利用大豆主要过敏原Gly m Bd 30K蛋白抗原表位蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。采用半固体培养基法和有限稀释法相结合的方法快速筛选获得稳定分泌的特异性杂交瘤细胞,用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹...利用大豆主要过敏原Gly m Bd 30K蛋白抗原表位蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。采用半固体培养基法和有限稀释法相结合的方法快速筛选获得稳定分泌的特异性杂交瘤细胞,用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行抗体纯化。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性。利用双单抗夹心ELISA法检测大豆过敏原。结果表明:获得6株可稳定分泌鼠抗大豆主要过敏原Gly m Bd 30K蛋白的单克隆抗体,分别命名为1C10,1D12,2D1,4B4,5F9,6B12,其Ig亚型除1D12和4B4为IgG2a外,其余均为IgG1,且6株单抗效价均在10-5以上。ELISA和Western Blotting分析表明该6株单抗均能特异性识别大豆主要过敏原Gly m Bd 30K蛋白,并且建立双单抗夹心ELISA的方法可以准确检测出大豆过敏原的存在。鼠抗大豆主要过敏原Gly m Bd 30K蛋白抗原表位区蛋白的单克隆抗体的成功制备,以及双单抗夹心ELISA检测系统的建立,为大豆主要过敏原蛋白的检测奠定了基础,也可以为食品中大豆过敏原的检出提供依据。展开更多
以栽培大豆(G.max)核心种质经聚类随机选择样本为主,以栽培大豆保留种质和野生大豆(G.soja)为对照,利用小鼠单克隆抗体Gly m Bd 30K(F5)和Gly m Bd 28K(C5)分别检测大豆的30K和28K过敏蛋白抗原,目的是发掘过敏蛋白缺失的品种资源,明确...以栽培大豆(G.max)核心种质经聚类随机选择样本为主,以栽培大豆保留种质和野生大豆(G.soja)为对照,利用小鼠单克隆抗体Gly m Bd 30K(F5)和Gly m Bd 28K(C5)分别检测大豆的30K和28K过敏蛋白抗原,目的是发掘过敏蛋白缺失的品种资源,明确其分布规律和特点,检测大豆核心种质的代表性,为资源和育种研究提供参考。鉴定结果表明,在参试的60份野生大豆和421份栽培大豆中没有发现30K过敏蛋白缺失的种质,但28K过敏蛋白缺失率分别为13.3%和37.8%。栽培大豆核心种质28K过敏蛋白缺失比率的变化趋势与栽培大豆保留种质总体规律基本相同,在3个生态区的缺失比率差异均不显著,说明核心种质在28K过敏蛋白缺失这个性状上具有代表性。SSR标记分析发现,在缺失过敏蛋白的种质中,80%相似系数在0.44以下,表明这些种质遗传基础较为广泛,可充分利用类群内或类群间差异较大的材料作为亲本配制杂交组合,培育缺失28K过敏蛋白优质品种。展开更多
文摘利用大豆主要过敏原Gly m Bd 30K蛋白抗原表位蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。采用半固体培养基法和有限稀释法相结合的方法快速筛选获得稳定分泌的特异性杂交瘤细胞,用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行抗体纯化。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性。利用双单抗夹心ELISA法检测大豆过敏原。结果表明:获得6株可稳定分泌鼠抗大豆主要过敏原Gly m Bd 30K蛋白的单克隆抗体,分别命名为1C10,1D12,2D1,4B4,5F9,6B12,其Ig亚型除1D12和4B4为IgG2a外,其余均为IgG1,且6株单抗效价均在10-5以上。ELISA和Western Blotting分析表明该6株单抗均能特异性识别大豆主要过敏原Gly m Bd 30K蛋白,并且建立双单抗夹心ELISA的方法可以准确检测出大豆过敏原的存在。鼠抗大豆主要过敏原Gly m Bd 30K蛋白抗原表位区蛋白的单克隆抗体的成功制备,以及双单抗夹心ELISA检测系统的建立,为大豆主要过敏原蛋白的检测奠定了基础,也可以为食品中大豆过敏原的检出提供依据。
文摘以栽培大豆(G.max)核心种质经聚类随机选择样本为主,以栽培大豆保留种质和野生大豆(G.soja)为对照,利用小鼠单克隆抗体Gly m Bd 30K(F5)和Gly m Bd 28K(C5)分别检测大豆的30K和28K过敏蛋白抗原,目的是发掘过敏蛋白缺失的品种资源,明确其分布规律和特点,检测大豆核心种质的代表性,为资源和育种研究提供参考。鉴定结果表明,在参试的60份野生大豆和421份栽培大豆中没有发现30K过敏蛋白缺失的种质,但28K过敏蛋白缺失率分别为13.3%和37.8%。栽培大豆核心种质28K过敏蛋白缺失比率的变化趋势与栽培大豆保留种质总体规律基本相同,在3个生态区的缺失比率差异均不显著,说明核心种质在28K过敏蛋白缺失这个性状上具有代表性。SSR标记分析发现,在缺失过敏蛋白的种质中,80%相似系数在0.44以下,表明这些种质遗传基础较为广泛,可充分利用类群内或类群间差异较大的材料作为亲本配制杂交组合,培育缺失28K过敏蛋白优质品种。
