依鲁替尼与达沙替尼对急性淋巴细胞白血病细胞增殖的抑制及其机制实验研究 被引量：5

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作者 邓媛 陶善东 +5 位作者 张欣 马晶晶 何正梅 陈月 邓之奎 于亮 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期72-79,共8页

目的:研究Btk抑制剂PCI-32765(依鲁替尼)和酪氨酸激酶Bcr-abl抑制剂Dasatinib(达沙替尼)对急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞(Sup-B15、RS4;11)增殖、凋亡的影响,为其用于Ph+和Ph-ALL靶向治疗提供实验依据。方法:PCI-32765和Dasatinib单药及... 目的:研究Btk抑制剂PCI-32765(依鲁替尼)和酪氨酸激酶Bcr-abl抑制剂Dasatinib(达沙替尼)对急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞(Sup-B15、RS4;11)增殖、凋亡的影响,为其用于Ph+和Ph-ALL靶向治疗提供实验依据。方法:PCI-32765和Dasatinib单药及联合用药处理Sup-B15与RS4;11细胞后,用CCK-8法检测细胞的凋亡,刘氏染色法观察对细胞形态变化,Western blot法检测PCI-32765和Dasatinib对Btk上下游信号分子表达及活性的影响。结果:PCI-32765对RS4;11和Sup-B15细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性,Sup-B15细胞对其敏感性高于RS4;11,IC_(50)值分别为3和8μmol/L(P<0.05)。Dasatinib对RS4;11和Sup-B15细胞的增殖抑制作用也呈剂量依赖性,IC50值分别为5μmol/L和5 nmol/L,相差1 000倍(P<0.01)。Dasatinib与PCI-32765联用后,增殖抑制作用明显增强(P<0.05)。PCI-32765和Dasatinib分别作用RS4;11和Sup-B15细胞8、12、24、36、48和72 h,PCI-32765与Dasatinib单药组及联合用药组的细胞存活率均逐渐降低,且两药具有协同作用,呈时间依赖性。PCI-32765或/和Dasatinib处理的RS4;11和Sup-B15细胞体积缩小,细胞质密度增加,核固缩、核偏位、核碎裂,但小剂量Dasatinib单药对RS4;11细胞凋亡促进不明显,联合用药组凋亡细胞增多。PCI-32765或/和Dasatinib处理SupB15细胞BCR-ABL、Btk、Lyn、Src表达水平及活性均降低,与药物浓度呈正相关;RS4;11细胞Btk、Lyn、Src表达水平及活性均降低,与药物浓度呈正相关。结论:PCI-32765或Dasatinib均可明显抑制Sup-B15和RS4;11细胞增殖,诱导其凋亡,且有协同作用。其作用机制可能与通过活化B细胞受体(B cell receptor,BCR)信号通路、促进细胞凋亡有关。 展开更多

关键词 急性淋巴细胞白血病 依鲁替尼 达沙替尼 Sup-B15细胞 RS4 11细胞

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Akt特异性抑制剂MK2206诱导U937及RS4;11细胞凋亡及其机制 被引量：4

2

作者 周俊 曹江 +2 位作者 孟凡静 冯浩 徐开林 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期627-632,共6页

目的:本研究探讨Akt激酶抑制剂MK2206对U937及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法:以不同浓度MK2206处理U937及RS4;11细胞24、48 h,用CCK-8法绘制细胞增殖曲线;Annexin V/7-氨基放线菌素D(7-AAD)双标记法分析细... 目的:本研究探讨Akt激酶抑制剂MK2206对U937及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法:以不同浓度MK2206处理U937及RS4;11细胞24、48 h,用CCK-8法绘制细胞增殖曲线;Annexin V/7-氨基放线菌素D(7-AAD)双标记法分析细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞周期的变化;实时定量PCR检测Bax、Bcl-2、XIAP、CDK1、caspase-3基因mRNA表达的变化。结果:MK2206对U937及RS4;11细胞增殖具有抑制作用,且抑制效应呈一定的时间和剂量依赖性,U937细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.48±0.15)和(0.09±0.01)μmol/L,RS4;11细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.91±0.02)和(0.68±0.11)μmol/L。0.5μmol/L MK2206作用于U937细胞及1.0μmol/L MK2206作用于RS4;11细胞24 h、48 h,Annexin V/7-AAD标记的阳性细胞升高,U937细胞组24 h细胞凋亡率为(4.18±0.70)%,48 h细胞凋亡率为(22.53±4.67)%,均高于对照组的(1.35±0.34)%(P<0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P<0.05);RS4;11细胞组24 h和48 h细胞凋亡率分别为(5.74±0.58)%和(10.07±1.24)%,均高于对照组的(1.32±0.31)%(P<0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P<0.05)。流式细胞术检测细胞周期结果显示,U937细胞组G2/M期细胞比例为(96.78±9.11)%,高于对照组的(9.64±0.91)%(P<0.05);RS4;11细胞组G2/M期细胞比例为(14.19±3.82)%,高于对照组的(5.75±1.28)%(P<0.05)。荧光定量PCR检测结果示,两种细胞中Bax、caspase-3 mRNA相对表达水平升高,而Bcl-2、XIAP表达水平降低,同时伴CDK1 mRNA水平的减少,与各自对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MK2206能有效抑制U937及RS4;11细胞增殖及促进细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G2/M期,其促凋亡机制与上调Bax与caspase-3基因表达、下调Bcl-2与XIAP基因表达有关,细胞周期G2/M期阻滞与CDK1基因表达水平下降有关。 展开更多

关键词 MK2206 白血病 U937细胞 RS4 11细胞 细胞凋亡

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溴结构域蛋白4抑制剂GSK525762A对急性B淋巴细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响及可能机制 被引量：4

3

作者 王缦 陈翀 +5 位作者 徐杰 王力 宋旭光 张焕新 曾令宇 徐开林 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期528-532,共5页

