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人类α-1,2-岩藻糖苷转移酶在猪血管内皮细胞的表达及作用
1
作者 李胜芝 马志方 +3 位作者 刘秉乾 张玥 王广有 马腾骧 《天津医科大学学报》 2005年第3期359-361,共3页
目的:探讨人类α-1,2-岩藻糖苷转移酶(HT)基因在猪血管内皮细胞(PIECs)的表达及意义。方法:将人HT基因重组质粒通过脂质体转染进猪血管内皮细胞,经G418筛选(500mg/L),用流式细胞仪检测HT的表达,表达阳性细胞与人血清共同孵育检测细胞的... 目的:探讨人类α-1,2-岩藻糖苷转移酶(HT)基因在猪血管内皮细胞(PIECs)的表达及意义。方法:将人HT基因重组质粒通过脂质体转染进猪血管内皮细胞,经G418筛选(500mg/L),用流式细胞仪检测HT的表达,表达阳性细胞与人血清共同孵育检测细胞的生存率。结果:流式细胞仪检测结果显示,未经转染HT基因的PIECS的H抗原表达率是13.80%,平均荧光强度很低是32.39,α-Gal表达率是99.98%,平均荧光强度是1347.09;转HT基因的PIECS其H抗原表达率是40.17%B平均荧光强度是143.66,α-Gal表达率是41.15%B平均荧光强度是158.72。转HT基因的细胞在人血清的作用下生存率明显高于未转染的细胞。结论:转染HT基因的PIECs明显提高了H抗原的表达,同时降低了α-Gal的表达,为转基因动物实验探讨克服异种移植超急性排斥反应(HAR)提供理论依据。 展开更多
关键词 α-1 2-岩藻糖苷转移酶 转基因 异种抗原
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核定位信号肽在异种移植动物模型转人α1,2-岩藻糖苷转移酶基因小鼠制备中的作用
2
作者 刘秉乾 王广有 +3 位作者 马志方 李胜芝 李光三 马腾骧 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期591-593,共3页
目的探讨核定位信号肽(NLS)在转人α1,2-岩藻糖苷转移酶(HT)基因小鼠制备中的作用。方法将受精卵随机分为3组,采用显微注射的方法制备转基因小鼠。实验组:将NIS 转基因构件与人HT转基因构件同时导入细胞质;对照Ⅰ组:将人HT转基因构件导... 目的探讨核定位信号肽(NLS)在转人α1,2-岩藻糖苷转移酶(HT)基因小鼠制备中的作用。方法将受精卵随机分为3组,采用显微注射的方法制备转基因小鼠。实验组:将NIS 转基因构件与人HT转基因构件同时导入细胞质;对照Ⅰ组:将人HT转基因构件导入细胞质;对照Ⅱ组:将人HT转基因构件导入细胞核。应用聚合酶链反应(PCR)、Southern杂交及逆转录 (RT)-PCR等方法检测人HT基因在G0代小鼠体内的整合与表达,应用流式细胞计数(FCM)检测转基因小鼠外周血单核细胞(PBMCs)表面H抗原与α-Gal抗原的表达。结果实验组与对照Ⅰ组 G0代小鼠的出生率33．8％(46／136)及35．4％(23／65)高于对照Ⅱ组10．2％(51／498)(P<0．01),实验组人HT基因的整合率(30．4％,14／46)高于对照Ⅰ组(0,0／23)与对照Ⅱ组(11．8％,6／51,P< 0．01),实验组人HT基因的表达率(19．6％,9／46)也高于对照Ⅰ组(0,0／23)和对照Ⅱ组(5．9％,3／ 51,P<0．01),人HT mRNA在小鼠心、肝、肾和骨骼肌组织中均表达阳性。转基因小鼠PBMCs表面H抗原表达阳性。表达强度为人的85％～190％,同时α-Gal抗原表达显著降低,为正常小鼠的 5％～12％。转基因小鼠已经稳定传3代。结论 NLS基因与目的基因细胞质共注射是制备转基因小鼠简便实用的新方法。 展开更多
关键词 转基因 核定位信号肽 α1 2-岩藻糖苷转移酶
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表达人α-1，2-岩藻糖苷转移酶、衰变加速因子和CD59基因的转基因小鼠的建立及其抗异种移植排斥反应的研究
3
作者 刘秉乾 程传宇 +3 位作者 武玉东 魏金星 李光三 马腾骧 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2008年第3期265-270,共6页
在进行非协调性异种器官移植时,目前已经证实表达人α-1,2-岩藻糖苷转移酶(HT)或者补体调节蛋白的供体动物器官均可以部分克服超急性排斥反应.本文的研究目的是探讨是否共表达人HT和补体调节蛋白(衰变加速因子与CD59)的转基因小鼠的外... 在进行非协调性异种器官移植时,目前已经证实表达人α-1,2-岩藻糖苷转移酶(HT)或者补体调节蛋白的供体动物器官均可以部分克服超急性排斥反应.本文的研究目的是探讨是否共表达人HT和补体调节蛋白(衰变加速因子与CD59)的转基因小鼠的外周血单核细胞能更有效的克服异种移植排斥反应.利用受精卵显微注射技术建立转人HT,DAF和/或CD59基因的小鼠动物模型,流式细胞技术筛选表达不同基因的转基因小鼠.将小鼠的外周血单核细胞与15%的人血清共孵育,检测细胞表面天然抗体的沉积、补体的激活以及黏附分子的表达等.三种目的基因均可以在转基因小鼠体内表达,并且HT基因的表达显著减少了引起异种移植排斥反应的主要抗原半乳糖α-1,3-半乳糖(α-Gal)的表达.功能实验表明,与单一目的基因表达的转基因小鼠相比,共表达HT/DAF或HT/CD59的转基因小鼠的外周血单核细胞对抗人血清介导溶破细胞的能力显著增强.而且三基因共表达的外周血单核细胞对抗人血清介导溶破细胞的能力最强,可以克服超急性排斥反应并且可以减少黏附分子的表达.高水平表达人HT,DAF和CD59基因的转基因小鼠可以完全克服异种器官移植超急性排斥反应并且可以部分克服急性血管排斥反应.本研究表明,表达三种基因的转基因小鼠的器官异种移植时存活时间可以显著延长,对异种移植来说也许是更合适的选择. 展开更多
