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Lentivirus-mediated shRNA interference targeting STAT3 inhibits human pancreatic cancer cell invasion 被引量:19
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作者 Guang Yan Chen Huang Jun Cao Ke-Jian Huang Tao Jiang Zheng-Jun Qiu 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2009年第30期3757-3766,共10页
AIM: To investigate RNA interference targeting signal transducer and activator of transcription-3 (STAT3) on invasion of human pancreatic cancer cells.METHODS: We constructed three plasmids of RNA interference tar... AIM: To investigate RNA interference targeting signal transducer and activator of transcription-3 (STAT3) on invasion of human pancreatic cancer cells.METHODS: We constructed three plasmids of RNA interference targeting the STAT3 gene. After LV (lentivirus)-STAT3siRNA (STAT3 small interfering RNA) the vector was transfected into the human pancreatic cell line, SW1990 and cell proliferation was measured by the MTT assay. Flow cytometry was used to assess cell cycle. Vascular endothelial growth favor (VEGF) and matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) mRNA and protein expression were examined by quantitative PCR and western blotting, respectively. The invasion ability of SW1990 cells was determined by cell invasion assay.RESULTS: We successfully constructed the LVSTAT3siRNA lentivirus vector and proved that it can suppress expression of STAT3 gene in SW1990 cells. RNA interference of STAT3 by the LV-STAT3siRNA construct significantly inhibited the growth of SW1990 cells, in addition to significantly decreasing both VEGF and MMP-2 mRNA and protein expression. Moreover, suppression of STAT3 by LV-STAT3siRNA decreased the invasion ability of SW1990 cells.CONCLUSION: The STAT3 signaling pathway may provide a novel therapeutic target for the treatment of pancreatic cancer since it inhibits the invasion ability of pancreatic cancer cells. 展开更多
关键词 Signal transducer and activator of transcription3 RNA interference Lentivirus vector Pancreatic cancercells INVASION
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空间圆形拟合检测新方法 被引量:18
2
作者 李英硕 杨帆 袁兆奎 《测绘科学》 CSCD 北大核心 2013年第6期147-148,共2页
本文提出一种实用的空间圆形拟合检测新方法:根据空间圆中任意两条弦所对应的中垂面与空间圆所处的平面必然相交且交点即为圆心这一空间圆特性,利用空间向量按照最小二乘法推导出圆心计算方程,按照附有条件的间接平差求解圆心坐标,进而... 本文提出一种实用的空间圆形拟合检测新方法:根据空间圆中任意两条弦所对应的中垂面与空间圆所处的平面必然相交且交点即为圆心这一空间圆特性,利用空间向量按照最小二乘法推导出圆心计算方程,按照附有条件的间接平差求解圆心坐标,进而反算出空间圆半径。经实例验证表明该模型可靠,拟合精度高,程序实现较其他模型更为简便,在工程运用中具有良好的实用性。 展开更多
关键词 空间圆 空间向量 最小二乘 限制条件 间接平差
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基于融合特征的视频关键帧提取方法 被引量:17
3
作者 张晓宇 张云华 《计算机系统应用》 2019年第11期176-181,共6页
