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维生素D_(3)羟化菌株的筛选及工艺优化
1
作者 侯懿娜 李会 +3 位作者 何鹏 何于琳 史劲松 许正宏 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1452-1458,共7页
25(OH)VD_(3)和1α,25(OH)_(2)VD_(3)在临床上具有广泛的应用,其合成方法包括化学合成法与生物转化法.生物转化法相比化学合成法具有反应条件温和、反应专一性强、成本低等优点.为获取具有生物羟基化维生素D_(3)功能的微生物,通过唯一... 25(OH)VD_(3)和1α,25(OH)_(2)VD_(3)在临床上具有广泛的应用,其合成方法包括化学合成法与生物转化法.生物转化法相比化学合成法具有反应条件温和、反应专一性强、成本低等优点.为获取具有生物羟基化维生素D_(3)功能的微生物,通过唯一碳源平板法从土壤中分离得到一株具有转化维生素D_(3)生成25(OH)VD_(3)和1α,25(OH)_(2)VD_(3)能力的菌株1-18.经16S rDNA测序鉴定,菌株1-18为巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium),命名为巨大芽孢杆菌H-1.通过单因素法优化发酵工艺,确定最佳发酵条件为初始pH值7.5,添加6%(V/V)的甘油助溶底物,发酵6 h时投入底物维生素D_(3),接种量为2%(V/V).优化后25(OH)VD_(3)的浓度在发酵36 h时达到1433.90μg/L,1α,25(OH)_(2)VD_(3)的浓度在发酵60 h时达到811.05μg/L.本研究成功筛选到新的羟基化维生素D_(3)的菌株,并通过优化发酵条件缩短了发酵周期和提高了羟化产物的浓度. 展开更多
关键词 维生素D_(3) 生物转化 巨大芽孢杆菌 25(oh)vd_(3) 1α 25(oh)_(2)vd_(3)
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1,25(OH)_(2)VD_(3)对血管紧张素Ⅱ诱导的足细胞内质网应激的抑制作用 被引量：1
2
作者 杨敏 金林 +3 位作者 王雅宁 梁栋 王海婷 刘云启 《滨州医学院学报》 2023年第2期120-125,132,共7页
目的探讨1,25(OH)_(2)VD_(3)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的足细胞内质网应激的影响,为临床上应用骨化三醇治疗足细胞损伤产生的蛋白尿提供理论依据。方法体外培养小鼠足细胞系(MPC5),随机分为对照组、AngⅡ组(10^(-6)mol/L的AngⅡ)、1,25... 目的探讨1,25(OH)_(2)VD_(3)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的足细胞内质网应激的影响,为临床上应用骨化三醇治疗足细胞损伤产生的蛋白尿提供理论依据。方法体外培养小鼠足细胞系(MPC5),随机分为对照组、AngⅡ组(10^(-6)mol/L的AngⅡ)、1,25(OH)_(2)VD_(3)组[10^(-6)mmol/L的AngⅡ+10^(-8)mol/L的1,25(OH)_(2)VD_(3)]。各组均在给药处理6、12、18、24 h后收集细胞,分别应用实时定量PCR、免疫荧光技术检测不同时间点各组样本中葡萄糖调节蛋白(GRP78)及蛋白激酶样内质网激酶(PERK)的mRNA表达量和蛋白表达情况。结果与对照组比较,AngⅡ组GRP78、PERK mRNA表达量在各个时间点均显著增加(P<0.01)。与AngⅡ组比较,1,25(OH)_(2)VD_(3)组GRP78、PERK mRNA表达量在各个时间点均显著降低(P<0.01或<0.05),相应的GRP78、PERK蛋白表达均较低。AngⅡ组给药处理12 h后GRP78、PERK mRNA表达量较6 h mRNA表达量均显著增加(P<0.01);AngⅡ组给药处理18 h后GRP78、PERK mRNA表达量较12 h mRNA表达量均显著增加(P<0.01,P<0.05)。结论AngⅡ可以诱导足细胞发生内质网应激,其发生强度与药物作用时间有关,而1,25(OH)_(2)VD_(3)能通过抑制AngⅡ诱导的足细胞内质网应激,起到保护足细胞的作用。 展开更多
