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猪繁殖与呼吸综合征病毒不同毒株RT-PCR鉴别诊断方法的建立 被引量:2
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作者 孟令宅 张哲 +3 位作者 刘陈针玉 赵卓 刘涛 袁万哲 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期98-103,共6页
根据GenBank登录的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)、经典型猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)、与NADC 30-like猪繁殖与呼吸综合征病毒(NADC 30-like PRRSV)Nsp2基因的核苷酸序列,设计了1对用于扩增3种不同毒株的RT-PCR引物,... 根据GenBank登录的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)、经典型猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)、与NADC 30-like猪繁殖与呼吸综合征病毒(NADC 30-like PRRSV)Nsp2基因的核苷酸序列,设计了1对用于扩增3种不同毒株的RT-PCR引物,建立了HP-PRRSV、C-PRRSV、NADC 30-like PRRSV等3种毒株RT-PCR鉴别诊断的方法,该方法可扩增出1072bp(C-PRRSV),985bp(HP-PRRSV)与682bp(NADC 30-like PRRSV)的特异性片段,而对猪瘟病毒,伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型检测均为阴性。敏感性试验结果表明,对HP-PRRSV,C-PRRSV、NADC 30-like PRRSV的最低核酸检出量分别为385,269,402pg,对来自临床的39份组织样品进行检测,检测阳性率为51%。该方法可用于3种不同PRRSV毒株临床快速检测与流行病学调查。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 高致病性 经典型 NADC 30-like 鉴别
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外来与新发动物疫病猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like变异流行情况及综合防控措施 被引量:1
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作者 王瑜 贺仪 +3 位作者 陈小洪 吴秀平 李容 邬旭龙 《猪业科学》 2020年第7期107-108,共2页
猪繁殖与呼吸综合征在我国流行已20余年,但其病原变异的复杂程度在进一步加大,流行程度也并未明显减弱,特别是2013年以来NADC 30-like毒株的出现导致了PRRS再次大范围流行。近年来PRRSV重组变异毒株越来越多,因此了解其流行情况以及防... 猪繁殖与呼吸综合征在我国流行已20余年,但其病原变异的复杂程度在进一步加大,流行程度也并未明显减弱,特别是2013年以来NADC 30-like毒株的出现导致了PRRS再次大范围流行。近年来PRRSV重组变异毒株越来越多,因此了解其流行情况以及防护措施,对进一步防控该病及保障我国生猪健康养殖具有重要意义。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NADC 30-like 防控措施 流行特征
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2014年~2019年PRRSV主要流行毒株在我国的变化 被引量:42
3
作者 张洪亮 张文立 +14 位作者 许浒 宋帅杰 赵静 相丽润 冷超粮 李真 刘春晓 汤艳东 陈家锃 彭金美 王倩 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期512-516,共5页
为了研究2014年至2019年PRRSV在我国的流行变化情况,本研究分别检测了2014年6月~2019年8月全国17个省、市和自治区及某大型养猪集团2007份和338份疑似PRRSV感染的病料。结果显示,共检出PRRSV阳性病料650份,测定了486株ORF5基因、441株n... 为了研究2014年至2019年PRRSV在我国的流行变化情况,本研究分别检测了2014年6月~2019年8月全国17个省、市和自治区及某大型养猪集团2007份和338份疑似PRRSV感染的病料。结果显示,共检出PRRSV阳性病料650份,测定了486株ORF5基因、441株nsp2基因和122株全基因组序列。遗传演化分析显示,2014年~2019年共检测到6种基因亚型的PRRSV,分别是I型PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like PRRSV、NADC34-like PRRSV、QYYZ-like PRRSV和RespPRRS MLV-like PRRSV。经统计分析显示,2016年以前除检测到1株NADC30-like PRRSV外,其余全部是HP-PRRSV;2016年后HP-PRRSV检出比率逐渐降低,NADC30-like PRRSV检出比率逐渐升高,且2016年后已超过HP-PRRSV,成为我国主要的流行株。QYYZ-like PRRSV的检出数量增多,其广泛流行于我国的华南地区。其它类型的PRRSV检出比率较低,呈现散发或局部流行。此外,近年来,PRRSV的细胞嗜性已经发生明显变化,绝大多数的病毒株无法在体外分离培养。因此,我国养殖企业针对PRRSV流行株的变化应及时调整防控策略,同时加大对PRRSV生物学特性变化机制的研究。本研究对了解我国PRRSV的流行状况及防控具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 PRRSV NADC30-like PRRSV 主要流行毒株 细胞嗜性
