期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到66篇文章
< 1 2 … 4 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
Radixin定点突变过表达对HepG2细胞膜转运蛋白Bsep的影响 被引量：2
1
作者 封欣婵 柴进 +1 位作者 程英 陈文生 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1002-1007,共6页
目的构建pcDNA3.1-RDX定点突变真核过表达质粒,研究其在胆汁淤积时对HepG2细胞膜转运蛋白胆盐输出泵(bile salt export pump,Bsep)定位表达的影响。方法从含有RDX野生型质粒中,利用PCR方法钓取RDX野生型基因片段并以野生型为基础进行定... 目的构建pcDNA3.1-RDX定点突变真核过表达质粒,研究其在胆汁淤积时对HepG2细胞膜转运蛋白胆盐输出泵(bile salt export pump,Bsep)定位表达的影响。方法从含有RDX野生型质粒中,利用PCR方法钓取RDX野生型基因片段并以野生型为基础进行定点突变,PCR扩增后转入pcDNA3.1载体,其产物转化DH-5α感受态细胞。对长出的单克隆进行菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析,比对正确即为构建成功的目的质粒。将目的质粒转染HepG2细胞,经G418筛选构建稳转细胞株。提取各株细胞的总蛋白,检测磷酸化RDX是否影响HepG2细胞膜上转运蛋白Bsep的表达。结果 PCR和测序结果均证实pcDNA3.1-RDX WT、pcDNA3.1-RDX T564D、pcDNA3.1-RDX T564A过表达载体构建成功。蛋白免疫印迹表明,与转染pcDNA-3.1-RDX-WT的HepG2相比,转染pcDNA-3.1-T564D的HepG2的Bsep膜蛋白表达量显著增加(P<0.05),而转染pcDNA-3.1-T564A的HepG2的Bsep膜蛋白表达量有所下降(P>0.05)。结论成功构建了pcDNA3.1-RDX WT、pcDNA3.1-RDX T564D、pcDNA3.1-RDX T564A过表达载体,并证实RDX的磷酸化能增强HepG2细胞膜上Bsep的表达。 展开更多
关键词 RDX定点突变 载体构建 PCDNA3 1载体 胆盐输出泵
下载PDF
凝血因子Ⅸ在CHO细胞中的表达和鉴定
2
作者 戴永刚 刘新风 《国际医药卫生导报》 2013年第10期1481-1484,共4页
人类B型血友病，是一种由于不能合成正常凝血因子Ⅸ（hVⅨ）所引起的遗传性疾病。补充hFⅨ是控制此种疾病最有效的方法。本文用CHO细胞作为表达系统，pcDNA3．1作为表达载体表达hFIX。经过对细胞进行免疫组化和免疫荧光分析，证明构建... 人类B型血友病，是一种由于不能合成正常凝血因子Ⅸ（hVⅨ）所引起的遗传性疾病。补充hFⅨ是控制此种疾病最有效的方法。本文用CHO细胞作为表达系统，pcDNA3．1作为表达载体表达hFIX。经过对细胞进行免疫组化和免疫荧光分析，证明构建的细胞株表达了重组hFIX蛋白。 展开更多
关键词 凝血因子Ⅸ 蛋白表达 PCDNA3 1载体
下载PDF
pcDNA3.1/NF-κB(p65)表达载体的构建及蛋白表达
3
作者 金龙 吴晓兰 +1 位作者 周昕欣 马腾 《解剖科学进展》 CAS 2013年第6期497-499,共3页
目的克隆NF-κB(p65)基因,构建真核表达载体pcDNA3.1/NF-κB(p65),并进行体外表达研究。方法提取B16总RNA,RT-PCR扩增出NF-κB(p65)基因片段,并将其克隆到pcDNA3.1载体中进行序列分析,转染到B16细胞中,Real-time PCR和Western-blot检测... 目的克隆NF-κB(p65)基因,构建真核表达载体pcDNA3.1/NF-κB(p65),并进行体外表达研究。方法提取B16总RNA,RT-PCR扩增出NF-κB(p65)基因片段,并将其克隆到pcDNA3.1载体中进行序列分析,转染到B16细胞中,Real-time PCR和Western-blot检测NF-κB(p65)的抗原性和表达量。结果获得高质量的B16总RNA,RT-PCR扩增出1.65kb的cDNA片段,成功构建了pcDNA3.1/NF-κB(p65)载体,Blast序列分析与GenBank中NM_009045.4完全一致。NF-κB(p65)重组蛋白具有抗原性,其基因和蛋白表达高于B16细胞组和空质粒pcDNA3.1组。结论成功构建pcDNA3.1/NF-κB(p65)表达载体和表达出具有NF-κB(p65)抗原性的重组蛋白。 展开更多
