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ESAT-6/CFP-10融合蛋白诊断结核性感染和结核病的研究 被引量：2
1
作者 彭孝红 肖勇 《临床血液学杂志（输血与检验）》 CAS 2009年第1期81-83,共3页
目的::探讨ESAT-6/CFP-10融合蛋白刺激外周血单个核细胞(PBMC)释放IFN-γ反应及其对结核性感染和结核病的诊断价值。方法:选取健康对照组(34例),密切接触组(19例)和结核病组(39例)3组对象,按其有无卡介苗(BCG)接种各分成两个2组共6小组... 目的::探讨ESAT-6/CFP-10融合蛋白刺激外周血单个核细胞(PBMC)释放IFN-γ反应及其对结核性感染和结核病的诊断价值。方法:选取健康对照组(34例),密切接触组(19例)和结核病组(39例)3组对象,按其有无卡介苗(BCG)接种各分成两个2组共6小组:健康对照组BCG未接种者(15例)、健康对照组BCG接种者(19例)、密切接触组BCG未接种者(6例)、密切接触组BCG接种者(13例)、结核病组BCG未接种者(7例)和结核病组BCG接种者(32例)。分离PBMC并分别与PPD和ESAT-6/CFP-10融合蛋白共同培养5d,以酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测培养上清液中IFN-γ,观察6组对象IFN-γ释放反应。结果:PPD刺激后,健康对照组BCG未接种者与密切接触组BCG未接种者结果之间差异有统计学意义(P<0.01),而3组BCG接种者之间结果差异无统计学意义(P>0.05)。ESAT-6/CFP-10融合蛋白刺激后,健康对照组、密切接触组、和结核病组3组总阳性率分别为0%,21.1%,87.2%,阳性率明显增加。健康对照组BCG未接种者与密切接触组BCG未接种者结果之间差异有统计学意义(P<0.05);健康对照组BCG接种者与密切接触组BCG接种者结果之间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:ESAT-6/CFP-10融合蛋白为结核杆菌特异性抗原,能够区分BCG接种和结核病,在结核性感染和结核病的诊断中有应用价值。 展开更多
关键词 ESAT-6/CFP 10融合蛋白 PPD 结核 BCG IFN-Γ
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三种结核分枝杆菌分泌蛋白的抗体制备及其在抗原检测中的应用 被引量：10
2
作者 唐宇龙 杨华 +5 位作者 刘湘新 柳斌 秦莲花 郑瑞娟 丁元生 胡忠义 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期597-600,共4页
目的制备结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6、MPT84和MPT63-MPT70重组蛋白抗体,探讨其在检测结核抗原中的应用价值。方法应用重组蛋白CFP10-ESAT-6、MPT64和MPT63- MPT70免疫血清,制备包被抗体和标记抗体,建立检测3种蛋白的双抗体夹心法,并将其... 目的制备结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6、MPT84和MPT63-MPT70重组蛋白抗体,探讨其在检测结核抗原中的应用价值。方法应用重组蛋白CFP10-ESAT-6、MPT64和MPT63- MPT70免疫血清,制备包被抗体和标记抗体,建立检测3种蛋白的双抗体夹心法,并将其用于17种分枝杆菌培养上清液和341份临床血清标本的检测。结果CFP10-ESAT-6的最低检出浓度为25 ng/mL,MPT64和MPT63-MPT70均为50 ng/mL。CFP10-ESAT-6检测17种分枝杆菌培养上清液,只有结核分枝杆菌为阳性;而MPT64和MPT63-MPT70检测除结核分枝杆菌阳性外,还各有5种非结核分枝杆菌培养上清液为阳性结果。CFP10-ESAT6、MPT64和MPT63-MPT70检测165例临床诊断的肺结核患者血清标本阳性率分别为33.9%、41.2%和47.9%;检测112例非结核患者血清标本的假阳性率分别为1.8%、7.1%和10.7%;检测64例健康对照的假阳性率分别为0、3.1%和7.8%。结论CFP10-ESAT-6、MPT64和MPT63-MPT70重组蛋白制备的抗体检测血清标本结核抗原的阳性率均不高,但特异性较好。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 重组蛋白质类 ESAT-6-CFP10融合蛋白 MPT64蛋白 结核分枝杆菌 MPT63-MPT70
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ESAT-6/CFP-10融合蛋白的抗原性分析及其对诊断结核临床应用价值 被引量：10