当前对视频的分析通常是基于视频帧,但视频帧通常存在大量冗余,所以关键帧的提取至关重要.现有的传统手工提取方法通常存在漏帧,冗余帧等现象.随着深度学习的发展,相对传统手工提取方法,深度卷积网络可以大大提高对图像特征的提取能力.... 当前对视频的分析通常是基于视频帧,但视频帧通常存在大量冗余,所以关键帧的提取至关重要.现有的传统手工提取方法通常存在漏帧,冗余帧等现象.随着深度学习的发展,相对传统手工提取方法,深度卷积网络可以大大提高对图像特征的提取能力.因此本文提出使用深度卷积网络提取视频帧深度特征与传统方法提取手工特征相结合的方法提取关键帧.首先使用卷积神经网络对视频帧进行深度特征提取,然后基于传统手工方法提取内容特征,最后融合内容特征和深度特征提取关键帧.由实验结果可得本文方法相对以往关键帧提取方法有更好的表现. 展开更多
关键词 关键帧提取 HSV HOG 3D卷积神经网络 特征向量 深度特征
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三维建模方法研究现状综述 被引量:16
4
作者 郑佳荣 王强 占文锋 《北京工业职业技术学院学报》 2013年第4期5-7,36,共4页
针对三维建模问题,通过查阅大量资料,阐述了三维建模基本方法,对三维建模方法以矢量模型、体元模型和混合模型进行分类,分析了各种三维建模方法的优缺点。就真三维建模主要问题,对测绘学和地学不同学科专家观点进行分析总结,为三维建模... 针对三维建模问题,通过查阅大量资料,阐述了三维建模基本方法,对三维建模方法以矢量模型、体元模型和混合模型进行分类,分析了各种三维建模方法的优缺点。就真三维建模主要问题,对测绘学和地学不同学科专家观点进行分析总结,为三维建模的研究和实践提供参考。 展开更多
关键词 三维建模 矢量模型 体元模型 真三维
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用面向对象的方法实现3DS文件的读取与操纵 被引量:9
5
作者 王益群 黄诚 《盐城工学院学报(自然科学版)》 CAS 2005年第3期41-44,共4页
介绍了利用面向对象的程序设计方法实现了3DS文件的读取。与面向过程的方法比较,面向对象方法对于理解3DS文件的读取、重绘及控制显得条理清晰,易于掌握,同时又方便移植到其它应用程序中。基于这一点,提出了将3DS文件的读取工作封装在... 介绍了利用面向对象的程序设计方法实现了3DS文件的读取。与面向过程的方法比较,面向对象方法对于理解3DS文件的读取、重绘及控制显得条理清晰,易于掌握,同时又方便移植到其它应用程序中。基于这一点,提出了将3DS文件的读取工作封装在一个类中,从而提高了程序的可读性。 展开更多
关键词 面向对象 OPENGL 3DMAX 法向量 面向对象方法 3DS 读取 文件 程序设计方法 操纵
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基于ID3算法的决策树研究与应用 被引量:10
6
作者 郭超峰 李梅莲 《许昌学院学报》 CAS 2007年第2期107-111,共5页
在ID3算法的基础上,提出了一个在决策树各级节点上,以信息增益作为节点属性选择的标准,对每个非叶节点进行了测试类聚,并将例子集分成不同子集,实现了决策树创建和相应规则的生成新算法.实验结果表明该实现方法是正确和高效的.
关键词 ID3 决策树 多叉树 向量 遍历
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三维激光雷达在地面无人平台中的外参数标定 被引量:11
7
作者 程子阳 任国全 +1 位作者 张银 孔国杰 《应用激光》 CSCD 北大核心 2019年第1期113-118,共6页
针对车载三维激光雷达在工作前需要对安装外参数进行标定的问题,综合考虑激光雷达的扫描光束不可见、多线式扫描等特点,提出了一种激光雷达外参数的标定方法。首先对普通纸箱进行扫描,以纸箱两个侧面和地面间的相互垂直关系作为约束,采... 针对车载三维激光雷达在工作前需要对安装外参数进行标定的问题,综合考虑激光雷达的扫描光束不可见、多线式扫描等特点,提出了一种激光雷达外参数的标定方法。首先对普通纸箱进行扫描,以纸箱两个侧面和地面间的相互垂直关系作为约束,采用随机抽样一致性算法(RANSAC)在获取的点云数据中拟合出三个平面的初始模型,并通过旋转、平移步骤优化平面模型的拟合精度,从最优模型中提取同名向量和同名点;然后基于空间向量的三维坐标系转换模型,对激光雷达的旋转和平移参数进行求解,只需采集一次数据即可完成所有外参数的标定;最后结合仿真和在标定后对室外环境三维重建的结果,验证了算法的有效性。 展开更多
关键词 三维激光雷达 外参数标定 RANSAC算法 同名向量 三维坐标系转换
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基于Cortex-M3的引导程序分析与设计 被引量:11
8
作者 朱传宏 沈严 +1 位作者 颜云松 徐军 《计算机与数字工程》 2012年第10期58-59,109,共3页
基于Flash存储器的嵌入式系统中,软件架构一般分为两部分:引导加载程序、应用程序。通过引导加载程序(bootloader),实现建立应用程序运行环境、更新应用程序等功能。针对Cortex-M3内核的特点,设计引导程序的架构,对引导程序的工作原理... 基于Flash存储器的嵌入式系统中,软件架构一般分为两部分:引导加载程序、应用程序。通过引导加载程序(bootloader),实现建立应用程序运行环境、更新应用程序等功能。针对Cortex-M3内核的特点,设计引导程序的架构,对引导程序的工作原理和启动流程进行了详细的分析,并在意法半导体公司的STM32F107芯片上进行验证,满足工程实际需要,方便移植到其它基于Cortex-M3内核的处理器,同时针对应用程序的编写提出了几点注意事项,对工程应用具有一定的指导意义。 展开更多
关键词 CORTEX-M3 引导程序 中断向量
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基于纵横波解耦的三维弹性波逆时偏移 被引量:8
9
作者 周熙焱 常旭 +1 位作者 王一博 姚振兴 《地球物理学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2018年第3期1038-1052,共15页
