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家蚕脂肪体蛋白质组学研究 被引量:15
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作者 侯勇 赵萍 +3 位作者 刘鸿丽 邹勇 官建 夏庆友 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期867-872,共6页
通过高精度的双向电泳技术对家蚕末龄幼虫的脂肪体组织进行了研究,采用基质辅助质量飞行时间质谱对其中一些表达量较高的蛋白点进行了鉴定,并利用GPMAW软件结合家蚕基因组预测的蛋白质数据库构建了本地的肽质量指纹图谱数据库,对所得到... 通过高精度的双向电泳技术对家蚕末龄幼虫的脂肪体组织进行了研究,采用基质辅助质量飞行时间质谱对其中一些表达量较高的蛋白点进行了鉴定,并利用GPMAW软件结合家蚕基因组预测的蛋白质数据库构建了本地的肽质量指纹图谱数据库,对所得到的肽质量指纹图谱进行了分析。研究发现,经过双向凝胶电泳及其图象分析技术,银染可以分离出722个清晰蛋白点,这些蛋白质主要集中在分子量15~90kD区域,等电点pH4~8之间。MALDI-TOF-MS鉴定的41个蛋白点中都有较强的肽质量指纹信号峰,其中34个蛋白点得到了成功鉴定,其中包括了大量参与代谢的酶类、不同分子量的热激蛋白、重要的血液蛋白30K,Actin3等,这一结果对人们进一步认识家蚕脂肪体提供了有利的帮助。 展开更多
关键词 家蚕 脂肪体 双向电泳 MALDI-TOF MS
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水稻蛋白质组双向电泳优化流程及方法 被引量:18
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作者 丁承强 马丹 +1 位作者 王绍华 丁艳锋 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期67-73,共7页
双向电泳是分析蛋白质混合物的一种有力手段,已在蛋白质组研究中得到广泛应用。水稻(Oryzasativa)作为重要的粮食作物,对其蛋白质组学研究开展较早。但由于技术复杂,对实验操作要求高,初学的研究者很难在较短的时间内掌握该实验技术。... 双向电泳是分析蛋白质混合物的一种有力手段,已在蛋白质组研究中得到广泛应用。水稻(Oryzasativa)作为重要的粮食作物,对其蛋白质组学研究开展较早。但由于技术复杂,对实验操作要求高,初学的研究者很难在较短的时间内掌握该实验技术。该文介绍了水稻研究中适合多个组织的双向电泳实验方法和优化流程。该优化流程能使新的研究者逐步优化实验条件,更快更好地完成双向电泳实验。同时详细介绍了实验关键环节的操作方法。 展开更多
关键词 蛋白质组学 水稻 双向电泳
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小鼠小肠上皮细胞经γ射线照射后蛋白质组差异分析 被引量:13
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作者 章波 粟永萍 +5 位作者 刘晓宏 艾国平 冉新泽 魏永江 王军平 程天民 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期234-237,共4页
目的 分析γ射线照射后 ,在辐射损伤期和修复期小鼠肠上皮细胞蛋白质组的改变 ,以探讨肠上皮细胞损伤与修复的分子机理。方法 采用 9Gy全身照射BALB c小鼠 ,分别于照射后3h和 72h取小肠制备卷肠切片 ,染色并观察小肠形态。分离未照射... 目的 分析γ射线照射后 ,在辐射损伤期和修复期小鼠肠上皮细胞蛋白质组的改变 ,以探讨肠上皮细胞损伤与修复的分子机理。方法 采用 9Gy全身照射BALB c小鼠 ,分别于照射后3h和 72h取小肠制备卷肠切片 ,染色并观察小肠形态。分离未照射小鼠及照射后 3h和 72h小鼠的肠上皮细胞 ,制备蛋白样品 ,采用双向电泳技术分离样品 ,PDQuest软件处理双向电泳图谱 ;并对差异的蛋白质点进行肽质量指纹分析。结果 小鼠肠上皮在照射后 3h以损伤性改变为主 ,72h后出现明显再生修复。采用双向电泳技术在正常对照组、照射后 3h组以及照射后 72h组分别检测到(6 38± 39)、(5 6 6± 32 )和 (5 91± 2 9)个蛋白质点。对其中 2 8个差异蛋白质点进行了肽质量指纹分析 ,经数据库检索 ,初步鉴定为一些与代谢、过氧化应急、信号转导相关的蛋白质。结论 电离辐射能诱导小鼠肠上皮细胞蛋白表达的改变 ,双向电泳技术对从整体方面揭示辐射损伤的分子机理有重要价值。 展开更多
关键词 小鼠 小肠 上皮细胞 Γ射线照射 蛋白质组 差异 分析 双向电泳 肽质量指纹谱
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双孢蘑菇耐温差异蛋白质组学研究 被引量:14
