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自组装纳米颗粒肿瘤疫苗OVA257-264-mi3的构建及其保护效果评价
1
作者 陈源 高晨 +6 位作者 李宇航 崔致远 程新 张怡 于博 顾江 杨宪 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期1361-1368,共8页
目的构建SpyCatcher-mi3纳米颗粒疫苗递送载体,评价其在增强卵清蛋白CD8+T细胞表位肽OVA 257-264免疫原性和在小鼠荷瘤模型中免疫保护效果。方法SpyCatcher-mi3蛋白由大肠杆菌表达,依次经亲和层析、阴离子交换层析纯化得到;合成OVA 257-... 目的构建SpyCatcher-mi3纳米颗粒疫苗递送载体,评价其在增强卵清蛋白CD8+T细胞表位肽OVA 257-264免疫原性和在小鼠荷瘤模型中免疫保护效果。方法SpyCatcher-mi3蛋白由大肠杆菌表达,依次经亲和层析、阴离子交换层析纯化得到;合成OVA 257-264-SpyTag多肽,通过SpyTag/SpyCatcher蛋白质连接系统构建纳米颗粒OVA 257-264-mi3;通过细胞溶血实验和细胞毒性实验评价OVA 257-264-mi3体外安全性,记录小鼠体重变化和镜检脏器组织切片HE染色评价OVA 257-264-mi3体内安全性;将6~8周龄,18~20 g,SPF级,雌性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为OVA 257-264-mi3组、OVA 257-264组和Control组,每组14只,分别于第0、14、28天免疫小鼠,末次免疫后第14天通过ELISpot检测其脾脏淋巴细胞中IFN-γ分泌细胞数量评价其免疫原性;在小鼠荷瘤模型上通过核磁共振成像等手段评价纳米颗粒疫苗OVA 257-264-mi3的保护效果。结果SpyCatcher-mi3和OVA 257-264-mi3均自组装形成均一稳定的纳米颗粒,平均粒径约为43.8 nm和91.3 nm;OVA 257-264-mi3在体内外均具有良好的安全性;OVA 257-264-mi3组小鼠每1×106个脾脏淋巴细胞中IFN-γ分泌细胞数量达253,显著高于OVA 257-264组(P<0.05);OVA 257-264-mi3组小鼠第22天荷瘤体积约151.1 mm 3,显著小于OVA 257-264组(P<0.05),且观察期内生存率达60%,显著高于OVA 257-264组(P<0.05)。结论成功构建了纳米颗粒疫苗OVA 257-264-mi3,其增强肿瘤抗原表位肽OVA 257-264免疫原性,在小鼠荷瘤模型中保护效果良好,为肿瘤新抗原疫苗的研究提供了理论基础。 展开更多
关键词 SpyCatcher-mi3 OVA 257-264 纳米颗粒疫苗 保护效果评价
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嵌合型口蹄疫病毒样颗粒构建、表达及鉴定 被引量：1
2
作者 刘绒欢 郭慧琛 +3 位作者 杜平 董虎 郭梦楠 孙世琪 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1305-1313,共9页
为提高口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV)病毒样颗粒(Virus-likeparticles,VLPs)的特异性识别和递呈,为靶向疫苗研究奠定基础,利用反向PCR技术,将卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)第257–264位氨基酸(Amino acids,aa)的短肽嵌入FMDV... 为提高口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV)病毒样颗粒(Virus-likeparticles,VLPs)的特异性识别和递呈,为靶向疫苗研究奠定基础,利用反向PCR技术,将卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)第257–264位氨基酸(Amino acids,aa)的短肽嵌入FMDV结构蛋白VP3第171–172位aa或第173–174位aa,通过大肠杆菌表达FMDV结构蛋白VP0、VP1和嵌合型VP3,体外组装得到嵌合OVA257-264肽的病毒样颗粒(VLPOVA)。用动态光散射、透射电镜检测VLPOVA大小和形态,免疫印迹、酶联免疫吸附试验和激光共聚焦显微镜检测短肽的嵌入情况。结果显示在VP3的第173–174位aa嵌入OVA,不影响蛋白表达和VLPs的组装且OVA位于VLPOVA的表面,VLPOVA粒径比VLPs稍大。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 嵌合型病毒样颗粒 OVA257-264 VP3