关键词 NF-κB(p65)基因 PCDNA3 1载体 B16细胞
原文传递
从江香猪ApoA1基因的克隆及亚细胞定位研究 被引量：6
4
作者 赵佳福 段志强 +3 位作者 杨远青 嵇辛勤 王圆圆 孙成娟 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第7期1954-1960,共7页
试验旨在克隆从江香猪载脂蛋白A1(apolipoprotein A1,ApoA1)基因,研究ApoA1基因在真核细胞中的亚细胞定位情况。通过提取从江香猪总RNA,采用RT-PCR、目的基因的连接、转化等方法构建携带有绿色荧光蛋白的pEGFP-C1-ApoA1重组质粒,并经菌... 试验旨在克隆从江香猪载脂蛋白A1(apolipoprotein A1,ApoA1)基因,研究ApoA1基因在真核细胞中的亚细胞定位情况。通过提取从江香猪总RNA,采用RT-PCR、目的基因的连接、转化等方法构建携带有绿色荧光蛋白的pEGFP-C1-ApoA1重组质粒,并经菌落PCR、双酶切及测序鉴定正确后,转染HEK-293T细胞,36h后观察荧光,分析ApoA1蛋白在真核细胞中的亚细胞定位情况。结果表明,从江香猪ApoA1基因与GenBank上公布的野猪序列相比,有6处发生了碱基突变,其中5处为有义突变,分别导致180位氨基酸由丙氨酸变为谷氨酸、185位氨基酸由组氨酸变为谷氨酰胺、186位氨基酸由缬氨酸变为亮氨酰胺、209位氨基酸由天冬氨酸变为甘氨酸;PSORTⅡPrediction和荧光共定位试验结果均表明,ApoA1蛋白的表达主要集中在细胞外基质,约占总表达量的77.8%。本试验成功克隆了从江香猪ApoA1基因CDS区,且ApoA1蛋白的表达主要集中在细胞外基质中,为进一步构建ApoA1基因转基因动物模型、开展ApoA1基因与人类因肥胖引起的相关疾病关系的研究奠定基础。 展开更多
关键词 丛江香猪 ApoA1基因 pEGFP-C1载体 HEK-293T细胞 生物信息学分析 亚细胞定位
下载PDF
广西巴马小型猪ApoE基因真核表达载体的构建及鉴定 被引量：4
5
作者 苏秀珍 蒋钦杨 +2 位作者 陈少梅 郭亚芬 兰干球 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1022-1025,共4页
【目的】构建广西巴马小型猪载脂蛋白E基因(ApoE)真核表达载体,为生产转ApoE基因的广西巴马小型猪奠定基础。【方法】采用RT-PCR从广西巴马小型猪肝组织中扩增出ApoE基因编码序列,将该基因连接至pEGFP-C1载体上,利用双酶切和测序对重组... 【目的】构建广西巴马小型猪载脂蛋白E基因(ApoE)真核表达载体,为生产转ApoE基因的广西巴马小型猪奠定基础。【方法】采用RT-PCR从广西巴马小型猪肝组织中扩增出ApoE基因编码序列,将该基因连接至pEGFP-C1载体上,利用双酶切和测序对重组质粒pEGFP-C1-ApoE进行鉴定,并将重组质粒pEGFP-C1-ApoE转染PK15细胞。【结果】广西巴马小型猪ApoE基因编码区序列长954bp,编码317个氨基酸,与GenBank已公布的猪ApoE基因cDNA序列(NM_214308)对应区段同源性为100%。构建的重组质粒pEGFP-C1-ApoE转染PK15细胞48h后,在荧光显微镜下转染细胞发出荧光,细胞形态清晰,可见细胞核。【结论】广西巴马小型猪ApoE基因能与pEGFP-C1载体重组构建pEGFP-C1-ApoE真核表达载体,有效表达出ApoE蛋白。 展开更多
关键词 广西巴马小型猪 载脂蛋白E基因 pEGFP-C1载体 重组质粒 真核表达载体
下载PDF
重组人TGF-β1融合蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定 被引量：4
