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雷公藤甲素通过下调HCA66的表达抑制非小细胞肺癌 被引量:4
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作者 王娟 李芳琼 +1 位作者 张枝倩 王伟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期934-939,共6页
目的从核糖体生物合成的角度探讨雷公藤甲素(triptolide,TP)抑制肺癌细胞的分子机制。方法以不同浓度的TP作用肺癌A549细胞后,利用免疫印迹检测HCA66的表达;RT-PCR检测18S RNA的表达;流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果TP能明显降低HC... 目的从核糖体生物合成的角度探讨雷公藤甲素(triptolide,TP)抑制肺癌细胞的分子机制。方法以不同浓度的TP作用肺癌A549细胞后,利用免疫印迹检测HCA66的表达;RT-PCR检测18S RNA的表达;流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果TP能明显降低HCA66蛋白的表达以及18S RNA的合成。HCA66的表达被干扰后,18S RNA的合成降低;过表达HCA66能部分逆转TP对18S RNA的抑制作用,并减弱TP对肺癌细胞的凋亡诱导和周期阻滞作用。结论TP通过降低HCA66的表达来干扰核糖体18S RNA合成,进而诱导细胞凋亡和周期阻滞。 展开更多
关键词 雷公藤甲素 HCA66 18S rna 核糖体 非小细胞肺癌 细胞周期 细胞凋亡
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胃癌研究中实时定量PCR实验内参基因的选择 被引量:2
2
作者 赵连梅 冯佳 +4 位作者 李燕 贾楠 戴素丽 冯强 单保恩 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期974-978,共5页
目的寻找胃癌研究中较为恒定和适宜作为内参基因。方法选取50例术后胃癌组织和癌旁组织,1株胃正常上皮细胞株和6株胃癌细胞株,分别提取组织和细胞总RNA。q RT-PCR(real time quantitative reverse transcription-polymerase chain react... 目的寻找胃癌研究中较为恒定和适宜作为内参基因。方法选取50例术后胃癌组织和癌旁组织,1株胃正常上皮细胞株和6株胃癌细胞株,分别提取组织和细胞总RNA。q RT-PCR(real time quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction)实时定量方法检测内参基因GAPDH(Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)、ACTB(β-actin)、RPⅡ(RNA polymerase subunitⅡ)和18s RNA在上述两组样本中的表达量,对比四种基因表达的变化。选择肿瘤标志物癌胚抗原CEA(carcino-embryonic antigen)作为待测目的基因,分别用上述4种基因作为内参,用相对定量q RT-PCR的方法在上述组织和细胞中检测CEA的表达。使用ge Norm软件分析最优化的内参基因。结果与癌旁组织相比,对应癌组织中GAPDH、ACTB、RPⅡ的表达均发生明显表达上调(P<0.05),上调倍数分别约为(6.49±1.12)、(5.02±0.87)和(3.68±0.78)倍。而18s RNA在两种组织中未发生明显表达变化(P>0.05)。GAPDH、ACTB、RPⅡ和18s RNA在胃正常上皮细胞和胃癌细胞中表达水平未发生明显变化。用GAPDH、ACTB、RPⅡ作为内参基因时,CEA m R N A上升的倍数和比率均明显减小(P<0.05)。用18s RNA作为内参时,CEA在癌组织中表达明显上升,上升倍数为(2.87±0.56)倍,与癌旁组织相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论在各种组织和细胞中没有完全恒定的内参基因。18s RNA可作为q RT-PCR实验检测胃组织基因表达最适宜的内参基因。 展开更多
关键词 胃癌组织 胃癌细胞 实时定量PCR 内参基因 18srna
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Comparative Study of Bunt Pathogen Resistance to the Effects of Fungicides in Callus Co-Cultures <i>Triticum aestivum</i>with Tilletia caries 被引量:1