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2016年我国部分地区类NADC30新亚群猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传变异分析 被引量:32
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作者 张洪亮 张晶 +12 位作者 李真 张文立 刘春晓 陈家锃 相丽润 冷超粮 彭金美 王倩 白云 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期675-680,共6页
为了解类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在我国新的流行特点,本研究根据GenBank中美国2012年提交的PRRSV NADC30株全基因组序列设计合成8对引物,通过RT-PCR的方法对本实验室2016年从4个省搜集的临床样品中检测到的15株类NADC3... 为了解类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在我国新的流行特点,本研究根据GenBank中美国2012年提交的PRRSV NADC30株全基因组序列设计合成8对引物,通过RT-PCR的方法对本实验室2016年从4个省搜集的临床样品中检测到的15株类NADC30 PRRSVs株进行了全基因组测序,并且结合参考株进行了序列分析。NSP2推导氨基酸的序列比对表明,15株PRRSVs均具有aa323~aa433+aa484+aa505~aa523 (111+1+19) 131个氨基酸缺失的分子特征;经RDP4和Simplot生物学软件分析表明,15株PRRSVs中14株为重组病毒株,参与重组的亲本病毒株为PRRSV NADC30株,提供重组基因片段的病毒株为HP-PRRSV或以VR2332为代表的经典PRRSV株,这些类NADC30重组病毒株的重组位置、重组的基因片段及重组片段长度均具有多样性,而且重组的位置多位于编码非结构蛋白或次要结构蛋白的基因区域;全基因组遗传演化分析表明,这些病毒株远离国内之前流行的HP-PRRSV,同源性仅为83.4 %~87.2 %,而与其它的类NADC30病毒株位于一个相对独立的分支,以上结果均表明这类病毒株已形成了一个新的亚群,命名为5亚群。本研究中不同地区PRRSV的核苷酸同源性差异较大,仅为88.6 %~99.6 %,并且只有2个病毒株可以感染PAM和MARC-145细胞。本研究表明,以基因缺失和基因重组多样性为主要特征的5亚群PRRSV已在我国流行,其生物学特性有待进一步研究。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 类NADC30 缺失 重组 5亚群
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2014~2015年河南地区PRRSV的分子检测及NSP2、ORF5基因变异分析 被引量:18
5
作者 郭天准 常洪涛 +7 位作者 崔丹丹 王新港 周峰 赵军 杨霞 李永涛 陈陆 王川庆 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期298-307,共10页
为了解河南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的分子特征及变异情况,本研究对2014~2015年河南各地118个养殖场的250份PRRS疑似病料进行RT-PCR检测,并对PRRSV阳性样品的NSP2和ORF5基因进行测序及变异分析。结果显示,PRRSV阳... 为了解河南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的分子特征及变异情况,本研究对2014~2015年河南各地118个养殖场的250份PRRS疑似病料进行RT-PCR检测,并对PRRSV阳性样品的NSP2和ORF5基因进行测序及变异分析。结果显示,PRRSV阳性样品共58份,阳性率为23.2%;扩增得到29个NSP2基因序列和31个ORF5基因序列;遗传进化分析表明,河南地区PRRSV流行毒株主要为美洲型毒株,其中14株与高致病性PRRSV(HP-PRRSV)高度同源,其余15株与美洲毒株NADC30高度同源,且该类毒株的nsp2蛋白存在131个氨基酸的不连续缺失,与国内及韩国报道的新变异毒株具有相似的缺失特征。与2012~2013年河南地区PRRSV分子流行病学调查结果相比,2014~2015年河南地区PRRSV流行株主要以HP-PRRSV和NADC30-Like毒株为主,尤其是后者在流行毒株中所占比例急剧上升,并且PRRSV流行毒株的NSP2和ORF5基因均发生很大变异,提示有必要对PRRSV的流行和变异进行持续监测,并对其致病性等进行深入研究,从而为新型疫苗及抗病毒药物的研发提供科学的参考依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2基因 ORF5基因 NADC30 变异分析
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福建NADC30-like PRRSV FJLY01株的全基因组分子特征分析 被引量:10
6
作者 魏春华 刘建奎 +4 位作者 戴爱玲 龚丽贞 李晓华 黄思琼 杨小燕 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第3期51-60,67,共11页