目的 探究溴结构域蛋白4（BRD4）抑制剂对急性B淋巴细胞白血病细胞生物学行为的影响及可能机制.方法 用BRD4抑制剂GSK525762A抑制急性B淋巴细胞白血病细胞株RS4; 11细胞BRD4活性,并以急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat细胞作对照.采用CC... 目的 探究溴结构域蛋白4（BRD4）抑制剂对急性B淋巴细胞白血病细胞生物学行为的影响及可能机制.方法 用BRD4抑制剂GSK525762A抑制急性B淋巴细胞白血病细胞株RS4; 11细胞BRD4活性,并以急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat细胞作对照.采用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;用Annexin Ⅴ/7-AAD标记,流式细胞术检测细胞凋亡;荧光定量PCR检测抗凋亡基因c-myc、Bcl-2、CDK6和促凋亡基因Bad、Bak、Bax的转录水平;Western blot检测Bcl-2及Bak蛋白的表达.结果 不同浓度GSK525762A对RS4; 11细胞增殖均有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,作用48、72 h其半数抑制率分别为6.174和1.996 μmol/L.与DMSO处理组比较,GSK525762A处理后RS4; 11细胞c-myc、Bcl-2、CDK6mRNA转录水平降低,而Bad、Bak、Bax mRNA转录水平升高,且Bcl-2蛋白表达水平下调,Bak蛋白表达水平上调.而GSK525762A对Jurkat细胞的增殖抑制作用并不明显.结论 GSK525762A可抑制RS4; 11细胞的增殖,并促进其凋亡;该作用可能通过下调Bcl-2表达,诱导白血病细胞凋亡而实现的. 展开更多

关键词 溴结构域蛋白4抑制剂 RS4 11细胞 细胞增殖

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26S蛋白酶抑制剂b-AP15对Jurkat及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响及凋亡机制的研究

4

作者 周俊 曹江 +2 位作者 孟凡静 冯浩 徐开林 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2015年第3期185-191,共7页

目的 探讨26S蛋白酶抑制剂b-AP15对Jurkat细胞与RS4;11细胞增殖及细胞凋亡的影响,并分析其作用机制.方法 无菌条件下对Jurkat细胞与RS4;11细胞进行培养,根据有无b-AP15处理,将其分为4组：①Jurkat细胞实验组;②Jurkat细胞对照组;③RS4;1... 目的 探讨26S蛋白酶抑制剂b-AP15对Jurkat细胞与RS4;11细胞增殖及细胞凋亡的影响,并分析其作用机制.方法 无菌条件下对Jurkat细胞与RS4;11细胞进行培养,根据有无b-AP15处理,将其分为4组：①Jurkat细胞实验组;②Jurkat细胞对照组;③RS4;11细胞实验组;④RS4;11细胞对照组.其中,Jurkat细胞实验组与RS4;11细胞实验组采用浓度分别为0.05,0.10,0.50,1.00,5.00 μmol/L b-AP15处理24,48 h;Jurkat细胞对照组与RS4;11细胞对照组采用RPMI 1640培养基进行同步培养.采用CCK-8法绘制4组细胞增殖曲线;采用Annexin Ⅴ-别藻蓝蛋白（APC）/7-氨基放线菌素D（7-AAD）双标记流式细胞术检查4组细胞凋亡情况;采用流式细胞术检测细胞4组细胞周期分布情况;采用实时定量PCR检测4组细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2相关Ⅹ蛋白（Bax）基因、B细胞淋巴瘤/白血病（Bcl）-2基因、Ⅹ连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）、周期素依赖性激酶（CDK）1基因及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）-3基因mRNA表达水平.结果 ①b-AP15对Jurkat细胞与RS4;11细胞增殖均具有抑制作用,且该抑制效应呈时间与剂量依赖性;Jurkat细胞经b-AP15处理24,48 h后,半数抑制浓度（IC50）分别为（1.52±0.35）μmol/L与（0.54±0.01） μmol/L,RS4;11细胞经b-AP15处理24,48 h后IC50分别为（0.97±0.02）μmol/L与（0.08±0.03）μmol/L.②使用浓度为1.5 μmol/L b-AP15处理Jurkat细胞实验组后,其与Jurkat细胞对照组相比细胞凋亡率显著增高,且差异有统计学意义（P＜0.001）;使用浓度为1.0 μmol/Lb AP15处理RS4;11细胞实验组后,其与RS4;11细胞对照组相比细胞凋亡率亦显著增加,且差异亦有统计学意义（P＜0.001）;且Jurkat细胞与RS4;11细胞经b-AP15处理48 h后,与处理24 h后者相比细胞凋亡率增高,且差异均有统计学意义（t=11.887,7.449;P＜0.001）.③与Jurkat细胞对照组相比,使用浓度为1.5 μmol/L b-AP15处理Jurkat细胞实验组24 h后,Jurkat细胞周 展开更多

关键词 蛋白酶抑制药 细胞增殖 细胞凋亡 细胞周期 JURKAT细胞 RS4 11细胞 b-AP15

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广藿香醇通过PKM2和NF-κB诱导MV4-11细胞凋亡相关机制 被引量：17

5

作者 杨雨婷 何贝轩 +3 位作者 何育霖 彭成 熊亮 曹治兴 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期99-103,共5页

