为0.5mmol/LIPTG在37℃下诱导4h,重组蛋白主要以包涵体形式出现。 展开更多

关键词 棉花 4-香豆酸辅酶A连接酶 基因克隆 原核表达

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茉莉酸甲酯处理对鲜切菠萝品质及抗氧化活性的影响 被引量：26

10

作者 季悦 李静 +2 位作者 王雷 金鹏 郑永华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第1期258-263,共6页

研究茉莉酸甲酯处理对鲜切菠萝贮藏期间品质和抗氧化活性的影响。先将完整的菠萝果实在20℃条件下分别用浓度为0、1、10、100μmol/L的茉莉酸甲酯熏蒸12 h,然后进行鲜切加工并于15℃条件下贮藏48 h。结果表明,茉莉酸甲酯处理可促进鲜切... 研究茉莉酸甲酯处理对鲜切菠萝贮藏期间品质和抗氧化活性的影响。先将完整的菠萝果实在20℃条件下分别用浓度为0、1、10、100μmol/L的茉莉酸甲酯熏蒸12 h,然后进行鲜切加工并于15℃条件下贮藏48 h。结果表明,茉莉酸甲酯处理可促进鲜切菠萝总酚含量和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力上升,抑制可溶性固形物及可滴定酸含量下降,而对色泽及菌落总数无显著影响(P>0.05)。其中,10μmol/L茉莉酸甲酯处理效果最好,能显著地诱导鲜切菠萝贮藏期间苯丙氨酸解氨酶和肉桂酸-4-羟化酶活力的上升(P<0.05),延缓4-香豆酸辅酶A连接酶活力的下降(P<0.05),从而促进总酚和总黄酮的积累,提高DPPH自由基清除能力。这些结果表明,茉莉酸甲酯处理可保持鲜切菠萝的品质并提高其抗氧化活性。 展开更多

关键词 茉莉酸甲酯 鲜切菠萝 苯丙氨酸解氨酶 肉桂酸-4-羟化酶 4-香豆酸辅酶A连接酶 抗氧化活性

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UGPase和反义4CL基因对转基因烟草纤维素和木质素合成的调控 被引量：14

11

作者 梁海泳 夏秀英 冯雪松 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2006年第6期1067-1072,共6页

用根癌农杆菌介导法将源于紫穗槐的尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UGPase)基因、反义4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)基因以及两者的双价基因分别转移至烟草中。PCR和Southern杂交检测证实外源基因已整合到转基因烟草基因组中。测定全纤维素和Kl... 用根癌农杆菌介导法将源于紫穗槐的尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UGPase)基因、反义4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)基因以及两者的双价基因分别转移至烟草中。PCR和Southern杂交检测证实外源基因已整合到转基因烟草基因组中。测定全纤维素和Klason木质素含量的结果显示,增强UGPase基因的表达可提高转基因植株的纤维素含量,但对木质素含量没有影响;抑制4CL基因的表达可显著降低转基因植株的木质素含量,但对纤维素含量没有影响;转移双价基因的转基因植株中纤维素含量增加而木质素含量降低。 展开更多

关键词 木质素 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 4-香豆酸辅酶A连接酶 纤维素 烟草

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青稞4-香豆酸辅酶A连接酶基因4CL的克隆及表达分析 被引量：13

12

作者 杨晓云 杨智敏 +4 位作者 罗小娇 孔德媛 袁金娥 刘新春 冯宗云 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1603-1610,共8页

为了进一步了解4-香豆酸辅酶A连接酶(4-coumarate:CoA ligase;4CL)基因在黄酮合成中的作用,利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)获得了青稞4CL基因(Hv4CL)的cDNA全长序列,并利用实时荧光定量PCR(q... 为了进一步了解4-香豆酸辅酶A连接酶(4-coumarate:CoA ligase;4CL)基因在黄酮合成中的作用,利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)获得了青稞4CL基因(Hv4CL)的cDNA全长序列,并利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术,对该基因在青稞4个胚乳发育时间段茎、叶和花中的表达情况进行研究。结果表明,Hv4CL基因cDNA序列全长2 107bp,该序列包含一个完整的开放阅读框(ORF,1 662bp),编码553个氨基酸。Hv4CL与小麦同源性最高(96%),且该蛋白序列中包含2个保守的box,即AMP结合盒:boxⅠ(SSGTTGLPKGV)和boxⅡ(GEICIRG)。qRT-PCR分析结果表明:4CL基因在青稞不同发育时期、不同组织的表达丰度不同,在茎中表达量最高,其次是叶和籽粒。 展开更多

关键词 青稞 黄酮 4-香豆酸辅酶A连接酶 RACE 表达模式

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甜高粱4-香豆酸辅酶A连接酶基因(4CL)的克隆与鉴定及时空表达分析 被引量：12

