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2DE-MS中膜蛋白质组的研究进展
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作者 张丽军 谢锦云 梁宋平 《生命科学研究》 CAS CSCD 2004年第S1期70-75,共6页
2-维凝胶电泳(2DE)具有高分辨率、高通量等特点,已被广泛地用于蛋白质组的研究.然而,2DE-MS在膜蛋白质组学研究方面却有其局限性,主要因为:膜蛋白具有低丰度、难溶、等电点时易沉淀、难酶解等特点.然而随着亚细胞分离技术和直接的生化... 2-维凝胶电泳(2DE)具有高分辨率、高通量等特点,已被广泛地用于蛋白质组的研究.然而,2DE-MS在膜蛋白质组学研究方面却有其局限性,主要因为:膜蛋白具有低丰度、难溶、等电点时易沉淀、难酶解等特点.然而随着亚细胞分离技术和直接的生化方法富集等技术的发展,低丰度问题得到了极大的改善;增溶剂(尿素,硫脲),新的两性离子和非离子去垢剂,以及有机溶剂等的利用极大地改善了膜蛋白质组的溶解性能;同时,一些新的2DE技术的利用扩大了常规2DE的分离范围.在膜蛋白裂解方面,将酶解法与化学法(CNBr)相结合,另外先进的质谱技术的发展使得膜蛋白质组的研究在最近几年取得了较大的发展.现对2DE-MS途径中,膜的富集、膜蛋白的提取、分离、酶解、鉴定方面的进展进行综述. 展开更多
关键词 膜蛋白质组学 亚细胞分离 去垢剂 2凝胶电泳(2de) 质谱
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真核细胞质膜蛋白质组研究进展 被引量:7
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作者 张丽军 谢锦云 +1 位作者 李选文 梁宋平 《生命科学》 CSCD 2005年第5期398-403,共6页
细胞膜(质膜)蛋白质是细胞的“门铃”与“门户”,是许多药物的作用靶标。细胞质膜蛋白质组的研究正成为蛋白质组研究的热点,这方面的研究有利于具有重要功能的低丰度蛋白质的发掘, 为药物研发和疾病的诊断提供靶体与标记蛋白质。然而,... 细胞膜(质膜)蛋白质是细胞的“门铃”与“门户”,是许多药物的作用靶标。细胞质膜蛋白质组的研究正成为蛋白质组研究的热点,这方面的研究有利于具有重要功能的低丰度蛋白质的发掘, 为药物研发和疾病的诊断提供靶体与标记蛋白质。然而,质膜蛋白质组的研究在强疏水性跨膜蛋白质和低丰度膜蚩白质的分离和鉴定上遇到了方法学的挑战。本文对质膜及其微区的纯化、质膜蛋白质组的分离与鉴定、生物信息学,以及亚细胞定位研究的近期进展作扼要介绍。 展开更多
关键词 质膜 蛋白质组学 2-凝胶电泳(2de) 质谱
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2DE中IPG胶条转移到SDS-PAGE中的技术改进 被引量:4
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作者 张丽军 谢锦云 +1 位作者 张健 梁宋平 《生命科学研究》 CAS CSCD 2004年第3期225-230,共6页
2-维凝胶电泳(Two-dimensionalgelelectrophoresis,2DE)因其高通量、高分辨率等特点,被广泛用于蛋白质组的分离.然而,在蛋白质从第一向-固相(ImmobilizedpHgradients,IPG)胶条转移到第二向-十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶(Sodiumdodecyls... 2-维凝胶电泳(Two-dimensionalgelelectrophoresis,2DE)因其高通量、高分辨率等特点,被广泛用于蛋白质组的分离.然而,在蛋白质从第一向-固相(ImmobilizedpHgradients,IPG)胶条转移到第二向-十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶(Sodiumdodecylsulfate,SDS;Polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE)时,常会引起蛋白质的损失.尤其是当将IPG胶条放入浓缩胶上时,在胶面不平、技术不熟练等情况下,常会在IPG胶条下引入气泡,导致蛋白质更多的损失.现将IPG胶条转移过程进行改进:先在第二向的十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶上加上薄薄的一层(约1~2mm厚)琼脂糖溶液,然后将IPG胶条转移上去,最后再封住胶条的上面.这样的转移不会引起气泡,可以大大提高实验的成功率及重复性,有利于蛋白质的转移(尤其是相对分子质量大于40kDa的蛋白质),提高质谱鉴定的准确性.此法操作简便,可以减少因操作不熟练而带来的麻烦. 展开更多