纵横波波场分离是弹性波偏移方法的必要条件,通过纵横波成像的差异可以获取更多地下介质的信息.目前所用的纵横波波场分离方法多采用Helmholtz分解,这样得到的波场不仅物理意义发生了变化,振幅和相位也会发生改变.本文采用纵横波解耦的... 纵横波波场分离是弹性波偏移方法的必要条件,通过纵横波成像的差异可以获取更多地下介质的信息.目前所用的纵横波波场分离方法多采用Helmholtz分解,这样得到的波场不仅物理意义发生了变化,振幅和相位也会发生改变.本文采用纵横波解耦的弹性波方程,将其应用于三维介质,对比分析了纵横波解耦方法相对传统Helmholtz分解方法在相位、振幅上的优势.将该解耦的波场分离方法应用于弹性波逆时偏移,能得到相位、振幅和物理意义不受改变的偏移结果.但是该解耦方法分离得到的纵横波波场均为矢量场,将该波场分离方法用于弹性波逆时偏移,还需要解决矢量场如何得到标量成像结果的问题.本文引入了Poynting矢量,通过Poynting矢量对矢量波场进行标量化,这样就能得到保振幅、相位,且无极性反转的标量PP和PS成像结果.同时针对S波Poynting矢量求取不准确的问题,采用拟S波应力场和S波速度场得到了更加准确的S波Poynting矢量.理论计算证明了本文采用的3D波场解耦的矢量波场分离方法的正确性和引入Poynting矢量对矢量波场进行标量成像的有效性. 展开更多
关键词 纵横波解耦 矢量波场分离 3D Poynting矢量 标量成像条件
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Support Vector Machine active learning for 3D model retrieval 被引量:6
10
作者 LENG Biao QIN Zheng LI Li-qun 《Journal of Zhejiang University-Science A(Applied Physics & Engineering)》 SCIE EI CAS CSCD 2007年第12期1953-1961,共9页
In this paper, we present a novel Support Vector Machine active learning algorithm for effective 3D model retrieval using the concept of relevance feedback. The proposed method learns from the most informative objects... In this paper, we present a novel Support Vector Machine active learning algorithm for effective 3D model retrieval using the concept of relevance feedback. The proposed method learns from the most informative objects which are marked by the user, and then creates a boundary separating the relevant models from irrelevant ones. What it needs is only a small number of 3D models labelled by the user. It can grasp the user's semantic knowledge rapidly and accurately. Experimental results showed that the proposed algorithm significantly improves the retrieval effectiveness. Compared with four state-of-the-art query refinement schemes for 3D model retrieval, it provides superior retrieval performance after no more than two rounds of relevance feedback. 展开更多
关键词 3D model retrieval Shape descriptor Relevance feedback Support vector Machine (SVM) Active learning
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陆地棉小GTP结合蛋白基因GhROP3的克隆、表达及VIGS载体的构建 被引量:8
11
作者 胡子曜 代培红 +7 位作者 刘超 玛迪娜·木拉提 王倩 吾尕力汗·阿不都维力 赵燚 孙玲 徐诗佳 李月 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期106-113,共8页
通过对陆地棉小GTP结合蛋白(small GTP-binding protein)基因GhROP3在不同逆境胁迫下的响应表达模式进行研究分析,为棉花抗逆相关基因克隆及棉花抗逆分子机制研究奠定基础。利用同源克隆的方法克隆GhROP3,利用生物信息学的方法分析该基... 通过对陆地棉小GTP结合蛋白(small GTP-binding protein)基因GhROP3在不同逆境胁迫下的响应表达模式进行研究分析,为棉花抗逆相关基因克隆及棉花抗逆分子机制研究奠定基础。利用同源克隆的方法克隆GhROP3,利用生物信息学的方法分析该基因的理化性质,通过荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法分析GhROP3在不同逆境诱导条件下的表达模式及组织表达特异性。同时构建了该基因的VIGS沉默载体,并利用农杆菌介导法转化棉花,qRT-PCR检测沉默效率。结果表明,以陆地棉的cDNA为模板克隆得到GhROP3,其开放阅读框(ORF)为591 bp,编码一个含196个氨基酸的碱性亲水性蛋白,相对分子质量为21.75 kD。qRT-PCR分析结果表明,GhROP3在棉花幼苗根、茎、叶、子叶和下胚轴中均有表达,且在茎中表达水平最高;GhROP3对高盐、干旱、低温和棉花黄萎病菌处理都有一定程度的响应。构建该基因的VIGS沉默载体转化棉花,qRT-PCR检测GhROP3在棉花的叶片和根部沉默,证明VIGS沉默载体构建成功并可以在植物体内正常工作。GhROP3可能在陆地棉的抗逆境胁迫反应中发挥着重要的作用。 展开更多