13

作者 周 王玉锋 +4 位作者 娄来清 周华 陈素丽 蔡庆生 滕胜 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期9-19,共11页

通过对木质素合成途径中关键的限速酶4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL,EC6.2.1.12)基因克隆、鉴定与时空表达分析来研究甜高粱4CL基因家族的特性,为今后利用基因工程手段改造甜高粱木质素提供一定的理论依据。搜索NCBI数据库得到高粱4CL基因家... 通过对木质素合成途径中关键的限速酶4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL,EC6.2.1.12)基因克隆、鉴定与时空表达分析来研究甜高粱4CL基因家族的特性,为今后利用基因工程手段改造甜高粱木质素提供一定的理论依据。搜索NCBI数据库得到高粱4CL基因家族序列,以甜高粱品种‘大力士’的cDNA为模板克隆得到甜高粱4CL家族中各蛋白编码序列(CDS),CDS连入表达载体pET51B,转入大肠杆菌表达菌株(BL21)进行诱导表达,镍柱纯化后进行酶活性分析。实时定量荧光PCR(qPCR)检测甜高粱4CL基因家族各成员在不同时期和不同组织中的相对表达量。结果表明:通过在NCBI数据库中对植物4CL蛋白序列分析,在高粱基因组中,鉴定出7个4CL类似(4CL-like)基因。序列对位排列分析显示:甜高粱7个4CL-like基因在高粱属中非常保守;其氨基酸序列与水稻相对应的Os4CL有90%左右的相似度;它们可分为4CL ClassⅠ和4CL ClassⅡ两类,其中Sb07G007810、Sb04G005210、Sb10G026130、Sb07G022040、Sb03G000610和Sb06G016630属于4CL ClassⅠ,Sb04G031010属于4CL ClassⅡ。酶活性分析表明甜高粱7个4CL蛋白都具有4-香豆酸辅酶A连接酶活力。通过对甜高粱7个4CL基因时空表达分析发现,参与木质素合成的4CL ClassⅠ类基因在组织生长快速期的表达量非常高,而参与类黄酮合成的4CL ClassⅡ类基因在植物受到太阳直接照射的部位表达量显著地增加。在根和茎中,Sb04G005210基因的表达量最高;在叶中,Sb07G007810基因的表达量最高。上述甜高粱7个基因属于真正的4CL基因。 展开更多

关键词 甜高粱 4-香豆酸辅酶A连接酶 木质素 时空表达 类黄酮 酶活性 基因克隆

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不同地区短葶飞蓬总黄酮含量与PAL和4CL酶活性的比较 被引量：11

14

作者 何慕涵 苏文华 +2 位作者 张光飞 代久凤 罗芳芳 《中国农学通报》 CSCD 2012年第25期179-183,共5页

为了探讨短葶飞蓬总黄酮含量地区差异形成的原因,从酶的角度揭示药用植物有效成分不同的原因;采集云南省不同地区短葶飞蓬野生植株,活体采回实验室4℃条件保存,鲜叶测定酶活性,剩余部分烘干研磨测定化学有效成分,比较它们总黄酮含量和... 为了探讨短葶飞蓬总黄酮含量地区差异形成的原因,从酶的角度揭示药用植物有效成分不同的原因;采集云南省不同地区短葶飞蓬野生植株,活体采回实验室4℃条件保存,鲜叶测定酶活性,剩余部分烘干研磨测定化学有效成分,比较它们总黄酮含量和苯丙氨酸解氨酶(PAL)及4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)的活性。短葶飞蓬总黄酮含量和相关酶活性都存在空间差异,其中总黄酮含量最低地区仅为最高地区的20.47%;总黄酮含量和PAL及4CL活性都为昆明待补地区最低,并且它们之间有正相关关系,说明产地间短葶飞蓬植株总黄酮含量的差异与合成过程的不同有关,但是合成的不同不能解释全部差异,总黄酮含量的不同还可能有其他原因。 展开更多

关键词 短葶飞蓬 合成过程 总黄酮 苯丙氨酸解氨酶(PAL) 4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)