关键词 2-凝胶电泳(2de) 蛋白质转移 改进 乳腺癌变组织
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蛋白质组学在肉品学中的应用 被引量:6
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作者 冯宪超 徐幸莲 周光宏 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第5期277-281,共5页
蛋白质组由基因组表达,会受到环境条件和处理条件的影响,可以看作是基因组和肉的功能品质特点之间的分子链接。蛋白质组学可以解释不同遗传背景或者肉的处理方法对肉质影响的分子机制。本文将介绍蛋白质组学的一些技术和它在肉质特点研... 蛋白质组由基因组表达,会受到环境条件和处理条件的影响,可以看作是基因组和肉的功能品质特点之间的分子链接。蛋白质组学可以解释不同遗传背景或者肉的处理方法对肉质影响的分子机制。本文将介绍蛋白质组学的一些技术和它在肉质特点研究中的应用。 展开更多
关键词 蛋白质组学 凝胶电泳(2-de) 质谱
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大豆雄性不育系与其保持系不同器官蛋白质比较 被引量:4
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作者 曾维英 杨守萍 +1 位作者 喻德跃 盖钧镒 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1619-1624,共6页
采用双向凝胶电泳技术对大豆质核互作雄性不育系NJCMS2A及其保持系NJCMS2B的种子、叶片和花药等不同器官蛋白质进行比较分析.结果显示,不育系NJCMS2A与其保持系NJCMS2B的花药2-DE图谱间存在较多差异表达蛋白点,种子2-DE图谱间仅有少量... 采用双向凝胶电泳技术对大豆质核互作雄性不育系NJCMS2A及其保持系NJCMS2B的种子、叶片和花药等不同器官蛋白质进行比较分析.结果显示,不育系NJCMS2A与其保持系NJCMS2B的花药2-DE图谱间存在较多差异表达蛋白点,种子2-DE图谱间仅有少量差异表达蛋白点,而叶片2-DE图谱间基本没有差异表达蛋白点.结果表明,不育基因表达具有时空性和器官特异性,与育性有关的蛋白主要在花药中表达. 展开更多
关键词 大豆 质核互作雄性不育 双向凝胶电泳(2-de) 蛋白质
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双向电泳图谱的图像分析技术进展 被引量:2
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作者 李赫 邹黎明 《沈阳医学院学报》 2006年第1期74-76,共3页
关键词 双向凝胶电泳(2-de) 图像分析 软件包 蛋白点
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巴西橡胶树叶片蛋白样品的制备及质谱初步分析 被引量:2
7
作者 林秀琴 邓军 +2 位作者 袁坤 王真辉 杨礼富 《热带农业科学》 2009年第4期1-6,共6页