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作者 L. G. Yarullina R. I. Kasimova +3 位作者 B. R. Kuluev O. B. Surina L. M. Yarullina R. I. Ibragimov 《Agricultural Sciences》 2014年第10期906-912,共7页
The morphophysiological and molecular-genetic parameters of T. caries isolates collected from various fields of Southern Urals agrocenoses have been analysed. Isolate 1 of wheat callus had a high growth rate in vitro ... The morphophysiological and molecular-genetic parameters of T. caries isolates collected from various fields of Southern Urals agrocenoses have been analysed. Isolate 1 of wheat callus had a high growth rate in vitro even in the presence of 0.1 mg/l fungicide Baitan. Isolate 2 of wheat callus had a low growth rate whereas 0.1 mg/l Baitan significantly inhibited its growth. Comparison of nucleotide sequences of 18S RNA gene of the two isolates showed high level of homology between them, but a large number of nucleotide substitutions have been found. The most characteristic excision was five nucleotides at position 461 of the isolate 2, compared with the isolate 1. Our results allow to assume that the environmental stress including high pesticide concentration may cause the resistance of T. caries pathogen to fungicides. 展开更多
关键词 Wheat Tilletia CARIES CALLI TRIADIMENOL 18S rna Resistance to Fungicides
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靶向人乳头瘤病毒18E6的短发夹结构RNA慢病毒载体的构建 被引量:1
4
作者 罗远材 瞿全新 +1 位作者 糜若然 张灏 《天津医药》 CAS 北大核心 2011年第9期813-816,共4页
目的:构建含有靶向人乳头瘤病毒18型E6癌基因(HPV18E6)的短发夹结构RNA(shRNA)的慢病毒载体。方法:根据HPV18E6癌基因的相关信息,设计并合成shRNA干扰序列,连入pGCSIL-GFP质粒,构建并鉴定含有shRNA的重组质粒pGC-shRNA;将重组质粒pGC-sh... 目的:构建含有靶向人乳头瘤病毒18型E6癌基因(HPV18E6)的短发夹结构RNA(shRNA)的慢病毒载体。方法:根据HPV18E6癌基因的相关信息,设计并合成shRNA干扰序列,连入pGCSIL-GFP质粒,构建并鉴定含有shRNA的重组质粒pGC-shRNA;将重组质粒pGC-shRNA和病毒包装质粒pHelper1.0、pHelper2.0共转染293T细胞,进行病毒包装,收集病毒液并进行浓缩、纯化;所得病毒液感染293T细胞,测定病毒滴度,并验证其对宫颈癌HeLa细胞HPV18E6癌基因的干扰效果。结果:HPV18E6的shRNA干扰序列与人类基因组没有同源性,此插入序列转录后得到的RNA二级结构能形成发夹状结构;重组质粒pGC-shRNA经PCR鉴定及DNA测序结果显示该重组质粒构建成功;成功对病毒进行包装、浓缩及纯化后,所得病毒滴度为3×108TU/mL,并能很好地抑制HPV18E6癌基因的表达。结论:成功构建了HPV18E6-RNAi-LV慢病毒载体,为后续RNA干扰研究的开展提供了工具。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒18 癌基因 rna干扰 质粒 转染 HELA细胞 逆转录聚合酶链反应
