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N-聚糖合成通路中内质网α-1,2甘露糖苷酶和α-甘露糖苷酶Ⅱ基因对家蚕胚胎滞育的调控作用
1
作者 阿依努尔·亚森 樊丙炎 +7 位作者 陈艳花 宁阳威 王东岳 吴赛 朱娟 王梅仙 唐顺明 沈兴家 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期106-115,共10页
家蚕滞育是基因与环境协同作用的结果,其调控网络十分复杂,至今仍未完全阐明。为了解家蚕N-聚糖生物合成通路是否参与胚胎滞育调控,调查家蚕不同化性品系蛹期、胚胎发育早期以及滞育激素(DH)、蜕皮激素(20E)处理后BmN细胞中内质网α-1,... 家蚕滞育是基因与环境协同作用的结果,其调控网络十分复杂,至今仍未完全阐明。为了解家蚕N-聚糖生物合成通路是否参与胚胎滞育调控,调查家蚕不同化性品系蛹期、胚胎发育早期以及滞育激素(DH)、蜕皮激素(20E)处理后BmN细胞中内质网α-1,2甘露糖苷酶基因(BmMAN1B)和α-甘露糖苷酶Ⅱ基因(BmMAN2)的转录水平。qRT-PCR结果显示:这2个基因在不同化性品系中的转录水平存在较大差异,蛹晚期的转录水平高于早期;分别用100 nmol/L DH和10 ng/mL 20E处理BmN细胞,BmMAN1B和BmMAN2的转录水平都极显著上调,提示2个基因与家蚕滞育密切相关。对BmN细胞和家蚕二化性品系秋丰165℃催青产非滞育卵组(QFLT)蛹期2 d雌蛹进行BmMAN1B和BmMAN2基因的RNA干扰,结果发现滞育相关基因BmDH、BmDHR-1、BmTRE2和BmSDH-2a等的转录水平发生了变化;当在个体水平进行BmMAN1B和BmMAN2基因的共同干扰时,382%的子代卵由非滞育转变为滞育。结果表明,BmMAN1B和BmMAN2在家蚕胚胎滞育中具有重要的调控作用。 展开更多
关键词 家蚕 滞育 N-糖基化 内质网α-1 2甘露糖苷酶 α-甘露糖苷酶Ⅱ
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Man_5GlcNAc_2哺乳动物甘露糖型糖蛋白的毕赤酵母表达系统构建 被引量：7
2
作者 杨晓鹏 刘波 +4 位作者 宋淼 巩新 唱韶红 薛奎晶 吴军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期108-117,共10页
蛋白的糖基化对蛋白的活性、高级结构及功能都有重要的影响。酵母表达的糖蛋白不同于哺乳动物表达的杂合型或复杂型糖蛋白,而是高甘露糖型或过度甘露糖化糖蛋白。在前期成功敲除毕赤酵母α-1,6-甘露糖转移酶(Och1p)基因、阻断毕赤酵母... 蛋白的糖基化对蛋白的活性、高级结构及功能都有重要的影响。酵母表达的糖蛋白不同于哺乳动物表达的杂合型或复杂型糖蛋白,而是高甘露糖型或过度甘露糖化糖蛋白。在前期成功敲除毕赤酵母α-1,6-甘露糖转移酶(Och1p)基因、阻断毕赤酵母过度糖基化,获得毕赤酵母过度糖基化缺陷菌株GJK01(ura3、och1)的基础上,通过表达不同物种来源的α-1,2-甘露糖苷酶I(MDSI)的活性区与酵母自身定位信号的融合蛋白,并通过DSA-FACE(基于DNA测序仪的荧光辅助糖电泳)分析筛选报告蛋白HSA/GM-CSF(人血清白蛋白与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白)的糖基结构,发现当编码酿酒酵母α-1,2-甘露糖苷酶(MnsI)基因的内质网定位信号与带有完整C-端催化区的拟南芥MDSI基因融合表达时,毕赤酵母工程菌株能够合成Man5GlcNAc2哺乳动物甘露糖型糖蛋白。这为在酵母体内合成类似于哺乳动物杂合型或复杂型糖基化修饰的糖蛋白奠定了基础。 展开更多
关键词 α-1 2-甘露糖苷酶I Man5GlcNAc2 糖基化 毕赤酵母 甘露糖型
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Ca^(2+)对α-1,2-甘露糖苷酶活性影响的分子动力学模拟研究
3
作者 熊静 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1120-1124,共5页
