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Response of the Ginseng C_(2)H_(2)-Type Zinc Finger Protein Family PgZFPs Gene to Methyl Jasmonate Regulation
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作者 Yue Jiang Lingyu Liu +7 位作者 Kangyu Wang Mingzhu Zhao Ping Chen Jun Lei Yanfang Wang Meiping Zhang Yi Wang Guang Chen 《Phyton-International Journal of Experimental Botany》 SCIE 2024年第11期3055-3071,共17页
The main active components of ginseng are ginsenosides,which play significant roles in treating cardiovascular diseases,cancer,and providing antioxidant effects.Ginsenosides are primarily synthesized through the mevalo... The main active components of ginseng are ginsenosides,which play significant roles in treating cardiovascular diseases,cancer,and providing antioxidant effects.Ginsenosides are primarily synthesized through the mevalo-nate pathway and the methylerythritol phosphate pathway.Many key enzyme genes involved in this biosynthetic process have been cloned and validated,yet the regulatory functions of transcription factors remain unclear.The C_(2)H_(2)-type zincfinger protein family,one of the largest families of transcription factors,is crucial in plant growth and development,response to biotic and abiotic stresses,and regulation of secondary metabolism.This study,based on the ginseng transcriptome database from Jilin,conducted a correlation analysis between the expression levels of PgZFPs genes in the Jilin ginseng C_(2)H_(2)-type zincfinger protein family and ginsenoside content,a gen-ome-wide association study of PgZFPs,and co-expression analysis of PgZFPs with validated key enzyme genes.Ultimately,five candidate genes involved in ginsenoside biosynthesis were identified.The involvement of PgZFP27 and PgZFP-59-02 genes from the PgZFPs family in the biosynthesis of ginsenosides was validated through in vitro methyl jasmonate(MeJA)induction experiments.This result provides new genetic resources for the biosynthesis of ginsenosides. 展开更多
关键词 GINSENOSIDES c_(2)H_(2)-type zincfinger protein family MeJA induction functional study SIT SITIENS FLc FLAccA MVA Mevalonate MEP 2-c-methyl-D-erythritol 4-phosphate GWAS Genome-wide association studies HPLc High-performance liquid chromatography
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雷公藤MCT基因的全长克隆与表达分析 被引量:9
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作者 童宇茹 苏平 +4 位作者 张萌 赵瑜君 王秀娟 高伟 黄璐琦 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第22期4378-4383,共6页
