白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的特异性细胞免疫应答对BMDM细胞中DENV-2复制的影响

1

作者 覃燕春 李莹 +4 位作者 胡欢 周璐 黄贞植 吴家红 商正玲 《中国热带医学》 CAS 北大核心 2024年第8期907-913,共7页

目的体外探究白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的小鼠脾淋巴细胞特异性免疫应答对2型登革病毒(dengue virus type 2,DENV-2)感染小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDM)的影响。方法采用CCK-8法分析rAlb-34k2-1蛋... 目的体外探究白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的小鼠脾淋巴细胞特异性免疫应答对2型登革病毒(dengue virus type 2,DENV-2)感染小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDM)的影响。方法采用CCK-8法分析rAlb-34k2-1蛋白对免疫/未免疫小鼠脾细胞的特异性增殖反应;制备荷载蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1、rAalb_CTL1蛋白(蚊唾液C型凝集素蛋白)的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC),与免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞进行混合淋巴细胞培养,取细胞培养上清处理DENV-2感染的BMDM细胞,实时荧光定量逆转录PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测DENV-2的核酸变化,分析rAlb-34k2-1蛋白诱导的特异性T淋巴细胞应答对BMDM内DENV-2复制的影响。将免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞与rAlb-34k2-1蛋白预处理的感染BMDM进行共培养,通过qRT-PCR检测培养48、72 h后DENV-2 E基因的表达,分析免疫/未免疫小鼠淋巴细胞对预处理的BMDM中DENV-2复制的影响。结果小鼠脾细胞体外特异性增殖实验显示,与未免疫组比较,rAlb-34k2-1蛋白能导致免疫小鼠脾细胞特异性增殖,刺激指数(stimulation index,SI)>2,P<0.0001;荷载rAalb_CTL1蛋白的混合淋巴细胞培养上清未影响BMDM细胞中DENV-2的复制,荷载rAlb-34k2-1蛋白的混合淋巴细胞培养上清可抑制BMDM中DENV-2复制(2^(-ΔΔCT) <0.5,P<0.05);与免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞混合培养后,rAlb-34k2-1预处理的BMDM中DENV-2复制无差异。结论rAlb-34k2-1蛋白诱导的小鼠T淋巴细胞应答上清可抑制BMDM细胞中DENV-2的复制,为探究蚊唾液蛋白诱导免疫效应在蚊媒病毒致病中的作用提供前期实验基础。 展开更多

关键词 rAlb-34k2-1蛋白 2型登革病毒 细胞免疫应答

原文传递

2型登革病毒检测基因芯片的研制 被引量：4

2

作者 肖维威 马文丽 +4 位作者 王洪敏 黄海 王艳 张宝 郑文岭 《生命科学研究》 CAS CSCD 2003年第4期305-309,共5页

利用长片断PCR扩增含几乎全长的2型登革病毒cDNA,酶切PCR扩增产物,通过建立2型登革病毒cDNA文库获取芯片探针.用点样仪将探针制备成2型登革病毒检测基因芯片.杂交时采用限制性显示(Re strictionDisplayRD)技术标记样品,ScanArray芯片扫... 利用长片断PCR扩增含几乎全长的2型登革病毒cDNA,酶切PCR扩增产物,通过建立2型登革病毒cDNA文库获取芯片探针.用点样仪将探针制备成2型登革病毒检测基因芯片.杂交时采用限制性显示(Re strictionDisplayRD)技术标记样品,ScanArray芯片扫描仪检测杂交信号.杂交结果显示,样品和2型登革病毒基因芯片杂交的敏感性强、特异性高. 展开更多

关键词 基因芯片 基因诊断 2型登革病毒 检测

下载PDF 职称材料

新型登革病毒RNA聚合酶小分子抑制剂Z1降低登革病毒复制和感染的研究 被引量：3

3

作者 郭颂欣 何士俊 +2 位作者 黄翠红 姚新刚 刘叔文 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期790-796,共7页