关键词 α-1 2-岩藻糖苷转移酶 补体调节蛋白 半乳糖α-1 3-半乳糖 超急性排斥反应 急性血管排斥反应
原文传递
转人α-1,2岩藻糖苷转移酶基因在异种移植中的研究 被引量：6
4
作者 李胜芝 刘秉乾 +3 位作者 马志方 张玥 王广有 马腾骧 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期1001-1002,共2页
目的研究转人α1,2岩藻糖苷转移酶基因(HT)在克服超急性排斥反应(HAR)中的作用。方法通过脂质体转染将人HT基因转入猪血管内皮细胞(PIECs)中,利用显微注射建立转HT基因小鼠模型,经流式细胞仪检测转HT基因阳性的PIECs表面抗原及小鼠外周... 目的研究转人α1,2岩藻糖苷转移酶基因(HT)在克服超急性排斥反应(HAR)中的作用。方法通过脂质体转染将人HT基因转入猪血管内皮细胞(PIECs)中,利用显微注射建立转HT基因小鼠模型,经流式细胞仪检测转HT基因阳性的PIECs表面抗原及小鼠外周血单核细胞表面抗原的变化。结果转HT基因的PIECs表面的α1,3半乳糖(αGal)比阴性对照下降了50%～60%,H抗原由无表达到44%～78%表达阳性;转HT基因小鼠白细胞表面的αGal比阴性对照下降了63%左右,H抗原阳性表达率为95%以上。结论HT基因在细胞和小鼠体内均有较好的表达,可减少异种抗原与异种抗体的反应,在克服超急性排斥反应中能发挥一定的作用。 展开更多
关键词 转人α-1 2岩藻糖苷转移酶基因 异种移植 急性排斥反应 脂质体
原文传递
重组人ht基因表达载体的构建及其意义
5
作者 李胜芝 马志方 +3 位作者 刘秉乾 张玥 王广有 马腾骧 《生物医学工程与临床》 CAS 2006年第2期105-108,共4页
目的通过基因工程技术构建人α1,2岩藻糖苷转移酶(ht)基因表达载体,以期HT在猪细胞表达,削减异种抗原α-Gal的合成。方法HindⅢ/XbaⅠ双酶切pcDNA3和pRc/CMV-htcDNA2种质粒,回收所需酶切片段,进而连接、转化感受态细菌,纯化pcDNA3-htcDN... 目的通过基因工程技术构建人α1,2岩藻糖苷转移酶(ht)基因表达载体,以期HT在猪细胞表达,削减异种抗原α-Gal的合成。方法HindⅢ/XbaⅠ双酶切pcDNA3和pRc/CMV-htcDNA2种质粒,回收所需酶切片段,进而连接、转化感受态细菌,纯化pcDNA3-htcDNA重组质粒,对其进行多酶切、PCR和测序鉴定。结果多酶切反应产物电泳可见内切酶PvuⅠ酶切产生6.5kb片段,BglⅡ酶切产生4.6kb和1.9kb片段,ApaⅠ酶切产生5.6kb和0.9kb片段,HindⅢ/XbaⅠ酶切产生5.4kb和1.1kb片段,结果与设计相符。PCR反应扩增出1098bp的htcDNA核心片段。序列测定结果与Genbank中htcDNA序列比对,表明在pcDNA3质粒多克隆位点成功定向连接了htcDNA全长序列。结论成功构建了pcDNA3-htcDNA重组质粒。 展开更多
关键词 α1 2岩藻糖苷转移酶 基因转移 载体
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人α1,2岩藻糖苷转移酶基因在猪动脉内皮细胞的表达
6
作者 马志方 李胜芝 +3 位作者 刘秉乾 张玥 王广有 马腾骧 《山西医科大学学报》 CAS 2005年第2期149-152,共4页
目的通过基因工程技术使人α1,2岩藻糖苷转移酶(HT)基因在猪动脉内皮细胞(PAEC)表达,削减异种抗原αGal的表达。方法构建pcDNA3HTcDNA重组质粒,体外培养PAEC,脂质体转染法将pcDNA3HTcDNA转染PAEC,新霉素(G418)筛选具有抗性的细胞克隆,... 目的通过基因工程技术使人α1,2岩藻糖苷转移酶(HT)基因在猪动脉内皮细胞(PAEC)表达,削减异种抗原αGal的表达。方法构建pcDNA3HTcDNA重组质粒,体外培养PAEC,脂质体转染法将pcDNA3HTcDNA转染PAEC,新霉素(G418)筛选具有抗性的细胞克隆,对其用PCR检测重组质粒的整合,流式细胞术(FCM)检测转染细胞H抗原和异种抗原αGal的表达。分别以未转染的PAEC和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为对照。结果重组质粒转染PAEC经筛选得到抗性细胞克隆,PCR扩增出人HT基因片段,FCM检测转染细胞H抗原表达升高,αGal表达明显降低。结论成功构建了pcD NA3HTcDNA重组质粒,并使人HT基因在PAEC表达,抑制了αGal的合成。 展开更多
关键词 α1 2岩藻糖苷转移酶 基因转移 内皮细胞
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