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猪源结肠小袋纤毛虫培养、分子鉴定和显微观察 被引量:10
5
作者 石团员 付媛 +5 位作者 鲍国连 索勋 郝力力 王一成 李军星 周永学 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期354-359,共6页
小袋纤毛虫病是一种人畜共患寄生虫病。本研究从浙江地区病猪盲肠内分离到了一株结肠小袋纤毛虫,通过RPMI1640培养基对其进行了体外培养,结肠小袋纤毛虫在28℃和37℃均能良好生长,在培养后第5天和第4天分别达到高峰值,虫体密度分别为1.6... 小袋纤毛虫病是一种人畜共患寄生虫病。本研究从浙江地区病猪盲肠内分离到了一株结肠小袋纤毛虫,通过RPMI1640培养基对其进行了体外培养,结肠小袋纤毛虫在28℃和37℃均能良好生长,在培养后第5天和第4天分别达到高峰值,虫体密度分别为1.60×104和2.31×104个·m L-1。显微镜下滋养体胞口、胞肛和食物泡结构明显,DAPI染色后大核明显呈哑铃型,且滋养体有大小差别明显的2种类型。18S r RNA基因PCR扩增、测序和聚类分析结果显示,猪源结肠小袋纤毛虫分离株存在2条明显不同的18S r RNA基因序列,序列间趋异性为0.6%,且该分离株序列与国外分离株间存在显著差异,在进化树上形成一独立的亚枝。在高倍显微镜下,滋养体内常见有许多生物活动,种类不明,16S r RNA基因PCR扩增到3条未知细菌序列,未知细菌16S r RNA基因序列与结肠小袋纤毛虫内微生物间的确切关系有待研究。 展开更多
关键词 结肠小袋纤毛虫 体外培养 18S r rna基因
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胶州湾浮游桡足类18S核糖体RNA基因(18S rDNA)扩增及序列变异初步研究 被引量:9
6
作者 门荣新 杨官品 +1 位作者 刘永健 管晓菁 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期88-96,共9页
采用PCR扩增、文库构建、限制性片段长度多态性分析、序列分析和系统学分析等方法,初步研究了夏季胶州湾上层海水浮游桡足类核糖体小亚基RNA基因(18SrDNA)约1.5kb片段的序列变异。从浮游生物混合DNA中选择性扩增桡足类18SrDNA,建立桡足... 采用PCR扩增、文库构建、限制性片段长度多态性分析、序列分析和系统学分析等方法,初步研究了夏季胶州湾上层海水浮游桡足类核糖体小亚基RNA基因(18SrDNA)约1.5kb片段的序列变异。从浮游生物混合DNA中选择性扩增桡足类18SrDNA,建立桡足类18SrDNA变异类型文库,并从文库中随机挑选的30个克隆进行分析。结果表明,VspI限制性内切酶能将这些克隆分成频率分别为0.17、0.23和0.6的3种操作分类单元(OTUs),遗传多样性指数达到0.95。3条OTU代表克隆序列与甲壳纲桡足亚纲核苷酸差异数在75.4—97.8之间,而与其他亚纲的差异都高于100。3条OTU代表克隆序列均属于桡足亚纲,其中,AY437861和AY437862属于哲水蚤目。3条OTU代表克隆序列可分为2个高变异区和3个相对保守区,其GC%分别为47.37%、48.16%和48.57%。研究结果表明,混合DNA提取方法简单,设计的引物可选择性地扩增浮游桡足类18SrDNA,根据18SrDNA序列序列变异描述浮游桡足类多样性是可行的。研究结果也为在浮游桡足类分类中引入18SrDNA序列奠定了基础。 展开更多
关键词 18S核糖体rna基因 桡足类 序列变异
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单条固定线虫基因组DNA提取及18S rRNA基因PCR扩增 被引量:8
7
作者 沈锡权 杨官品 廖梅杰 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期33-36,共4页