6
作者 姜昌丽 张英起 颜真 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第3期193-195,共3页
目的构建人转化生长因子-β1(TGF-β1)基因的原核表达载体,表达并纯化GST-hTGFβ1.方法应用RT-PCR获得人TGF-β1的基因片段,成功构建人TGF-β1原核表达载体,诱导表达人TGF-β1与GST的融合蛋白;应用亲和层析法纯化重组融合蛋白,对纯化产... 目的构建人转化生长因子-β1(TGF-β1)基因的原核表达载体,表达并纯化GST-hTGFβ1.方法应用RT-PCR获得人TGF-β1的基因片段,成功构建人TGF-β1原核表达载体,诱导表达人TGF-β1与GST的融合蛋白;应用亲和层析法纯化重组融合蛋白,对纯化产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western Blot检测分析.结果成功构建了人TGF-β1重组融合表达质粒pGEX-4T-1-TGF-β1,表达的蛋白经SDS-PAGE电泳分析,在Mr约为39×103处出现了一条新生的蛋白条带,该表达蛋白具有与TGF-β1抗体特异性的结合能力.结论成功构建了人TGF-β1基因的原核表达载体并纯化了该基因的原核表达产物,为下一步的人TGF-β1自体疫苗的研制奠定了基础. 展开更多
关键词 转化生长因子-Β1 重组融合蛋白/分离与纯化 pGEX4T-1载体
下载PDF
新型大孔聚合物小球NKG-1载体在甲醇和乙醇分离测定中的应用 被引量：5
7
作者 葛德钧 王建华 +1 位作者 郭贤权 何炳林 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1989年第6期384-385,共2页
甲醇中微量乙醇及乙醇中微量甲醇的分离与分析一直是人们颇为关注的问题。由于高含量的峰易将低含量的峰掩盖,使二者难于分离或分离度很小。文献报道,选用D-山梨醇为固定液,6201为载体需填装5—8m长色谱柱方可使乙醇和甲醇较好分离;选... 甲醇中微量乙醇及乙醇中微量甲醇的分离与分析一直是人们颇为关注的问题。由于高含量的峰易将低含量的峰掩盖,使二者难于分离或分离度很小。文献报道,选用D-山梨醇为固定液,6201为载体需填装5—8m长色谱柱方可使乙醇和甲醇较好分离;选用聚乙二醇-20M为固定液,硅烷化白色405为载体,分离白酒中各组分,甲醇和乙醇色谱峰分离度很小;Mangani等人应用色谱法直接测定果酒中甲醇含量,检测限为≈0.05％。 本文采用南开大学高分子化学研究所研制的新型大孔聚合物小球NKG-1为载体,涂渍10％聚乙二醇-20M,仅用2m长不锈钢柱,可将甲醇和乙醇较好分离,用于定量分析其准确度、精密度均较好,检测限可达0.005％。 展开更多
关键词 甲醇 乙醇 分离 测定 色谱法 大孔聚合物小球NKG-1载体 色谱柱
下载PDF
HIV-1载体的研发沿革 被引量：2
8
作者 张帆 张敬之 《生命科学》 CSCD 北大核心 2010年第3期296-301,共6页
自从科学家于1983年发现了人类免疫性缺陷病毒1(human immunodeficiency virus1,HIV-1)以来,随着对它的研究不断深入,其表达载体的开发也有了长足的进步。与其他逆转录病毒载体相比,如莫罗尼小鼠白血病病毒(murine leukemiavirus,MLV)... 自从科学家于1983年发现了人类免疫性缺陷病毒1(human immunodeficiency virus1,HIV-1)以来,随着对它的研究不断深入,其表达载体的开发也有了长足的进步。与其他逆转录病毒载体相比,如莫罗尼小鼠白血病病毒(murine leukemiavirus,MLV)载体和泡沫病毒(foamyvirus,FV)载体等,HIV-1载体具有诸多独特的优点,因而有着更广泛的应用于临床基因治疗的前景。该文对HIV-1载体的研发过程及其优缺点进行综述。 展开更多
关键词 人类免疫性缺陷病毒1 慢病毒载体 HIV-1载体 SIN载体
原文传递
牛FADD基因的克隆分析及其真核表达载体的构建 被引量：3
9