【目的】了解福建省NADC30-like PRRSV FJLY01株的分子生物学特征和遗传演化规律,为PRRSV的防控提供参考。【方法】对采自福建省规模化猪场的疑似病料进行PRRSV分离鉴定,以NADC30PRRSV毒株基因序列为参考设计并合成9对引物,分别对分离... 【目的】了解福建省NADC30-like PRRSV FJLY01株的分子生物学特征和遗传演化规律,为PRRSV的防控提供参考。【方法】对采自福建省规模化猪场的疑似病料进行PRRSV分离鉴定,以NADC30PRRSV毒株基因序列为参考设计并合成9对引物,分别对分离株序列进行分段PCR扩增,经克隆测序后进行序列拼接,采用MEGA 6.0软件进行核苷酸及氨基酸同源性比对,并绘制其与其他35株毒株的系统遗传进化树。【结果】FJLY01株基因组全长为15 016bp(不包含polyA),包含10个开放阅读框,5′-UTR长190bp,3′-UTR长148bp,Nsp2基因缺失393bp。Nsp2蛋白存在类似PRRSV MN184和NADC30株的131个氨基酸的缺失。核苷酸比对结果表明,FJLY01株与VR-2332、MLV RespPRRS/Repro、CH-1a和BJ-4株核苷酸的同源性为85.2%~86.3%,与JXA1、HuN4等HP-PRRSV株核苷酸的同源性为83.7%~84.1%,与MN184A、MN184B株核苷酸的同源性为87.9%~88.2%,与NADC30株核苷酸的同源性最高,为97.1%。系统进化树分析表明,该毒株属于NADC30-like毒株,与JXA1、VR2332和CH-1a的亲缘关系较远。【结论】福建省存在NADC30-like毒株,应该加强PRRSV的监测。 展开更多
关键词 PRRSV 全基因组 NADC30-like 福建省
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2018-2019年河南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查 被引量:8
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作者 赵小月 张格 +6 位作者 汪悦 刘红英 陈宇 赵军 王川庆 陈陆 李永涛 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期2286-2292,共7页
为了解华中地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行特点及变异规律,本研究对2018-2019年采自河南18个地市94个猪场的414份猪肺脏、脾脏和淋巴结等样品进行PRRSVRT-PCR检测,并将阳性样品进行ORF5和NSP2基因扩增和序列测定以及遗传进化... 为了解华中地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行特点及变异规律,本研究对2018-2019年采自河南18个地市94个猪场的414份猪肺脏、脾脏和淋巴结等样品进行PRRSVRT-PCR检测,并将阳性样品进行ORF5和NSP2基因扩增和序列测定以及遗传进化分析。结果显示,414份病料中共检测出PRRSV阳性样品106份,阳性率为25.48%,其中,豫北地区检出率较高,且2018年11月至2019年2月阳性率明显增加;从阳性样品中扩增得到83个ORF5和31个NSP2基因序列;遗传进化分析表明,检出的PRRSV阳性样品中74株PRRSV属于类NADC30毒株,6株与华南地区主要流行毒株类QYYZ毒株高度相似,2株与商品化活疫苗基因序列高度同源;氨基酸序列比对发现,所检出毒株之间氨基酸同源性差异较大,10株毒株GP5序列在高变区存在插入或缺失,29个NSP2序列存在131位不连续氨基酸缺失,1个NSP2序列与高致病性PRRS疫苗毒株JXA1 NSP2存在相同缺失,1株与经典疫苗毒株RespPRRS MLV完全同源。结果表明,2018-2019年河南地区PRRSV以类NADC30毒株为优势毒株,且NSP2和ORF5基因进一步发生较大变异;同时华南地区主要流行毒株类QYYZ毒株在河南开始增多以及个别活疫苗的使用导致PRRSV的流行趋势更加复杂。因此,加强对PRRSV的流行及遗传变异的持续监测尤为重要,本研究可为PRRS临床诊断、防控以及疫苗研发提供有效的科学依据。 展开更多
关键词 PRRSV ORF5 NSP2 类NADC30毒株 类QYYZ毒株
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2015年、2016年我国部分地区猪群猪繁殖与呼吸综合征的分子流行病学研究 被引量:8
8
作者 赵蕾 吴发兴 +3 位作者 张锋 董雅琴 杨增岐 李晓成 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第10期96-100,244,共6页
为了解我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传变异情况和流行趋势,试验利用RT-PCR方法对2015年、2016年全国超过20个省份的3 078份疑似PRRS病料进行检测,并扩增部分阳性病料的ORF5基因进行测序和遗传变异分析。结... 为了解我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传变异情况和流行趋势,试验利用RT-PCR方法对2015年、2016年全国超过20个省份的3 078份疑似PRRS病料进行检测,并扩增部分阳性病料的ORF5基因进行测序和遗传变异分析。结果表明:PRRSV阳性样本共889份,阳性率为28.88%。扩增得到177个ORF5的基因序列,通过序列分析发现,我国流行的PRRSV主要为美洲型,其中90份与高致病性PRRSV(HP-PRRSV)高度同源,53份与经典PRRSV高度同源,34份与NADC30-like PRRSV高度同源,其中14份流行毒株的GP5蛋白糖基化位点N34发生缺失。说明监测地区主要流行HP-PRRSV,同时NADC30-like PRRSV已经形成一个相对独立的分支在我国流行,提示有必要加强PRRSV变异毒株的流行和变异的监测,同时对其致病性等生物学特性进行深入研究。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) NADC30-like 流行病学 RT-PCR ORF5基因 遗传演化分析
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Genomic similarity and antibody-dependent enhancement of immune serum potentially affect the protective efficacy of commercial MLV vaccines against NADC30-like PRRSV 被引量:4
