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丹参2-C-甲基-D-赤藓糖醇2,4-环焦磷酸合成酶(SmMCS)基因全长克隆及其生物信息学分析 被引量：6
1
作者 高伟 程琪庆 +4 位作者 马晓惠 何云飞 蒋超 袁媛 黄璐琦 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第22期3365-3370,共6页
目的:从丹参毛状根中克隆2-C-甲基-D-赤藓糖醇2,4-环焦磷酸合成酶(SmMCS)全长基因,并进行生物信息学分析。方法:根据丹参转录组数据提供的基因片段设计特异引物,采用RACE方法克隆SmMCS全长cDNA,并对SmMCS进行蛋白结构预测、序列多重比... 目的:从丹参毛状根中克隆2-C-甲基-D-赤藓糖醇2,4-环焦磷酸合成酶(SmMCS)全长基因,并进行生物信息学分析。方法:根据丹参转录组数据提供的基因片段设计特异引物,采用RACE方法克隆SmMCS全长cDNA,并对SmMCS进行蛋白结构预测、序列多重比对和构建进化树等分析;同时采用实时定量PCR检测Ag+诱导子诱导丹参毛状根不同时期的SmMCS基因转录水平。结果:克隆的SmMCS全长cDNA由988个核苷酸组成,具有完整编码框,编码234个氨基酸,蛋白相对分子质量约24.6 kDa,等电点pI 8.53;实时定量PCR结果表明该基因受Ag+诱导后表达水平在12 h时急剧上升并达到最高值。结论:从丹参毛状根中克隆得到一条SmMCS全长cDNA,为进一步研究丹参酮类成分的生物合成和萜类次生代谢提供靶基因。 展开更多
关键词 丹参 2-c-甲基-D-赤藓糖醇2 4-环焦磷酸合成酶 cDNA末端快速扩增 生物信息学分析
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以IspD为靶点的新型抗结核药物筛选研究 被引量：4
2
作者 鲁众阳 杨延辉 +3 位作者 蒙建州 关艳 郝雪秦 肖春玲 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第17期1947-1953,共7页
目的:筛选靶向结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸-胞嘧啶转移酶(2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate cytidylyltransferase,Isp D)的新型抗结核化合物,研制具有全新作用机制的新型抗多药耐药MT... 目的:筛选靶向结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸-胞嘧啶转移酶(2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate cytidylyltransferase,Isp D)的新型抗结核化合物,研制具有全新作用机制的新型抗多药耐药MTB药物。方法:应用高通量的微生物体外微量、直观快速的药敏试验方法,筛选得到具有抑制MTB生长的阳性化合物;同时在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)中重组表达MTB的Isp D,建立酶活测定方法,构建Isp D酶抑制剂筛选模型,从具有抑制MTB生长的阳性化合物中筛选Isp D抑制剂;对在酶水平上具有良好抑制活性的化合物进行作用机制研究,确定其对MTB(H37Rv)的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),评价其抗菌谱,测定其对非洲绿猴肾细胞(Vero)和人肝癌细胞(Hep G2)的毒性。结果:从4万多个化合物中初步得到了159个具有抑制MTB生长的阳性化合物,从中筛选得到了5个Isp D的抑制剂,其中的IMB-4901显示出较好的Isp D抑制活性(50%inhibiting concentration,IC50=19.3μg·m L-1)和抗MTB活性(MIC=1.6μg·m L-1)。结论:成功获得了以Isp D为靶点的新型抗MTB药物先导化合物。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 2-c-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸-胞嘧啶转移酶 抑制剂 高通量筛选 抗结核药物
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黄花蒿MCS基因的克隆及其序列分析与原核表达 被引量：3
3
作者 王英 贾伟章 +3 位作者 谭明俊 张军 王丹 刘顺会 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2013年第16期2288-2293,共6页
目的从黄花蒿中克隆MEP途径关键酶2C-甲基-D-赤藓糖醇-2,4-环焦磷酸合成酶(MCS)基因,进行序列特征分析、原核表达以及组织表达的研究。方法根据黄花蒿MCS(AaMCS)基因EST序列,克隆MCS cDNA及基因组序列。将MCS编码区与表达载体pET-21a(+... 目的从黄花蒿中克隆MEP途径关键酶2C-甲基-D-赤藓糖醇-2,4-环焦磷酸合成酶(MCS)基因,进行序列特征分析、原核表达以及组织表达的研究。方法根据黄花蒿MCS(AaMCS)基因EST序列,克隆MCS cDNA及基因组序列。将MCS编码区与表达载体pET-21a(+)重组,构建pET-21a(+)-MCS的原核表达载体并转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导获得MCS融合蛋白。半定量RT-PCR检测MCS的组织表达情况。结果 AaMCS cDNA全长994 bp,包含681 bp的开放阅读框,编码226个氨基酸,基因全长2 540 bp,包含3个外显子和2个内含子。构建pET-21a(+)-MCS重组质粒,获得稳定的pET-21a(+)-MCS原核表达体系。AaMCS在根、茎、叶、花中均有表达,其中花中表达量较高,根和茎中表达量低。结论克隆了AaMCS基因,建立pET-21a(+)-MCS稳定的原核表达体系,为研究AaMCS蛋白的活性及其功能奠定了基础。 展开更多
关键词 黄花蒿 2c-甲基-D-赤藓糖醇-2 4-环焦磷酸合成酶 基因克隆 序列分析 原核表达
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芒果MDS家族基因的鉴定、进化及表达分析
4
作者 盖江涛 王鹏 +2 位作者 叶秀旭 罗睿雄 陈业渊 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2021年第6期1858-1863,共6页