目的:探讨广藿香醇(PA)诱导MV4-11细胞凋亡,并探讨其可能存在的相关活性。方法:采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测PA对人结、直肠癌细胞HCT116,人肝癌细胞Hep G-2,人肺癌细胞A549,人急性淋巴髓单核细胞白血病细胞MV4-11,人皮肤黑色素... 目的:探讨广藿香醇(PA)诱导MV4-11细胞凋亡,并探讨其可能存在的相关活性。方法:采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测PA对人结、直肠癌细胞HCT116,人肝癌细胞Hep G-2,人肺癌细胞A549,人急性淋巴髓单核细胞白血病细胞MV4-11,人皮肤黑色素瘤细胞A375,小鼠乳腺癌细胞4T1,人单核细胞型淋巴瘤细胞THP-1,人正常胚肾293A细胞的增殖抑制作用;采用Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态学变化;通过Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染法并应用流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化M2型丙酮酸激酶(p-PKM2),核转录因子-κB(NF-κB),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)凋亡蛋白的表达。结果:PA能抑制人HCT116,Hep G-2,A549,MV4-11,A375,4T1,THP-1,293A细胞的增殖,半抑制浓度(IC50)分别为0.26,0.32,0.28,0.09,0.37,0.23,0.24,0.33 mmol·L-1;作用于MV4-11细胞24 h后可使细胞核皱缩,染色质凝聚,形成明显的凋亡小体。0.1,0.2,0.5 mmol·L-1PA能诱导MV4-11细胞凋亡,凋亡率分别为7.9%,13.6%,22.0%,与溶剂组比较,结果具有统计学差异(P<0.05);Western blot检测显示,PA使细胞NF-κB,p-PKM2,Caspase-3蛋白表达发生明显改变(P<0.05)。结论:PA能抑制人白血病细胞MV4-11细胞的增殖,并诱导其发生凋亡,作用机制可能与NF-κB,p-PKM2,Caspase-3蛋白量的改变有关。 展开更多

关键词 广藿香醇 凋亡 人白血病MV4-11细胞 增殖

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枸杞多糖的分离纯化及其体外抗增殖和抗炎活性分析 被引量：7

6

作者 乔西凤 马丛伟 +6 位作者 张颖 林展乐 黄菁霞 林丽 张勇民 杨宜婷 杜志云 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2023年第2期125-134,共10页

研究不同枸杞(Lyciumbarbarum,Gouqi,GQ)多糖组分对苯甲酸雌二醇(Estradiol,E2)及黄体酮(Progesterone,P)联合诱导小鼠乳腺上皮细胞(HC11细胞)增殖的抑制作用的影响。通过水提醇沉及柱分离法获得不同组分;并对其分子量及体外抗增殖、抗... 研究不同枸杞(Lyciumbarbarum,Gouqi,GQ)多糖组分对苯甲酸雌二醇(Estradiol,E2)及黄体酮(Progesterone,P)联合诱导小鼠乳腺上皮细胞(HC11细胞)增殖的抑制作用的影响。通过水提醇沉及柱分离法获得不同组分;并对其分子量及体外抗增殖、抗炎症作用进行初步分析。结果显示,枸杞粗多糖通过DEAE-52离子色谱柱和Sephadex G-50凝胶柱洗脱出7种多糖组分,分别为GQ-01、GQ-02、GQ-03、GQ-04、GQ-05、GQ-06、GQ-07,其平均相对分子量分别为113 ku、<1 ku、367 ku、613 ku、81 ku、110 ku、<1 ku。选用不同浓度枸杞多糖(5、25、125、250、500、1000μg/mL)处理HC11细胞,发现250μg/mL(GQ-01、GQ-04及GQ-06)可显著抑制E2(25μg/mL)+P(250μg/mL)联合诱导的HC11细胞增殖活性,分别降低了28.13%、26.74%、30.83%(P<0.01);GQ-01及GQ-06可调节G0/G1与G2/M期转变而影响细胞周期的分布;与模型组相比,GQ-06可极显著抑制E2+P联合诱导雌激素受体(ERα)水平,降低了5.54%(P<0.01);GQ-04及GQ-06可显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞的NO水平的产生,与模型组相比NO水平分别降低了13.43%、12.65%(P<0.05)。该研究表明,GQ-06可能通过影响细胞周期分布及抑制ERα的水平,从而抑制乳腺上皮细胞过度增殖;此外,还可抑制LPS诱导RAW364.7细胞中NO的释放,降低细胞的炎症反应。该研究将为功能性食品深度开发提供重要的理论依据。 展开更多

关键词 枸杞多糖 小鼠乳腺上皮细胞(HC11细胞) 细胞周期 雌激素受体(ERα) 一氧化氮(NO)

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地西他滨联合三氧化二砷对急性髓系白血病MV4-11细胞增殖和凋亡的影响 被引量：8

7

作者 陈思思 赵彦平 +2 位作者 吴文忠 马铁梁 陈苏宁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1343-1347,共5页

目的:探讨地西他滨(DAC)单用或联合三氧化二砷(As2O3)对人类急性髓系白血病(AML)MV4-11细胞的增殖和凋亡的影响,为寻找治疗MLL重排的AML的有效方法提供实验依据。方法:应用CCK8法检测DAC和As2O3单药对MV4-11细胞增殖的抑制情况,以低于50... 目的:探讨地西他滨(DAC)单用或联合三氧化二砷(As2O3)对人类急性髓系白血病(AML)MV4-11细胞的增殖和凋亡的影响,为寻找治疗MLL重排的AML的有效方法提供实验依据。方法:应用CCK8法检测DAC和As2O3单药对MV4-11细胞增殖的抑制情况,以低于50%抑制浓度(IC_(50))的DAC与低于20%抑制浓度(IC_(20))的AS_2O_3联合用药,检测联合用药对MV4-11细胞增殖时的抑制情况。用流式细胞术检测两药单用及联合应用时M V4-11细胞的凋亡情况。结果:DAC和AS_2O_3单独用药时,随着药物浓度的增加对MV4-11细胞的增殖抑制作用逐渐增强(P<0.01)。DAC和As_2O_3对MV4-11细胞的IC_(50)分别为2.409和2.364μmol/L。与DAC单独用药比较,低于(IC_(50))值各浓度(0.01、0.1、0.5、1μmol/L)DAC与As_2O_3(0.25μmol/L)分别联合用药,对MV4-11细胞增殖抑制率均明显升高(P<0.05)。DAC(5.0μmol/L)作用MV4-11细胞48 h的凋亡率为13.50%±1.87%,As_2O_3(2μmol/L)作用MV4-11细胞48 h的凋亡率为12.60%±2.33%,两药联合采用的凋亡率增高为51.13%±4.97%。结论:DAC和As_2O_3能显著抑制MV4-11细胞增殖并诱导其凋亡,两药联合应用对MV4-11细胞增殖抑制及诱导凋亡有协同作用。 展开更多