采用分子动力学模拟方法讨论了Ca^(2+)对α-1,2-甘露糖苷水解酶(Bt3990)催化性能的影响,以及Bt3990与底物分子的相互作用方式,并测试了删除活性中心Ca^(2+)对酶-底物复合物结构的影响。研究结果表明,当Bt3990活性中心含有Ca^(2+)时酶的... 采用分子动力学模拟方法讨论了Ca^(2+)对α-1,2-甘露糖苷水解酶(Bt3990)催化性能的影响,以及Bt3990与底物分子的相互作用方式,并测试了删除活性中心Ca^(2+)对酶-底物复合物结构的影响。研究结果表明,当Bt3990活性中心含有Ca^(2+)时酶的体系结构很稳定,同时Ca^(2+)有助于使具有催化功能的残基处于特定的位置,便于其发挥催化作用。Ca^(2+)能促使底物偏离基态构象稳定在近似进攻构象。当Bt3990活性中心失去Ca^(2+)时,酶的体系结构不再稳定。 展开更多
关键词 α-1 2-甘露糖苷酶 CA^2+ 分子动力学模拟
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稻瘟病菌一个假定的α-1，2-甘露糖苷酶生物信息学分析
4
作者 周洁 王思毅 +2 位作者 林成增 鲁国东 王宗华 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2008年第2期127-134,共8页
对稻瘟病菌一个假定的α-1,2-甘露糖苷酶MgManⅠ生物信息学进行分析的结果表明,该蛋白与海枣曲霉、桔青霉等丝状真菌的已知α-1,2-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.113)氨基酸序列具有高度同源性,并具有其相同的活性中心位点.基序分析表明,该蛋白... 对稻瘟病菌一个假定的α-1,2-甘露糖苷酶MgManⅠ生物信息学进行分析的结果表明,该蛋白与海枣曲霉、桔青霉等丝状真菌的已知α-1,2-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.113)氨基酸序列具有高度同源性,并具有其相同的活性中心位点.基序分析表明,该蛋白可能含有4个N-糖基化位点、3类19个磷酸化位点和12个N-肉豆蔻酰位点.该蛋白的相对分子质量预测为58.2 ku,理论等电点pI为5.17,并且为细胞外分泌蛋白,信号肽剪切位点为21A和22S之间.系统发育分析表明:MgManⅠ与丝状真菌中的海枣曲霉、桔青霉α-1,2-甘露糖苷酶之间亲缘关系最近,形成一大类;动物的α-1,2-甘露糖苷酶与植物的α-1,2-甘露糖苷酶分别聚成二大类;酿酒酵母α-1,2-甘露糖苷酶ScManⅠ与丝状真菌不同,单独成为一类.进一步以已知结构的PcManⅠ为模板,通过同源建模得到的三维结构图形基本反映了MgManⅠ的空间构象,为深入研究该蛋白的生化特性和生物学功能奠定了基础. 展开更多
关键词 稻瘟病菌 α-1 2-甘露糖苷酶 生物信息学
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哺乳动物细胞中糖链结构的改造
5
作者 金则成 喜多岛敏彦 +1 位作者 藤田盛久 高晓冬 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期39-46,共8页
由于蛋白质需要正确的折叠和糖基化修饰,目前生物药用蛋白质主要通过哺乳动物细胞生产。然而利用哺乳动物细胞生产医药蛋白质也面临着高成本、糖链不均一等问题。本研究中,我们构建了敲除高尔基体α-1,2-甘露糖苷酶Ⅰ的HEK293细胞株,其... 由于蛋白质需要正确的折叠和糖基化修饰,目前生物药用蛋白质主要通过哺乳动物细胞生产。然而利用哺乳动物细胞生产医药蛋白质也面临着高成本、糖链不均一等问题。本研究中,我们构建了敲除高尔基体α-1,2-甘露糖苷酶Ⅰ的HEK293细胞株,其中MAN1A1和MAN1A2双敲除细胞株D-KO35中蛋白质上高甘露糖型N-比例增加。在这株双敲细胞中,溶酶体膜蛋白LAMP2上的糖链对糖链内切酶-H处理敏感,证明蛋白上N-糖链结构以高甘露糖型结构为主。研究结果表明,在哺乳动物细胞中敲除高尔基体α-1,2-甘露糖苷酶的细胞株,可用于生产均一化N-糖链结构的重组糖蛋白。 展开更多
关键词 N-糖基化 α-1 2-甘露糖苷酶 糖蛋白 HEK293细胞
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