4
作者 陆兆明 徐祯 +3 位作者 王珂 陈澄 陈岑渌璐 宋思扬 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期590-593,共4页
利用蛋白质组学和荧光定量PCR方法,研究双孢蘑菇(Agaricus bisporusLange(Imbach))02菌株在常温与高温胁迫下的蛋白质表达差异,发现了6个差异蛋白质点,经NCBI数据库比对分析,表明6个差异蛋白质分别为HSP70家族的HSS1热激蛋白、异柠檬酸... 利用蛋白质组学和荧光定量PCR方法,研究双孢蘑菇(Agaricus bisporusLange(Imbach))02菌株在常温与高温胁迫下的蛋白质表达差异,发现了6个差异蛋白质点,经NCBI数据库比对分析,表明6个差异蛋白质分别为HSP70家族的HSS1热激蛋白、异柠檬酸裂解酶、细胞色素P450单氧化酶及3个未知蛋白质.这些蛋白质在双孢蘑菇受热胁迫下具有保护自身稳定的功能. 展开更多
关键词 双孢蘑菇 双向电泳 热胁迫 蛋白表达差异
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家蚕幼虫5龄期中肠蛋白质组学 被引量:9
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作者 姚慧鹏 郭爱芹 +2 位作者 何芳青 鲁兴萌 吴小锋 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期89-94,共6页
利用双向电泳技术对家蚕幼虫5龄期第2天、第5天和第7天的中肠蛋白质进行分离,并利用ImageMaster 2D Platinum对所分离得到的蛋白图谱进行比较,并对一些蛋白质斑点进行了质谱鉴定。研究发现,家蚕中肠蛋白质具有区别于家蚕其他组织的明显... 利用双向电泳技术对家蚕幼虫5龄期第2天、第5天和第7天的中肠蛋白质进行分离,并利用ImageMaster 2D Platinum对所分离得到的蛋白图谱进行比较,并对一些蛋白质斑点进行了质谱鉴定。研究发现,家蚕中肠蛋白质具有区别于家蚕其他组织的明显特征:蛋白质大多分布在PI值4-8、分子量20~70 kD的区域,且分布不均匀,主要集中在酸性一侧,这一特点在家蚕5龄期第7天的图谱尤为明显。5龄期家蚕第2天的蛋白质斑点数目为869个,而到第5天增加到966个,新增蛋白数目97个,进一步观察发现增加的蛋白主要分布在PI值6-9,分子量20~40kD区间;随着进入幼虫成熟期,蛋白质斑点数目明显减少,第7天斑点数仅为420个,比第5天减少了56.5%。这些结果说明家蚕中肠组织蛋白质组成在5龄早、中、晚期经历了较大变化,暗示这可能与中肠的功能相适应。从MALDI-TOF-MS鉴定的斑点发现了构成家蚕中肠组织的一些新的部分结构蛋白和一些可能与消化、吸收相关的蛋白,还发现一些能够抵御外界微生物入侵的相关蛋白。这些结果为进一步认识家蚕中肠提供了重要的理论基础。 展开更多
关键词 家蚕 中肠 双向电泳 质谱
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一种快速高效制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法 被引量:13
6
作者 蔡顺风 何欣怡 +4 位作者 何祥康 邱海洪 李光才 何永强 鲁兴萌 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1019-1024,共6页
家蚕微孢子虫孢子壁坚厚不易破碎,并对许多化学物质有很强的抵抗性,使用常规的核酸和蛋白抽提方法效果不够理想。研究建立玻璃珠破碎法快速制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法,采用琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE分析所得DNA的完整性... 家蚕微孢子虫孢子壁坚厚不易破碎,并对许多化学物质有很强的抵抗性,使用常规的核酸和蛋白抽提方法效果不够理想。研究建立玻璃珠破碎法快速制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法,采用琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE分析所得DNA的完整性和所得总蛋白的差异性,并对提取蛋白进行双向电泳试验。结果表明:使用玻璃珠破碎法对微孢子虫孢子壁的破碎率可达到90%以上,基因组DNA得率约为7.65 fg/粒,总蛋白得率约为788.3 fg/粒,均显著高于常用的发芽法和液氮冻融研磨法的得率。双向电泳结果显示玻璃珠破碎法能有效提取家蚕微孢子虫总蛋白,经考马斯亮蓝染色可检测到约350个蛋白点,蛋白信息丰富,可进一步用于质谱分析。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 核酸 蛋白 提取方法 珠磨式研磨器 双向电泳