9
作者 Yang Li Lele Xu +11 位作者 Dian Jiao Zifang Zheng Zhihao Chen Yang Jing Zhiwei Li Zhiqian Maa Yingtong Feng Xuyang Guo Yumiao Wang Yuan He Haixue Zheng Shuqi Xiao 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2023年第5期813-826,共14页
Porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS)is one of the most significant diseases affecting the pig industry worldwide.The PRRSV mutation rate is the highest among the RNA viruses.To date,NADC30-like PRRSV an... Porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS)is one of the most significant diseases affecting the pig industry worldwide.The PRRSV mutation rate is the highest among the RNA viruses.To date,NADC30-like PRRSV and highly pathogenic PRRSV(HP-PRRSV)are the dominant epidemic strains in China;however,commercial vaccines do not always provide sufficient cross-protection,and the reasons for insufficient protection are unclear.This study isolated a wild-type NADC30-like PRRSV,SX-YL1806,from Shaanxi Province.Vaccination challenge experiments in piglets showed that commercial modified live virus(MLV)vaccines provided good protection against HP-PRRSV.However,it could not provide sufficient protection against the novel strain SXYL1806.To explore the reasons for this phenomenon,we compared the genomic homology between the MLV strain and HP-PRRSV or NADC30-like PRRSV and found that the MLV strain had a lower genome similarity with NADC30-like PRRSV.Serum neutralization assay showed that MLV-immune serum slightly promoted the homologous HP-PRRSV replication and significantly promoted the heterologous NADC30-like PRRSV strain replication in vitro,suggesting that antibody-dependent enhancement(ADE)might also play a role in decreasing MLV protective efficacy.These findings expand our understanding of the potential factors affecting the protective effect of PRRSV MLV vaccines against the NADC30-like strains. 展开更多
关键词 NADC30-like PRRSV Modified live virus(MLV)vaccines Genomic similarity Antibody dependent enhancement(ADE) Cross protection
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2016-2017年我国华北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30毒株分子遗传演化分析 被引量:7
10
作者 石青青 姜轩 +3 位作者 张奥 李留安 马吉飞 孙英峰 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第3期80-85,共6页
为了解我国华北地区类NADC30流行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及遗传变异情况,本研究自2016~2017年采集华北四省市(北京、天津、山东及河北)部分猪场疑似PRRSV样品239份进行RT-PCR检测,对所有阳性样品的ORF5基因测序分析及部分阳性样... 为了解我国华北地区类NADC30流行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及遗传变异情况,本研究自2016~2017年采集华北四省市(北京、天津、山东及河北)部分猪场疑似PRRSV样品239份进行RT-PCR检测,对所有阳性样品的ORF5基因测序分析及部分阳性样品病毒分离,并选择1株基因缺失病毒TJjh1602株进行全基因的序列扩增及分析.结果显示:PRRSV检测总阳性率44.35%(106/239),遗传进化显示52.83%(56/106)的流行毒株与类NADC30相近且位于系谱1(lineage 1),其中32.14%(18/56)的类NADC30流行毒株具有相同特征性的氨基酸位点缺失;TJjh1602株全基因长度为15018 nt,与NADC30同源性为95.2%,除具有上述特征性氨基酸位点缺失外,无其他插入或缺失.研究结果推测PRRSV类NADC30毒株在我国华北地区广泛流行,同时已遗传演化成一类具有ORF5缺失分子标签的新型类NADC30毒株,提示需进一步加强对PRRSV新型缺失毒株的流行病学调查及相关致病力研究. 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 类NADC30 遗传演化