关键词 急性白血病 地西他滨 三氧化二砷 MV4-11细胞 细胞凋亡

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青蒿琥酯联合硼替佐米对急性髓系白血病细胞体外凋亡、自噬的影响及其作用机制 被引量：7

8

作者 胡莲洁 姜涛 +3 位作者 王甫珏 黄世华 成晓敏 贾永前 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期204-208,共5页

目的探讨青蒿琥酯联合硼替佐米对急性髓系白血病(AML)细胞株MV4-11细胞增殖、凋亡及自噬的影响及其作用机制。方法 MTT法检测青蒿琥酯、硼替佐米单用及两药联合对MV4-11细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法... 目的探讨青蒿琥酯联合硼替佐米对急性髓系白血病(AML)细胞株MV4-11细胞增殖、凋亡及自噬的影响及其作用机制。方法 MTT法检测青蒿琥酯、硼替佐米单用及两药联合对MV4-11细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞内Bcl-2家族蛋白(Bcl-2、Mcl-1、Bim、Bax)、cleaved-Caspase-3及自噬相关蛋白LC3B的表达。结果青蒿琥酯呈浓度和时间依赖性抑制MV4-11细胞增殖,作用48 h的IC50为1.44 μg/ml。硼替佐米呈浓度依赖性抑制MV4-11细胞增殖,作用48 h的IC50为8.97 nmol/L。青蒿琥酯(0.75、1.0 μg/ml)与硼替佐米(6、8 nmol/L)联合作用48 h,对MV4-11细胞的增殖抑制率均高于单药组(P值均<0.05),两药相互作用的协同指数(CI)均<1。1.5 μg/ml青蒿琥酯作用MV4-11细胞48 h的凋亡率为(15.27±2.18)%,8 nmol/L硼替佐米作用MV4-11细胞48 h的凋亡率为(19.85±3.23)%,两药联合作用后凋亡率增高至(81.67±5.96)%,显著高于单药组(P值均<0.05)。两药联合作用MV4-11细胞24 h后细胞内cleaved-Caspase-3、促凋亡蛋白Bim及自噬相关蛋白LC3B表达上调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调。结论青蒿琥酯联合硼替佐米具有协同抑制MV4-11细胞增殖和诱导凋亡及促进自噬的效应,作用机制可能与Bcl-2家族蛋白表达的改变有关。 展开更多

关键词 白血病 髓样 急性 青蒿琥酯 硼替佐米 MV4-11细胞 BCL-2家族蛋白

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木香挥发油诱导人白血病细胞MV4-11凋亡及其作用机制的探讨 被引量：6

9

作者 杨雨婷 何育霖 +3 位作者 何贝轩 熊亮 曹治兴 彭成 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第19期95-99,共5页

目的:以人急性髓性白血病MV4-11细胞为研究对象,探讨木香挥发油对MV4-11细胞增殖与凋亡抑制作用及其作用机制。方法:以质量浓度分别为3,6,12,25,50,100 mg·L^(-1)的木香挥发油作用于人急性髓性白血病MV4-11细胞不同时间,另设空白组... 目的:以人急性髓性白血病MV4-11细胞为研究对象,探讨木香挥发油对MV4-11细胞增殖与凋亡抑制作用及其作用机制。方法:以质量浓度分别为3,6,12,25,50,100 mg·L^(-1)的木香挥发油作用于人急性髓性白血病MV4-11细胞不同时间,另设空白组,采用噻唑蓝(MTT)法检测木香挥发油对其增殖抑制作用,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态学变化,Annexin V-FITC,PI双染及PI单染法应用流式细胞术检测细胞凋亡和周期,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测蛋白激酶B(AKT),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)凋亡蛋白的表达。结果:木香挥发油对MV4-11细胞的半抑制浓度(IC50)为13.33 mg·L^(-1);木香挥发油作用于MV4-11细胞24 h后可使细胞核皱缩,染色质凝聚,形成明显的凋亡小体;与空白组比较,木香挥发油G0/G1期和G2/M期细胞明显减少,S期细胞明显增多(P<0.05,P<0.01);与空白组比较,12,25,50,100,150 mg·L^(-1)木香挥发油能诱导MV4-11细胞凋亡(P<0.05);与空白组比较,25,50,100,150 mg·L^(-1)木香挥发油可抑制AKT的磷酸化,并促进Caspase-3蛋白的降解(P<0.05,P<0.01)。结论:木香挥发油能抑制人白血病细胞MV4-11细胞的增殖,其作用机制可能与抑制AKT活性进而诱导细胞凋亡效应有关。 展开更多

关键词 木香挥发油 凋亡 人白血病MV4-11细胞 增殖 蛋白激酶B 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3

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斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)病毒性神经坏死病毒的纯化分析及检测方法建立 被引量：5