目的 筛选新型的登革病毒RNA聚合酶抑制剂。方法 大肠杆菌原核表达DENV2 RNA聚合酶蛋白NS5RdRp。SPR高通量筛选小分子化合物库,寻找与NS5 RdRp蛋白结合的小分子化合物;CPE、LDH和空斑实验在细胞水平上验证化合物的抗病毒效果;实时荧... 目的 筛选新型的登革病毒RNA聚合酶抑制剂。方法 大肠杆菌原核表达DENV2 RNA聚合酶蛋白NS5RdRp。SPR高通量筛选小分子化合物库,寻找与NS5 RdRp蛋白结合的小分子化合物;CPE、LDH和空斑实验在细胞水平上验证化合物的抗病毒效果;实时荧光定量PCR法检测化合物对病毒RNA合成的影响;免疫荧光法检测病毒复制中间体dsRNA以及病毒蛋白合成;蛋白免疫印迹法检测化合物对病毒蛋白合成量的影响;时间点处理实验判断抗病毒作用阶段。结果 2,5-二氢-1,2-二苯基-4-环己氨基-5-氧代-1H-吡咯-3-甲酸乙酯(Z1)与NS5 RdRp具有结合活性,在细胞水平上具有抗DENV2活性,半数有效浓度(EC50)为4.75μmol·L-1。Z1抑制DENV2 RNA合成,抑制病毒dsRNA的合成,并抑制病毒蛋白的合成,其抑制作用发生在病毒进入后阶段。结论 Z1是新型的登革病毒NS5 RdRp抑制剂,其明显抑制登革病毒RNA的合成,并进一步抑制病毒蛋白的翻译合成,从而抑制子代病毒的复制和释放,其可作为新型的抗登革病毒先导化合物用于进一步的开发。 展开更多

关键词 NS5 RdRp抑制剂 登革病毒RNA聚合酶 2型登革病毒 抗病毒药物 SPR 病毒复制

下载PDF 职称材料

Hu-TLC-SCID小鼠的建立及其对2型登革病毒的免疫应答

4

作者 左丽 郭辉玉 张昌卿 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期211-215,共5页

利用２型登革病毒（ＤＶ２）体外免疫人扁桃腺淋巴细胞（Ｈｕ－ＴＬＣ）移植给ＳＣＩＤ小鼠，以建立Ｈｕ－ＴＬＣ－ＳＣＩＤ小鼠。并用不同剂量灭活ＤＶ２加强免疫，观察小鼠对ＤＶ２的免疫应答。结果表明，移植Ｈｕ－ＴＬＣ后第２周起... 利用２型登革病毒（ＤＶ２）体外免疫人扁桃腺淋巴细胞（Ｈｕ－ＴＬＣ）移植给ＳＣＩＤ小鼠，以建立Ｈｕ－ＴＬＣ－ＳＣＩＤ小鼠。并用不同剂量灭活ＤＶ２加强免疫，观察小鼠对ＤＶ２的免疫应答。结果表明，移植Ｈｕ－ＴＬＣ后第２周起，可在Ｈｕ－ＴＬＣ－ＳＣＩＤ小鼠血清中检出入ＩｇＧ，最高达４１２．８６μｇ／ｍｌ。移植后次日用不同剂量灭活ＤＶ２加强免疫，每２周加强１次，首次加强免疫后第２周，Ｈｕ－ＴＬＣ－ＳＣＩＤ小鼠血清中出现抗ＤＶ２特异性人ＩｇＭ；第４周起有特异性人ＩｇＧ产生，最高达１：６４００。其含量和产生动态与抗原量有关。 展开更多

