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Transwell 3-D联合共培养促使人羊水克隆样细胞来源干细胞向肝样细胞分化的研究 被引量：6
1
作者 张胜利 范应中 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1323-1328,共6页
目的 探讨Transwell 3-D联合共培养促使人羊水克隆样细胞来源干细胞向肝样细胞分化的可能性.方法 利用克隆杯,从人孕中期羊水标本中分离获得人羊水克隆样细胞来源干细胞,培养扩增后,通过流式细胞仪检测表面抗原进行鉴定.利用Transwell... 目的 探讨Transwell 3-D联合共培养促使人羊水克隆样细胞来源干细胞向肝样细胞分化的可能性.方法 利用克隆杯,从人孕中期羊水标本中分离获得人羊水克隆样细胞来源干细胞,培养扩增后,通过流式细胞仪检测表面抗原进行鉴定.利用Transwell小室联合共培养肝细胞诱导其向肝样细胞分化,观察诱导后细胞形态的变化,利用细胞免疫荧光检测甲胎蛋白（AFP）、白蛋白（ALB）和细胞角蛋白-18（CK-18）在诱导后细胞中的表达,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝细胞相关基因的表达.结果 利用克隆杯分离出的人羊水克隆样细胞来源干细胞CD44和CD90表达阳性,CD10、CD14、CD34、CD45和人类白细胞抗原DR基因（HLA-DR）表达阴性.诱导2～4周后,肝样细胞出现,检测证实这些细胞表达AFP、ALB、CK-18、GATA结合蛋白-4（GATA4）、肝细胞核因子（HNF）-1α和细胞色素20A（CYP20A）等肝细胞相关标志和基因.结论 Transwell 3-D联合共培养可以促使人羊水克隆样细胞来源干细胞向肝样细胞分化. 展开更多
关键词 人羊水克隆样细胞来源干细胞 TRANSWELL 3-D联合共培养 肝样细胞
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脉络丛Neuro-2A细胞株对胚胎脊髓运动神经元轴突的排斥作用
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作者 盛鹏 杨惠林 +2 位作者 张志坚 龚爱华 刘锦波 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2008年第3期197-200,共4页
目的:探讨脉络丛组织、Neuro-2A细胞株对胚胎脊髓运动神经元轴突生长的影响。方法:采用ECM Gel作为组织培养的基质底物,将脉络丛组织或者Neuro-2A细胞株和胚胎12天的腹侧脊髓运动神经柱进行三维共培养,观察脉络丛组织或者Neuro-2A细胞... 目的:探讨脉络丛组织、Neuro-2A细胞株对胚胎脊髓运动神经元轴突生长的影响。方法:采用ECM Gel作为组织培养的基质底物,将脉络丛组织或者Neuro-2A细胞株和胚胎12天的腹侧脊髓运动神经柱进行三维共培养,观察脉络丛组织或者Neuro-2A细胞株对胚胎脊髓运动神经元轴突生长的影响。结果:脉络丛组织或者Neuro-2A细胞株与胚胎12天的腹侧脊髓组织共培养2天后,脊髓运动神经元轴突表现为偏离脉络丛组织或者Neuro-2A细胞株的偏向性生长。结论:脉络丛组织和Neuro-2A细胞株对胚胎脊髓运动神经元轴突有排斥作用。 展开更多
关键词 SLIT2 脉络丛 脊髓运动神经元轴突 三维共培养
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基于微流控芯片构建的肿瘤细胞三维共培养模型 被引量：7
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作者 赵毅 刘刚 +4 位作者 蔡绍皙 陈斯佳 李博 邹米莎 吴泽志 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第28期2868-2876,共9页
在肿瘤及相伴血管生长过程中,微环境中的多种理化因素协同地发挥着重要的作用.传统体外实验多借助于Transwell等模型,在单一因素下考察细胞生物学效应,并不能反映在体的多因素微环境.基于微流控技术,本文构建了一种新的多细胞共培养模型... 在肿瘤及相伴血管生长过程中,微环境中的多种理化因素协同地发挥着重要的作用.传统体外实验多借助于Transwell等模型,在单一因素下考察细胞生物学效应,并不能反映在体的多因素微环境.基于微流控技术,本文构建了一种新的多细胞共培养模型,整合了多环境维度(二维/三维)、细胞与细胞及细胞与胞外基质相互作用、不同生化因子的浓度梯度、细胞区域性等多个重要因素,形成微环境,并能实时监测细胞的迁移和侵袭等响应.为评价该模型的可行性和功能上的独特优势,我们模拟了肿瘤细胞(HepG2,CAOV-3)和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)共存的三维微环境,考察了它们共培养时相互诱导向三维基质材料中的迁移情况.结果表明,在三维共培养模型中细胞能够相互影响并出现明显形态差异;2种肿瘤细胞的诱导均使HUVECs迁移能力显著提高;同时2种不同肿瘤细胞出现了与其病理特质(HepG2低浸润,CAOV-3高浸润)相对应的迁移能力差异.以上结果表明,该模型可望为研究肿瘤微环境下的相关问题提供一个相对简便且更具整合价值的研究平台. 展开更多