10

作者 葛辉 吴丽云 +8 位作者 周宸 黄种持 吴建绍 郑乐云 林琪 杨求华 吴水清 王艺磊 林克冰 《渔业研究》 2019年第2期96-105,共10页

根据GenBank中已有的鱼类病毒性神经坏死病毒(NNV)RNA2基因序列,设计引物,从福建厦门具有典型NNV发病症状的斜带石斑鱼中克隆了RNA2基因的全长序列,并将序列提交到GenBank获得登录号为MF510920,命名为XMNNV。系统进化树分析结果表明XMNN... 根据GenBank中已有的鱼类病毒性神经坏死病毒(NNV)RNA2基因序列,设计引物,从福建厦门具有典型NNV发病症状的斜带石斑鱼中克隆了RNA2基因的全长序列,并将序列提交到GenBank获得登录号为MF510920,命名为XMNNV。系统进化树分析结果表明XMNNV与RGNNV聚类在一起,与SJNNV、BFNNV和TPNNV等其他鱼类神经坏死病毒亲缘关系较远,说明本研究分离得到的XMNNV属于RGNNV基因型。通过超速离心方法对病毒进行提纯,得到了纯化的NNV病毒。电镜观察结果表明,病毒粒子直径20～25 nm,结构为正二十面体,与已经报道的NNV结构一致。通过对XMNNV与其它RGNNV RNA2基因进行序列比对,在保守区设计引物,运用RT-PCR方法建立了RGNNV的PCR检测方法,该方法灵敏度高达67 copies/μL。纯化的病毒对E11(条纹月鳢细胞系)和大黄鱼肌肉细胞进行感染,结果表明该病毒可以感染这两种鱼类细胞。E11细胞被感染病毒后,细胞出现空泡化,并最终导致细胞分解死亡;大黄鱼肌肉细胞感染后,细胞变圆,慢慢从培养皿壁脱落,最终解体死亡。另外,对感染后细胞进行PCR检测,结果显示为阳性,进一步确定了分离的NNV具有感染这两种细胞的能力。本研究通过电镜观察和PCR检测两种方法确定了患病石斑鱼携带NNV,通过对两种鱼类细胞的感染实验,确定了该病毒具有一定的感染能力。综上,本研究为石斑鱼NNV疾病的诊断提供了有效的方法,对石斑鱼NNV疾病的预防具有一定的指导意义。 展开更多

关键词 斜带石斑鱼 神经坏死病毒 分离纯化 E11细胞系 大黄鱼肌肉细胞

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阿可拉定下调STAT5基因表达对急性髓性白血病发挥抗肿瘤作用 被引量：5

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作者 王骏 宣自学 +2 位作者 王珊珊 杨德宣 袁守军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期25-30,共6页

目的研究阿可拉定在体内外对急性髓性白血病(AML)的抗肿瘤作用及其对AML的重要靶点的影响。方法用MTT法测定阿可拉定在体外对MV-4-11细胞生长抑制作用,流式细胞分析不同浓度阿可拉定对MV-4-11细胞的凋亡和周期的影响,RT-PCR检测阿可拉定... 目的研究阿可拉定在体内外对急性髓性白血病(AML)的抗肿瘤作用及其对AML的重要靶点的影响。方法用MTT法测定阿可拉定在体外对MV-4-11细胞生长抑制作用,流式细胞分析不同浓度阿可拉定对MV-4-11细胞的凋亡和周期的影响,RT-PCR检测阿可拉定对FLT3和STAT5基因表达的影响,采用MV-4-11细胞NOD/SCID小鼠皮下移植瘤模型评价阿可拉定在体内抑制肿瘤生长的作用。结果MTT结果表明,阿可拉定能够明显抑制MV-4-11细胞生长,IC50为7.48μmol·L-1;在体外不同浓度的阿可拉定能够明显诱导MV-4-11细胞凋亡,使G0/G1期细胞比例升高且呈现浓度依赖性;体内实验表明,阿可拉定明显抑制荷瘤小鼠皮下瘤块的生长,且用药时间越早对控制肿瘤进展越有利。结论阿可拉定明显下调STAT5基因的表达,在体外能够明显抑制含FLT3-ITD突变体的MV-4-11细胞生长,在体内也表现出良好的抑制肿瘤生长的作用。 展开更多

关键词 阿可拉定 STAT5 FLT3 FLT3-ITD 急性髓性白血 病 MV-4-11细胞

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脂多糖对大鼠乳腺上皮细胞酪蛋白基因表达的影响 被引量：4

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作者 田青 SPITZER A J 赵凤启 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期3365-3373,共9页

本试验旨在探讨脂多糖(LPS)对大鼠乳腺上皮细胞中αs1-酪蛋白(CSN1S1)、β-酪蛋白(CSN2)和乳清蛋白(α-LA)3种主要酪蛋白基因表达的影响。采用单因素试验设计,用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法研究在催乳素诱导作用下,0、100、500、1000、5... 本试验旨在探讨脂多糖(LPS)对大鼠乳腺上皮细胞中αs1-酪蛋白(CSN1S1)、β-酪蛋白(CSN2)和乳清蛋白(α-LA)3种主要酪蛋白基因表达的影响。采用单因素试验设计,用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法研究在催乳素诱导作用下,0、100、500、1000、5000和25000 ng/mL的LPS作用于HC11细胞3和24 h对酪蛋白基因(CSN1S1、CSN2和α-LA)、葡萄糖转运因子1(GLUT1)、葡萄糖转运因子8(GLUT8)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达的影响。结果表明:不同剂量、不同作用时间的LPS作用于HC11细胞,均显著抑制了CSN2基因的表达;作用3 h时,500~1000 ng/mL的LPS显著增加了α-LA基因的表达量(P<0.05),作用24 h时,所有剂量的LPS均显著抑制了α-LA基因的表达(P<0.05);500~25000 ng/mL的LPS作用3 h时和所有剂量的LPS作用24 h时均显著增加了CSN1S1基因的表达量(P<0.05);LPS显著增加了TNF-α基因的表达量(P<0.05);1000 ng/mL的LPS作用3 h时和100~25000 ng/mL的LPS作用24 h时,均显著增加了IL-6基因的表达量(P<0.05);500~25000 ng/mL的LPS作用3 h时显著增加了IL-1β基因的表达量(P<0.05);从时间效应来看,总体趋势是3种细胞因子(IL-6、IL-1β、TNF-α)在作用24 h时的基因表达量均高于作用3 h时。大于5000 ng/mL的LPS作用3 h时显著增加了GLUT1基因的表达量(P<0.05),所有剂量LPS均显著抑制了GLUT8基因的表达(P<0.05)。综上,在大鼠乳腺上皮细胞中,LPS对不同酪蛋白基因的表达有不同的影响,LPS能抑制CSN2和α-LA基因的表达,却能增强CSN1S1基因的表达。 展开更多