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龙眼体细胞胚胎发生过程中特异表达蛋白的双向电泳分析 被引量:7
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作者 安娜 赖钟雄 郭志雄 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第3期244-249,共6页
以龙眼品种红核子LC2胚性细胞系为材料,进行体细胞胚胎(简称体胚)发生及其同步化调控,获取体胚发生过程中各个主要发育阶段的培养物(胚性愈伤组织、球形胚、子叶形胚、早期成熟胚、中期成熟胚、晚期成熟胚),采用双向电泳对体胚发生过程... 以龙眼品种红核子LC2胚性细胞系为材料,进行体细胞胚胎(简称体胚)发生及其同步化调控,获取体胚发生过程中各个主要发育阶段的培养物(胚性愈伤组织、球形胚、子叶形胚、早期成熟胚、中期成熟胚、晚期成熟胚),采用双向电泳对体胚发生过程中特异表达蛋白进行分析.结果表明:(1)龙眼胚性愈伤组织中,pI为4-5的酸性蛋白表达种类最多,在体胚发育的过程中逐渐消失,相反,pI为5-6的微酸性蛋白的表达逐渐增多;(2)体胚发育后期,尤其是成熟胚晚期,分子质量大的蛋白大量减少,分子质量较小的蛋白增多并逐渐积累;(3)虽然在各个发育阶段都会出现一些新的特异蛋白,但是没有改变蛋白质种类逐渐减少的趋势;(4)发现了一些有差异的特异蛋白点,尤其是成熟胚后期,有一系列大分子质量的蛋白消失,新出现了一部分分子质量较小的蛋白,其中几种表达量很大,可能与体胚发育有密切关系. 展开更多
关键词 龙眼 体细胞胚胎发生 特异表达蛋白 双向电泳
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大鼠骨组织蛋白质组样品提取方法的建立 被引量:5
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作者 刘建仁 樊粤光 +4 位作者 王海彬 史风雷 何伟 袁浩 王三英 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期420-424,共5页
蛋白质组学是目前研究的重要热点.该文拟建立大鼠骨组织蛋白质样品提取的最佳方法,用于双向电泳分离,为进一步进行蛋白组学分析奠定基础.实验对3种不同方法制备的样本进行同一条件的二维电泳(2- DE)图谱,比较2- DE的结果.结果发现,丙酮... 蛋白质组学是目前研究的重要热点.该文拟建立大鼠骨组织蛋白质样品提取的最佳方法,用于双向电泳分离,为进一步进行蛋白组学分析奠定基础.实验对3种不同方法制备的样本进行同一条件的二维电泳(2- DE)图谱,比较2- DE的结果.结果发现,丙酮沉淀法最佳.这些结果提示,只有结合骨组织成分特征与双向电泳的具体要求,选择恰当的样品提取液,采用合理的提取步骤,获得蛋白质样品,才能得到清晰高分辨率的电泳图谱,满足蛋白质组学分析需要. 展开更多
关键词 骨组织 提取方法 大鼠 蛋白质组学 2-DE 二维电泳 电泳分离 最佳方法 样品提取 具体要求 双向电泳 成分特征 电泳图谱 高分辨率 蛋白组 提取液 沉淀法 学分
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黄瓜根系蛋白质组分析的双向电泳技术条件优化 被引量:11
9
作者 王珊珊 郝宇涵 +3 位作者 任婧祺 郭春深 朱延殊 范海延 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期233-236,共4页
双向电泳(2-DE)是蛋白质组学研究的重要支撑技术之一。为建立适于黄瓜根系蛋白质组分析的双向电泳技术,对黄瓜根系蛋白质样品提取方法、裂解缓冲液配方及SDS-PAGE分离胶浓度等参数进行研究。结果表明:采用TCA/丙酮法提取黄瓜根系中的蛋... 双向电泳(2-DE)是蛋白质组学研究的重要支撑技术之一。为建立适于黄瓜根系蛋白质组分析的双向电泳技术,对黄瓜根系蛋白质样品提取方法、裂解缓冲液配方及SDS-PAGE分离胶浓度等参数进行研究。结果表明:采用TCA/丙酮法提取黄瓜根系中的蛋白质,裂解缓冲液为8mol·L-1尿素、2mol·L-1硫脲、2%IPG Buffer、4%CHAPS、1%TBP、65mmol·L-1DTT、2mmol·L-1EDTA、0.001%溴酚蓝和1%鸡尾酒,SDS-PAGE分离胶浓度为11%时,可获得分离效果较好的双向电泳图谱。该技术条件为适合黄瓜根系蛋白分离的较优双向电泳体系。 展开更多
关键词 黄瓜根系 蛋白质组 双向电泳
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水稻种子胚乳蛋白的双向电泳分析技术 被引量:9
10
作者 易克 田云 +2 位作者 徐向利 卢向阳 萧浪涛 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期513-515,共3页