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猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30毒株的新近流行 被引量:7
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作者 周磊 丁玉平 《中国猪业》 2017年第11期20-23,32,共5页
猪繁殖与呼吸综合征是严重危害养猪生产的病毒性传染病。自20世纪90年代中期在我国发生和流行以来,已经20余载。据田间流行优势毒株的不同,可大致分为三个阶段:经典毒株流行阶段(1995-2006年)、高致病性变异株流行阶段(2006-2013年)和... 猪繁殖与呼吸综合征是严重危害养猪生产的病毒性传染病。自20世纪90年代中期在我国发生和流行以来,已经20余载。据田间流行优势毒株的不同,可大致分为三个阶段:经典毒株流行阶段(1995-2006年)、高致病性变异株流行阶段(2006-2013年)和新近的类NADC30毒株流行阶段(2013年至今)。2013-2014年间与美国分离株NADC30亲缘性较高的一类PRRSV毒株开始在我国暴发流行,其具有与NADC30和MN184等谱系1(lineage 1)毒株相同的nsp2编码区缺失模式。致病性分析及疫苗保护试验结果表明,其致病性介于高致病性毒株与经典株之间,目前商用疫苗对其保护效果不佳。且类NADC30毒株易与其他PRRSV毒株发生重组,产生新的变异株。类NADC30毒株的广泛流行,以及相关重组毒株的叠现,进一步增加了PRRS疫病防控的难度。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 类NADC30(NADC30-like) 分子流行病学 致病性与免疫保护 重组
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PRRSV经典毒株、高致病毒株、类NADC30毒株及类NADC34毒株鉴别RT-PCR检测方法的建立及应用
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作者 蹇艳银 张佳怡 +4 位作者 张耕馨 倪民婷 卢淳 师源 王金涛 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期465-471,共7页
为提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不同流行毒株的快速鉴别诊断能力,本研究对近几年国内外流行的PRRSV不同毒株的Nsp2核苷酸序列进行比对,设计了1对可用于鉴别4类不同PRRSV毒株的简并引物,建立了鉴别PRRSV经典毒株(C-PRRSV)、高致病... 为提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不同流行毒株的快速鉴别诊断能力,本研究对近几年国内外流行的PRRSV不同毒株的Nsp2核苷酸序列进行比对,设计了1对可用于鉴别4类不同PRRSV毒株的简并引物,建立了鉴别PRRSV经典毒株(C-PRRSV)、高致病毒株(HP-PRRSV)、类NADC30毒株(NADC30-like)及类NADC34毒株(NADC34-like)的RT-PCR检测方法。结果显示,C-PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like、NADC34-like毒株Nsp2基因的扩增片段大小分别为1072 bp、982 bp、679 bp、772 bp,检测限分别为4.70×10 copies/μL、3.34×10^(2)copies/μL、8.57×10 copies/μL、5.71×10^(2)copies/μL,对其他常见猪病病原均未扩增出特异性条带,3次重复试验均能够扩增出均匀一致的目的片段;83份临床组织样品共检出阳性27份,其中NADC30-like毒株7份、NADC34-like毒株20份,与GP5基因检测结果的符合率为97.6%。上述结果表明,本研究建立的PRRSV鉴别RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于C-PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like、NADC34-like毒株的快速鉴别和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 经典毒株 高致病毒株 类NADC30毒株 类NADC34毒株 鉴别
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检测猪繁殖与呼吸综合征病毒及鉴别类NADC30毒株的双重荧光定量PCR方法 被引量:2
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作者 周茜 于孔森 +6 位作者 林青青 李玮卓 李文霞 余琦 王秋霞 陈蕾 王永强 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期462-467,共6页
