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大肠杆菌头孢菌素C乙酰酯酶的敲除对头孢菌素C酰化酶应用的影响
被引量:
1
1
作者
赵强
刘洋
+1 位作者
周晶辉
许岗
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第1期96-103,共8页
7-氨基头孢烷酸(7-ACA)是合成头孢菌素类抗生素的重要中间体,工业上通常采用头孢菌素C酰化酶一步水解头孢菌素C制备,但在该反应产物中存在一个主要杂质3-去乙酰基-7-氨基头孢烷酸(D-7-ACA),该杂质的产生是由大肠杆菌中内源基因aes编码...
7-氨基头孢烷酸(7-ACA)是合成头孢菌素类抗生素的重要中间体,工业上通常采用头孢菌素C酰化酶一步水解头孢菌素C制备,但在该反应产物中存在一个主要杂质3-去乙酰基-7-氨基头孢烷酸(D-7-ACA),该杂质的产生是由大肠杆菌中内源基因aes编码的头孢菌素C乙酰酯酶水解头孢菌素C或7-ACA引起的。为了防止D-7-ACA的形成,获得高品质7-ACA,减少下游精制成本,采用大肠杆菌双质粒pTargetF/pCas敲除系统,设计相应的gRNA以及同源修复供体DNA,对大肠杆菌BL21(DE3)中的aes进行敲除,从而获得了Aes缺陷型菌株BL21(DE3)△aes。将携带头孢菌素C酰化酶(CPCacy)表达质粒pET30-CPCacy的重组工程菌BL21(DE3)/pET30-CPCacy和BL21(DE3)△aes/pET30-CPCacy所诱导表达的孢菌素C酰化酶细胞破碎上清液进行7-ACA的生产对比试验,结果表明,敲除菌BL21(DE3)△aes/pET30-CPCacy对头孢菌素C的转化率为98.8%而原始菌为98.5%,同时7-ACA的产率为80.7%而原始菌株为80.2%,杂质D-7-ACA的产率仅为0.1%,为原始菌的25%,这些工作为进一步生产高品质的7-ACA奠定了基础。
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关键词
3
-去乙酰基-
7
-氨基头孢烷酸(D-
7
-
aca
)
孢菌素C酰化酶(CPCacy)
头孢菌素C乙酰酯酶
pTargetF/pCas
原文传递
题名
大肠杆菌头孢菌素C乙酰酯酶的敲除对头孢菌素C酰化酶应用的影响
被引量:
1
1
作者
赵强
刘洋
周晶辉
许岗
机构
湖南福来格生物技术有限公司
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第1期96-103,共8页
文摘
7-氨基头孢烷酸(7-ACA)是合成头孢菌素类抗生素的重要中间体,工业上通常采用头孢菌素C酰化酶一步水解头孢菌素C制备,但在该反应产物中存在一个主要杂质3-去乙酰基-7-氨基头孢烷酸(D-7-ACA),该杂质的产生是由大肠杆菌中内源基因aes编码的头孢菌素C乙酰酯酶水解头孢菌素C或7-ACA引起的。为了防止D-7-ACA的形成,获得高品质7-ACA,减少下游精制成本,采用大肠杆菌双质粒pTargetF/pCas敲除系统,设计相应的gRNA以及同源修复供体DNA,对大肠杆菌BL21(DE3)中的aes进行敲除,从而获得了Aes缺陷型菌株BL21(DE3)△aes。将携带头孢菌素C酰化酶(CPCacy)表达质粒pET30-CPCacy的重组工程菌BL21(DE3)/pET30-CPCacy和BL21(DE3)△aes/pET30-CPCacy所诱导表达的孢菌素C酰化酶细胞破碎上清液进行7-ACA的生产对比试验,结果表明,敲除菌BL21(DE3)△aes/pET30-CPCacy对头孢菌素C的转化率为98.8%而原始菌为98.5%,同时7-ACA的产率为80.7%而原始菌株为80.2%,杂质D-7-ACA的产率仅为0.1%,为原始菌的25%,这些工作为进一步生产高品质的7-ACA奠定了基础。
关键词
3
-去乙酰基-
7
-氨基头孢烷酸(D-
7
-
aca
)
孢菌素C酰化酶(CPCacy)
头孢菌素C乙酰酯酶
pTargetF/pCas
Keywords
3-
deacetyl
-
7
-
aminocephalosporanic
acid
(D-
7
-
aca
)
CPC
acylase(CPCacy)
Cephalosporin
C
acetyl
esterase
pTargetF/pCas
分类号
Q814 [生物学—生物工程]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大肠杆菌头孢菌素C乙酰酯酶的敲除对头孢菌素C酰化酶应用的影响
赵强
刘洋
周晶辉
许岗
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
原文传递
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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