为探讨水稻灌浆期间与籽粒充实相关蛋白表达的变化,建立了一套适于水稻种子胚乳蛋白双向电泳分析技术,探讨了胚乳蛋白的提取、纯化以及双向电泳的一些关键技术.结果表明,通过乙醇铵沉淀、高压等电聚焦和两步平衡等方法可以获得较好的分... 为探讨水稻灌浆期间与籽粒充实相关蛋白表达的变化,建立了一套适于水稻种子胚乳蛋白双向电泳分析技术,探讨了胚乳蛋白的提取、纯化以及双向电泳的一些关键技术.结果表明,通过乙醇铵沉淀、高压等电聚焦和两步平衡等方法可以获得较好的分析结果,获得胚乳蛋白斑点数约350个,等电点范围在3.0~9.0,其中大部分集中在4.0~7.0. 展开更多
关键词 水稻 胚乳蛋白 双向电泳
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家蚕精巢蛋白质的双向电泳及质谱分析 被引量:5
11
作者 聂红毅 钟晓武 +3 位作者 邹勇 衣启营 赵萍 夏庆友 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期369-378,共10页
精巢是雄性家蚕Bombyxmori的生殖腺,它的主要功能是产生精子,全面检测和鉴定精巢器官的蛋白分布将为分析家蚕雄性个体的发育和繁殖奠定基础。本研究利用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白硝酸银染色技术对家蚕5龄第5天幼虫的精巢组织进行了... 精巢是雄性家蚕Bombyxmori的生殖腺,它的主要功能是产生精子,全面检测和鉴定精巢器官的蛋白分布将为分析家蚕雄性个体的发育和繁殖奠定基础。本研究利用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白硝酸银染色技术对家蚕5龄第5天幼虫的精巢组织进行了蛋白检测,利用基质辅助激光解析质量飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对表达量较高的蛋白点进行了肽质量指纹图谱鉴定。结果表明:家蚕精巢蛋白质可以检测出1000个以上的蛋白点,这些蛋白点主要集中在分子量为15~90kD区域,等电点3.5~9之间,其中60个蛋白点得到了成功鉴定,按照已知或推测的蛋白功能,将其分为8类,包括:细胞骨架和细胞结构蛋白,膜蛋白或信号相关蛋白,大量应激反应蛋白(伴侣蛋白),线粒体和能量产生相关蛋白,转录调控和翻译及DNA/RNA结合相关蛋白,酶和少量血液组成蛋白。其中很多蛋白可能在鞭毛形成、能量代谢及减数分裂过程中有重要作用。这些结果为进一步认识家蚕精子形成过程提供了重要的生物学信息。 展开更多
关键词 家蚕 精巢 精子形成 蛋白质 双向电泳 肽质量指纹图谱鉴定 质谱分析 生物信息学分析
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白粉菌侵染Pm21近等基因系的早期蛋白组差异研究 被引量:8
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作者 李达 李强 +2 位作者 关西贞 张卫东 田纪春 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第1期5-11,共7页
分析接种小麦白粉菌E09后Pm21近等基因系及其亲本叶片的总蛋白质差异,从蛋白质组调控角度揭示Pm21基因抗白粉病的抗病机理。以Pm21近等基因系及其亲本百农3217为试材,显微观察接种后5 d内的叶片表面细胞与白粉菌孢子表型差异;采用非离... 分析接种小麦白粉菌E09后Pm21近等基因系及其亲本叶片的总蛋白质差异,从蛋白质组调控角度揭示Pm21基因抗白粉病的抗病机理。以Pm21近等基因系及其亲本百农3217为试材,显微观察接种后5 d内的叶片表面细胞与白粉菌孢子表型差异;采用非离子去污剂提取总蛋白质,运用双向电泳、质谱分析与数据库检索技术,比较Pm21近等基因系及其亲本接菌第4天后的叶片总蛋白质差异。超显微和显微观察结果表明,12 h后百农3217叶细胞表面与Pm21近等基因系相比褶皱明显;在接菌第2天后,在Pm21近等基因系白粉菌孢子生长明显慢于其亲本表面孢子,且孢子侵入个数较少,不萌发现象较多;在第4天后Pm21近等基因系被侵染叶片细胞出现过敏性反应;通过MALDI-TOF-MS/MS质谱测序和MASCOT软件序列分析,注释了15个表达上调蛋白点;功能分类表明,差异蛋白质分别参与叶绿体光合呼吸作用(40%)、放氧作用(13%)、代谢物合成(20%)、抗病、动力蛋白、运输等生理功能。蛋白质组水平发现,光合呼吸蛋白和叶谷氨酰胺合成酶在Pm21近等基因系感病3~4 h后就大量表达,可能是导致叶片明显变绿原因;叶谷氨酰胺合成酶的增加与光合呼吸蛋白的增加密不可分;光合呼吸蛋白和抗坏血酸过氧化物酶的上调表达为植物体在高H2O2浓度下正常生长提供了保障。另外,β-1,3-葡聚糖苷酶的过量表达也是Pm21基因前期抵御白粉菌侵染有效物质。钾离子通道蛋白可能在抗病防御过程中起到了信号转导的作用。 展开更多