关键词 棉花 GhROP3 基因克隆 表达分析 载体构建
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基于旋转矢量法的三维管线建模 被引量:8
12
作者 左国成 王山东 《计算机与数字工程》 2013年第1期118-120,共3页
管线三维可视化的一个重点问题是对于从原有二维管线中心线数据中计算提取出管线表面顶点的坐标,难点在于弯管处的表面处理。文中提出基于旋转矢量法的三维管线建模方法,能够生成连续的三维管线,并可以控制管线的精细程度。实验表明此... 管线三维可视化的一个重点问题是对于从原有二维管线中心线数据中计算提取出管线表面顶点的坐标,难点在于弯管处的表面处理。文中提出基于旋转矢量法的三维管线建模方法,能够生成连续的三维管线,并可以控制管线的精细程度。实验表明此方法便于理解,计算量小,生成的管线表面平滑。 展开更多
关键词 三维GIS 三维管线 旋转矢量法 管线可视化
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利用车载LiDAR点云数据提取城市道路规则多边形 被引量:8
13
作者 谢宏全 梅雪琴 +2 位作者 蔡东健 王亚娜 刘付程 《测绘通报》 CSCD 北大核心 2020年第3期87-90,共4页
随着自动驾驶高精地图的发展,准确高效地提取道路规则多边形成为必要。本文以苏州市某城市快速路为研究对象,通过使用徕卡车载激光移动测量系统获得城市道路点云数据,观察了解车载点云数据各类属性信息,根据观察结果组合利用点云数据高... 随着自动驾驶高精地图的发展,准确高效地提取道路规则多边形成为必要。本文以苏州市某城市快速路为研究对象,通过使用徕卡车载激光移动测量系统获得城市道路点云数据,观察了解车载点云数据各类属性信息,根据观察结果组合利用点云数据高差、点云灰度差值、点云强度差值,在此基础上再利用网格密度法实现道路规则多边形的提取,然后通过对目标的矢量化得到三维矢量规则多边形。最后对提取的矢量化结果进行精度评定。试验结果表明:该方法在提取道路规则多边形方面能得到较好的结果且能满足高精地图需求。 展开更多
关键词 高精地图 车载点云 道路规则多边形 网格密度 三维矢量
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自动绘制室内平面图的点云向量追踪算法 被引量:8
14
作者 蔡来良 宋德云 +2 位作者 胡青峰 魏峰远 舒前进 《武汉大学学报(信息科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1404-1411,共8页
根据建筑物室内墙壁的空间姿态特征,建立了一种自动绘制室内平面图的点云向量追踪算法。首先截取一定厚度的室内墙体点云并将其投影至水平面,在投影平面上建立正方形格网,对投影后的平面点进行分割管理,并通过八邻域算法对网格内点云进... 根据建筑物室内墙壁的空间姿态特征,建立了一种自动绘制室内平面图的点云向量追踪算法。首先截取一定厚度的室内墙体点云并将其投影至水平面,在投影平面上建立正方形格网,对投影后的平面点进行分割管理,并通过八邻域算法对网格内点云进行聚类。然后采用网格重心法对聚类后的点云数据进行抽稀,并根据邻域内点间距与连线向量夹角大小对抽稀后的点进行追踪排序,建立追踪方向的向量序列,结合向量序列中相邻值夹角的突变情况完成不同墙面的点云分割。最后采用最小二乘算法对分割得到的相同墙面点云进行直线拟合,求取相邻墙体直线的交点,建立房屋墙体平面投影线段及其空间连接关系,依序输出墙体投影线段,完成房屋平面图的绘制并导出DXF格式数据交换文件。通过对某小区建筑物室内扫描数据的分析,对所提算法进行验证,结果表明所提算法可准确快速地对室内三维激光扫描点云进行分析处理,并完成室内建筑物平面图的绘制。 展开更多
关键词 三维扫描 室内平面图 向量追踪 点云聚类 点云抽稀 点云分割
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Key Technology in Developing Web-Based Engineering Drawing CAI Software 被引量:7
15
作者 Feng Kaiping Zuo Zongyi (Guangdong University of Technology, Guangzhou 510090, China) Wen Junwen (Physics Department, Zhanjiang Normal College Jinhua 316101, China) Miscillaneous 《Computer Aided Drafting,Design and Manufacturing》 2000年第2期89-95,共7页
Key techniques to improve the quality of developing Web-based engineering drawing CAI software are discussed and some experience in applying commercial tools for generating vector drawing, concise representation of 3D... Key techniques to improve the quality of developing Web-based engineering drawing CAI software are discussed and some experience in applying commercial tools for generating vector drawing, concise representation of 3D solids, real-time interactive animation, data management etc. is illustrated. A Web-based Engineering Drawing CAI software 'Solid Projection' has been implemented by using these techniques. 展开更多