根据雷公藤转录组数据提供的基因片段设计特异引物,采用全长PCR方法克隆Tw MCT全长cDNA,分析序列同源性,预测TwMCT蛋白结构,并进行序列多重比对和构建系统进化树分析;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR),以actin为内参,分析雷公藤悬浮细胞... 根据雷公藤转录组数据提供的基因片段设计特异引物,采用全长PCR方法克隆Tw MCT全长cDNA,分析序列同源性,预测TwMCT蛋白结构,并进行序列多重比对和构建系统进化树分析;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR),以actin为内参,分析雷公藤悬浮细胞受茉莉酸甲酯(MeJA)诱导后0~72 hTwMCT基因的相对表达量。克隆得到全长1 318 bp TwMCT全长c DNA,具有完整编码框,编码311个氨基酸,蛋白相对分子质量为34.14 kDa,理论等电点为8.65;RT-qPCR结果表明该基因受MeJA诱导后表达逐渐上升,在24 h时达到最高值。克隆雷公藤TwMCT全长cDNA和分析表达特性,为进一步研究该基因的功能和雷公藤次生代谢调控提供了基因元件。 展开更多
关键词 雷公藤 2-c-甲基-D-赤藻醇-4-磷酸胱氨酰转移酶(McT) 克隆 表达分析
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青蒿2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶基因克隆与分析 被引量:9
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作者 张曼 向礼恩 +3 位作者 王辉 兰小中 陈敏 廖志华 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1334-1339,共6页
MEP途径定位于植物细胞的质体中,为包括青蒿素在内的萜类合成提供基本前体。2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶(2-C-methyl-D-erythritol 4-phosphate cytidylyltransferase,MCT)是该途径的第3个关键酶,催化2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷... MEP途径定位于植物细胞的质体中,为包括青蒿素在内的萜类合成提供基本前体。2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶(2-C-methyl-D-erythritol 4-phosphate cytidylyltransferase,MCT)是该途径的第3个关键酶,催化2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸生成4-(5'-焦磷酸胞苷)-2-C-甲基-D-赤藓醇。本文首次克隆了青蒿MCT基因全长cDNA(AaMCT)并进行了相关生物信息学分析。基因表达结果表明:AaMCT在青蒿分泌型腺体中大量表达,在叶、花、茎和根中少量表达;同时发现,AaMCT表达受到MeJA强烈诱导。亚细胞定位结果显示:AaMCT融合GFP特异性定位在叶绿体中,与MEP途径定位于质体吻合。最后在拟南芥中超量表达AaMCT,拟南芥中叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量得到显著提高,表明AaMCT在萜类物质的生物合成中起重要作用。 展开更多
关键词 青蒿 2-c-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶 超量表达 亚细胞定位 萜类
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雷公藤4-(5'-二磷酸胞苷)-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶基因的全长克隆与表达分析 被引量:8
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作者 童宇茹 苏平 +5 位作者 赵瑜君 张萌 王秀娟 胡添源 高伟 黄璐琦 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第21期4165-4170,共6页
4-(5-焦磷酸胞苷)-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶[4-(cytidine-5-diphospho)-2-C-methyl-D-erythritol kinase,CMK]是雷公藤甲素等萜类成分生物合成途径上关键酶之一。根据获得的雷公藤转录组数据中Tw CMK片段设计特异性引物,采用全长PCR... 4-(5-焦磷酸胞苷)-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶[4-(cytidine-5-diphospho)-2-C-methyl-D-erythritol kinase,CMK]是雷公藤甲素等萜类成分生物合成途径上关键酶之一。根据获得的雷公藤转录组数据中Tw CMK片段设计特异性引物,采用全长PCR方法克隆Tw CMK全长c DNA,并进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测茉莉酸甲酯(Me JA)诱导雷公藤悬浮细胞后0~72 h Tw CMK基因的表达水平。结果表明,Tw CMK全长c DNA由1 732个核苷酸组成,具有完整的开放阅读框,共编码387个氨基酸,蛋白相对分子质量为42.85 k Da,理论等电点为5.79;Tw CMK基因受Me JA诱导后表达逐渐上升,在24 h时达到最高值。为进一步研究雷公藤甲素等萜类成分次生代谢调控和生物合成奠定了基础。 展开更多