为建立可同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守区和类NADC30毒株的双重TaqMan探针荧光定量PCR方法,分别针对保守的N蛋白基因和Nsp2基因设计特异性引物和探针,通过优化反应体系及反应条件对该方法的灵敏度、特异性、重复性进行评... 为建立可同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守区和类NADC30毒株的双重TaqMan探针荧光定量PCR方法,分别针对保守的N蛋白基因和Nsp2基因设计特异性引物和探针,通过优化反应体系及反应条件对该方法的灵敏度、特异性、重复性进行评估。结果显示,双重标准曲线的相关系数(R^(2))均大于0.990,具有良好的线性关系;最低检测限分别为5.27 copies/μL和3.00 copies/μL,具有较高的灵敏度;不与其他常见猪病病原发生非特异反应,且重复性良好,批内批间变异系数均小于3%。对168份临床样本的检测结果显示,PRRSV总阳性检出率为68.45%(115/168),其中类NADC30检出率为32.14%,混合感染率为20.24%,与临床诊断结果相一致。结果表明,本方法可用于检测PRRSV和鉴别类NADC30毒株以及猪繁殖与呼吸系统综合征的流行病学调查。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 类NADC30毒株 TAQMAN探针 荧光定量PCR 鉴别检测
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猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like株的分离鉴定及基因组分析
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作者 毛丽萍 潘晓梅 +5 位作者 曹剑 李俊辉 周涛 侯红娟 郑学功 贺笋 《动物医学进展》 北大核心 2024年第7期11-17,共7页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)呈现全球流行,对养猪行业造成巨大的经济损失。为增加PRRSV分离细胞种类的多样性,同时了解新疆地区猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)遗传变异的现状,采用新鲜制备猪骨髓细胞诱导分化成猪骨髓源巨噬细胞,对新疆地... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)呈现全球流行,对养猪行业造成巨大的经济损失。为增加PRRSV分离细胞种类的多样性,同时了解新疆地区猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)遗传变异的现状,采用新鲜制备猪骨髓细胞诱导分化成猪骨髓源巨噬细胞,对新疆地区某猪场疑似患有PRRS的肺脏,接种至猪骨髓源巨噬细胞,分离获得1株PRRSV毒株,命名为XJYQ-2021。通过测序得到全基因组序列,对该毒株NSP2氨基酸序列缺失、ORF5及全基因组序列进行同源性、遗传进化及重组分析;利用间接免疫荧光试验进行鉴定,同时对第10、15、20代病毒液绘制生长曲线。结果显示,诱导分化的猪骨髓源巨噬细胞纯度高达90%以上,XJYQ-2021分离株在该细胞生长良好,可见明显细胞病变;通过生长曲线可观察到病毒含量随代次增加而递增,感染48 h左右病毒滴度达到峰值;该分离株基因组全长15030 nt,与美洲型NADC30同源性为90%;XJYQ-2021分离株与VR2332相比,NSP2氨基酸序列与美洲型NADC30具有相同不连续缺失(111+1+19);全基因重组分析结果表明,XJYQ-2021分离株是重组病毒,有一个重组片段,其中NADC30是亲本毒株,与JXA1之间发生重组获得。研究结果可为PRRSV的病毒分离提供优选细胞种类,同时掌握了新疆地区PRRSV流行毒株的遗传进化现状。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 类NADC30 猪骨髓源巨噬细胞 NSP2 重组分析
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两株类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定 被引量:6
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作者 邓跃 谭菲菲 +5 位作者 王娟 常亚飞 陈喜波 王同燕 李向东 田克恭 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第1期50-55,共6页
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)又称为"猪蓝耳病",是一种由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的猪传染性疾病。本研究将采... 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)又称为"猪蓝耳病",是一种由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的猪传染性疾病。本研究将采集到的2份疑似患有PRRS的流产胎儿的肺组织研磨后离心,取上清液接种猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)盲传3代。通过RT-PCR方法和间接免疫荧光方法,对组织样品及细胞培养物进行了鉴定和分型。结果显示本研究成功从2份样品中分离到了类NADC30,且该毒株可以在PAM细胞上增殖。该研究结果为研究类NADC30毒株的重组机制、致病情况及研制预防疫苗提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 类NADC30 猪肺泡巨噬细胞
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生泰尔驯蓝方案的临床应用效果评价
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作者 杨业民 邱存义 +2 位作者 张益宁 李慧 王兴龙 《动物医学进展》 北大核心 2024年第5期132-136,共5页