作者 杨润军 张路培 +2 位作者 许尚忠 李俊雅 高雪 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2009年第2期15-20,26,共7页
【目的】克隆牛FADD基因并构建真核表达载体,以探讨其在牛卵泡发育过程中的调控作用。【方法】采用RT-PCR技术,从牛卵巢组织总RNA中反转录FADD cDNA,对编码区核苷酸序列分析后,将其全长cDNA删除终止密码子,采用定向克隆技术连接克隆到... 【目的】克隆牛FADD基因并构建真核表达载体,以探讨其在牛卵泡发育过程中的调控作用。【方法】采用RT-PCR技术,从牛卵巢组织总RNA中反转录FADD cDNA,对编码区核苷酸序列分析后,将其全长cDNA删除终止密码子,采用定向克隆技术连接克隆到含有水母绿色荧光蛋白(AcGFP)报告基因的真核表达载体pAcGFP-Nl中,用BglⅡ、EcoRⅠ双酶切、测序进行鉴定,并进行了牛FADD mRNA的组织表达谱分析。【结果】克隆的牛FADD基因编码区全长序列与NCBI公布的序列完全一致,核苷酸和氨基酸序列与猪的同源性最高,与鸡的同源性最低,仅为42.5%和44%;通过PCR方法在FADD阅读框两端引入了BglⅡ和EcoRⅠ克隆位点,并于起始位点前加入Kozak序列,成功构建pAcGFP-N1-bFADD融合蛋白表达载体。组织表达谱分析表明,牛FADD mRNA高表达于肝脏、淋巴组织及睾丸、卵巢组织,在小肠、心、胰腺、肺、肾及肌肉中则弱表达或无表达。【结论】成功克隆了牛FADD基因,并构建pAcGFP-N1-bFADD融合蛋白表达载体,为FADD基因在牛卵母细胞发育调控中的基础研究提供了一种简便可靠的方法。 展开更多
关键词 FADD基因 pAcGFP—N1载体 融合蛋白 重组质粒
下载PDF
利用接头插入技术构建环型T载体(pYCQ1) 被引量：1
10
作者 杨成泉 马春泉 +2 位作者 杨达梅 蒋丹 李海英 《黑龙江大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2010年第1期117-120,共4页
人工设计接头序列,其特点为含有3′突出A末端,同时人工接头序列内部含有XcmⅠ、BspM901、AceⅡ酶切位点。利用人工接头3′突出A与线性的pMD18-T载体的3′突出T连接,将线性的pMD18-T载体改造成环形具有自身复制功能的pYCQ1载体,降低了实... 人工设计接头序列,其特点为含有3′突出A末端,同时人工接头序列内部含有XcmⅠ、BspM901、AceⅡ酶切位点。利用人工接头3′突出A与线性的pMD18-T载体的3′突出T连接,将线性的pMD18-T载体改造成环形具有自身复制功能的pYCQ1载体,降低了实验室使用T载体的成本,同时增加了载体的克隆位点。利用pYCQ1作为T载体时,用XcmⅠ酶切(XcmⅠ限制性片段具有3′T末端)pYCQ1载体可以得到线性的3′T粘性末端的pYCQ1-T载体。实验验证,pYCQ1-T载体可以在受体菌E.coliDH5α中进行大量自我复制,并能够克隆1 800 bp的外源PCR产物。 展开更多
关键词 接头 XcmⅠ pMD18-T载体 pYCQ1载体 pYCQ1-T载体
下载PDF
真核表达载体pEGFP-N1-MKRN1的构建及其在Siha细胞中的表达 被引量：2
11
作者 石艳艳 刘涛 +5 位作者 张琴 袁成福 卜友泉 易发平 刘革力 宋方洲 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第23期2707-2710,共4页
目的:构建真核表达载体pEGFP-N1-MKRN1并稳定转染人宫颈癌细胞系Siha细胞,检测MKRN1表达情况及对细胞增殖和凋亡的影响.方法:用RT-PCR技术从人胚肾细胞株HEK293细胞中获得MKRN1的cDNA并将其插入表达载体pEGFP-N1中;构建的重组质粒经脂... 目的:构建真核表达载体pEGFP-N1-MKRN1并稳定转染人宫颈癌细胞系Siha细胞,检测MKRN1表达情况及对细胞增殖和凋亡的影响.方法:用RT-PCR技术从人胚肾细胞株HEK293细胞中获得MKRN1的cDNA并将其插入表达载体pEGFP-N1中;构建的重组质粒经脂质体介导转染Siha细胞;Western Blot鉴定MKRN1在Siha细胞中的稳定表达.结果:RT-PCR成功地扩增出一条约1477 bp的片段,经限制性内切酶酶切分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒,荧光显微镜下观察到稳定转染的细胞发出较强绿色荧光,Western Blot证明人MKRN1能以融合蛋白的形式在Si-ha细胞中稳定表达.结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-MKRN1,获得了稳定表达人MKRN1基因的Siha细胞克隆,为进一步研究人MKRN1的功能及其与细胞增殖及凋亡的关系提供了实验基础和重要的细胞模型. 展开更多