3
作者 沈颖 陆国华 姚航平 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1531-1534,共4页
目的分析ESAT-6/CFP-10融合蛋白作为结核抗原的特性,并探讨以其作为抗原的酶联免疫斑点实验(ELISPOT)在结核诊断中的应用价值。方法以ESAT-6/CFP-10融合蛋白为刺激抗原的ELISPOT法(ESAT-6/CFP-10-ELISPOT)检测经结核特异性抗原刺激后分... 目的分析ESAT-6/CFP-10融合蛋白作为结核抗原的特性,并探讨以其作为抗原的酶联免疫斑点实验(ELISPOT)在结核诊断中的应用价值。方法以ESAT-6/CFP-10融合蛋白为刺激抗原的ELISPOT法(ESAT-6/CFP-10-ELISPOT)检测经结核特异性抗原刺激后分泌γ干扰素的效应T淋巴细胞数量方法,测定65例单纯结核病患者,16例HIV/结核双重感染患者,20例HIV感染患者,32例非结核呼吸道疾病患者,30名健康体检者外周血单个核细胞中结核菌抗原特异的T淋巴细胞的频率。结果 ESAT-6/CFP-10-ELISPOT与结核菌素皮肤试验(TST)在所有81例结核患者中的比较,ESAT-6/CFP-10-ELISPOT阳性率98.8%,TST阳性率为56.8%;ESAT-6/CFP-10-ELISPOT在涂阳结核组、涂阴结核组、HIV/结核双重感染组阳性率分别为100.0%、97.1%、100.0%,其敏感性远高于痰涂片检查,且各组结果差异无统计学意义;20例HIV感染组有1例阳性,非结核呼吸道疾病患者组与健康对照组均为阴性,提示ESAT-6/CFP-10-ELISPOT方法的特异度为98.8%。结论ESAT-6/CFP-10融合蛋白可以很好的刺激效应T淋巴细胞分泌γ干扰素,适合作为结核诊断中的特异性抗原,因而可以用于ELISPOT的检测,ESAT-6/CFP-10-ELISPOT对结核诊断有应用价值。 展开更多
关键词 ESAT-6/CFP-10融合蛋白 结核 人类免疫缺陷病毒 酶联免疫斑点 诊断
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结核分枝杆菌ESAT6-CFP10融合蛋白对小鼠巨噬细胞自噬功能的影响 被引量：5
4
作者 赵勇 师长宏 +4 位作者 张彩勤 毛峰峰 白冰 伍静 张海 《中国比较医学杂志》 CAS 2010年第6期13-16,共4页
目的研究结核分枝杆菌(MTB)ESAT6-CFP10融合蛋白对小鼠巨噬细胞自噬功能的影响。方法H37Rv菌株感染小鼠巨噬细胞后加入纯化的重组ESAT6-CFP10融合蛋白,通过透射电镜检测自噬体的形成。提取细胞总RNA和蛋白,以实时定量RT-PCR及Western b... 目的研究结核分枝杆菌(MTB)ESAT6-CFP10融合蛋白对小鼠巨噬细胞自噬功能的影响。方法H37Rv菌株感染小鼠巨噬细胞后加入纯化的重组ESAT6-CFP10融合蛋白,通过透射电镜检测自噬体的形成。提取细胞总RNA和蛋白,以实时定量RT-PCR及Western blot方法检测自噬相关基因(atg)分子水平和蛋白表达水平。结果ESAT6-CFP10融合蛋白可抑制小鼠巨噬细胞自噬体的形成,并导致atg分子表达水平下降,其中atg8表达量下降最为明显。结论MTB ESAT6-CFP10融合蛋白通过调控atg分子表达水平影响小鼠巨噬细胞自噬功能。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 ESAT6-CFP10融合蛋白 自噬 自噬相关基因(atg)
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结核分枝杆菌rESAT-6-CFP-10融合蛋白的制备及其血清学诊断价值 被引量：4
5
作者 石君帆 宋广忠 +3 位作者 泮结超 漏磊君 杨明瑾 李召东 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2010年第6期365-367,共3页
目的 表达、纯化结核分枝杆菌rESAT-6-CFP-10（rEC）融合蛋白,评价其在结核病血清学诊断方面的应用价值.方法 用镍离子螯合亲和层析柱纯化融合蛋白,用ELISA法检测血清样本中的抗结核抗体,以37例PPD阴性患者正常血清A492＋2s为正常限值,... 目的 表达、纯化结核分枝杆菌rESAT-6-CFP-10（rEC）融合蛋白,评价其在结核病血清学诊断方面的应用价值.方法 用镍离子螯合亲和层析柱纯化融合蛋白,用ELISA法检测血清样本中的抗结核抗体,以37例PPD阴性患者正常血清A492＋2s为正常限值,评价rEC诊断的特异性及灵敏度.结果 rEC融合蛋白在大肠埃希菌中以可溶性非包涵体形式表达,表达浓度为0.19 mg/mL.rFC检测抗结核抗体在PPD阳性健康人群中的特异性为100%（30/30）,在痰涂片或细菌培养阳性和两法均阴性的结核病患者中灵敏度分别为75.56%（34/45）和67.3]%（35/52）.结论 结核分枝杆菌rEC融合蛋白以可溶性形式高效表达,具有较强的免疫反应性和较高的血清学诊断价值. 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 rESAT-6-CFP-10融合蛋白 血清学诊断