关键词 白粉菌 近等基因系 PM21 显微观察 双向电泳 蛋白质组
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过氧化物酶6在大鼠附睾中的表达及分布 被引量:7
13
作者 王小强 齐晓伟 +4 位作者 程露阳 孙铁成 舒如明 王慧萍 于和鸣 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期260-267,共8页
通过双向电泳结合质谱技术分离鉴定正常成年大鼠附睾头段与尾段管腔液中的蛋白组成,从附睾头段及尾段管腔液的22个差异蛋白点中鉴定出12个蛋白质.其中11个蛋白质在不同种属哺乳动物的附睾组织中已有鉴定报道,而过氧化物酶6(peroxiredoxi... 通过双向电泳结合质谱技术分离鉴定正常成年大鼠附睾头段与尾段管腔液中的蛋白组成,从附睾头段及尾段管腔液的22个差异蛋白点中鉴定出12个蛋白质.其中11个蛋白质在不同种属哺乳动物的附睾组织中已有鉴定报道,而过氧化物酶6(peroxiredoxin 6,Prdx6)为新发现的存在于附睾头段及尾段管腔液中的体液蛋白.采用RT-PCR、Western印迹及免疫组化技术,对该蛋白在大鼠附睾中的表达及分布进行了分析.实验表明,Prdx6与精子的成熟、贮存及保护有一定关系,其具体机制值得进一步深入研究. 展开更多
关键词 附睾 双向电泳 质谱 过氧化物酶6(Prdx6)
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镉胁迫下嗜温鞘氨醇杆菌降解丁草胺的蛋白质组学研究 被引量:7
14
作者 林晓燕 牟仁祥 +4 位作者 曹赵云 曹珍珍 周蓉 许萍 陈铭学 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2738-2745,共8页
为了从蛋白表达水平阐释丁草胺降解菌应答镉胁迫及胁迫情况下降解丁草胺的分子机制,对丁草胺高效降解菌嗜温鞘氨醇杆菌(Sphingobacterium thalpophilum)在重金属镉胁迫下蛋白质组变化进行研究,设置10 mg·L-1镉胁迫处理和不加镉的对... 为了从蛋白表达水平阐释丁草胺降解菌应答镉胁迫及胁迫情况下降解丁草胺的分子机制,对丁草胺高效降解菌嗜温鞘氨醇杆菌(Sphingobacterium thalpophilum)在重金属镉胁迫下蛋白质组变化进行研究,设置10 mg·L-1镉胁迫处理和不加镉的对照,7 d后分别取样提取菌株总蛋白,利用双向(2-D)电泳和质谱鉴定技术分析两者之间的差异表达蛋白,并进行差异蛋白功能分析。2-D电泳结果分析共获得93个差异蛋白点,其中上调蛋白49个,下调蛋白44个。选取重复性好且差异最为明显的23个蛋白质点酶解脱盐后进行MALDI-TOF-MS分析,成功鉴定出15个差异蛋白,其中8个为上调蛋白,7个为下调蛋白;差异蛋白分别按GO和COG进行了蛋白功能的生物信息学分类。研究表明:差异显著蛋白主要为参与丁草胺代谢的蛋白、响应镉胁迫敏感蛋白及在镉胁迫下参与丁草胺代谢的蛋白;获得2个镉高度敏感蛋白(蛋白编号分别为A0A0M7HIV1和A0A0D6IIE6)以及1个抗镉胁迫同时参与丁草胺代谢的蛋白(蛋白编号为D4FMF4),推测它们在镉胁迫下丁草胺的降解中起重要作用。 展开更多
关键词 镉胁迫 丁草胺 嗜温鞘氨醇杆菌 双向电泳 蛋白质组学
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家蚕5龄第3天血液蛋白的双向电泳及质谱分析 被引量:5
15
作者 侯勇 赵萍 +2 位作者 邹勇 钟晓武 夏庆友 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期670-675,共6页
基于为家蚕血液比较蛋白质组学的研究提供基础信息的目的,利用双向电泳技术对家蚕5龄幼虫的血液蛋白进行分析,并采用基质辅助质量飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对其中一些表达量较高的蛋白进行了肽质量指纹图谱分析鉴定。120μg血液... 基于为家蚕血液比较蛋白质组学的研究提供基础信息的目的,利用双向电泳技术对家蚕5龄幼虫的血液蛋白进行分析,并采用基质辅助质量飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对其中一些表达量较高的蛋白进行了肽质量指纹图谱分析鉴定。120μg血液蛋白经过双向凝胶电泳及考马斯亮蓝染色后可以检测出106个蛋白点,60μg血液蛋白经双向电泳及银染后可以检测出126个蛋白点,这些蛋白点主要集中在分子质量15~80kD区域,等电点4~7。MALDI-TOF MS鉴定的52个蛋白点中都有较强的肽质量指纹信号峰,其中成功鉴定了46个蛋白点。在这些蛋白中,不仅包含了SP贮存蛋白和30K低分子量脂蛋白等家蚕血液蛋白的主要成分,还包含了大量与代谢相关的蛋白酶类、蛋白酶抑制剂、离子转运蛋白、免疫相关因子、分子伴侣等不同种类的蛋白。 展开更多