关键词 LPS HC11细胞 基因表达 酪蛋白 细胞因子 葡萄糖转运因子

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黄芪多糖对鸡巨噬细胞HD11的免疫调节作用研究 被引量：3

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作者 刘琴 王磊 +5 位作者 张康 徐国伟 郭志廷 王学智 张景艳 Huub F.J.Savelkoul 《中兽医医药杂志》 CAS 2023年第4期1-7,共7页

调节巨噬细胞的活化是增强畜禽免疫力的有效方法。黄芪多糖(APS)作为免疫增强剂,在临床被广泛应用,但有关其对家禽巨噬细胞的调节作用机制鲜有报道。本研究用APS诱导鸡巨噬细胞HD1112 h,评价其对HD11细胞的免疫调节作用。通过CCK-8法检... 调节巨噬细胞的活化是增强畜禽免疫力的有效方法。黄芪多糖(APS)作为免疫增强剂,在临床被广泛应用,但有关其对家禽巨噬细胞的调节作用机制鲜有报道。本研究用APS诱导鸡巨噬细胞HD1112 h,评价其对HD11细胞的免疫调节作用。通过CCK-8法检测细胞增殖活力;用台盼蓝检测细胞的活率;采用Griess试剂法检测细胞中NO含量;采用RT-PCR法检测细胞中细胞因子、TLRs和NF-κB p65的mRNA表达水平。结果表明,25~400μg/mL APS对鸡巨噬细胞HD11无毒性作用,能显著促进细胞增殖(P<0.05),且APS组(除400μg/mL)与LPS组无显著性差异(P>0.05)。CCK-8检测显示,50~200μg/mL APS能显著提高细胞中NO含量(P<0.05)及炎性因子IL-8和IL-10转录水平(P<0.05),且呈一定的剂量依赖性,200μg/mL APS还能显著提高炎性因子IL-1β和IL-6转录水平(P<0.05),但均对TNF-α无显著性影响(P>0.05)。此外,50~200μg/mL APS对TLR2基因表达有显著的抑制作用(P<0.05),100~200μg/mL APS对TLR4基因表达有显著的抑制作用(P<0.05),表明TLR2对APS更敏感,但200μg/mL APS能提高NF-κB p65的转录水平(P<0.05)。这些结果表明黄芪多糖作为一种免疫调节剂对鸡巨噬细胞有免疫增强作用,并表现出不同的剂量依赖效应。 展开更多

关键词 黄芪多糖 HD11细胞 炎性因子 免疫增强

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新城疫病毒Mukteswar株感染鸡巨噬细胞入胞及胞内转运途径研究

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作者 黄新月 谭磊 +6 位作者 宋翠萍 仇旭升 孙英杰 刘炜玮 廖瑛 丁铲 吴艳涛 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第5期1-10,共10页

新城疫病毒(NDV)可以通过多种内吞途径入侵不同宿主细胞并在内体中逃逸从而避免被宿主天然免疫系统“追踪”。为探究NDV中等毒力疫苗株Mukteswar感染鸡巨噬细胞(HD11)的入胞和胞内转运途径,本研究利用Dynasore、CPZ、MβCD、Baf A1预处... 新城疫病毒(NDV)可以通过多种内吞途径入侵不同宿主细胞并在内体中逃逸从而避免被宿主天然免疫系统“追踪”。为探究NDV中等毒力疫苗株Mukteswar感染鸡巨噬细胞(HD11)的入胞和胞内转运途径,本研究利用Dynasore、CPZ、MβCD、Baf A1预处理细胞,然后感染NDV Mukteswar株,通过Westem blot和IFA检测NDV NP蛋白的表达变化。结果显示Dynasore、MβCD和Baf A1处理后NP的表达水平降低,表明NDV入侵HD11细胞是利用小窝蛋白介导的内吞途径,且依赖动力蛋白、胆固醇和pH。通过过表达和干扰试验检测调节不同内体囊泡类型运输的Rab蛋白(Rab5、Rab7、Rab11)对NDV感染HD11细胞的影响,结果发现Rab7的表达对NDV感染无影响,而过表达Rab5和Rab11促进NDV感染,表明是由Rab5、Rab11而不是Rab7调节NDV的转运。本研究丰富了NDV入侵宿主免疫细胞的途径及胞内转运的研究,并为全面阐明NDV感染机制提供了理论基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒 HD11细胞 小窝蛋白介导的内吞 RAB蛋白

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小檗胺选择性诱导FLT3突变急性髓系白血病细胞MV4-11凋亡及其机制研究 被引量：3

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作者 黄宇 余庆峰 +1 位作者 徐荣臻 凌云 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第18期4331-4336,共6页