关键词 人化SCID小鼠 2型登革病毒 免疫应答

原文传递

DEN-2 NGC株感染Balb/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异

5

作者 陈文捷 左丽 +1 位作者 潘宇 商正玲 《贵阳医学院学报》 CAS 2007年第3期330-330,共1页

关键词 TH1/TH2类细胞因子 BALB/C小鼠 初次感染 NGC株 间接ELISA法 2型登革病毒 皮下多点注射 小鼠血浆

下载PDF 职称材料

由转染的哺乳动物细胞系产生的2型登革病毒胞外亚病毒颗粒及对其作为亚单位疫苗的研究

6

作者 李玉华 《国外医学（预防．诊断．治疗用生物制品分册）》 2003年第3期139-139,共1页

关键词 2型登革病毒 胞外亚病塞颗粒 亚单位疫苗 研究 哺乳动物细胞系

下载PDF 职称材料

DV2 NGC株感染BALB／C小鼠后IL-4、IFN-γ产生动态的研究

7

作者 陈文捷 左丽 +1 位作者 潘宇 商正玲 《贵阳医学院学报》 CAS 2005年第1期90-90,共1页

目的: 观察2型登革病毒NGC株感染BALB/C小鼠后其IL-4、IFN-γ产生动态,研究登革病毒感染的免疫机制.方法: 用不同含量的DV2 NGC株经皮下多点注射,间接ELISA法测定感染后不同时间各组小鼠血浆IL-4、IFN-γ含量.

关键词 IL-4 IFN-γ 感染后 BALB/C小鼠 含量 2型登革病毒 登革病毒感染 生动 水平 产生

下载PDF 职称材料

2型登革病毒NS3蛋白酶诱导细胞凋亡

8

作者 陈金元 陈锦荣 《生物制品快讯》 2004年第7期11-11,共1页

关键词 2型登革病毒 NS3蛋白酶 诱导 细胞凋亡

下载PDF 职称材料

2型登革病毒临床分离株感染Balb/c小鼠后Th2类主要细胞因子的动态变化

9

作者 潘宇 左丽 +1 位作者 陈文捷 商正玲 《贵阳医学院学报》 CAS 2007年第3期224-224,共1页

关键词 BALB/C小鼠 2型登革病毒 临床分离株 感染过程 细胞因子 动态变化 夹心酶联免疫吸附实验 TH2

下载PDF 职称材料

从贵州白纹伊蚊体内分离到一株2型登革病毒

10

作者 舒莉萍 左丽 +1 位作者 郝牧 赵星 《贵阳医学院学报》 CAS 2004年第2期172-172,共1页

从贵州省独山县麻尾镇白纹伊蚊标本中分离到一株病毒 ,用抗DEN1 4型单克隆抗体经间接免疫荧光法和RT PCR产物酶切分型鉴定为DEN 2 ,并对其NS1和E基因RT PCR产物进行部分基因序列测定 ,与DEN 2NGC株比较 ,麻尾株的NS1基因区有 7个碱基... 从贵州省独山县麻尾镇白纹伊蚊标本中分离到一株病毒 ,用抗DEN1 4型单克隆抗体经间接免疫荧光法和RT PCR产物酶切分型鉴定为DEN 2 ,并对其NS1和E基因RT PCR产物进行部分基因序列测定 ,与DEN 2NGC株比较 ,麻尾株的NS1基因区有 7个碱基发生点突变 ,E基因区有 1个碱基的插入 ,两个序列被GenBank收录 ,编号分别为AY2 774 0 2、AY2 782 2 6 ;麻尾分离株与其他 9株DEN 2型病毒进行系统发育关系的分析 ,结果显示与D2 - 4 3株系统进化关系最近 ;证明贵州省存在DEN感染的自然循环。 展开更多

关键词 贵州 白纹伊蚊 2型登革病毒 基因 序列

下载PDF 职称材料

DV2 NGC株感染BALB/C小鼠后IL-4、IFN-γ产生动态的研究

11

作者 陈文捷 左丽 +1 位作者 潘宇 商正玲 《贵阳医学院学报》 CAS 2004年第4期376-376,共1页

关键词 BALB/C 小鼠 IL-4 IFN-γ 2型登革病毒感染 免疫机制

下载PDF 职称材料