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PDK1基因shRNA慢病毒载体构建及干扰效应鉴定
1
作者
郝南
农德勇
+4 位作者
李钻
林俊浩
黄桂海
李锡明
李伟
《中国临床新医学》
2021年第8期773-778,共6页
目的构建PDK1基因短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,鉴定其对PC-3细胞PDK1基因的干扰效应。方法在GenBank数据库检索PDK1基因序列,参考该序列设计PDK1特异性过干扰序列,酶切过表达用载体LV3,纯化酶切产物后进行定向连接。将重组干扰病毒质粒...
目的构建PDK1基因短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,鉴定其对PC-3细胞PDK1基因的干扰效应。方法在GenBank数据库检索PDK1基因序列,参考该序列设计PDK1特异性过干扰序列,酶切过表达用载体LV3,纯化酶切产物后进行定向连接。将重组干扰病毒质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,测定病毒滴度。将构建的慢病毒感染PC-3细胞,采用real-time RT-PCR法鉴定其PDK1基因干扰效应。结果测序结果证实成功构建PDK1基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,慢病毒滴度为1×108 TU/ml。real-time RT-PCR结果显示,LV3-PDK1-shRNA慢病毒感染PC-3细胞可显著抑制其PDK1 mRNA的表达(P<0.05)。结论成功构建PDK1基因RNAi慢病毒载体,获得稳定沉默PDK1基因的PC-3细胞株,为后续研究PDK1基因在前列腺癌细胞模型中的作用奠定基础。
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关键词
RNA干扰
3
-磷脂酰肌醇依赖的蛋白激酶-
1
转染
前列腺癌
慢病毒载体
下载PDF
职称材料
题名
PDK1基因shRNA慢病毒载体构建及干扰效应鉴定
1
作者
郝南
农德勇
李钻
林俊浩
黄桂海
李锡明
李伟
机构
广西壮族自治区人民医院泌尿外科
出处
《中国临床新医学》
2021年第8期773-778,共6页
基金
国家自然科学基金项目(编号:81460387)。
文摘
目的构建PDK1基因短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,鉴定其对PC-3细胞PDK1基因的干扰效应。方法在GenBank数据库检索PDK1基因序列,参考该序列设计PDK1特异性过干扰序列,酶切过表达用载体LV3,纯化酶切产物后进行定向连接。将重组干扰病毒质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,测定病毒滴度。将构建的慢病毒感染PC-3细胞,采用real-time RT-PCR法鉴定其PDK1基因干扰效应。结果测序结果证实成功构建PDK1基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,慢病毒滴度为1×108 TU/ml。real-time RT-PCR结果显示,LV3-PDK1-shRNA慢病毒感染PC-3细胞可显著抑制其PDK1 mRNA的表达(P<0.05)。结论成功构建PDK1基因RNAi慢病毒载体,获得稳定沉默PDK1基因的PC-3细胞株,为后续研究PDK1基因在前列腺癌细胞模型中的作用奠定基础。
关键词
RNA干扰
3
-磷脂酰肌醇依赖的蛋白激酶-
1
转染
前列腺癌
慢病毒载体
Keywords
Ribonucleic
acid(RNA)interference(RNAi)
3-
phosphoinositide
dependent
protein
kinase
-1(
pdk
1)
Transfection
Prostate
cancer
Lentiviral
vector
分类号
R34 [医药卫生—基础医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
PDK1基因shRNA慢病毒载体构建及干扰效应鉴定
郝南
农德勇
李钻
林俊浩
黄桂海
李锡明
李伟
《中国临床新医学》
2021
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