为探究生泰尔驯蓝方案临床上抗类NADC-30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的效果和对围产期母猪繁殖性能的影响,在母猪产前10 d至产后7 d的日粮中添加驯蓝方案,测定母猪和仔猪PRRSV抗体水平和各项生产指标,评价驯蓝方案在临床上应用的效... 为探究生泰尔驯蓝方案临床上抗类NADC-30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的效果和对围产期母猪繁殖性能的影响,在母猪产前10 d至产后7 d的日粮中添加驯蓝方案,测定母猪和仔猪PRRSV抗体水平和各项生产指标,评价驯蓝方案在临床上应用的效果。结果显示,在产前10 d至产后7 d日粮中添加驯蓝方案,母猪血清中PRRSV抗体S/P值≥1.5高抗体水平由试验前7头下降至4头,下降了33.4%;仔猪在出生后14 d内PRRSV抗体水平处于高水平,14 d后至21 d抗体全部呈现下降趋势,PRRSV抗体S/P值≥1的数量,由14 d的13头降至21 d的8头,从72.2%下降至44.4%;21 d仔猪断奶时用药组仔猪个体均重高于对照组1.19 kg,差异极显著(P<0.001),仔猪日均增重,用药组与对照组分别为208.71 g、159.06 g,差异极显著(P<0.001)。驯蓝方案能降低围产期母猪血清中PRRSV抗体水平,降低14~21 d仔猪血清中PRRSV抗体水平,提高仔猪健康度和抗病能力;驯蓝方案能增强围产期母猪的繁殖性能。研究结果可为当前国内类NADC-30 PRRSV的防控奠定理论和实践基础,对当前国内兽医传染病的防控具有重要意义。 展开更多
关键词 驯蓝方案 类NADC-30猪繁殖与呼吸综合征病毒 抗病毒 效果评价
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基于PRRSV灭活疫苗免疫的PRRSV类NADC30株防控案例分析 被引量:6
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作者 段振华 胡明英 +8 位作者 甘一波 黄宇 刘香林 李苗 梁俊武 李汝 甘甲忠 梁兆德 何颖 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第6期60-66,共7页
2018年1月份广西玉林某猪场母猪出现大规模流产,初生仔猪腹股沟淋巴结发青、发紫,死亡率达到15%以上;保育猪在断奶后1周开始发烧,呼吸道症状明显,死亡率高达20%。为了对该猪场猪只所患疾病进行诊断,试验采用RT-PCR方法确定感染病原并对... 2018年1月份广西玉林某猪场母猪出现大规模流产,初生仔猪腹股沟淋巴结发青、发紫,死亡率达到15%以上;保育猪在断奶后1周开始发烧,呼吸道症状明显,死亡率高达20%。为了对该猪场猪只所患疾病进行诊断,试验采用RT-PCR方法确定感染病原并对其进行遗传进化分析,根据诊断结果制订和实施了疫苗免疫和药物治疗方案,通过统计猪场发病前后6个月的生产性能指标(窝均产仔数、窝均产健仔数、产房仔猪死亡率、保育仔猪死亡率)和采用荧光RT-PCR方法对母猪血清中的病原和抗体进行监测,评价综合防控方案的效果。结果表明:引起该猪场母猪繁殖障碍的病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),对其ORF5和Nsp2基因测序,测序毒株命名为GXYL 2018,该毒株与PRRSV NADC302012株在同一进化分支上,基因相似性分别为91.7%和90.6%。采用PRRSV灭活疫苗免疫和药物治疗方案后,该猪场母猪繁殖障碍症状消失,经产母猪、后备母猪和公猪血清中PRRSV阳性率和抗体离散度分别下降了64.16,48.19,80.00百分点和38.43,14.76,23.97百分点;母猪窝均产健仔数增加了1.61头,产房和保育仔猪死亡率分别下降了9.72,10.02百分点。说明PRRSV灭活疫苗免疫和药物治疗方案可以用于PRRSV类NADC30株引起的母猪繁殖障碍的综合防控。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30 繁殖障碍 灭活疫苗 抗体检测 防治
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CD163基因敲除大白猪的抗蓝耳病性能和主要生产性能研究 被引量:2
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作者 张健 吴珍芳 杨化强 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期333-339,共7页
[目的]运用CRISPR/Cas9基因编辑技术和体细胞核移植技术获得CD163基因全敲除(CD163 gene knockout,CD163-KO)的克隆猪,验证该基因敲除大白猪的抗蓝耳病特性,并研究其与野生型大白猪在生理、生产和繁殖性能等方面的差别,评估CD163-KO大... [目的]运用CRISPR/Cas9基因编辑技术和体细胞核移植技术获得CD163基因全敲除(CD163 gene knockout,CD163-KO)的克隆猪,验证该基因敲除大白猪的抗蓝耳病特性,并研究其与野生型大白猪在生理、生产和繁殖性能等方面的差别,评估CD163-KO大白猪的主要生产性能。[方法]用猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)流行毒株NADC30-like对本研究所获得的11头CD163-KO大白猪和5头年龄、体质量相当的野生型大白猪进行攻毒试验。连续14 d观察猪的临床症状,记录直肠温度变化,检测血清中PRRSV病毒含量和抗体水平。14 d后取肺部组织进行切片,通过PRRSV免疫荧光试验观察肺脏感染情况。采集CD163-KO和野生型大白猪肺泡巨噬细胞进行免疫染色,观察肺泡巨噬细胞表面CD163蛋白的表达情况;采集猪外周血单核细胞进行诱导分化,观察CD163-KO与野生型大白猪诱导分化的巨噬细胞对血红蛋白-结合珠蛋白复合物的摄取情况。最后,统计分析CD163-KO与野生型大白猪的生产性能及公猪的繁殖性能。[结果]本研究获得的CD163-KO大白猪对蓝耳病NADC30-like毒株具有完全抗性,敲除CD163基因不影响巨噬细胞的生理功能,CD163-KO与野生型大白猪的生长性能和繁殖性能无明显差异。[结论]本研究是对CD163-KO猪抵抗蓝耳病的又一佐证和补充,证明CD163基因敲除操作对生产性能没有潜在的负面影响,为抗蓝耳病猪的生物安全提供了支撑。 展开更多