关键词 微环境 三维共培养 微流控芯片 细胞迁移
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3D共培养模型对体外培养兔角膜缘干细胞的影响
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作者 周瑛 孙秋萍 +1 位作者 蔡岩 高晓唯 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2019年第4期331-335,共5页
目的探讨三维(three-dimension,3D)共培养模型对体外扩增兔角膜缘干细胞(limbal stem cells,LSCs)的作用。方法体外培养兔LSCs,以牙周膜干细胞(human periodontal stem cell,HPDLSCs)作为饲细胞建立共培养模型,根据载体不同分为3组,纤... 目的探讨三维(three-dimension,3D)共培养模型对体外扩增兔角膜缘干细胞(limbal stem cells,LSCs)的作用。方法体外培养兔LSCs,以牙周膜干细胞(human periodontal stem cell,HPDLSCs)作为饲细胞建立共培养模型,根据载体不同分为3组,纤维蛋白胶组:将兔LSCs、HPDLSCs、纤维蛋白胶3D共培养;羊膜组:将兔LSCs、HPDLSCs、羊膜3D共培养;对照组:将兔LSCs、HPDLSCs共培养。共培养5 d后,用倒置显微镜、HE染色、扫描电镜观察兔LSCs的细胞形态,采用免疫荧光染色检测各组兔LSCs阳性标志物p63的表达,并比较各组p63的阳性率。结果共培养5 d后,倒置显微镜、HE染色观察细胞形态,羊膜组、纤维蛋白胶组细胞排列紧密,呈大小不等的团块状集落,细胞大小基本一致;对照组细胞排列相对稀疏;扫描电镜下观察见纤维蛋白胶组和羊膜组细胞与载体贴附良好。免疫荧光染色显示纤维蛋白胶组、羊膜组和对照组LSCs的p63阳性率分别为(69.93±8.76)%、(78.36±8.56)%和(58.59±8.31)%,三组间总体比较差异有统计学意义(F=9.43,P=0.000)。两两比较中纤维蛋白胶组、羊膜组LSCs的p63阳性率均大于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。纤维蛋白胶组、羊膜组的p63阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论以纤维蛋白胶、羊膜作为载体,HPDLSCs作为饲细胞的3D共培养模型有助于体外扩增兔LSCs。 展开更多
关键词 角膜缘干细胞 纤维蛋白胶 羊膜 3D共培养
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利用海藻酸水凝胶构建仿肝板肝组织三维共培养模型
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作者 王高尚 贾志栋 +2 位作者 李阳 彭青 高毅 《重庆医学》 CAS 北大核心 2017年第17期2305-2308,共4页
目的利用海藻酸水凝胶构建一种新的肝细胞三维共培养模型。方法利用海藻酸钠、微流控芯片,以及肝细胞C3A和脐静脉内皮细胞EA.hy926制备出海藻酸钠水凝胶微纤维,实验组为仿肝板组,同时制备出混合无序水凝胶微纤维作为对照组。利用活细胞... 目的利用海藻酸水凝胶构建一种新的肝细胞三维共培养模型。方法利用海藻酸钠、微流控芯片,以及肝细胞C3A和脐静脉内皮细胞EA.hy926制备出海藻酸钠水凝胶微纤维,实验组为仿肝板组,同时制备出混合无序水凝胶微纤维作为对照组。利用活细胞双荧光标记验证微纤维内两种细胞排列结构,将微纤维培养1周,每天观察微纤维形态,检测肝细胞活力及清蛋白(Alb)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH-L)、α1抗胰蛋白酶(α1AT)、凝血因子Ⅶ(FⅦ)、谷胱甘肽S转移酶α1(GSTα1)、细胞色素P450氧化酶1A2(CYP1A2)的水平。结果仿肝板组水凝胶内C3A细胞在中间,有2~3排,EA.hy926细胞位于C3A细胞两侧,呈现肝板结构排布;对照组水凝胶内两种细胞则混杂在一起呈无序状态;大约3d肝组织条索形成;两组水凝胶微纤维直径随时间变化差异无统计学意义(P>0.05);仿肝板组肝细胞活力在第5天达到最大值,对照组在第6天达到最大值,两组除第1天较接近外,其余各天仿肝板组均高于对照组;两组清蛋白分泌水平变化趋势基本相同,在第3天达到最大值,第4天开始下降;仿肝板组ALT、AST、LDH-L在第3天下降到最小值,第4天以后变化趋势和对照组相同;两组α1AT除第5天外其余各时间点比较差异均有统计学意义(P<0.05);两组GSTα1分泌量随时间持续上升,仿肝板组各时间点明显高于对照组(P<0.05);仿肝板组FⅦ分泌量前7d逐渐升高,对照组于第2天持续下降,仿肝板组第3天开始明显高于对照组(P<0.05);对照组细胞内CYP1A2水平随时间变化不明显,仿肝板组从第4天开始明显高于对照组(P<0.05)。结论成功构建出一种仿肝板肝组织三维共培养模型,肝细胞功能有望得到长时间维持。 展开更多
关键词 海藻酸钠 水凝胶 微流体 肝细胞 肝板 三维共培养
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