关键词 雷公藤 4-(5-焦磷酸胞苷)-2-c-甲基-D-赤藓醇激酶(cMK) 生物信息学分析 表达分析
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丹参2-C-甲基-D-赤藓糖醇2,4-环焦磷酸合成酶(SmMCS)基因全长克隆及其生物信息学分析 被引量:6
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作者 高伟 程琪庆 +4 位作者 马晓惠 何云飞 蒋超 袁媛 黄璐琦 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第22期3365-3370,共6页
目的:从丹参毛状根中克隆2-C-甲基-D-赤藓糖醇2,4-环焦磷酸合成酶(SmMCS)全长基因,并进行生物信息学分析。方法:根据丹参转录组数据提供的基因片段设计特异引物,采用RACE方法克隆SmMCS全长cDNA,并对SmMCS进行蛋白结构预测、序列多重比... 目的:从丹参毛状根中克隆2-C-甲基-D-赤藓糖醇2,4-环焦磷酸合成酶(SmMCS)全长基因,并进行生物信息学分析。方法:根据丹参转录组数据提供的基因片段设计特异引物,采用RACE方法克隆SmMCS全长cDNA,并对SmMCS进行蛋白结构预测、序列多重比对和构建进化树等分析;同时采用实时定量PCR检测Ag+诱导子诱导丹参毛状根不同时期的SmMCS基因转录水平。结果:克隆的SmMCS全长cDNA由988个核苷酸组成,具有完整编码框,编码234个氨基酸,蛋白相对分子质量约24.6 kDa,等电点pI 8.53;实时定量PCR结果表明该基因受Ag+诱导后表达水平在12 h时急剧上升并达到最高值。结论:从丹参毛状根中克隆得到一条SmMCS全长cDNA,为进一步研究丹参酮类成分的生物合成和萜类次生代谢提供靶基因。 展开更多
关键词 丹参 2-c-甲基-D-赤藓糖醇2 4-环焦磷酸合成酶 cDNA末端快速扩增 生物信息学分析
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植物类异戊二烯合成途径的研究进展 被引量:7
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作者 张伟 梁成伟 《山东化工》 CAS 2014年第5期57-58,共2页
类异戊二烯广泛分布于自然界中,是结构最复杂、功能最多的一类化合物,具有极其重要的生理生态作用及经济价值。植物体内的类异戊二烯化合物从异戊烯焦磷酸(IPP)合成,IPP的合成途径主要有两条:甲羟戊酸(MVA)途径和2-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷... 类异戊二烯广泛分布于自然界中,是结构最复杂、功能最多的一类化合物,具有极其重要的生理生态作用及经济价值。植物体内的类异戊二烯化合物从异戊烯焦磷酸(IPP)合成,IPP的合成途径主要有两条:甲羟戊酸(MVA)途径和2-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(MEP)途径。 展开更多
关键词 类异戊二烯 MVA途径 MEP途径
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樟树4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶基因的克隆及表达分析 被引量:6
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作者 荆礼 郑汉 +3 位作者 姚娜 陈美兰 申业 黄璐琦 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1578-1584,共7页
4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶(4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol kinase,CMK)是植物萜类化合物生物合成途径甲基赤藓醇-4-磷酸途径(methylerythritol-4-phosphate pathway,DXP/MEP)上的第4个关键酶。该研究根据樟树... 4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶(4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol kinase,CMK)是植物萜类化合物生物合成途径甲基赤藓醇-4-磷酸途径(methylerythritol-4-phosphate pathway,DXP/MEP)上的第4个关键酶。