根据线虫18S核糖体RNA基因PCR扩增效果比较了丙酮、乙醇、乙醇+0.05mol/LEDTA(pH8.0)和5%海水福尔马林4种固定剂,碱裂解和蛋白酶K处理2种单条线虫基因组DNA提取方法的优劣。用乙醇固定的样品最适合制备PCR模板DNA,而5%海水福尔马林固定... 根据线虫18S核糖体RNA基因PCR扩增效果比较了丙酮、乙醇、乙醇+0.05mol/LEDTA(pH8.0)和5%海水福尔马林4种固定剂,碱裂解和蛋白酶K处理2种单条线虫基因组DNA提取方法的优劣。用乙醇固定的样品最适合制备PCR模板DNA,而5%海水福尔马林固定的样品能最完整地保持样品形态。蛋白酶K处理获得的DNA较碱裂解获得的更适合PCR扩增。结果有助于分子生物学方法在海洋线虫分类、多样性和生态学研究中的应用。 展开更多
关键词 PCR扩增 基因组DNA提取 Rrna基因 18S DNA提取方法 分子生物学方法 福尔马林 蛋白酶K 模板DNA 生态学研究 效果比较 乙醇固定 海洋线虫 碱裂解 PCB M基因 核糖体 固定剂 样品 多样性 海水
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油菜秸秆还田对土壤真菌群落结构和功能影响的研究 被引量:8
8
作者 胡洪涛 胡时友 +5 位作者 周荣华 张舒 曹春霞 张佑宏 夏贤格 杨靖钟 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2020年第S01期6-10,共5页
油菜是中国乃至世界重要的油料作物之一,油菜秸秆还田能改善土壤性质、提高土壤肥力,是农业废弃物综合利用的主要途径。文章为阐明油菜秸秆还田对土壤微生物群落的影响,特进行了2年油菜秸秆还田试验,并提取试验区土壤基因组DNA,利用真菌... 油菜是中国乃至世界重要的油料作物之一,油菜秸秆还田能改善土壤性质、提高土壤肥力,是农业废弃物综合利用的主要途径。文章为阐明油菜秸秆还田对土壤微生物群落的影响,特进行了2年油菜秸秆还田试验,并提取试验区土壤基因组DNA,利用真菌18S核糖体RNA基因高通量测序方法,研究不同处理土壤真菌组成、结构和功能的变化。试验结果表明,油菜秸秆还田(SR)和对照(CK)处理高通量测序分别获得135824和100582条高质量序列,分别代表1129和964个OTUs,简并后得到1498个OTUs,其中595(35.6%)个为两处理共有。两处理OTU丰度分布较为均匀,但SR处理OTU种类较CK多。两处理真菌群落在门水平较为类似,均以子囊菌门丰度最高,其次为担子菌门和罗兹菌门,仅新丽鞭毛菌门只在CK中检出。在检出的212个属中,126个属(59.4%)为两处理共有,同CK比较,SR处理部分属丰度发生较大变化。Alpha多样性分析显示,SR处理真菌群落丰富度、均匀度、Shannon指数和Simpson指数均显著增加(P<0.1),而Beta多样性分析显示SR处理土壤真菌群落与对照显著不同(P<0.05)。同对照比较,SR处理21个属(8.7%)丰度发生显著性改变(P<0.1),包括核盘菌属在内的17个属显著增加,倍数变化(FC)在0.09~7.76之间,而源杯梗孢属等4个属丰度则显著下降,FC在-1.6^-5.3之间。SR处理中编码与纤维素分解相关酶的基因,包括纤维素分解酶、纤维二糖脱氢酶、葡聚糖1,3-beta-葡萄糖糖苷酶,其丰度在还田处理中有较大幅度增加,倍数变化在1.95~3.29之间,而与编码木质素分解酶相关基因,L-木酮糖还原酶基因丰度显著增加(P<0.05)、漆酶基因则小幅下降。综合结果表明,油菜秸秆还田有利于增加土壤真菌群落的丰度和多样性、促进土壤纤维素分解相关基因丰度增加,但土壤核盘菌数量也相应显著增加,提示有可能增加油菜菌核病发生风险。 展开更多
关键词 油菜秸秆还田 18S核糖体rna基因高通量测序 核盘菌 油菜菌核病 alpha多样性 秸秆分解相关基因
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DMN所致小鼠肝损伤模型中血清IL_18和肝脏Fas mRNA的表达 被引量:5
9
作者 柏淑禹 吴建成 王爱珍 《天津医药》 CAS 北大核心 2003年第12期786-788,共3页
目的 :观察二甲基亚硝胺 (DMN)诱导实验性肝损伤模型过程中 ,小鼠血清IL_18及肝脏FasmRNA表达的动态变化及其意义。方法 :以0 1 %DMN腹腔注射制备小鼠实验性肝损伤模型 ,以原位末端标记技术(TUNEL)检测肝组织细胞的凋亡 ,ELASA法测定血... 目的 :观察二甲基亚硝胺 (DMN)诱导实验性肝损伤模型过程中 ,小鼠血清IL_18及肝脏FasmRNA表达的动态变化及其意义。方法 :以0 1 %DMN腹腔注射制备小鼠实验性肝损伤模型 ,以原位末端标记技术(TUNEL)检测肝组织细胞的凋亡 ,ELASA法测定血清IL -18水平 ,半定量逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)检测肝组织FasmRNA的表达。结果 :第1次注射后2d ,即可见散在肝组织细胞凋亡 ,并不伴随明显的炎症和坏死。随着注射次数的增加 ,凋亡及炎症损伤并存且逐渐加重 ,血清IL -18及肝脏FasmRNA的表达水平皆随着肝损伤的加重而增强 ,均于第5次注射DMN后达到最高峰(P<0.01) ,恢复期内明显回落 ,且2者呈正相关趋势 (r=0.407,P<0.05)。结论 :DMN即可诱导肝脏细胞凋亡 ,又可诱导坏死 ,但凋亡在肝损伤的早期机制中更加重要。IL -18的促炎症效应和Fas系统的促凋亡效应之间存在正反馈途径。 展开更多