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棉花Gh4CL1基因克隆及表达 被引量：8

15

作者 倪志勇 吕萌 范玲 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期876-882,共7页

根据棉花纤维特异表达cDNA文库分析得到的4-香豆酸辅酶A连接酶基因EST序列设计引物,采用RT-PCR技术从棉花中克隆了1个4CL基因,命名为Gh4CL1(GenBank登录号为FJ479707).结果表明:Gh4CL1基因cDNA全长2 331 bp,具有1个1 722 bp的开放阅读... 根据棉花纤维特异表达cDNA文库分析得到的4-香豆酸辅酶A连接酶基因EST序列设计引物,采用RT-PCR技术从棉花中克隆了1个4CL基因,命名为Gh4CL1(GenBank登录号为FJ479707).结果表明:Gh4CL1基因cDNA全长2 331 bp,具有1个1 722 bp的开放阅读框,5′非编码区为64 bp,3′非编码区为445 bp,编码573个氨基酸,预测分子量约为61.951 kD,等电点为5.70.氨基酸同源性分析发现,Gh4CL1与来自白杨、大豆和紫草的4CL同源性较高.半定量RT-PCR检测表明,Gh4CL1基因在不同发育阶段的棉纤维中均有表达,在开花后20 d的棉纤维中表达量最大,说明该基因可能参与调控棉纤维细胞的伸长和次生壁的增厚.Gh4CL1基因在棉花花瓣中表达量最高,在其他组织中低水平表达或不表达. 展开更多

关键词 棉花 4-香豆酸辅酶A连接酶 基因克隆 序列分析 表达分析

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苦荞Ft4CL基因克隆、生物信息学及分子进化分析 被引量：8

16

作者 侯思宇 赵盖超 +5 位作者 刘荣华 孙朝霞 令狐斌 韩渊怀 许冬梅 李红英 《山西农业大学学报（自然科学版）》 CAS 2015年第1期24-28,共5页

与其他作物相比,苦荞中含有较高含量的黄酮类物质-‘芦丁’。4-香豆酸-辅酶A连接酶(4-coumarate:CoA ligase,EC 6.2.1.12)是植物苯丙烷代谢途径转向黄酮类物质代谢的关键酶之一。本研究利用已知的来源于‘九江苦荞’叶片的Ft4CL1(HQ6540... 与其他作物相比,苦荞中含有较高含量的黄酮类物质-‘芦丁’。4-香豆酸-辅酶A连接酶(4-coumarate:CoA ligase,EC 6.2.1.12)是植物苯丙烷代谢途径转向黄酮类物质代谢的关键酶之一。本研究利用已知的来源于‘九江苦荞’叶片的Ft4CL1(HQ654088)基因片段为探针序列,从苦荞叶片转录组数据库中序列拼接得到一个苦荞Ft4CL全长基因,命名为Ft4CL(GenBank登录号:KM362863)。生物信息学分析结果表明:该cDNA长度为2 007bp,具有完整的ORF,共1 743bp,编码580个氨基酸,具备4CL所有活性位点。与已公布的部分Ft4CL基因及蒺藜苜蓿(Pb4CL)、甜瓜(Cm4CL)和黄瓜(Cs4CL)基因相似度为100%、73%、73%和72%。遗传聚类结果显示,该基因归类于双子叶植物。研究结果为深入探讨苦荞黄酮代谢途径提供了基础,也为提高苦荞黄酮含量提供了定向靶基因。 展开更多

关键词 苦荞 4-香豆酸辅酶A连接酶 电子克隆 生物信息学分析

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陆地棉4-香豆酸辅酶A连接酶基因Gh4CL30的功能分析

17

作者 巩隽铭 熊显鹏 +3 位作者 张彩霞 邵东南 程帅帅 孙杰 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1301-1309,共9页

【目的】研究4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)家族基因Gh4CL30的生物学功能,为棉花株型育种提供理论依据和基因种质资源。【方法】利用病毒诱导的基因沉默技术和基因编辑技术获得Gh4CL30沉默和编辑植株,测定该基因抑制及敲除植株的黄酮和木质... 【目的】研究4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)家族基因Gh4CL30的生物学功能,为棉花株型育种提供理论依据和基因种质资源。【方法】利用病毒诱导的基因沉默技术和基因编辑技术获得Gh4CL30沉默和编辑植株,测定该基因抑制及敲除植株的黄酮和木质素含量,调查棉花田间表型性状、种子大小和纤维品质。【结果】Gh4CL30基因沉默和敲除植株中木质素合成相关基因表达量显著下降,4-香豆酸辅酶A连接酶含量显著减少,茎秆中木质素含量显著降低,其株高、种子大小和纤维长度显著降低。【结论】Gh4CL30通过调控棉花木质素生物合成功能影响其生长发育。 展开更多

关键词 陆地棉 4-香豆酸辅酶A连接酶 木质素 基因编辑 株高

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光皮桦中4-香豆酸辅酶A连接酶基因Bl4CL的克隆和表达分析 被引量：6

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作者 程龙军 童再康 +1 位作者 黄华宏 楼雄珍 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2010年第1期5-10,共6页