关键词 Web-based education vector drawing true 3D model real-time interaction Vh
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三维GIS中矢量数据的高效精确渲染方法 被引量:7
16
作者 李尚林 胡夏 刘晓平 《系统仿真学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期965-972,共8页
在地理信息系统(GIS,Geographic Information System)中,矢量数据在空间位置定位和空间分析等方面有着许多重要的应用,精确高效的将二维矢量数据叠加绘制到三维地形上是必需的。提出了一种动态矢量纹理金字塔叠加绘制方法。根据当前视... 在地理信息系统(GIS,Geographic Information System)中,矢量数据在空间位置定位和空间分析等方面有着许多重要的应用,精确高效的将二维矢量数据叠加绘制到三维地形上是必需的。提出了一种动态矢量纹理金字塔叠加绘制方法。根据当前视点位置实时生成对应金字塔级别的矢量纹理块,矢量纹理分块与地形分块一一对应,统一调度渲染,并使用无约束各向异性滤波的纹理反走样方法来减轻纹理走样问题。该方法独立于底层地形几何体,因此能够跟大部分多分辨率地形绘制方法很好的进行结合。在数字地球系统中使用多层矢量数据的实验结果表明,所提算法绘制效率较高,绘制效果良好。 展开更多
关键词 三维GIS 矢量数据 动态纹理金字塔 无约束各项异性滤波
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Mathematical Wave Functions and 3D Finite Element Modelling of the Electron and Positron
17
作者 Declan Traill 《Journal of Applied Mathematics and Physics》 2024年第4期1134-1162,共29页
The wave/particle duality of particles in Physics is well known. Particles have properties that uniquely characterize them from one another, such as mass, charge and spin. Charged particles have associated Electric an... The wave/particle duality of particles in Physics is well known. Particles have properties that uniquely characterize them from one another, such as mass, charge and spin. Charged particles have associated Electric and Magnetic fields. Also, every moving particle has a De Broglie wavelength determined by its mass and velocity. This paper shows that all of these properties of a particle can be derived from a single wave function equation for that particle. Wave functions for the Electron and the Positron are presented and principles are provided that can be used to calculate the wave functions of all the fundamental particles in Physics. Fundamental particles such as electrons and positrons are considered to be point particles in the Standard Model of Physics and are not considered to have a structure. This paper demonstrates that they do indeed have structure and that this structure extends into the space around the particle’s center (in fact, they have infinite extent), but with rapidly diminishing energy density with the distance from that center. The particles are formed from Electromagnetic standing waves, which are stable solutions to the Schrödinger and Classical wave equations. This stable structure therefore accounts for both the wave and particle nature of these particles. In fact, all of their properties such as mass, spin and electric charge, can be accounted for from this structure. These particle properties appear to originate from a single point at the center of the wave function structure, in the same sort of way that the Shell theorem of gravity causes the gravity of a body to appear to all originate from a central point. This paper represents the first two fully characterized fundamental particles, with a complete description of their structure and properties, built up from the underlying Electromagnetic waves that comprise these and all fundamental particles. 展开更多