采用TCA-丙酮沉淀法并稍做改进提取巴西橡胶树叶片总蛋白,蛋白溶解后,用试剂盒对蛋白上清液进行纯化和浓度测定。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和双向凝胶电泳(2-DE)的结果均表明,所制得的蛋白样品质量较高,并且纯化过... 采用TCA-丙酮沉淀法并稍做改进提取巴西橡胶树叶片总蛋白,蛋白溶解后,用试剂盒对蛋白上清液进行纯化和浓度测定。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和双向凝胶电泳(2-DE)的结果均表明,所制得的蛋白样品质量较高,并且纯化过的蛋白样品2-DE(双向电泳)图谱效果更好(7cm,考染)。根据预实验结果,选用17cmIPG预制干胶条对纯化的蛋白样品进行2-DE实验,采用快速银染法进行染色,随机挖取银染胶上6个蛋白点进行MALDI-TOFMS分析和数据库检索,鉴定了3个蛋白,它们是:1-氨基环丙烷-1羧酸合酶2,核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亚基和F11O4.2。本实验为进一步对巴西橡胶树叶片中具有重要生物学功能蛋白的筛选和鉴定打下了方法学基础。 展开更多
关键词 巴西橡胶树 蛋白样品 双向凝胶电泳(2-de) MALDI-TOF MS
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应用LCM和蛋白质组学技术筛选肺腺癌的差异表达蛋白质 被引量:2
8
作者 代书炎 李茂玉 +6 位作者 李育 覃婉元 梅城 付莹 陈永恒 陈主初 彭芳 《生命科学研究》 CAS CSCD 2017年第2期136-143,共8页
为筛选肺腺癌(lung adenocarcinoma,AdC)发病相关蛋白质,首先采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从AdC组织和正常支气管上皮(normal bronchial epithelium,NBE)组织中切割并收集AdC细胞和NBE细胞,再应用... 为筛选肺腺癌(lung adenocarcinoma,AdC)发病相关蛋白质,首先采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从AdC组织和正常支气管上皮(normal bronchial epithelium,NBE)组织中切割并收集AdC细胞和NBE细胞,再应用双向凝胶电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离经LCM收集的细胞蛋白质,通过PDQuest软件分析差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达蛋白质,组织芯片免疫组化方法检测差异蛋白质膜联蛋白A4(annexin A4)在30例AdC组织、配对的癌旁组织和淋巴结转移癌组织中的表达水平。研究结果显示,通过蛋白质组学方法建立了LCM收集的AdC和NBE细胞的2-DE图谱,质谱鉴定得到了33个差异表达蛋白质,其中21个蛋白质在AdC细胞中表达上调,12个蛋白质在AdC细胞中表达下调。组织芯片免疫组化结果显示,与癌旁肺组织相比,annexin A4在AdC组织中的表达水平显著上调,且在AdC淋巴结转移癌组织中的表达明显高于其原发癌组织。上述结果提示annexin A4与AdC的发病及淋巴结转移相关,有望成为诊断AdC及预测AdC转移的分子标志物。 展开更多
关键词 肺腺癌(AdC) 转移 膜联蛋白A4 激光捕获显微切割技术(LCM) 蛋白质组学 蛋白质筛选 双向凝胶电泳(2-de)
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橡胶树PR107和CATAS8-79中胶乳蛋白的差异分析及磷酸化蛋白的鉴定
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作者 王丹 徐兵强 +3 位作者 孙勇 彭存智 常丽丽 仝征 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2022年第5期904-914,共11页