目的探讨小檗胺选择性诱导FMS样酪氨酸激酶3(FMS-like tyrosine kinase 3,FLT3)基因突变急性白血病细胞凋亡及其可能作用机制。方法应用MTT法比较小檗胺对FLT3突变阳性急性髓系白血病细胞株MV4-11和野生型FLT3肿瘤细胞胰腺癌细胞株PANC-... 目的探讨小檗胺选择性诱导FMS样酪氨酸激酶3(FMS-like tyrosine kinase 3,FLT3)基因突变急性白血病细胞凋亡及其可能作用机制。方法应用MTT法比较小檗胺对FLT3突变阳性急性髓系白血病细胞株MV4-11和野生型FLT3肿瘤细胞胰腺癌细胞株PANC-1、淋巴瘤细胞株Pfeiffer、肺癌细胞株A549增殖的影响;流式细胞术检测小檗胺处理MV4-11后细胞凋亡和细胞周期的变化;Western blotting法检测FLT3及下游信号分子磷酸化STAT5(p-STAT5)蛋白的变化。结果 MTT结果显示,小檗胺作用于MV4-11细胞24、48、72 h的半数抑制浓度(IC50)值分别是(7.039±0.700)、(4.840±0.271)、(2.088±0.376)μmol/L,明显低于野生型FLT3肿瘤细胞株;小檗胺作用于MV4-11细胞48 h后,随着小檗胺浓度增加,凋亡细胞比例增高,细胞周期停滞在G0/G1期。小檗胺呈浓度依赖性下调FLT3突变蛋白和p-STAT5蛋白的表达。结论小檗胺能选择性下调FLT3突变蛋白及其下游信号分子p-STAT5,诱导FLT3突变急性髓系白血病MV4-11细胞凋亡和生长抑制。 展开更多

关键词 小檗胺 急性髓系白血病 MV4-11细胞 增殖 凋亡 FLT3信号通路

原文传递

干扰TLR4对LPS感染鸡HD11细胞免疫炎症的影响 被引量：2

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作者 李欢 孙红艳 +1 位作者 于智勇 孙长花 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期72-78,83,共8页

Toll样受体(toll-like receptor,TLR)成员TLR4可识别革兰氏阴性细菌的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),参与宿主免疫炎症反应。研究旨在通过干扰基因TLR4,以阐释TLR4对炎性细胞因子基因表达水平和鸡巨噬细胞HD11凋亡的影响,为完善TLR4... Toll样受体(toll-like receptor,TLR)成员TLR4可识别革兰氏阴性细菌的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),参与宿主免疫炎症反应。研究旨在通过干扰基因TLR4,以阐释TLR4对炎性细胞因子基因表达水平和鸡巨噬细胞HD11凋亡的影响,为完善TLR4在鸡免疫反应中的分子调控机制提供一定依据。不同剂量LPS感染鸡HD11细胞,检测感染后不同时间点TLR4及免疫炎性相关基因表达量。设计3条TLR4基因干扰片段,分别转染鸡HD11细胞,qRT-PCR和流式分别检测LPS感染前后TLR4和免疫炎性相关基因表达量以及细胞凋亡。结果显示,1μg/mL LPS感染8 h时诱导基因TLR4、IL-1β、IL-8和IL-6的表达效果最佳。成功干扰TLR4基因后,LPS感染鸡HD11细胞时促炎因子基因IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α表达量显著性降低(P<0.05),且有效抑制细胞凋亡;但抗炎因子基因TGF-β和IFN-α的表达水平不受影响(P>0.05)。结果说明,调节TLR4基因的表达可直接影响细胞对LPS的炎症反应,为控制过度炎症反应提供新思路和干预靶点,对缓解应激性病理损伤和提高家禽健康具有实践意义。 展开更多

关键词 TLR4 LPS 鸡HD11细胞 免疫炎症 敲除载体

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青蒿酯联合阿糖胞苷±柔红霉素对MLL基因重排白血病细胞株MV4-11凋亡的影响及其机制研究 被引量：2

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作者 黎建云 熊欣 +6 位作者 王典文 张旭艳 黄灿 邹玲丽 郑彩凤 陈信 涂传清 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1724-1729,共6页

目的:探讨青蒿酯(ARTS)联合柔红霉素(DNR)±阿糖胞苷(Ara-C)对MLL基因重排(MLL-r)急性髓系白血病(AML)细胞株MV4-11细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法:采用CCK-8法检测ARTS、DNR、Ara-C单药及联用对MV4-11细胞增殖率及计算单药... 目的:探讨青蒿酯(ARTS)联合柔红霉素(DNR)±阿糖胞苷(Ara-C)对MLL基因重排(MLL-r)急性髓系白血病(AML)细胞株MV4-11细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法:采用CCK-8法检测ARTS、DNR、Ara-C单药及联用对MV4-11细胞增殖率及计算单药的IC50;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况及凋亡受体DR4、DR5的表达;Western blot检测各组细胞中Caspase-3、Caspase-9的表达。结果:ARTS、Ara-C、DNR均呈浓度依赖性抑制MV4-1l细胞增殖(r=0.99,r=0.90,r=0.97),48 h的IC50分别为0.31μg/ml、1.43μmol/L、22.47 nmol/L。ARTS 0.3μg/ml、Ara-C 1.0μmol/L、DNR 15 nmol/L作用于MV4-11细胞48 h的增殖率比较:3药联合组<2药联合组<单药组(均P<0.05);2药联合组细胞增殖率比较:ARTS+Ara-C组<ARTS+DNR组<Ara-C+DNR组,3药及2药相互作用的协同指数(CI)均<l。2药及3药联合处理细胞后,ARTS+DNR+Ara-C组细胞凋亡率高于Ara-C+DNR组、ARTS+DNR组(P<0.05),ARTS+DNR+Ara-C组细胞凋亡率与ARTS+Ara-C组相当(P>0.05),各组细胞中DR4和DR5的表达无差异(P>0.05)。与DNR+Ara-C组相比,ARTS+DNR+Ara-C组、ARTS+Ara-C组24 h Caspase-3表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05),其中3药联合组细胞中Caspase-3表达下调最显著,但各组细胞中Caspase-9表达无明显改变。结论:体外研究显示ARTS+DNR+Ara-C、ARTS+Ara-C方案协同抑制MV4-11细胞增殖和诱导MV4-11细胞凋亡作用均强于传统方案Ara-C+DNR,其作用机制可能是通过下调Caspase-3表达发挥作用,对Caspase-9、DR4、DR5的表达无影响。 展开更多

