-
题名西索米星生物合成基因sis I功能的研究
被引量：1
- 1
-
-
作者
万云凤
洪文荣
石贤爱
-
机构
福州大学生物科学与工程学院
-
出处
《延边大学学报（自然科学版）》
CAS
2016年第2期130-135,共6页
-
基金
国家自然科学基金资助项目(31070093)
-
文摘
通过生物学试验,构建依纽小单孢菌TS388(Micromonospora inyoensis TS388)中sisI基因缺失工程菌,再通过分析其次级代谢产物的变化,揭示西索米星生物合成基因簇上sisI基因的功能.首先构建用于sisI基因框内敲除的穿梭载体pKTI3,经接合转移导入依纽小单孢菌TS388中,通过影印筛选及PCR鉴定获得sisI功能缺失工程菌TI1102(△sisI).工程菌经发酵,提取代谢产物,再经TLC及MS分析,用以比较亲株与工程菌代谢产物结构的差异.结果显示:工程菌TI1102代谢产物结构发生变化,不再合成西索米星,主要积累中间代谢产物JI-20A,由此证明了sisI基因参与了JI-20A到西索米星的3′,4′-双脱羟基作用.获得主产JI-20A的工程菌为该类半合成药物提供了重要前导化合物.
-
关键词
sisI基因
依纽小单孢菌
生物合成
3’
4'-双脱羟基
-
Keywords
sis I gene
Micromonospora inyoensis
biosynthesis
3＇ ,4＇-double dehydroxylase
-
分类号
Q933
[生物学—微生物学]
-
-
题名genP基因在依纽小单孢菌中表达的分析
- 2
-
-
作者
万云凤
洪文荣
石贤爱
-
机构
福州大学生物科学与工程学院
-
出处
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
2016年第5期-,共7页
-
基金
国家自然科学基金项目(31070093)
-
文摘
庆大霉素生物合成过程中的genP基因和西索米星生物合成过程中的sisI基因属同工异源酶基因,均能催化绛红糖胺3′,4′-双脱羟基反应。本研究借助组合生物合成,探索绛红小单孢菌中的genP基因能否在依纽小单孢菌中表达。首先构建genP基因替换sisI基因的同源重组质粒pKPI4,并经接合转移将其导入依纽小单孢菌TS388中,最后再通过影印筛选及PCR鉴定获得genP基因替换sisI基因的工程菌PTI886。将野生型菌株TS388、sisI基因缺失突变株TI1102(TS388△sisI)及工程菌PTI886在同等条件下进行发酵,提取其代谢产物并经薄层层析及质谱分析。结果表明,突变株TI1102不能合成西索米星,而工程菌PTI886仍能继续合成西索米星,且代谢产物组分与野生型菌株TS388相比无明显变化,说明genP基因能在依纽小单孢菌中表达。本研究揭示了同工异源酶基因异源表达的可行性,可为今后不同微生物异源基因组合的研究提供借鉴。
-
关键词
组合生物合成
genP基因
sisⅠ基因
异源表达
3'
4'-双脱羟基
-
Keywords
combinatorial biosynthesis
genP
sisⅠ
heterologous expression
3',4'-double dehydroxylation
-
分类号
Q933
[生物学—微生物学]
Q786
-
-
题名同工异源酶基因forp与genp异源表达的研究
- 3
-
-
作者
林共德
连榕
洪文荣
石贤爱
-
机构
福州大学生物科学与工程学院
-
出处
《宁夏大学学报（自然科学版）》
CAS
2017年第4期377-382,共6页
-
基金
国家自然科学基金资助项目(31070093)
-
文摘
来自绛红色小单孢菌G1008的genp与来自橄榄星小单孢菌FOM808的forp,均参与3’,4’-双脱羟基,2个基因属于同工异源酶基因.应用同源重组原理,实现forp替换genp,探索同工异源酶基因异源表达的可能性.以温敏型穿梭质粒pKC1139为载体,构建同源重组质粒pFP4.经接合转移将载体导入到G1008基因组中,利用影印筛选和PCR验证的方法,获得基因重组工程菌FTP2.提取工程菌次级代谢产物,经TLC和MS分析.结果表明,工程菌仍然可以产生庆大霉素C组分.forp基因的功能得到了体现,外源基因forp实现了异源表达,进一步证实forp是负责参与3’,4’-双脱羟基的功能基因.
-
关键词
异源表达
forp
genp
3’
4’-双脱羟基
绛红色小单孢菌
-
Keywords
heterologous expression
forp
genp
3＇, 4＇-double dehydroxylase
micromonospora purpurea
-
分类号
Q933
[生物学—微生物学]
-
-
题名小单孢菌3',4'-双脱羟基酶基因功能的研究
被引量：3
- 4
-
-
作者
张国华
洪文荣
饶以群
樊伟明
朱宝泉
-
机构
福州大学生物科学与工程学院
浙江震元制药有限公司
上海医药工业研究院
-
出处
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期88-91,共4页
-
基金
国家自然科学基金资助项目(No.31070093
No.30801449)
+1 种基金
国家"重大新药创制"科技重大专项资助项目(No.2009ZX09301-007)
福建省教育厅科研基金资助项目(No.2007F5070)~~
-
文摘
根据文献查阅、同源比对及进化树分析,推测绛红色小单孢菌中gntI和伊纽小单孢菌sisI为3',4'-双脱羟基酶基因。通过克隆得到gntI和sisI,随后将其构建到pET30a表达载体,并在E.coli BL21实现异源表达。利用生物信息学对该蛋白亲水性图谱、空间结构及活性域进行分析、预测。基于同源建模得到三级结构,推测其二级结构以α-螺旋为主,肽段40～60,100～120处可能为该酶活性中心。此研究为该酶进一步功能研究和应用奠定了基础。
-
关键词
小单孢菌
3'
4'-双脱羟基酶基因
生物信息学
-
Keywords
Micromonospora
3′
4′-double dehydroxylase
bioinformatics
-
分类号
Q753
[生物学—分子生物学]
Q784
-