关键词 DMN 小鼠 肝损伤 动物模型 血清IL-18 肝脏Fasm rna表达 二甲基亚硝胺 白细胞介素18
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鸡组织滴虫病PCR病原学诊断方法的建立 被引量:6
10
作者 曲昌宝 王尚尚 +5 位作者 侯照峰 宿世杰 刘丹丹 曹李琴 陶建平 许金俊 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期160-163,共4页
为建立鸡组织滴虫(H.meleagridis)的PCR检测方法,本研究以确诊的感染火鸡组织滴虫的阳性鸡的肝组织DNA为模板,设计针对18S rRNA基因高度保守的特异性引物,建立组织滴虫病的PCR诊断方法。敏感性试验显示阳性样品组织DNA的最低检出限为4 ... 为建立鸡组织滴虫(H.meleagridis)的PCR检测方法,本研究以确诊的感染火鸡组织滴虫的阳性鸡的肝组织DNA为模板,设计针对18S rRNA基因高度保守的特异性引物,建立组织滴虫病的PCR诊断方法。敏感性试验显示阳性样品组织DNA的最低检出限为4 ng/μL。特异性试验表明与其他常见鸡寄生虫的DNA样品均无交叉反应。该PCR方法对临床样品的检出率为100%,与组织病理学诊断结果符合率为100%。该诊断方法敏感、特异,可以用于组织滴虫病的临床诊断。 展开更多
关键词 火鸡组织滴虫 18S核糖体rna基因 PCR 诊断
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西部喙缘蝽的形态和分子生物学鉴定 被引量:1
11
作者 马如玉 潘涛 +4 位作者 王婷婷 林晨 荣书利 王子豪 王俊平 《西部林业科学》 CAS 北大核心 2023年第2期175-179,共5页
西部喙缘蝽为山东省黑松上的新记录种。为明确山东省威海市和青岛市黑松上发现的一种缘蝽科昆虫的类别,采用形态学和分子生物学方法[线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)和核糖体小亚基18S rRNA基因序列进行系统发育关系分析]对该昆虫进... 西部喙缘蝽为山东省黑松上的新记录种。为明确山东省威海市和青岛市黑松上发现的一种缘蝽科昆虫的类别,采用形态学和分子生物学方法[线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)和核糖体小亚基18S rRNA基因序列进行系统发育关系分析]对该昆虫进行鉴定。结果显示:(1)该昆虫体长15~20 mm,体宽5~7 mm,红棕色;前胸背板棕色;后足腿节膨大,胫节极度膨大;前翅中部具横向“之”字形白纹。(2)基于COⅠ基因和18S rRNA基因的系统发育树显示该虫与西部喙缘蝽(Leptoglossus occidentalis Heidemann, 1910)在同一分支上。基于形态学和分子生物学鉴定该昆虫为西部喙缘蝽。研究结果为西部喙缘蝽属昆虫的分类和鉴定提供参考。 展开更多
关键词 西部喙缘蝽 形态学特征 分子生物学鉴定 核糖体18S rrna COⅠ基因
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基于18 S rRNA的鸡组织滴虫病PCR诊断方法的建立 被引量:5
12
作者 肖跃强 魏凤 +4 位作者 赵蕾 宋峰 于新友 张文通 沈志强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第6期88-90,共3页
河南某鸡场约4周龄鸡疑似发生鸡组织滴虫病。根据鸡组织滴虫18 S rRNA序列设计引物,提取肝脏、盲肠内容物寄生虫DNA,采用PCR方法检测。结果表明,PCR扩增到与预期大小一致的产物,经测序比对,证实为鸡组织滴虫感染。所建立的PCR方法具有... 河南某鸡场约4周龄鸡疑似发生鸡组织滴虫病。根据鸡组织滴虫18 S rRNA序列设计引物,提取肝脏、盲肠内容物寄生虫DNA,采用PCR方法检测。结果表明,PCR扩增到与预期大小一致的产物,经测序比对,证实为鸡组织滴虫感染。所建立的PCR方法具有灵敏、特异、快速等优点,不仅能用于鸡组织滴虫病临床诊断,还能用于开展流行病学研究。 展开更多