关键词 家蚕 血液蛋白 双向电泳 基质辅助质量飞行时间质谱
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Proteomic analysis of differentially expressed proteins between Xiangyou 15 variety and the mutant M15 被引量:5
16
作者 Zhen-Qian ZHANG Gang XIAO +7 位作者 Rui-Yang LIU Tai-Long TAN Chun-Yun GUAN Guo-Huai WANG She-Yuan CHEN Xian-Meng WU Mei GUAN Qin LI 《Frontiers in Biology》 CAS CSCD 2014年第3期234-243,共10页
A high oleic acid rapeseed material MI5 (derived from Xiangyou 15 variety) has been received more attention for its significant effect for human health. And it has almost the same physiological characteristic with X... A high oleic acid rapeseed material MI5 (derived from Xiangyou 15 variety) has been received more attention for its significant effect for human health. And it has almost the same physiological characteristic with Xiangyou 15 variety. To find out the difference between high oleic acid rapeseed material and Xiangyou 15 seedling, a comparative proteomic approach based on 2-DE and mass spectrometry was adopted. A total of 277 protein spots showed a significant change in intensity by more than 2.0-fold from M15 compared with Xiangyou 15 variety. Among them, 48 spots that changed at least 3.0-fold were excised from gels and successfully identified by MALDI-TOF/TOF MS. The identified proteins involved in metabolism of carbohydrate and energy (75%), stress and defense (8.3%), photosynthesis (6.3%), protein metabolism (2.1%) and other functions (8.3%). Then real-time quantitative PCR (qPCR) analysis was used to verify the expression levels of differentially expressed proteins, but the results did well agree with the proteomic results. In this work, most of the proteins involved in metabolism of carbohydrate and energy have higher expression in M15, which may reveal M15 has higher metabolism ability. These results provided much information to understand the differences between high oleic acid rapeseed material and Xiangyou 15 variety, which will be useful to screen high oleic rapeseed materials in seedling period. 展开更多
关键词 proteomic analysis high oleic acid 2-D electrophoresis real-time quantitative PCR