关键词 MLL基因重排 急性髓系白血病 青蒿酯 柔红霉素 阿糖胞苷 MV4-11细胞

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HSPB1基因对脂多糖诱导的鸡巨噬细胞炎症反应的调控机制

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作者 丁梦霞 翟敏茜 +8 位作者 田慧慧 郭玉洁 于燕鸽 朱召岩 田亚东 孙桂荣 韩瑞丽 康相涛 闫峰宾 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第13期74-79,共6页

为了探究热休克因子结合蛋白1(heat shock factor binding protein 1,HSPB1)基因对脂多糖(LPS)诱导的鸡巨噬细胞(HD11细胞)炎症反应的调控机制,试验以不同浓度的LPS刺激HD11细胞不同时间,构建HD11细胞炎症模型,利用HSPB1基因过表达质粒p... 为了探究热休克因子结合蛋白1(heat shock factor binding protein 1,HSPB1)基因对脂多糖(LPS)诱导的鸡巨噬细胞(HD11细胞)炎症反应的调控机制,试验以不同浓度的LPS刺激HD11细胞不同时间,构建HD11细胞炎症模型,利用HSPB1基因过表达质粒pcDNA3.1-HSPB1瞬时转染HD11细胞后再用最佳浓度的LPS进行刺激,并以仅转染pcDNA3.1和pcDNA3.1-HSPB1的HD11细胞为对照,采用实时荧光定量PCR方法检测转染HSPB1基因过表达质粒pcDNA3.1-HSPB1后对白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和α干扰素(IFN-α)基因表达的影响。结果表明:在LPS浓度为1μg/mL、刺激时间为9 h时炎症因子IL-1β基因相对表达量极显著升高(P<0.01),成功构建出HD11细胞炎症模型;与转染pcDNA3.1质粒相比,转染HSPB1基因过表达质粒pcDNA3.1-HSPB1后能极显著下调IL-6、IL-1β和IFN-α基因的相对表达量(P<0.01);受LPS刺激且仅转染pcDNA3.1质粒后,能极显著上调IL-6、IL-1β和IFN-α基因的相对表达量(P<0.01),诱发细胞的炎症反应;而与受LPS刺激且仅转染pcDNA3.1质粒相比,转染HSPB1基因过表达质粒pcDNA3.1-HSPB1的HD11细胞受LPS刺激后能极显著下调IL-6、IL-1β和IFN-α基因的相对表达量(P<0.01),降低LPS刺激的炎症反应。说明HSPB1基因具有抗炎作用,与LPS联用有颉颃作用,能抑制由LPS刺激的HD11细胞炎性因子的表达水平,从而缓解细胞炎症反应。 展开更多

关键词 HSPB1基因 LPS HD11细胞 炎症 炎性因子

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TRPV1受体T704位点突变对其糖基化及功能的影响

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作者 其乐木格 吴超 +4 位作者 程雪莹 孙美艳 张野 汪庆童 何淑芳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期2199-2200,共2页

瞬时受体电位香草酸亚型1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)是一种非选择性阳离子通道,尤其对钙离子有高渗透性,在辣椒素、热刺激(>43℃)、酸性pH和内源性代谢物质等伤害性刺激下被激活[1],是镇痛药物研发的关键靶... 瞬时受体电位香草酸亚型1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)是一种非选择性阳离子通道,尤其对钙离子有高渗透性,在辣椒素、热刺激(>43℃)、酸性pH和内源性代谢物质等伤害性刺激下被激活[1],是镇痛药物研发的关键靶向分子。TRPV1通道C-端的TRP结构域中,T704位点是重要的磷酸化位点之一,影响TRPV1对伤害性刺激的敏感性[2]。本研究利用F11细胞,通过构建和转染大鼠TRPV1定点突变质粒TRPV1 T704A与TRPV1 T704E,探讨TRPV1受体T704位点突变对TRPV1蛋白表达、糖基化修饰、膜转运和细胞钙内流的影响。 展开更多

关键词 瞬时受体电位香草酸亚型1 定点突变 糖基化修饰 钙离子成像 辣椒素 F11细胞

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鸡MyD88基因对巨噬细胞增殖和凋亡的影响

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作者 丁梦霞 朱召岩 +8 位作者 于燕鸽 王冰欣 昝瑞隆 田亚东 孙桂荣 韩瑞丽 蒋瑞瑞 康相涛 闫峰宾 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1703-1709,共7页

为探究鸡MyD88基因对巨噬细胞增殖和凋亡的影响,通过构建MyD88基因过表达质粒,以及合成MyD88基因干扰片段,并分别转染至鸡巨噬细胞(HD11)细胞中,采用CCK-8、流式细胞术及qRT-PCR方法检测过表达和干扰MyD88对HD11细胞增殖和凋亡的影响。... 为探究鸡MyD88基因对巨噬细胞增殖和凋亡的影响,通过构建MyD88基因过表达质粒,以及合成MyD88基因干扰片段,并分别转染至鸡巨噬细胞(HD11)细胞中,采用CCK-8、流式细胞术及qRT-PCR方法检测过表达和干扰MyD88对HD11细胞增殖和凋亡的影响。结果显示,MyD88过表达可显著降低HD11细胞活力(P<0.05),下调促增殖标志基因CCND1和PCNA的表达水平(P<0.05),上调抑增殖标志基因P21的表达水平(P<0.05),减少S期细胞数,阻滞细胞周期进程,增加HD11细胞凋亡率,上调促凋亡基因Caspase 3、Caspase 9和Bax的表达水平(P<0.05)。干扰MyD88可显著提高HD11细胞活力(P<0.05),上调促增殖标志基因的表达水平,降低G1期细胞数,增加S期细胞数,加快细胞周期进程,降低HD11细胞凋亡率。结果表明,MyD88基因能抑制HD11细胞增殖,促进HD11细胞凋亡。 展开更多

关键词 鸡 MYD88 HD11细胞 增殖 凋亡

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