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题名海刺参组织蛋白酶L基因的克隆、重组表达及活性鉴定
被引量：6
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作者
鄢荣歆
徐赛涛
丛丽娜
杨冠科
朱蓓薇
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机构
大连工业大学生物与食品工程学院
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出处
《大连工业大学学报》
CAS
北大核心
2009年第6期391-396,共6页
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基金
国家自然科学基金资助项目(30571449)
国家重点基础研究发展规划("973"计划)前期研究资助项目(2006CB708210)
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文摘
通过RT-PCR和RACE PCR技术,从海刺参(Stichopus japonicus)肠中克隆得到编码组织蛋白酶L(SjCL)基因,其中全长cDNA 1 287 bp,5′非编码区(UTR)202 bp,3′UTR 87 bp,开放阅读框(ORF)999 bp,编码332个氨基酸(aa),包括组织蛋白酶L成熟肽316 aa和信号肽16 aa,分子质量预测为35.3 ku。用SjCL序列与相似物种海胆、海葵等进行对比,可知SjCL具有组织蛋白酶L所特有的氨基酸保守区域ERFNIN和GNFD,以及由Cys 139,His 278和Asn 299残基组成的保守活性位点。将编码SjCL基因克隆进原核表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒pET32a(+)-SjCL,转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞,再进行诱导表达、亲和纯化和透析复性,得到了纯化且具有活性的重组SjCL。酶活力检测结果表明,重组SjCL对组织蛋白酶L特异性底物Z-Phe-Arg-Nmec具有较高活性,而对组织蛋白酶B特异性底物Z-Arg-Arg-Nmec无活性。本实验对SjCL的cDNA序列进行了生物信息学分析并通过基因工程的手段表达出具有活性的重组SjCL,为进一步研究组织蛋白酶L在海刺参自溶过程中的作用提供理论基础。
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关键词
海刺参
组织蛋白酶L
RT-PCR
3′-和5-′racepcr
重组表达
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Keywords
Stichopusjaponicus
cathepsin L
RT-PCR
3′- and 5′-RACE PCR
recombinant expression
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分类号
TS254.2
[轻工技术与工程—水产品加工及贮藏工程]
Q786
[轻工技术与工程—食品科学与工程]
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