关键词 ELECTRON POSITRON Wave Function Solution Electromagnetic Spin Mass Charge Proof Fundamental Particle Properties Quantum Mechanics Classical Physics Computer 3D Model Schrödinger Equation RMS KLEIN GORDON Electric Magnetic Lorentz Invariant Hertzian vector Point Potential Field Density Phase Flow Attraction REPULSION Shell Theorem Ehrenfest VIRIAL Normalization Harmonic Oscillator
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miRNA-155 Modulates the Malignant Biological Characteristics of NK/T-Cell Lymphoma Cells by Targeting FOXO3a Gene 被引量:6
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作者 姬卫国 张旭东 +3 位作者 孙向东 王祥麒 常保萍 张明智 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2014年第6期882-888,共7页
This study investigated the effects of miRNA-155 on malignant biological characteristics of NK/T-cell lymphoma cell lines and the possible mechanism. The expression of miRNA-155 was detected in lymphoma cell lines fro... This study investigated the effects of miRNA-155 on malignant biological characteristics of NK/T-cell lymphoma cell lines and the possible mechanism. The expression of miRNA-155 was detected in lymphoma cell lines from different sources (SNK-6, YTS, Jurkat and DOHH2) by real-time PCR. Lentiviral vectors (pLL3.7) that could overexpress or downexpress miRNA-155 were constructed. Recombinant lentiviral particles were prepared and purified, and their titers determined. The expression of miRNA-155 in the infected SNK-6 cells and the cell proliferation were detected by PCR and CCK-8, respectively. Flow cytometry was used to determine the apoptosis of infected SNK-6 cells. The target of miRNA155 was predicted from Targetscan website. The effect of miRNA155 on FOXO3a expression was examined by Western blotting. The results showed that among the human NK/T-cell lymphoma cell lines SNK-6, YTS, Jurkat and DOHH2, the expression of miRNA-155 was highest in SNK-6. The infection efficiency of the recombinant lentivirns in SNK-6 was more than 70% at multiplicity of infection (MOI) of 100. The expression of miRNA-155 was significantly increased in SNK-6 cells infected by lentivirus vectors with high expression of miRNA-155 (4 times higher than the control group), and profoundly decreased in those infected with lentivirnses with low expression of miRNA-155. The proliferation of