该研究根据樟树转录组数据,利用RT-PCR(reverse transcription-PCR)方法从药用植物樟树Cinnamomum camphora中克隆得到4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶基因,命名为Cc CMK1(Gene Bank登录号Ku376098),对其序列进行生物信息学分析,结果表明该基因开放阅读框(ORF)为1 212 bp,编码403个氨基酸,推测其相对分子质量为44.46 k Da,等电点(theoretical p I)为4.99。跨膜结构分析表明CMK蛋白不存在跨膜结构。信号肽分析表明其为非分泌蛋白,不存在信号肽。亚细胞定位表明其定位于叶绿体中。利用荧光实时PCR检测了龙脑樟、油樟、芳樟、脑樟和异樟5种化学型樟树中Cc CMK1基因的表达量,结果表明Cc CMK1基因在油樟中的表达量最高,龙脑樟中表达量最低,为樟树萜类化合物生物合成途径关键酶基因元件挖掘提供研究基础。 展开更多
关键词 樟树 4-二磷酸胞苷-2-c-甲基-D-赤藓醇激酶(cMK) 基因克隆 生物信息学分析 表达分析
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药用植物类异戊二烯代谢途径及其活性产物合成调控研究进展 被引量:6
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作者 王秋军 张犇 王剑文 《植物学研究》 2012年第2期23-29,共7页
植物类异戊二烯化合物是一类具有多种药理活性的天然产物,其生物合成主要通过甲羟戊酸途径与2C-甲基-4-磷酸-4D-赤藓糖醇途径,对这两条途径的调控研究已成为近年来热点之一。本文就近年来植物类异戊二烯代谢途径的研究进展以及相关活性... 植物类异戊二烯化合物是一类具有多种药理活性的天然产物,其生物合成主要通过甲羟戊酸途径与2C-甲基-4-磷酸-4D-赤藓糖醇途径,对这两条途径的调控研究已成为近年来热点之一。本文就近年来植物类异戊二烯代谢途径的研究进展以及相关活性成分的生物合成调控研究做一综述。 展开更多
关键词 类异戊二烯化合物 生物合成 甲羟戊酸途径 2c-甲基4-磷酸-4D-赤藓糖醇途径
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基于丹参功能基因的道地品质形成的分子机制 被引量:4
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作者 许文娟 李贝宁 +5 位作者 罗凌龙 张驰 张小波 李俊伶 阿呷吕布 王学勇 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第13期97-107,共11页
目的:探讨丹参功能基因单核苷酸多态性(SNP)和丹参有效成分之间的关系以及丹参药材产地特异性品质形成的分子机制。方法:以8个不同产地及变型的丹参为研究对象,采用高效液相色谱(HPLC)方法得到不同产地丹参成分指纹图谱,同时对丹参酮代... 目的:探讨丹参功能基因单核苷酸多态性(SNP)和丹参有效成分之间的关系以及丹参药材产地特异性品质形成的分子机制。方法:以8个不同产地及变型的丹参为研究对象,采用高效液相色谱(HPLC)方法得到不同产地丹参成分指纹图谱,同时对丹参酮代谢途径中的3个功能基因丹参乙酰CoA酰基转移酶(SmAACT),4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-Derythritol kinas(SmCMK),丹参异戊烯焦磷酸异构酶(SmIPPI)的cDNA全长进行聚合酶链式反应(PCR)扩增、克隆测序以及生物信息学分析。结果:获得了8个产地及变型共23株丹参样品中3个功能基因SmAACT,SmCMK,SmIPPI的cDNA全长序列。通过对3个功能基因的SNP位点及氨基酸多态性序列分析,分别发现18,16和14个SNP位点。HPLC指纹图谱可以将8个产地的丹参聚为两大类,北京、湖北、山东白花、山西、河南、山东紫花样品聚为一支,河北与内蒙古样品聚为另一支,这也说明丹参成分变化趋势与地理距离关联不大,而变型及品种因素对质量差异的贡献率较高。结论:不同产地丹参具有明显的遗传分化趋势,并形成了各自的产地特异性基因型。通过探讨不同产地丹参药材特异性品质形成的分子机制,为保证临床用药的稳定有效奠定基础,同时为丹参优良品种选育提供指导。 展开更多
关键词 丹参 单核苷酸多态性 丹参乙酰coA酰基转移酶(SmAAcT) 4-diphosphocytidyl-2-c-methyl-D-erythritol kinas(SmcMK) 丹参异戊烯焦磷酸异构酶(SmIPPI)
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以IspD为靶点的新型抗结核药物筛选研究 被引量:4
10
作者 鲁众阳 杨延辉 +3 位作者 蒙建州 关艳 郝雪秦 肖春玲 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第17期1947-1953,共7页