关键词 1 25(oh)_(2)vd_(3) 内质网应激 葡萄糖调节蛋白 蛋白激酶样内质网激酶
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1,25(OH)_(2)VD_(3)诱导培养兔骨髓细胞FOS蛋白产生的实验研究
3
作者 冯雪 林珠 段银钟 《现代口腔医学杂志》 CAS CSCD 2000年第6期379-380,共2页
目的　观察 1,2 5二羟维生素D3 [1,2 5 (OH) 2 VD3 ]对培养兔骨髓细胞产生立即早期基因c -fos的蛋白产物 (FOS蛋白 )的诱导作用。方法　在原代培养至第六代的兔骨髓细胞中加入含 5× 10 -5M/L 1,2 5 (OH) 2 VD3的培养液 ,继续培养 ... 目的　观察 1,2 5二羟维生素D3 [1,2 5 (OH) 2 VD3 ]对培养兔骨髓细胞产生立即早期基因c -fos的蛋白产物 (FOS蛋白 )的诱导作用。方法　在原代培养至第六代的兔骨髓细胞中加入含 5× 10 -5M/L 1,2 5 (OH) 2 VD3的培养液 ,继续培养 3小时后 ,固定标本 ,进行FOS免疫组化反应。结果　大部分细胞形态正常 ,胞核呈棕黄色 ,椭圆形 ,胞浆不着色 ,细胞轮廓清晰 ,表现为FOS免疫组织化学反应阳性。结论　 1,2 5 (OH) 2 VD3 能够诱导兔骨髓细胞表达FOS蛋白 。 展开更多
关键词 1 25二羟维生素D_(3) 骨髓细胞 立即早期基因c-fos
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1，25（OH）2VD3对人脐带间充质干细胞增殖及成骨分化的影响 被引量：2
4
作者 吴学建 程省 陶金刚 《中华显微外科杂志》 CSCD 北大核心 2011年第5期386-389,F0003,共5页
目的研究人脐带组织间充质干细胞（UCMSCs）体外分离、扩增的方法，探讨不同浓度的1，25（OH）2维生素D3[1，25（OH）2VD3]对人UCMSCs增殖及成骨分化的影响。方法利用组织块贴壁法分离并培养人UCMSCs，通过免疫组化技术对其鉴定：取生... 目的研究人脐带组织间充质干细胞（UCMSCs）体外分离、扩增的方法，探讨不同浓度的1，25（OH）2维生素D3[1，25（OH）2VD3]对人UCMSCs增殖及成骨分化的影响。方法利用组织块贴壁法分离并培养人UCMSCs，通过免疫组化技术对其鉴定：取生长状态良好的第3代人UCMSCs进行干预实验，设置10^-7、10^-9和10^-11mol／L3种浓度的1，25（OH）2VD3作为实验组，并设空白对照组（常规DMEM培养基）。动态观察干预前、后各组细胞的形态变化，四唑盐（MTT）比色法观察细胞增殖，免疫组化法检测碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原蛋白表达，茜素红染色观察矿化结节形成情况。结果组织块贴壁培养法可获得人UCMSCs，免疫细胞化学显示CD44、CD105强阳性，CD34、CD45阴性，符合人UCMSCs的特征；1，25（OH）2VD3对人UCMSCs增殖的影响表现为少于7d促进增殖，超过7d则抑制增殖，高剂量组（10^-7mol／L组）抑制干细胞增殖效应更明显，不同浓度效应与时间效应之间存在交互作用（P〈0．05）；1，25（OH）2VD3对人UCMSCs成骨分化影响表现为10^-11mol／L组促碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原蛋白分泌作用高于10^-7和10^-9mol／L组，低剂量1，25（OH）2VD3促进成骨细胞分化作用更明显（P〈0．05）；1，25（OH）2VD3可促进人UCMSCs钙化结节的形成。结论采用组织块贴壁培养法可以成功获得人UCMSCs，1，25（OH）2VD3可有效调节人UCMSCs增殖并促进其向成骨细胞分化。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 1 25(oh)2维生素D3 分化 成骨细胞
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