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C3b_(AN42)与OVA_(257-264)融合基因的构建及表达产物生物学活性的鉴定
3
作者 许桂莲 郭波 +3 位作者 郑萍 杨菲 邹强 吴玉章 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期651-654,共4页
目的 :探讨补体系统在T细胞活化中的作用。方法 :构建补体组分C3活化片段C3b的受体结合片段C3bAN42 与OVA2 57-2 64CTL表位融合基因表达质粒 ,并对融合蛋白的表达以及生物学活性进行检测。结果 :以重组质粒转染COS 7细胞后 ,用FACS检测... 目的 :探讨补体系统在T细胞活化中的作用。方法 :构建补体组分C3活化片段C3b的受体结合片段C3bAN42 与OVA2 57-2 64CTL表位融合基因表达质粒 ,并对融合蛋白的表达以及生物学活性进行检测。结果 :以重组质粒转染COS 7细胞后 ,用FACS检测融合蛋白在COS 7细胞中得到表达。将转染细胞的培养上清与巨噬细胞系Ana 1共孵育 ,通过激光共聚焦显微镜扫描观察 ,发现融合蛋白可与Ana 1发生特异性结合 ,并且重组的融合蛋白被Ana 1细胞内吞后 ,可释放出表位肽OVA2 57-2 64。后者与MHC Ⅰ类分子结合后 ,以OVA2 57-2 64 MHC Ⅰ类分子复合物的形式被交叉呈递于Ana 1细胞的表面。结论 :C3bAN42 与OVA2 57-2 64CTL表位融合基因在真核细胞中能正确表达 。 展开更多
关键词 C3B OVA257-264 CTL表位 交叉呈递
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嵌合OVA多肽的水貂肠炎病毒VP2病毒样颗粒的表达及鉴定
4
作者 吕甜甜 郭晓芹 +3 位作者 曹海旭 朱言柱 宋显晶 张蕾 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期712-719,共8页
为探究水貂肠炎病毒(MEV)VP2病毒样颗粒(VLPs)作为嵌合载体携带外源抗原的能力,通过PCR技术将鸡卵清蛋白(OVA)第257~264位氨基酸短肽(SIINFEKL)插入到MEV VP2的N末端获得OVA_(257-264)-VP2,通过克隆重组和蓝白斑筛选分别获得重组质粒Bac... 为探究水貂肠炎病毒(MEV)VP2病毒样颗粒(VLPs)作为嵌合载体携带外源抗原的能力,通过PCR技术将鸡卵清蛋白(OVA)第257~264位氨基酸短肽(SIINFEKL)插入到MEV VP2的N末端获得OVA_(257-264)-VP2,通过克隆重组和蓝白斑筛选分别获得重组质粒Bacmid-VP2、Bacmid-OVA_(257-264)-VP2,转染到昆虫细胞表达获得VP2、OVA_(257-264)-VP2蛋白的重组杆状病毒;通过间接免疫荧光和Western-blot分析蛋白反应原性,透射电镜观察VLPs形态,血凝试验检测其血凝特性。间接免疫荧光和Western-blot结果表明,重组蛋白VP2和OVA_(257-264)-VP2都具有良好的反应原性。透射电镜观察结果表明,VP2与OVA_(257-264)-VP2都可以形成病毒样粒子,颗粒直径均约为22 nm。血凝试验结果表明,重组蛋白VP2和OVA_(257-264)-VP2与天然病毒的凝集特性相同,均可达到1∶16 384。结论:在MEV VP2的N端插入OVA257-264,不影响VP2病毒样颗粒的组装,VP2和外源多肽都保持有良好的反应原性,MEV VP2可以作为疫苗载体递呈外源抗原。 展开更多
关键词 病毒样颗粒 水貂肠炎病毒 VP2基因 OVA
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