目的:筛选靶向结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸-胞嘧啶转移酶(2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate cytidylyltransferase,Isp D)的新型抗结核化合物,研制具有全新作用机制的新型抗多药耐药MT... 目的:筛选靶向结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸-胞嘧啶转移酶(2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate cytidylyltransferase,Isp D)的新型抗结核化合物,研制具有全新作用机制的新型抗多药耐药MTB药物。方法:应用高通量的微生物体外微量、直观快速的药敏试验方法,筛选得到具有抑制MTB生长的阳性化合物;同时在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)中重组表达MTB的Isp D,建立酶活测定方法,构建Isp D酶抑制剂筛选模型,从具有抑制MTB生长的阳性化合物中筛选Isp D抑制剂;对在酶水平上具有良好抑制活性的化合物进行作用机制研究,确定其对MTB(H37Rv)的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),评价其抗菌谱,测定其对非洲绿猴肾细胞(Vero)和人肝癌细胞(Hep G2)的毒性。结果:从4万多个化合物中初步得到了159个具有抑制MTB生长的阳性化合物,从中筛选得到了5个Isp D的抑制剂,其中的IMB-4901显示出较好的Isp D抑制活性(50%inhibiting concentration,IC50=19.3μg·m L-1)和抗MTB活性(MIC=1.6μg·m L-1)。结论:成功获得了以Isp D为靶点的新型抗MTB药物先导化合物。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 2-c-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸-胞嘧啶转移酶 抑制剂 高通量筛选 抗结核药物
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南方红豆杉MCT基因克隆、功能验证及组织表达特异性检测 被引量:4
11
作者 简东琴 曾令江 +1 位作者 杨颖舫 杨春贤 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1408-1416,共9页
【目的】克隆南方红豆杉的2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶(MCT)基因(TcMCT),分析其功能,并检测组织表达特异性,为深入研究TcMCT基因在紫杉醇生物合成中的作用机制提供理论依据。【方法】采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得TcMC... 【目的】克隆南方红豆杉的2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶(MCT)基因(TcMCT),分析其功能,并检测组织表达特异性,为深入研究TcMCT基因在紫杉醇生物合成中的作用机制提供理论依据。【方法】采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得TcMCT基因的cDNA全长序列,对其编码蛋白进行生物信息学分析及亚细胞定位,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测TcMCT基因的组织表达模式,并在大肠杆菌中超表达该基因以验证其功能。【结果】克隆获得的TcMCT基因cDNA序列全长为1293 bp,开放阅读框(ORF)为942 bp,编码313个氨基酸。TcMCT蛋白与其他植物MCT蛋白中均含保守的MEP结合位点和CTP结合位点,但在N端氨基酸序列保守性较差,其中与同为裸子植物银杏GbMCT蛋白的亲缘关系最近,氨基酸序列的相似性为59.3%。TcMCT蛋白的三级结构与AtMCT蛋白相似,均属于同源二聚体。TcMCT蛋白N端含84个氨基酸残基的质体转运肽,且以Arg88作为切割位点,定位于叶绿体中。TcMCT基因在南方红豆杉不同组织中均有表达,在绿色树皮中的相对表达量显著高于其他组织(P<0.05,下同),且在老叶和嫩叶中的相对表达量显著高于茎和根,在茎和根中的表达量极少甚至不表达。大肠杆菌中超表达TcMCT基因可促进β-胡萝卜素大量积累。【结论】不同物种MCT氨基酸序列具有较高的保守性,TcMCT基因具有明显的组织表达特异性,可调控萜类物质如β-胡萝卜素等的生物合成,推测其在紫杉醇生物合成中发挥重要调控作用。 展开更多
关键词 南方红豆杉 2-c-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶(McT) 生物信息学分析 功能验证 紫杉醇
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卷叶贝母MCT基因克隆与表达分析 被引量:3
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作者 张甜甜 李锐 +1 位作者 陈晓仪 赵琦 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2018年第22期7275-7280,共6页