橡胶树是合成天然橡胶的重要植物。PR107和CATAS8-79是具有不同产排胶性状的2个无性系。在以往的研究中,胶乳中蛋白表达差异被认为是影响天然橡胶合成的关键因子之一。然而,这2个无性系之间与胶乳产量相关的蛋白质图谱尚未明确。本研究... 橡胶树是合成天然橡胶的重要植物。PR107和CATAS8-79是具有不同产排胶性状的2个无性系。在以往的研究中,胶乳中蛋白表达差异被认为是影响天然橡胶合成的关键因子之一。然而,这2个无性系之间与胶乳产量相关的蛋白质图谱尚未明确。本研究采用蛋白质组学方法对这些蛋白质进行鉴定,有助于探讨巴西橡胶树胶乳合成机理。经双向凝胶电泳和质谱鉴定分析,共获得65个差异表达蛋白信息。通过磷酸化蛋白质组分析,在PR107胶乳中鉴定出31个磷酸化蛋白质,含有74个磷酸化氨基酸残基,在CATAS8-79胶乳中鉴定出80个磷酸化蛋白质,含有166个磷酸化氨基酸残基。橡胶延伸因子/小橡胶粒子蛋白(REF/SRPP)家族成员被鉴定为差异表达蛋白和磷酸化修饰蛋白,这些蛋白在调节天然橡胶合成中起着重要作用。pro-hevein和hevamine也表现出不同的磷酸化修饰水平,它们主要在天然橡胶排胶过程中起作用。一种丝氨酸-苏氨酸蛋白磷酸酶激酶的磷酸化和去磷酸化修饰可能在天然橡胶合成中起调节作用。这些结果为天然橡胶生物合成调控机制的研究提供了新的理论依据。 展开更多
关键词 巴西橡胶树 天然橡胶生物合成 磷酸蛋白质组 双向凝胶电泳(2-de)
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新的啤酒蛋白质组图谱的构建及在啤酒质量控制方面的应用 被引量:1
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作者 张波(摘译) 管政兵(摘译) +1 位作者 陆健(摘译) 金昭(摘译) 《啤酒科技》 2011年第2期58-67,共10页
本研究通过凝胶双向电泳(2一DE)对啤酒中的蛋白质组进行分析,进一步通过质谱技术结合数据库检索方法对凝胶上的主要蛋白点进行鉴定归类,构建出了一个全面的啤酒蛋白质组图谱。结果显示,检测到的199个蛋白质点中有85个能被成功鉴定... 本研究通过凝胶双向电泳(2一DE)对啤酒中的蛋白质组进行分析,进一步通过质谱技术结合数据库检索方法对凝胶上的主要蛋白点进行鉴定归类,构建出了一个全面的啤酒蛋白质组图谱。结果显示,检测到的199个蛋白质点中有85个能被成功鉴定,此85个蛋白点可归为12类蛋白质。为了证明不同的大麦品种和麦芽溶解度对啤酒蛋白质组成和啤酒品质特征的影响,本文研究了11个啤酒样品,它们由蛋白质溶解度不同的8个品种的大麦麦芽酿造而成。通过2一DE分析啤酒蛋白质组并进行对比,发现大麦品种和麦芽溶解度均会影响啤酒中几种蛋白质的浓度,而啤酒中蛋白质的浓度与啤酒的品质特性,如泡沫稳定性有关。此外,观察到源于酵母的蛋白质也可能影响啤酒的品质。啤酒蛋白质组图谱的应用可为啤酒品质相关蛋白质的检测和研究提供一个强有力的平台。 展开更多
关键词 啤酒蛋白质 大麦·酿酒酵母 双向凝胶电泳(2-de) 蛋白质组
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先天性弓形虫感染胎鼠脑组织蛋白差异分析
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作者 高思 赫燕侠 +3 位作者 李佳洁 马红倩 刘红丽 侯玉英 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第5期508-512,共5页
目的检测先天性弓形虫感染胎鼠脑组织差异蛋白并分析其功能,为先天性弓形虫病的发生机制研究提供理论基础。方法选取9~10周龄BALB/c孕鼠20只,随机分为正常对照组和感染组,每组10只。于妊娠第10d,感染组每只小鼠腹腔注射经胰酶消化的弓... 目的检测先天性弓形虫感染胎鼠脑组织差异蛋白并分析其功能,为先天性弓形虫病的发生机制研究提供理论基础。方法选取9~10周龄BALB/c孕鼠20只,随机分为正常对照组和感染组,每组10只。于妊娠第10d,感染组每只小鼠腹腔注射经胰酶消化的弓形虫速殖子40个/0.2ml;正常对照组腹腔注射无菌PBS溶液0.2ml/只(0.01mol/L,pH 7.3)。于妊娠第20d处死孕鼠,取胎鼠脑组织,采用Bradford法测定蛋白含量;采用双向凝胶电泳分离胎鼠脑组织蛋白,运用ImageMaster 2D软件分析差异蛋白,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析差异蛋白点的肽指纹谱(PMF),运用Mascot软件在SWISS-PROT数据库中对差异蛋白进行比较与评判,运用David软件对差异蛋白进行生物信息学分析。结果两组胎鼠脑组织均分离出约500个蛋白点,经蛋白质胶图分析鉴定出显著差异蛋白点15个,分子质量单位(Mr)多分布于(8~48)×103之间,等电点(pI)在3~10之间。