以从光皮桦茎叶组织提取的mRNA为模板,根据其他已克隆到的阔叶类树种中4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)基因的同源序列设计兼并引物,进行RT-PCR扩增,获得部分基因片段,然后结合5’,3’RACE方法从光皮桦中扩增出1个4CL基因的全长cDNA序列,命名... 以从光皮桦茎叶组织提取的mRNA为模板,根据其他已克隆到的阔叶类树种中4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)基因的同源序列设计兼并引物,进行RT-PCR扩增,获得部分基因片段,然后结合5’,3’RACE方法从光皮桦中扩增出1个4CL基因的全长cDNA序列,命名为Bl4CL。该基因cDNA全长为1983bp(GenBank登录号FJ410448),具有完整的开放阅读框架(69～1697bp),编码蛋白为542个氨基酸,包含一个AMP结合功能域和一个含有12个氨基酸的功能基序。与其他植物中的4CL进行同源性比对的结果显示,Bl4CL蛋白与东北白桦的同源性最高,达到了98%。该基因在光皮桦的根和茎中表达量较高,而在花和叶中的表达量低。 展开更多

关键词 光皮桦 4-香豆酸辅酶A连接酶 基因克隆 表达

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小麦Ta4CL1基因的克隆及其在促进转基因拟南芥生长和木质素沉积中的功能 被引量：4

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作者 孟颖 邢蕾蕾 +3 位作者 曹晓红 郭光艳 柴建芳 秘彩莉 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期63-75,共13页

4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL;EC 6.2.1.12)位于苯丙烷途径分支点的上游,是苯丙烷代谢途径的核心酶,可产生木质素、黄酮类等化合物,这些化合物对植物的生长发育及环境适应性均具有重要作用。在双子叶植物中,有关4CL的研究较多,而在单子叶植... 4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL;EC 6.2.1.12)位于苯丙烷途径分支点的上游,是苯丙烷代谢途径的核心酶,可产生木质素、黄酮类等化合物,这些化合物对植物的生长发育及环境适应性均具有重要作用。在双子叶植物中,有关4CL的研究较多,而在单子叶植物尤其是作物中的研究相对较少。本研究利用RACE技术从普通小麦中克隆了一个4CL基因Ta4CL1。系统发育分析表明,Ta4CL1与水稻、玉米和高粱等植物中在木质素合成中具有重要作用的4CLs聚成一类;利用Ta4CL1过表达、拟南芥4CLs突变体at4cl1、at4cl3和at4cl14cl3及其功能回复株系进行的分析表明,Ta4CL1与At4CL1功能相似,在植物木质素合成中具有重要作用,但未参与黄酮类化合物生物合成的调控过程;Ta4CL1是转基因拟南芥中4CL酶活性的主要贡献者。过表达Ta4CL1的转基因拟南芥叶片增大、茎更粗;Ta4CL1的表达还受茉莉酸甲酯(Methyl jasmonic acid,MeJA)、赤霉素(Gibberellin,GA)和生长素(Indoleacetic acid,IAA)等激素处理的影响。本研究为利用基因工程将Ta4CL1应用于改善小麦秸秆的利用效率提供了理论依据。 展开更多

关键词 4-香豆酸辅酶A连接酶 Ta4CL1 木质素沉积 促进生长 小麦 拟南芥

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当归4-香豆酸辅酶A连接酶基因克隆与组织表达分析 被引量：5

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作者 温随超 王引权 +4 位作者 雒军 夏琦 樊秦 荔淑楠 王振恒 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第24期4824-4829,共6页

4-香豆酸辅酶A连接酶(4-coumarate coenzyme A ligase,4CL)为高等植物苯丙烷代谢途径关键酶之一,在当归阿魏酸的生物合成中起调控作用。研究利用同源克隆结合c DNA末端快速扩增(RACE)技术克隆当归4CL编码基因全长c DNA序列,并用实时荧... 4-香豆酸辅酶A连接酶(4-coumarate coenzyme A ligase,4CL)为高等植物苯丙烷代谢途径关键酶之一,在当归阿魏酸的生物合成中起调控作用。研究利用同源克隆结合c DNA末端快速扩增(RACE)技术克隆当归4CL编码基因全长c DNA序列,并用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析4CL基因在当归幼苗生长过程中根、茎、叶组织中的表达特征。结果表明,获得的4CL c DNA序列(在Gen Bank已注册,登录号为KT880508)全长1 815 bp,含有1个1 632 bp的完整开放阅读框(opening reading frame,ORF),编码544个氨基酸的多肽链。4CL基因在当归幼苗不同生长阶段的根、茎、叶组织中均有表达,随着苗龄增大,茎、叶中的相对表达量显著增加(P<0.05),而根中表达量变化不大,表明4CL基因在当归幼苗中的表达具有明显的时空性。该研究为进一步研究4CL基因的结构与功能,解析当归阿魏酸的合成代谢机制和时空调控的分子基础奠定了工作基础。 展开更多

关键词 当归 4-香豆酸辅酶A连接酶 基因克隆 基因表达

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