关键词 CD163 基因敲除 大白猪 PRRSV 类NADC30毒株 抗病育种 生物安全评价
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中国新发L1A PRRSV变异株的出现与流行状况分析 被引量:1
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作者 许浒 龚帮俊 +17 位作者 李超 孙琪 李宛生 赵静 郭镇洋 李金昊 张思钰 相丽润 彭金美 王倩 周国辉 冷超粮 汤艳东 赵鸿远 安同庆 蔡雪辉 张洪亮 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期779-786,共8页
2017年我国首次发现类NADC34 PRRSV,该类病毒属于L1A(Sublineage1.5)亚型。近年来,新发类NADC34 PRRSV在我国不断变异,已经成为危害我国养猪业重要的PRRSV亚型。为了确定新发类NADC34 PRRSV的流行特征,本研究从2021年~2023年37份新发类N... 2017年我国首次发现类NADC34 PRRSV,该类病毒属于L1A(Sublineage1.5)亚型。近年来,新发类NADC34 PRRSV在我国不断变异,已经成为危害我国养猪业重要的PRRSV亚型。为了确定新发类NADC34 PRRSV的流行特征,本研究从2021年~2023年37份新发类NADC34 PRRSV阳性病料样品中选择4份样品经PCR分段扩增PRRSV全基因组序列并测序,利用SeqMan软件拼接,获得了4株完整的PRRSV全基因组序列,相应的病毒分别命名为TZJ2165、TZJ2451、TZJ2756、WK621株。下载GenBank中所有中国类NADC34 PRRSV和美国L1C变异株的ORF5基因及NSP2基因序列,利用MEGA7.0构建上述PRRSV ORF5基因序列的遗传进化树,分析其遗传变异情况。利用Megalign软件分析各分支内ORF5基因序列的相似性,以及新发类NADC34 PRRSV NSP2氨基酸序列,分析其是否存在一致的氨基酸缺失特征。根据PRRSV ORF5基因的限制性片段多态性(RFLP)分类方法,对新发类NADC34 PRRSV的ORF5基因序列分类。利用Simplot软件分析新发类NADC34 PRRSV和L1C变异株全基因组序列中的重组事件。基于ORF5基因进化树结果显示,这4株新发类NADC34 PRRSV与之前分离的TZJ2007、BJ-20-06等12株PRRSV均属于L1A亚型,与早期类NADC34 PRRSV相比,这些病毒株形成了一个独立分支,将其命名为L1A变异株,且其ORF5基因序列的相似性≥93%。NSP2氨基酸序列比对分析发现,L1A变异株具有一致的131个氨基酸不连续缺失的分子特征。ORF5基因的RFLP模式分析结果显示,L1A变异株RFLP模式分为1-4-2、1-4-4、1-5-4、1-7-4和1-6-4,模式并不一致。重组分析结果显示,L1A变异株存在相似的重组模式,它们均是以NADC30株(类NADC30 PRRSV)为主要亲本,JXA1株(类HP-PRRSV)提供部分非结构蛋白基因区域、IA/2014/NADC34株(类NADC34 PRRSV)提供ORF2a~ORF6区域的重组病毒。目前L1A变异株已经在黑龙江、内蒙古、辽宁、北京、广西、江苏、四川、福建、山东、广东和山西等11个省份检出。通过� 展开更多
关键词 L1A PRRSV变异株 类NADC30 PRRSV 类NADC34 PRRSV HP-PRRSV 重组 出现与流行
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鉴别PRRSV经典、高致病性和类NADC30毒株PCR方法的建立及初步应用 被引量:5
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作者 商佳亮 腾召剑 +3 位作者 陈立功 倪福太 宋勤叶 周双海 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期445-450,共6页
为了建立鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory virus,PRRSV)经典毒株、高致病性毒株与类NADC30毒株的快速检测方法,根据不同毒株的ORF1a核苷酸序列,设计并合成PRRSV特异性引物。经过引物筛选以及对退火温... 为了建立鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory virus,PRRSV)经典毒株、高致病性毒株与类NADC30毒株的快速检测方法,根据不同毒株的ORF1a核苷酸序列,设计并合成PRRSV特异性引物。经过引物筛选以及对退火温度、引物浓度的优化,建立了应用1对引物鉴别检测经典、高致病性及类NADC30 PRRSV毒株的PCR方法。该方法的反应体系为20μL,退火温度为58°C,引物含量为10 pmol,对经典毒株、高致病毒株和类NADC30毒株cDNA的最低检出量分别为12.16、138.70和59.30 pg;对猪瘟病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型等的检测均为阴性。进而用建立的PCR方法检测2017-2019年采集的38份PRRSV阳性组织病料,结果PRRSV总检出率为100%,其中类NADC30毒株、高致病性毒株与经典毒株的检出率分别为89.5%(34/38)、26.3%(10/38)和7.9%(3/38),并检测到2种或3种不同PRRSV毒株混合感染样本。该检测结果表明,建立的PCR方法可以用于PRRSV感染临床病例的检测,提示当前河北省部分地区猪场类NADC30毒株已成为优势流行毒株,不同PRRSV毒株的混合感染状态复杂多样。 展开更多
关键词 PRRSV PRRSV经典毒株 高致病性毒株 类NADC30毒株 PCR ORFla
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