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通过生物素化标记分析细胞膜亚蛋白质组 被引量:4
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作者 廖翔 朱旭东 +3 位作者 党颖 李涛 周晓巍 黄培堂 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期247-251,共5页
细胞膜在许多基本生物学作用过程中扮演着重要角色,比如细胞-细胞相互作用、信号转导和物质运输.分析不同生理或病理状态细胞的膜蛋白的表达变化,有助于了解这些生物学过程以及发现新的诊断、治疗靶位.成功地进行膜蛋白分析最重要的是... 细胞膜在许多基本生物学作用过程中扮演着重要角色,比如细胞-细胞相互作用、信号转导和物质运输.分析不同生理或病理状态细胞的膜蛋白的表达变化,有助于了解这些生物学过程以及发现新的诊断、治疗靶位.成功地进行膜蛋白分析最重要的是获得足够浓度与纯度的膜蛋白.这里报告一种分离高纯度膜蛋白的方法,主要包括三个步骤:(1)生物素化活细胞表面的膜蛋白,(2)链亲和素琼脂糖亲和吸附,(3)强烈的清洗条件去除非特异吸附的胞质蛋白.最后用化学方法洗脱生物素标记的膜蛋白进行双向电泳分离分析.用该方法制备了HeLa细胞的膜蛋白.免疫印迹结果表明,生物素标记的膜蛋白基本上都是低丰度蛋白.这样制备得到的膜蛋白双向电泳分离出2400多个蛋白质点,而且大多数点的亮度相近,分布得相对分散没有聚集成群.这种图谱非常便于比较分析找到差异蛋白.多次重复制备膜蛋白、电泳表明该方法的重复性和稳定性很好. 展开更多
关键词 细胞膜 蛋白质组 双向电泳 生物素化 亲和纯化
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适于蛋白双向电泳的水稻叶片样品提取方法初探 被引量:5
18
作者 应雯 陆徐忠 +4 位作者 李莉 倪大虎 宋丰顺 汪秀峰 杨剑波 《生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第3期84-87,共4页
在水稻基因组测序完成后,利用蛋白质组学技术揭示水稻基因功能的研究,已成为水稻分子生物学研究的热点之一。水稻叶片作为DNA研究的便利材料被经常使用,但对蛋白质研究来说,占叶片全蛋白50%~60%的核酮糖二磷酸羧化酶(RuBP羧化酶)对低... 在水稻基因组测序完成后,利用蛋白质组学技术揭示水稻基因功能的研究,已成为水稻分子生物学研究的热点之一。水稻叶片作为DNA研究的便利材料被经常使用,但对蛋白质研究来说,占叶片全蛋白50%~60%的核酮糖二磷酸羧化酶(RuBP羧化酶)对低丰度蛋白常常造成掩盖。以水稻叶片为材料,用不同浓度的聚乙二醇(PEG)去除叶片中RuBP羧化酶。通过SDS-PAGE垂直电泳比较发现,浓度为17%的PEG对去除RuBP羧化酶效果最好,所获得的蛋白质样品可以得到质量较高的双向电泳图谱。 展开更多
关键词 水稻叶片 RUBP羧化酶 聚乙二醇 双向电泳
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家蚕对浓核病毒中国株(BmDNV-3)抗性及感性品系中肠的差异蛋白质分析 被引量:3
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作者 包方 姚勤 +4 位作者 李军 刘晓勇 余蔚 尹慧娟 陈克平 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1219-1224,共6页
【目的】通过比较家蚕Bombyx mori抗性及感性品系的中肠蛋白质表达谱,获得家蚕对家蚕浓核病毒中国株(BmDNV-3)抗性相关的蛋白。【方法】利用双向电泳(2-DE)对感性品种华八35和抗性品种秋丰接种病毒后48h的蛋白质表达谱进行比较分析,并... 【目的】通过比较家蚕Bombyx mori抗性及感性品系的中肠蛋白质表达谱,获得家蚕对家蚕浓核病毒中国株(BmDNV-3)抗性相关的蛋白。【方法】利用双向电泳(2-DE)对感性品种华八35和抗性品种秋丰接种病毒后48h的蛋白质表达谱进行比较分析,并对其中的差异蛋白进行MALDI-TOF-TOF质谱分析,通过NCBInr和MSDB数据库进行蛋白点的鉴定和功能分析。【结果】获得重复性较好的差异蛋白点16个,其中质谱鉴定出5种蛋白,它们分别是糖基转移酶(glycosyltransferase)、糖基转移酶-S(GlcAT-S)、21.5kD小热休克蛋白(21.5kDsmall heat shock protein)、V-ATP酶(vacuolar ATPsynthase)和精氨酸激酶(arginine kinase)。这5种蛋白在抗性品系秋丰中的表达量均高于感性品系华八35。【结论】糖基转移酶和糖基转移酶-S仅在抗性品系中存在,提示它们可能是与抗性有关的蛋白。此外,增强的应激反应和能量代谢也可能与家蚕对BmDNV-3的抗性产生相关。 展开更多