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牛结核分枝杆菌ESAT6-CFP10-BFH融合蛋白原核表达及皮试反应
6
作者 鲍佳鹏 孙悦 +9 位作者 张建军 苏岳乐 毕力格 郭宇 巴依尔塔 赵东辉 陈彪 冯紫佳 郑可 秦建华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期2502-2508,共7页
为了改善ESAT6-CFP10融合蛋白检测牛结核分枝杆菌感染存在灵敏度低的问题,应用铁蛋白骨架显著性提升EC(ESAT6-CFP10)法的灵敏度,将ESAT6、CFP10和牛源铁蛋白重链(BFH)用柔性多肽连接,按照ESAT6-CFP10-BFH的串联组合方案设计基因序列,构... 为了改善ESAT6-CFP10融合蛋白检测牛结核分枝杆菌感染存在灵敏度低的问题,应用铁蛋白骨架显著性提升EC(ESAT6-CFP10)法的灵敏度,将ESAT6、CFP10和牛源铁蛋白重链(BFH)用柔性多肽连接,按照ESAT6-CFP10-BFH的串联组合方案设计基因序列,构建pET-28a-EC-BFH重组质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中。使用自诱导培养基对铁蛋白EC融合抗原(EC-BFH蛋白)进行诱导表达,亲和层析镍柱法纯化EC-BFH蛋白,使用蛋白印迹(Western blot)对EC-BFH蛋白进行鉴定及纯度测定。将EC-BFH蛋白对健康豚鼠进行皮试,通过观察皮试部位是否会引起炎性反应,验证EC-BFH蛋白的特异性。对牛结核分枝杆菌致敏成功的豚鼠,以提纯牛型结核菌素(PPDB)作为对照,检测EC蛋白和EC-BFH蛋白效价对比阳性率。结果表明:EC-BFH蛋白的相对分子质量约为48.4 kDa,与预期相同,说明成功纯化EC-BFH蛋白。EC-BFH蛋白对健康豚鼠进行皮试24 h后无炎症反应,说明EC-BFH蛋白特异性良好。根据阳性率数据显示EC-BFH蛋白效价远远高于EC蛋白;在注射量为1,10和20μg时,EC-BFH蛋白皮试的阳性率均高于EC蛋白,尤其注射量在1μg时,EC蛋白和EC-BFH蛋白的阳性率分别为16.6%和100%,且EC-BFH蛋白与PPDB的阳性率接近。结果表明EC-BFH融合蛋白提高了EC法检测牛结核分枝杆菌感染的灵敏度,增强了皮试反应效果,作为检测牛结核分枝杆菌感染的诊断试剂有很大的研究价值。 展开更多
关键词 ESAT6-CFP10融合蛋白 牛结核分枝杆菌 提纯牛型结核菌素
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结核分枝杆菌rESAT-6-CFP-10融合蛋白的构建和表达及其免疫反应性分析 被引量：2
7
作者 宋广忠 石君帆 +3 位作者 漏磊君 李召东 泮结超 John T.Belisle 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2011年第2期100-104,共5页
目的构建结核分枝杆菌H37Rv株esat．6-cfp-10（简称ec）融合基因及其原核表达载体pET-23b（＋）．esat．6-cfp-10[以下简称pE％23b（＋）-ec]，表达、纯化融合蛋白rESAT-6-CFP-10（简称rEC），并分析其免疫反应性。方法采用基因拼接技术... 目的构建结核分枝杆菌H37Rv株esat．6-cfp-10（简称ec）融合基因及其原核表达载体pET-23b（＋）．esat．6-cfp-10[以下简称pE％23b（＋）-ec]，表达、纯化融合蛋白rESAT-6-CFP-10（简称rEC），并分析其免疫反应性。方法采用基因拼接技术将ESAT-6和CFP-IO编码基因用疏水甘氨酸接头（Gly4Ser），进行PCR扩增融合。构建TA克隆载体pMDR19-T-esat-6-cfp-10（简称pMD-19-T-ec），利用PCR、酶切和测序进行鉴定。经限制性内切酶NdeI、XhoI双酶切后将融合基因定向克隆入原核表达载体pET-23b（＋）。将构建正确的重导组质粒pET-23b（＋）-ec转化E-coliBL21（DE3）pLysE，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPm）诱导rEC的表达。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western印迹法分析其表达情况。用镍离子螯合亲和层析柱纯化融合蛋白。用Western印迹初步评价融合蛋白的免疫反应性。结果融合基因及其原核表达载体构建成功，融合蛋白以可溶性非包涵体形式表达，相对分子质量为21000，表达量约占菌体总蛋白的35％。经亲和层析后得到了纯度达97．2％的融合蛋白。Western印迹证实，融合蛋白能与确诊的肺结核患者血清发生特异性免疫应答。结论成功构建了原核表达载体pET-23b（＋）-ec，获得了rEC融合蛋白，为rEC融合蛋白在结核病诊断中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 esttt-6-cfp10 融合基因 rESAT-6-CFP-10融合蛋白