2-C-甲基-D-赤藓糖醇-2,4-环焦磷酸合成酶(MDS)是MEP代谢途径中的关键酶。为了鉴定芒果中的MDS家族基因,探索MDS家族基因的进化、表达模式。本研究采用同源搜索的方法,从13个植物基因组中下载了16个MDS家族基因,对其进行了蛋白结构域、... 2-C-甲基-D-赤藓糖醇-2,4-环焦磷酸合成酶(MDS)是MEP代谢途径中的关键酶。为了鉴定芒果中的MDS家族基因,探索MDS家族基因的进化、表达模式。本研究采用同源搜索的方法,从13个植物基因组中下载了16个MDS家族基因,对其进行了蛋白结构域、系统发育及在芒果中的表达分析。蛋白结构域分析结果显示,芒果MDS家族基因的蛋白序列均包含完整的PF02542.16结构域。系统发育进化树显示,芒果中的MDS家族基因是在双子叶植物形成后进化的,且与柑橘的MDS基因关系最近。表达分析结果显示,在芒果品种‘贵妃’、‘台农’和‘金煌’的成熟果果肉中,芒果MDS家族基因均在‘贵妃’中表达量最高,其次是‘台农’,在‘金煌’中表达量最低,而且差异显著。本研究为进一步研究芒果MDS家族基因在萜类合成途径中的作用提供科学依据。 展开更多
关键词 芒果(Mangifera indica) 2-c-甲基-D-赤藓糖醇-2 4-环焦磷酸合成酶(MDS) MEP 萜类
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顶复门原虫类异戊二烯生物合成途径及其关键酶的研究进展 被引量：2
5
作者 廖申权 吴彩艳 +3 位作者 戚南山 吕敏娜 覃宗华 孙铭飞 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第2期75-78,共4页
顶复门原虫包括疟原虫(Plasmodium spp.)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、艾美耳球虫(Eimeria spp.)、锥虫(Trypanosoma spp.)、泰勒虫(Theileria spp.)及巴贝斯虫(Babesia spp.)等一大类引起严重人畜疾病的寄生性原虫。顶复门原虫利... 顶复门原虫包括疟原虫(Plasmodium spp.)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、艾美耳球虫(Eimeria spp.)、锥虫(Trypanosoma spp.)、泰勒虫(Theileria spp.)及巴贝斯虫(Babesia spp.)等一大类引起严重人畜疾病的寄生性原虫。顶复门原虫利用2C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(MEP)途径合成类异戊二烯前体物质,这些化合物对于维持顶复门原虫的生存具有十分重要的作用。1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸(DOXP)还原异构酶是MEP途径的关键酶,对其作用机理及抑制剂的筛选研究已取得重要进展。论文对顶复门原虫类异戊二烯的MEP途径,DOXP还原异构酶的作用机理及靶标研究进展进行综述。 展开更多
关键词 2c-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸途径 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶 药靶 顶复门原虫
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顶复门寄生虫类异戊二烯酸代谢途径的研究进展 被引量：1
6
作者 刘翠翠 王婧 +5 位作者 张继瑜 周绪正 李冰 魏小娟 李金善 牛建荣 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期25-27,共3页
顶复门寄生虫是一类细胞内专性寄生原虫,包括弓形虫、疟原虫、泰勒虫及巴贝斯虫等,它们能够引起人和动物的疾病,并造成严重的经济损失。2C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(MEP)途径是顶复门寄生虫类异戊二烯酸的特殊代谢途径,对维持虫体的生存... 顶复门寄生虫是一类细胞内专性寄生原虫,包括弓形虫、疟原虫、泰勒虫及巴贝斯虫等,它们能够引起人和动物的疾病,并造成严重的经济损失。2C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(MEP)途径是顶复门寄生虫类异戊二烯酸的特殊代谢途径,对维持虫体的生存有重要作用,而且该途径中的各种酶也成为科学工作者们研究的热点。本文对顶复门寄生虫类异戊二烯酸代谢途径的研究现状进行了综述。 展开更多
关键词 顶复门寄生虫 顶质体 2c-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(MEP)途径 关键酶
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莱茵衣藻对MeJA处理的初期响应模式分析
7
作者 贾彬 兰成湘 李翔宇 《深圳大学学报（理工版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期237-244,共8页
茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)是植物次生代谢的调节剂,参与异戊二烯代谢调控,对莱茵衣藻的异戊二烯类物质合成有重要影响.为探究莱茵衣藻如何快速响应MeJA处理,测定MeJA处理下莱茵衣藻的生长状态和光合效率等生理特征参数,重点关... 茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)是植物次生代谢的调节剂,参与异戊二烯代谢调控,对莱茵衣藻的异戊二烯类物质合成有重要影响.为探究莱茵衣藻如何快速响应MeJA处理,测定MeJA处理下莱茵衣藻的生长状态和光合效率等生理特征参数,重点关注MeJA处理24 h内2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(2-C-methnatureyl-D-rythritol-4-phosphate,MEP)合成途径、类胡萝卜素合成途径和甾醇合成途径关键基因的表达水平变化.结果表明,MeJA处理降低了莱茵衣藻的生物量积累和光合活性,上调了MEP通路和甾醇合成通路相关基因,下调了类胡萝卜素合成途径的关键基因.在转录与生理层面,莱茵衣藻对于MeJA处理的初期响应具有快速与剂量依赖性的特点.研究结果为探索微藻类异戊二烯合成和代谢机制提供理论参考. 展开更多
关键词 代谢工程 代谢控制 莱茵衣藻 茉莉酸甲酯 类异戊二烯 2-甲基-D-赤藓糖醇4-磷酸途径 光合效率分析 转录分析
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