关键词 组织滴虫 18 S rrna PCR
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一步法实时荧光RT-PCR在疟原虫检测中的应用
13
作者 何丽润 曾华颖 +5 位作者 郑夔 戴俊 师永霞 孙芳芳 杨可航 蔡扬尧 《中国口岸科学技术》 2023年第3期20-24,共5页
本研究探讨了用一步法实时荧光RT-PCR检测疟原虫核酸的可行性。分别用一步法实时荧光RT-PCR和实时荧光PCR两种扩增方法对不同稀释度的样本总RNA和基因组DNA进行检测,同时对20份疟原虫阳性血样进行检测。结果显示,一步法实时荧光RT-PCR... 本研究探讨了用一步法实时荧光RT-PCR检测疟原虫核酸的可行性。分别用一步法实时荧光RT-PCR和实时荧光PCR两种扩增方法对不同稀释度的样本总RNA和基因组DNA进行检测,同时对20份疟原虫阳性血样进行检测。结果显示,一步法实时荧光RT-PCR可检测到的稀释度最高,比实时荧光PCR高1000倍。运用一步法实时荧光RT-PCR方法检测出20份全部阳性样本,检出率为100%;实时荧光PCR方法检测出18份阳性样本,检出率为90%。结果表明,一步法实时荧光RT-PCR方法用于疟原虫检测比实时荧光PCR方法更具有优势,敏感性更强,准确性更高。 展开更多
关键词 疟原虫 荧光定量PCR法 18S rrna
原文传递
荧光定量PCR技术检测疟原虫方法初探 被引量:3
14
作者 邵雷 朱姗姗 +3 位作者 胡文佳 蒋昵真 陈妍 林红 《中国输血杂志》 CAS 2020年第11期1144-1147,共4页
目的探索荧光定量PCR技术在献血者疟原虫检测中的应用。方法参照文献设计针对疟原虫18S小亚基核糖体RNA (18S rRNA)基因序列的通用引物和探针并构建标准质粒;将标准质粒和4种疟原虫阳性标本进行梯度倍比稀释后进行荧光定量PCR检测,建立... 目的探索荧光定量PCR技术在献血者疟原虫检测中的应用。方法参照文献设计针对疟原虫18S小亚基核糖体RNA (18S rRNA)基因序列的通用引物和探针并构建标准质粒;将标准质粒和4种疟原虫阳性标本进行梯度倍比稀释后进行荧光定量PCR检测,建立符合本实验室条件的实验体系,与巢式PCR方法进行灵敏度比较,并对47例献血者进行疟原虫筛查。结果应用荧光定量PCR技术检测标准质粒的检测下限是10-1copy/μL,用于恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)、间日疟原虫(P.vivax)、三日疟原虫(P.malaria)和卵形疟原虫(P.ovale)阳性标本检测,其下限均为1 copy/μL,且整个PCR程序仅用时1 h 59 min;应用荧光定量PCR技术检测47例献血者全血标本,均为阴性;应用巢式PCR技术检测间日疟原虫和三日疟原虫的检测下限为102copy/μL,检测灵敏度明显低于荧光定量PCR检测方法。结论荧光定量PCR检测方法具有操作简单、快速、灵敏、经济等特点,通过针对本实验室的特定实验优化,更加适用于献血者疟原虫的快速大量筛查。 展开更多
关键词 疟原虫 荧光定量PCR 18S核糖体rna 巢式PCR 献血者
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重组酶介导等温扩增技术检测疟原虫方法的建立和评价 被引量:3
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作者 邵雷 赵松 +3 位作者 刘燕红 应清界 杨坤 林红 《中国热带医学》 CAS 2022年第7期617-622,共6页
目的 建立一种重组酶介导等温扩增技术(RAA)检测疟原虫的方法。方法 针对疟原虫属保守18S小亚基核糖体RNA(18S rRNA)基因设计特异性引物,筛选确定最佳引物对组合并建立疟原虫重组酶介导核酸等温扩增体系。通过该RAA体系检测疟原虫标准... 目的 建立一种重组酶介导等温扩增技术(RAA)检测疟原虫的方法。方法 针对疟原虫属保守18S小亚基核糖体RNA(18S rRNA)基因设计特异性引物,筛选确定最佳引物对组合并建立疟原虫重组酶介导核酸等温扩增体系。通过该RAA体系检测疟原虫标准质粒、4种疟原虫[恶性疟原虫(Plasmodium falciparum, P.f)、间日疟原虫(P. vivax,P.v)、三日疟原虫(P. malaria, P.m)、卵形疟原虫(P. ovale, Po)]病原体以及其他6种输血传播寄生虫(婴儿利士曼原虫、杜氏利士曼原虫、刚地弓形虫、溶组织阿米巴虫、犬吉氏巴贝西虫、田鼠巴贝虫),以评估该体系的灵敏度和特异度。结果 筛选出一组扩增效果较好的引物对,整个RAA体系使用最佳引物对在37℃,20 min即可完成扩增,对标准质粒的检测下限为10-2copies/μL,恶性疟原虫、间日疟原虫和卵形疟原虫为102copies/μL,三日疟原虫为10 copies/μL。RAA检测体系未与其他输血传播寄生虫产生交叉反应,特异性良好。应用RAA方法检测外籍学生献血者标本,结果与荧光定量PCR结果一致。结论 成功建立了一种快速、简便和特异的疟原虫RAA检测方法,将会给血液筛查和一些基层偏远医院的临床检测提供很大帮助。 展开更多