关键词 家蚕 浓核病毒 抗性 2-D电泳 MALDI TOF/TOF MS
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Proteomics profile changes in cisplatin-treated human ovarian cancer cell strain 被引量:3
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作者 LI Zhengyu1, ZHAO Xia1, YANG Jinliang2 & WEI Yuquan2 1. Department of Gynecology and Obstetrics, West China Second Hospital of Sichuan University, Chengdu 610041, China 2. National Key Laboratory of Biotherapy of Human Diseases, West China Hospital of Sichuan University, Chengdu 610041, China 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2005年第6期648-657,共10页
To compare the alterations in proteomes between cisplatin-treated and -untreated human ovarian cancer SKOV3 cells, and to explore the feasibility of proteomics in research about antitumor mechanisms of agents, SKOV3 c... To compare the alterations in proteomes between cisplatin-treated and -untreated human ovarian cancer SKOV3 cells, and to explore the feasibility of proteomics in research about antitumor mechanisms of agents, SKOV3 cells were exposed to cisplatin (6 μg/mL) for 6 h. Then, the cells were collected and solubilized and global proteins were extracted by lysis buffer; two-dimensional electrophoresis was conducted with the IPG readystrips as carriers; the gels were stained with Coomassie blue and alterations between gels were compared by PDQuest. Eventually, 11 spots with significant differences were selected and excised and the proteins were identified by PMF and MS/MS analysis. The results revealed that exposure to cisplatin could notably increase expressions of some proteins, such as tropomyosin family, actin family, trio-sephosphate isomerase family, and HSP60, etc.; while expressions of some other proteins de-creased, such as enolase family, etc. Those proteins were involved in cellular energy metabolism, transformation, apoptosis and morphologic maintenance, which suggested that alterations of those physiological processes might be involved in anti-tumor mechanism of cisplatin. 展开更多
关键词 proteomics cisplatin OVARIAN cancer 2-D electrophoresis mass spectrometry.
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