本研究是基于转录组测序结果,通过PCR技术克隆卷叶贝母(Fritillaria cirrhosa D. Don)中MEP途径的2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶基因(2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate cytidylyltransferase, MCT)的开放阅读框(open readin... 本研究是基于转录组测序结果,通过PCR技术克隆卷叶贝母(Fritillaria cirrhosa D. Don)中MEP途径的2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶基因(2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate cytidylyltransferase, MCT)的开放阅读框(open reading frame, ORF)序列,运用生物信息学方法对该基因进行分析,预测其编码蛋白的结构与功能,并通过荧光定量PCR (qRT-PCR)检测FcMCT基因在野生鳞茎和愈伤组织中的表达情况,为后续卷叶贝母MCT基因功能研究打下基础。通过PCR技术,获得了900 bp的FcMCT ORF片段,编码299个氨基酸,并与NCBI上公布的木薯、橡胶树、向日葵等植物MCT蛋白的相似性达80%以上;通过SOPMA和SWISS-MODE网站预测的Fc MCT蛋白的二级、三级结构,可以看出FcMCT蛋白的主要结构元件是无规卷曲和α螺旋构成;通过qRT-PCR检测野生状态的卷叶贝母中根、茎、叶、鳞茎和诱导状态的愈伤组织中的FcMCT基因表达水平,发现在愈伤组织的表达水平最高。最终,我们认为FcMCT是甾类生物碱合成途径的关键酶,在贝母不同组织中的表达量不同,受激素组合诱导表达,FcMCT是一个具有生物学功能的蛋白质,为利用基因工程手段提高卷叶贝母中生物碱含量提供了理论依据。 展开更多
关键词 川贝母 2-c-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶 克隆 生物信息学 基因表达
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茅苍术AlCMK基因的克隆及原核表达分析 被引量:3
13
作者 鲁继梅 徐睿 +4 位作者 吴君贤 邹立思 刘超 彭华胜 查良平 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期2876-2884,共9页
4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶[4-(cytidine-5′-diphospho)-2-C-methyl-D-erythritol kinase,CMK]是生成萜类化合物MEP途径的关键酶之一。本研究以茅苍术转录组数据为依据,克隆获得CMK基因序列,命名为AlCMK(GenBank登录号为OM283... 4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶[4-(cytidine-5′-diphospho)-2-C-methyl-D-erythritol kinase,CMK]是生成萜类化合物MEP途径的关键酶之一。本研究以茅苍术转录组数据为依据,克隆获得CMK基因序列,命名为AlCMK(GenBank登录号为OM283293)。研究结果表明,AlCMK包含一个全长为1230 bp的开放阅读框(ORF),编码409个氨基酸,推测其相对分子质量为44752.53,蛋白理论等电点为6.67;跨膜结构分析表明其无跨膜结构,二级结构显示其主要由无规则卷曲(48.17%)结构组成;同源氨基酸序列分析表明,茅苍术与除虫菊、桂花、杜仲、忍冬、丹参CMK基因编码的氨基酸序列具有较高同源性;系统进化树分析表明,茅苍术AlCMK与菊科植物CMK蛋白亲缘关系较近;构建pET-32a-AlCMK原核表达载体,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)表达感受态,蛋白表达结果显示其分子质量约为65 kDa;利用qRT-PCR分析AlCMK基因在不同组织和茉莉酸甲酯(MeJA)处理后的表达模式,同时采用ELISA试剂盒法测定茅苍术CMK酶活性,结果表明,不同产地茅苍术AlCMK基因具有组织表达差异性,且受外源MeJA诱导表达,酶活结果显示不同产地茅苍术CMK酶活性均在叶中较高;亚细胞定位显示该基因位于叶绿体中。本研究为进一步阐明茅苍术中萜类化合物合成途径AlCMK基因的生物学功能提供参考。 展开更多
关键词 茅苍术 4-二磷酸胞苷-2-c-甲基-D-赤藓醇激酶 基因克隆 原核表达 表达分析 亚细胞定位
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滇龙胆GrCMS基因的克隆与表达分析 被引量:2
14
作者 张晓东 李彩霞 王元忠 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期258-265,共8页