关键词 疟原虫 重组酶介导等温扩增 18S核糖体rna 分子诊断
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基于18S rRNA和线粒体16S rRNA基因序列的柳蚕进化分析 被引量:2
16
作者 朱保建 刘朝良 +2 位作者 曹甲 李旭全 魏国清 《昆虫知识》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期285-292,共8页
为探讨柳蚕Actias selene Hübner与鳞翅目昆虫的系统发育关系,本研究利用PCR扩增获得了柳蚕核糖体18S rRNA和线粒体16S rRNA基因的部分序列,长度分别为391bp和428bp。并采用邻近距离法(NJ)、最大简约法(MP)、类平均聚类法(UPGMA)... 为探讨柳蚕Actias selene Hübner与鳞翅目昆虫的系统发育关系,本研究利用PCR扩增获得了柳蚕核糖体18S rRNA和线粒体16S rRNA基因的部分序列,长度分别为391bp和428bp。并采用邻近距离法(NJ)、最大简约法(MP)、类平均聚类法(UPGMA)构建系统进化树。结果表明,柳蚕线粒体16SrRNA基因序列与大蚕蛾科昆虫的16SrRNA基因序列均表现出偏好于碱基AT的倾向。柳蚕与所研究的其它蚕类的遗传距离介于0.016至0.140之间,其中与温带柞蚕Antheraea roylii的遗传距离最小,与野桑蚕Bombyx mandarina的遗传距离最大。而基于鳞翅目昆虫18S rRNA基因部分序列的进化分析显示,柳蚕与柞蚕Antheraea pernyi之间的遗传距离最小(0.010),与蓖麻蚕Samia ricini的遗传距离最大(0.017)。 展开更多
关键词 柳蚕 核糖体18S rna 线粒体16S Rrna 进化分析
原文传递
湖南省湘西自治州黄牛泰勒虫分子流行病学调查 被引量:1
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作者 李晖 侯强红 +4 位作者 汤国祥 吴阳祥 张大军 赵俊龙 宋金秋 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期183-186,共4页
目的了解湖南省湘西自治州黄牛泰勒虫感染率和遗传变异。方法2018年8月至2019年8月,从湘西自治州凤凰县、花垣县和保靖县采集184份黄牛血液样品,用基于泰勒虫属18S核糖体RNA(18S r RNA)基因的PCR方法对所有血液样品进行检测。将部分阳... 目的了解湖南省湘西自治州黄牛泰勒虫感染率和遗传变异。方法2018年8月至2019年8月,从湘西自治州凤凰县、花垣县和保靖县采集184份黄牛血液样品,用基于泰勒虫属18S核糖体RNA(18S r RNA)基因的PCR方法对所有血液样品进行检测。将部分阳性产物基因序列与GenBank数据库中收录的相应虫株序列进行同源性比对,以卵形疟原虫18S rRNA基因作为外群构建种系发育树。结果共143份血液样品检测为泰勒虫阳性,平均检出率为77.7%。凤凰县、花垣县和保靖县黄牛血液样品均检出泰勒虫,检出率分别为85.0%、88.3%和61.0%;湘西黄牛和普通黄牛泰勒虫检出率分别为77.2%和79.5%(χ^(2)=0.08,P>0.05);舍饲牛群与散养牛群检出率分别为68.9%和89.7%(χ^(2)=22.36,P<0.01)。随机挑选18个PCR阳性样品进行测序与序列分析,发现所有样品与已知吕氏泰勒虫分离株同源性超过99.0%;系统进化树分析发现18个样品与吕氏泰勒虫聚为同一分支,但与其他虫株所属分支相隔较远。结论湖南省湘西地区黄牛泰勒虫感染率较高,吕氏泰勒虫可能为优势虫种。 展开更多
关键词 吕氏泰勒虫 18S核糖体rna 分子流行病学 黄牛 湘西自治州
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山羊腔阔盘吸虫的形态学观察和分子鉴定 被引量:3
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作者 张卫兴 王龙 +5 位作者 田守龙 张炳顺 梁楚瑶 黄福强 刘全 张浩吉 《动物医学进展》 北大核心 2019年第2期34-38,共5页