letivirns-infected SNK-6 cells was decreased as the expression of miRNA-155 reduced. The apoptosis rate was increased with the reduction in the expression of miRNA-155. FOXO3a was found to be a possible target of miRNA155, as suggested by Targetscan website. Western blotting showed that the expression of FOXO3a was significantly elevated in SNK-6 cells with miRNA-155 inhibition. It was concluded that reduction in miRNA-155 expression can inhibit the proliferation of SNK-6 lymphoma cells and promote their apoptosis, which may be associated with regulation of FOXO3a gene. 展开更多
关键词 miRNA-155 lentiviral vector NK/T-cell lymphoma cell lines apoptosis FOXO3A
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Bc MF3反义基因植物表达载体的构建及其对拟南芥的遗传转化 被引量:3
19
作者 刘乐承 余小林 +3 位作者 叶纨芝 向珣 卢钢 曹家树 《长江大学学报(自然科学版)》 CAS 2005年第11期76-79,共4页
根据编码白菜(Brassica rapa L.ssp.chinensis,syn B.campestris ssp.chinensis)果胶甲酯酶的BcMF3基因cDNA序列内部第1343~1797个碱基之间序列设计引物,从白菜花蕾eDNA中PCR扩增出455bp的片段,把该片段作为反义基因连接至双... 根据编码白菜(Brassica rapa L.ssp.chinensis,syn B.campestris ssp.chinensis)果胶甲酯酶的BcMF3基因cDNA序列内部第1343~1797个碱基之间序列设计引物,从白菜花蕾eDNA中PCR扩增出455bp的片段,把该片段作为反义基因连接至双元载体pBI121上,得到了植物表达栽体pBI-B3,并用“三亲杂交”法导入农杆菌LBA4404菌株中,PCR扩增和酶切结果表明所构建的植物表达载体pBFB3含有BcMF3反义基因片断,并已导入了根癌农杆菌(Agrobacterinrn tume fuciens)中;采用花序浸润法转化拟南芥(Arabidopsis thaliana)后,播种筛选浸润植株的种子获得了5株卡那霉素抗性植株,PCR扩增证明BcMF3反义片段成功整合到拟南芥基因组中;转基因拟南芥子代(T2)的抗性分离符合孟德尔分离比例,表明外源基因是单一位点插入。 展开更多
关键词 反义基因 拟南芥(Arabidopsis thaliana) BcMF3 白菜 表达载体 遗传转化
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转录因子SOX3对卵巢颗粒细胞增殖和雌二醇分泌的影响
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作者 蔡睿 张浩 +3 位作者 刘壮 陈远华 谢芬芬 洪强 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第3期371-376,383,共7页
目的研究性别决定区Y框蛋白3(SOX3)对人卵巢颗粒细胞(KGN)增殖和雌二醇分泌的影响。方法在NCBI数据库Gene-Bank中搜索人SOX3(NM_005634.3)的基因序列,用PCR方法扩增目的基因SOX3,将其克隆到慢病毒载体pLV-EF1a-GFP-2A-Puro上,获得过表... 目的研究性别决定区Y框蛋白3(SOX3)对人卵巢颗粒细胞(KGN)增殖和雌二醇分泌的影响。方法在NCBI数据库Gene-Bank中搜索人SOX3(NM_005634.3)的基因序列,用PCR方法扩增目的基因SOX3,将其克隆到慢病毒载体pLV-EF1a-GFP-2A-Puro上,获得过表达慢病毒重组质粒pLV-EF1a-GFP-2A-Puro-SOX3;将测序正确的过表达慢病毒重组质粒以及包装质粒(pGag/Pol、pRev、pVSV-G)共同转染到人胚肾细胞系(HEK 293T)细胞中(pLV-SOX3组),将pLV-EF1a-GFP-2A-Puro及包装质粒(pGag/Pol、pRev、pVSV-G)共同转染到HEK 293T细胞中(pLV-NC组),转染48 h后收集两组慢病毒颗粒并测定病毒的滴度,将两组慢病毒感染KGN细胞,经嘌呤霉素筛选2周后,获得稳定表达的细胞系;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法检测两组中SOX3的mRNA和蛋白水平;CCK-8法检测两组细胞增殖能力;ELISA测定两组雌二醇的浓度。结果PCR产物的鉴定和测序结果表明SOX3基因片段扩增成功,酶切和测序结果表明过表达慢病毒重组质粒构建完成;慢病毒感染HEK 293T细胞后可检测到绿色荧光,表明慢病毒包装成功;慢病毒感染KGN细胞后经嘌呤霉素筛选,荧光显微镜下观察细胞表达绿色荧光;RT-qPCR和Western blot检测结果均表明pLV-SOX3组中SOX3表达水平高于pLV-NC组(P<0.05)。CCK-8检测结果表明,pLV-SOX3组较pLV-NC组细胞增殖能力明显增强(P<0.01)。ELISA结果显示,pLV-SOX3组雌二醇浓度较pLV-NC组升高(P<0.05)。结论过表达转录因子SOX3能够促进KGN的增殖和雌二醇分泌。 展开更多
关键词 SOX3 卵巢颗粒细胞 慢病毒载体 增殖 雌二醇 绿色荧光蛋白
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