2-C-甲基-D-赤藓醇4-磷酸胞苷酰转移酶是赤藓糖磷酸酯(MEP)途径中的第三个催化酶。以滇龙胆转录组为基础,采用RT-PCR技术从滇龙胆幼叶克隆2-C-甲基-D-赤藓醇4-磷酸胞苷酰转移酶基因GrCMS,并进行原核表达和组织特异性表达分析。序列分析... 2-C-甲基-D-赤藓醇4-磷酸胞苷酰转移酶是赤藓糖磷酸酯(MEP)途径中的第三个催化酶。以滇龙胆转录组为基础,采用RT-PCR技术从滇龙胆幼叶克隆2-C-甲基-D-赤藓醇4-磷酸胞苷酰转移酶基因GrCMS,并进行原核表达和组织特异性表达分析。序列分析显示,GrCMS基因(登录号KJ917164)开放阅读框(ORF)长933 bp,编码310氨基酸,推测分子量为34.23 kD,等电点为7.68。蛋白质序列分析显示,GrCMS无信号肽,为亲水稳定蛋白,主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,可能定位叶绿体;具有CMS保守结构域。进化分析结果表明,GrCMS蛋白与长春花CrCMS蛋白亲缘关系最近。原核表达结果表明,GrCMS与预期蛋白大小一致。定量PCR结果表明,GrCMS基因主要在叶中表达。结果为进一步研究该基因功能和龙胆苦苷生物合成途径奠定基础。 展开更多
关键词 滇龙胆 2-c-甲基-D-赤藓醇4-磷酸胞苷酰转移酶 基因克隆 表达分析
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胡黄连2-C-甲基-D-赤藓糖-4-磷酸胞苷转移酶基因的生物信息学分析 被引量:2
15
作者 郑玉娟 陈容 周文化 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第15期2218-2223,共6页
目的研究胡黄连Picrorhiza kurrooa 2-C-甲基-D-赤藓糖-4-磷酸胞苷转移酶(MCT)基因特征并预测MCT结构与功能位点。方法以胡黄连MCT基因为研究对象,利用NCBI网站及生物信息学软件对其碱基分布、氨基酸组成、亲疏水性、保守区及二级结构... 目的研究胡黄连Picrorhiza kurrooa 2-C-甲基-D-赤藓糖-4-磷酸胞苷转移酶(MCT)基因特征并预测MCT结构与功能位点。方法以胡黄连MCT基因为研究对象,利用NCBI网站及生物信息学软件对其碱基分布、氨基酸组成、亲疏水性、保守区及二级结构和三级结构进行预测和分析;并对9个物种的MCT基因进行多重比对与进化分析。结果胡黄连MCT基因的mRNA序列长为1 216 bp(GenBank JQ991625.1),编码由399个氨基酸组成的蛋白质,该蛋白质相对分子质量为44 448.5,其中量最高的为Ser(10.0%);整个多肽中疏水性氨基酸占59.5%,平均疏水值为0.050;与丹参Salvia miltiorrhiza MCT氨基酸序列对比同源性最高,达99%。结论胡黄连MCT基因处于稳定状态,编码的蛋白为疏水性蛋白,在进化过程中是相对保守的,获得的保守区段序列信息为其他物种MCT基因的克隆奠定了基础。 展开更多
关键词 2-c-甲基-D-赤藓糖-4-磷酸胞苷转移酶 胡黄连 丹参 生物信息学 蛋白质结构
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芒果MCT基因的鉴定、进化及表达
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作者 盖江涛 王鹏 +1 位作者 叶秀旭 陈业渊 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第21期6969-6974,共6页
2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶(MCT)是MEP代谢途径中关键的酶。为了鉴定芒果中的MCT基因,探索MCT基因的进化路线和表达模式,本研究以拟南芥MCT基因为参考,利用BLAST和HMMER软件,从12个植物基因组中搜索得到了14个MCT基因,对其... 2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶(MCT)是MEP代谢途径中关键的酶。为了鉴定芒果中的MCT基因,探索MCT基因的进化路线和表达模式,本研究以拟南芥MCT基因为参考,利用BLAST和HMMER软件,从12个植物基因组中搜索得到了14个MCT基因,对其进行了保守结构域、系统发育分析,并对芒果中MCT基因的表达进行了分析。保守结构域分析结果显示,芒果MCT蛋白包含一个PF01128.19结构域,且蛋白序列高度保守。系统发育分析表明,MCT基因的进化与其所在物种的进化路径保持一致,藻类到被子植物中MCT基因的拷贝数受到严格控制。表达分析结果显示,在芒果品种‘桂热82’和‘红玉’中,MCT基因在发育过程中的芒果果皮、果肉中的表达量高于成熟芒果中果皮、果肉的表达量,推测其在芒果发育过程中有更重要的作用。本研究为进一步阐明芒果MCT基因的功能提供了科学依据。 展开更多
关键词 芒果(Mangifera indica) 2-c-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶(McT) 2-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸(MEP)
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芒果MDS家族基因的鉴定、进化及表达分析
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作者 盖江涛 王鹏 +2 位作者 叶秀旭 罗睿雄 陈业渊 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2021年第6期1858-1863,共6页