为了从形态学和分子水平对山羊腔阔盘吸虫(Eurytrema coelomaticum)的种类鉴定提供依据,对采集自广东佛山发病山羊胰脏的阔盘吸虫在形态学观察的基础上,抽提虫体基因组DNA,通过PCR方法对虫体核糖体18SrRNA基因和线粒体cox1基因进行扩增... 为了从形态学和分子水平对山羊腔阔盘吸虫(Eurytrema coelomaticum)的种类鉴定提供依据,对采集自广东佛山发病山羊胰脏的阔盘吸虫在形态学观察的基础上,抽提虫体基因组DNA,通过PCR方法对虫体核糖体18SrRNA基因和线粒体cox1基因进行扩增,将产物与pMD18-T载体连接,转化到大肠埃希菌DH5α感受态细胞进行克隆、测序和序列分析。结果获得虫体18SrRNA基因的大小为1 922bp,线粒体cox 1基因大小为444bp。序列分析显示,获得的18SrRNA基因与GenBank收录的腔阔盘吸虫(E.coelomaticum,登录号为DQ401035)同源性高达99%;线粒体cox1基因与GenBank收录的胰阔盘吸虫(E.pancreaticum,登录号为KC535544)的同源性仅为90%。研究结果从分子水平证明采集自广东佛山山羊体的阔盘吸虫为腔阔盘吸虫(E.coelomaticum),对山羊阔盘吸虫病的防控有指导意义。 展开更多
关键词 山羊 腔阔盘吸虫 18S核糖体rna基因 细胞色素C氧化酶第1亚基基因 序列分析
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一株高效降解青霉素菌的筛选及鉴定 被引量:2
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作者 王礼君 冯丽妍 +1 位作者 徐建中 张伟国 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期89-94,共6页
从青霉素生产企业附近的土壤中筛选出耐受青霉素钠质量浓度为20 g/L的菌株,利用高效液相色谱法筛选到一株高效降解青霉素钠的菌株Anti-Pen20。根据菌落及菌体形态特征和基于18S r RNA基因序列的分析鉴定,结果表明,菌株Anti-Pen20属粘质... 从青霉素生产企业附近的土壤中筛选出耐受青霉素钠质量浓度为20 g/L的菌株,利用高效液相色谱法筛选到一株高效降解青霉素钠的菌株Anti-Pen20。根据菌落及菌体形态特征和基于18S r RNA基因序列的分析鉴定,结果表明,菌株Anti-Pen20属粘质红酵母属(Rhodotorula mucilaginosa)。当菌株Anti-Pen20的接种体积分数为15%、青霉素钠初始质量浓度为20 g/L时,30℃恒温培养24 h,对青霉素钠的降解率可达到85%。菌株Anti-Pen20在高质量浓度的青霉素钠培养基中表现出高效的降解率,有望应用于高质量浓度青霉素钠菌渣的处理回收,为AntiPen20在动物饲料添加剂以及果业中作为防病变添加剂的应用提供研究依据。 展开更多
关键词 青霉素钠 粘质红酵母 18S rrna 菌株鉴定 高效降解
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海链藻目核糖体RNA基因片段的扩增及多样性分析 被引量:1
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作者 李海涛 杨官品 刘永健 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期40-44,共5页
海链藻目(Thalassiosirales)的海链藻属(Thalassiosira)和骨条藻属(Skeletonema)微藻是形成春季赤潮的主要种类。为利用分子生物学方法分析表层海水主要赤潮形成藻的动态变化、快速鉴定赤潮形成藻种,设计了海链藻目特异引物,扩增了胶州... 海链藻目(Thalassiosirales)的海链藻属(Thalassiosira)和骨条藻属(Skeletonema)微藻是形成春季赤潮的主要种类。为利用分子生物学方法分析表层海水主要赤潮形成藻的动态变化、快速鉴定赤潮形成藻种,设计了海链藻目特异引物,扩增了胶州湾近岸表层海水海链藻目18S核糖体RNA基因片断。随机测定10个序列,其中4个与海链藻属的Thalassiosi-ra concaviuscula的完全相同,其余的可确定属于海链藻属。表明该引物对能选择性地扩增海链藻目18S核糖体RNA基因片断。 展开更多
关键词 海链藻目(Thalassiosirales) 18S核糖体rna基因 多样性
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