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人IP-10蛋白原核表达及其活性鉴定 被引量：1
8
作者 邵紫韫 彭毅 《华南国防医学杂志》 CAS 2008年第4期30-32,45,共4页
目的构建人His标记的γ干扰素诱导蛋白10(interferonγ--inducible protein10,IP-10)融合蛋白表达载体并在原核细胞中表达、纯化,获得有活性的IP-10蛋白,为进一步研究其在炎症过程中的作用机制及寻找新的抗炎途径提供基础。方法从人肺c... 目的构建人His标记的γ干扰素诱导蛋白10(interferonγ--inducible protein10,IP-10)融合蛋白表达载体并在原核细胞中表达、纯化,获得有活性的IP-10蛋白,为进一步研究其在炎症过程中的作用机制及寻找新的抗炎途径提供基础。方法从人肺cDNA文库中PCR扩增无信号肽的IP-10基因编码序列,构建重组载体pET-14b/IP-10;重组质粒经酶切、测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株;经异丙基γ-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导后,用镍离子亲和层析柱纯化融合蛋白,以THP-1细胞进行微室跨膜迁移(transwell)实验鉴定融合蛋白活性。结果酶切、测序鉴定重组载体pET-14b/IP-10构建正确,并纯化得到高纯度的IP-10融合蛋白。而且该蛋白具有诱导单核细胞THP-1跨膜迁移活性。结论成功构建了人IP-10融合蛋白表达载体,并纯化得到具有活性的IP-10融合蛋白,为进一步研究IP-10的功能提供了重要的实验材料。 展开更多
关键词 γ干扰素诱导蛋白10融合蛋白 细胞迁移
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重组白细胞介素-10／Fc融合蛋白对内毒素诱导急性肺损伤小鼠的实验干预作用 被引量：3
9
作者 毕铭华 王宝恩 +3 位作者 郑心校 李敏 Konstantin Mayer 张淑文 《中国危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期461-464,I0001,共5页
目的探讨重组白细胞介素-10（rIL-10）／Fc融合蛋白对内毒素诱导的急性肺损伤（ALI）小鼠炎症调控作用及其机制。方法向气管内注射脂多糖（LPS）制成ALI动物模型；rIL-10／Fc融合蛋白采用腹腔内给药方式。132只小鼠被随机均分为正常对... 目的探讨重组白细胞介素-10（rIL-10）／Fc融合蛋白对内毒素诱导的急性肺损伤（ALI）小鼠炎症调控作用及其机制。方法向气管内注射脂多糖（LPS）制成ALI动物模型；rIL-10／Fc融合蛋白采用腹腔内给药方式。132只小鼠被随机均分为正常对照组、rIL-10／Fc对照组、ALI模型组、rIL-10／Fc治疗组。每组选择25只小鼠观察24h存活率；其余用于检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞数量、肿瘤坏死因子-a（TNF—a）和IL-1B水平，以及肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性、肺组织湿／干重（W／D）比值；光镜下观察肺组织病理学改变。结果注射LPS后4h可引起BALF中TNF-a和IL-1B显著升高（P均〈O．01），rIL-10／Fc治疗组较ALI模型组有所降低，但差异无统计学意义；但在8h和12h，rIL-10／Fc融合蛋白能显著抑制BALF中TNF—a产生，在12h抑制IL-1B产生；并明显改善LPS注射24h后实验动物的存活率（P〈0．01）。rIL-10／Fc对LPS诱导的ALI小鼠BALF中白细胞数量、肺组织MPO活性、肺组织W／D比值无显著改变。注射LPS24h后，肺组织出现了明显的炎性改变，但在rIL-10／Fc融合蛋白干预后没有出现显著的差异。结论rIL-10／Fc融合蛋白能显著抑制LPS诱导的ALI小鼠肺促炎细胞因子产生，改善预后。 展开更多
关键词 重组白细胞介素-10/Fe融合蛋白 肺损伤 急性 内毒素
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