2-C-甲基-D-赤藓糖醇-2,4-环焦磷酸合成酶(MDS)是MEP代谢途径中的关键酶。为了鉴定芒果中的MDS家族基因,探索MDS家族基因的进化、表达模式。本研究采用同源搜索的方法,从13个植物基因组中下载了16个MDS家族基因,对其进行了蛋白结构域、... 2-C-甲基-D-赤藓糖醇-2,4-环焦磷酸合成酶(MDS)是MEP代谢途径中的关键酶。为了鉴定芒果中的MDS家族基因,探索MDS家族基因的进化、表达模式。本研究采用同源搜索的方法,从13个植物基因组中下载了16个MDS家族基因,对其进行了蛋白结构域、系统发育及在芒果中的表达分析。蛋白结构域分析结果显示,芒果MDS家族基因的蛋白序列均包含完整的PF02542.16结构域。系统发育进化树显示,芒果中的MDS家族基因是在双子叶植物形成后进化的,且与柑橘的MDS基因关系最近。表达分析结果显示,在芒果品种‘贵妃’、‘台农’和‘金煌’的成熟果果肉中,芒果MDS家族基因均在‘贵妃’中表达量最高,其次是‘台农’,在‘金煌’中表达量最低,而且差异显著。本研究为进一步研究芒果MDS家族基因在萜类合成途径中的作用提供科学依据。 展开更多
关键词 芒果(Mangifera indica) 2-c-甲基-D-赤藓糖醇-2 4-环焦磷酸合成酶(MDS) MEP 萜类
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黄花蒿MCS基因的克隆及其序列分析与原核表达 被引量:3
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作者 王英 贾伟章 +3 位作者 谭明俊 张军 王丹 刘顺会 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2013年第16期2288-2293,共6页
目的从黄花蒿中克隆MEP途径关键酶2C-甲基-D-赤藓糖醇-2,4-环焦磷酸合成酶(MCS)基因,进行序列特征分析、原核表达以及组织表达的研究。方法根据黄花蒿MCS(AaMCS)基因EST序列,克隆MCS cDNA及基因组序列。将MCS编码区与表达载体pET-21a(+... 目的从黄花蒿中克隆MEP途径关键酶2C-甲基-D-赤藓糖醇-2,4-环焦磷酸合成酶(MCS)基因,进行序列特征分析、原核表达以及组织表达的研究。方法根据黄花蒿MCS(AaMCS)基因EST序列,克隆MCS cDNA及基因组序列。将MCS编码区与表达载体pET-21a(+)重组,构建pET-21a(+)-MCS的原核表达载体并转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导获得MCS融合蛋白。半定量RT-PCR检测MCS的组织表达情况。结果 AaMCS cDNA全长994 bp,包含681 bp的开放阅读框,编码226个氨基酸,基因全长2 540 bp,包含3个外显子和2个内含子。构建pET-21a(+)-MCS重组质粒,获得稳定的pET-21a(+)-MCS原核表达体系。AaMCS在根、茎、叶、花中均有表达,其中花中表达量较高,根和茎中表达量低。结论克隆了AaMCS基因,建立pET-21a(+)-MCS稳定的原核表达体系,为研究AaMCS蛋白的活性及其功能奠定了基础。 展开更多
关键词 黄花蒿 2c-甲基-D-赤藓糖醇-2 4-环焦磷酸合成酶 基因克隆 序列分析 原核表达
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顶复门原虫类异戊二烯生物合成途径及其关键酶的研究进展 被引量:2
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作者 廖申权 吴彩艳 +3 位作者 戚南山 吕敏娜 覃宗华 孙铭飞 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第2期75-78,共4页
顶复门原虫包括疟原虫(Plasmodium spp.)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、艾美耳球虫(Eimeria spp.)、锥虫(Trypanosoma spp.)、泰勒虫(Theileria spp.)及巴贝斯虫(Babesia spp.)等一大类引起严重人畜疾病的寄生性原虫。顶复门原虫利... 顶复门原虫包括疟原虫(Plasmodium spp.)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、艾美耳球虫(Eimeria spp.)、锥虫(Trypanosoma spp.)、泰勒虫(Theileria spp.)及巴贝斯虫(Babesia spp.)等一大类引起严重人畜疾病的寄生性原虫。顶复门原虫利用2C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(MEP)途径合成类异戊二烯前体物质,这些化合物对于维持顶复门原虫的生存具有十分重要的作用。1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸(DOXP)还原异构酶是MEP途径的关键酶,对其作用机理及抑制剂的筛选研究已取得重要进展。论文对顶复门原虫类异戊二烯的MEP途径,DOXP还原异构酶的作用机理及靶标研究进展进行综述。 展开更多
关键词 2c-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸途径 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶 药靶 顶复门原虫
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