在弓形虫感染胎鼠脑组织低表达的15个差异蛋白点经过鉴定和功能分析,主要是以下6种:结蛋白,肌动蛋白,血清白蛋白,葡萄糖调节蛋白,蛋白质二硫键异构酶和膜联蛋白。结论弓形虫感染胎鼠脑组织中有6种差异蛋白低表达,弓形虫可能通过降低这些蛋白的表达量来影响胎鼠脑组织的正常结构、物质转运和调节功能等,从而引发先天性弓形虫脑病。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 胎鼠脑组织蛋白 双向凝胶电泳(2-de) 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)
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原位鼻咽癌裸鼠模型血清蛋白质组学的研究
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作者 吴丽莎 蒋星军 +8 位作者 刘卫东 周文 冯湘玲 李雪华 祝斌 王磊 刘春梅 姚开泰 任彩萍 《生命科学研究》 CAS CSCD 2010年第3期250-256,共7页
利用我室建立的原位鼻咽癌裸鼠模型,建立了稳定性较好的鼻咽癌裸鼠血清蛋白质2-DE方法,并比较了原位鼻咽癌裸鼠血清与对照组裸鼠血清蛋白质2-DE图谱之间的差异.与正常裸鼠血清比较,原位鼻咽癌裸鼠模型组血清增加了4个蛋白质点.利用MALDI... 利用我室建立的原位鼻咽癌裸鼠模型,建立了稳定性较好的鼻咽癌裸鼠血清蛋白质2-DE方法,并比较了原位鼻咽癌裸鼠血清与对照组裸鼠血清蛋白质2-DE图谱之间的差异.与正常裸鼠血清比较,原位鼻咽癌裸鼠模型组血清增加了4个蛋白质点.利用MALDI-TOF质谱技术对血清差异蛋白点进行鉴定,发现SAA-1前体(serumamyloidA-1 protein precursor)在鼻咽癌裸鼠模型组血清中明显高表达,为寻找鼻咽癌血清生物标志物提供了有利的线索. 展开更多
关键词 鼻咽癌(NPC) 血清蛋白质组学 双向凝胶电泳(2-de) SAA-1 质谱分析
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2种蛋白质组学方法在石榴中的应用比较
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作者 曹尚银 牛娟 +6 位作者 张杰 李好先 薛辉 陈丽娜 刘蓓蓓 张富红 赵第广 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第20期68-71,共4页
对蛋白质组学中的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,简称2-DE)、相对和绝对定量同位素标记(isobaric tags for relative and absolute quantification,简称iTRAQ)2种技术进行比较,以期为石榴的蛋白质组学研... 对蛋白质组学中的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,简称2-DE)、相对和绝对定量同位素标记(isobaric tags for relative and absolute quantification,简称iTRAQ)2种技术进行比较,以期为石榴的蛋白质组学研究提供选择参考。取花后120 d的三白石榴籽粒为材料,分别用双向电泳、iTRAQ 2种技术检测三白石榴籽粒蛋白。结果表明,利用2-DE技术检测到890种蛋白;通过质谱鉴定出5种蛋白;利用iTRAQ技术得到1 940种蛋白,其中分子量在10 ku以下的有16种,200 ku以上的有19种,pH值大于11的有11种,说明iTRAQ技术在鉴定大分子、小分子蛋白方面具有优势。由以上结果可知,iTRAQ技术比2-DE技术能发现更多数量、更多种类的蛋白,而且iTRAQ技术可以通过信息检索了解到被检索肽段的真实身份,该技术的出现,使得对同种蛋白质表达变化的鉴定更为准确。 展开更多
关键词 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-de) 相对和绝对定量同位素标记(TRAQ) 蛋白质组学 石榴
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