关键词 MKRN1 pEGFP-N1载体 SIHA细胞 增殖和凋亡
下载PDF
成人肝cDNA文库的构建 被引量：1
12
作者 苟德明 郑新民 +3 位作者 陈乃清 魏庆信 李文鑫 路兴中 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第5期449-452,共4页
用异硫氰酸胍／盐酸胍法从人肝组织中提取ＲＮＡ，通过Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维柱分离出ｍＲＮＡ。以ｍＲＮＡ为模板，含ＮｏｔⅠ接头的Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）为引物，在逆转录酶ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔⅡＲＴ催化下合成单链ｃＤＮＡ（ｓｓ... 用异硫氰酸胍／盐酸胍法从人肝组织中提取ＲＮＡ，通过Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维柱分离出ｍＲＮＡ。以ｍＲＮＡ为模板，含ＮｏｔⅠ接头的Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）为引物，在逆转录酶ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔⅡＲＴ催化下合成单链ｃＤＮＡ（ｓｓｃＤＮＡ），再在Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡ聚合酶Ⅰ与ＲＮａｓｅＨ和ＤＮＡＬｉｇａｓｅ共同作用下，ｓｃＤＮＡ拷贝成双链ｃＤＮＡ（ｄｓｃＤＮＡ）。经放射自显影测定，合成有全长ｃＤＮＡ片段。平末端ｄｓｃＤＮＡ与ＳａｌⅠ接头连接，ＮｏｔⅠ酶切后，通过过柱取掉小于５００ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，大片段ｃＤＮＡ与载体ｐＳＰＯＲＴ１连接，转化受体菌ＤＨ５α，经稀释测定出含有重组子的文库大小为３．３×１０６。该文库适合于筛选低丰度ｍＲＮＡ的ｃＤＮＡ克隆。 展开更多
关键词 成人肝 CDNA文库 pSPORT1载体
下载PDF
真核表达Hsa-miR-1基因及其检测方法的建立 被引量：1
13
作者 胡徐庞 李伟 +7 位作者 曹跃芬 张璇 黄青红 徐科 杨耿兵 魏旭斌 钱程 刘立 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2011年第5期783-788,共6页
获得Hsa-miR-1的方法主要由人工合成,需耗费很高的成本与时间。文章通过将Hsa-miR-1前体部分连接至pcDNA3.0,可实现Hsa-miR-1基因的高表达。构建含有Hsa-miR-1基因表达前体的表达载体pcDNA-Hsa-miR-1和含有与Hsa-miR-1基因完全互补序列... 获得Hsa-miR-1的方法主要由人工合成,需耗费很高的成本与时间。文章通过将Hsa-miR-1前体部分连接至pcDNA3.0,可实现Hsa-miR-1基因的高表达。构建含有Hsa-miR-1基因表达前体的表达载体pcDNA-Hsa-miR-1和含有与Hsa-miR-1基因完全互补序列的检测载体pEGFP-C1-CM1。通过共转染pcDNA-Hsa-miR-1和pEGFP-C1-CM1检测Hsa-miR-1基因的表达,并采用Taqman探针法定量检测Hsa-miR-1基因表达水平,成功构建了可高效表达Hsa-miR-1基因的真核生物质粒pcDNA-Hsa-miR-1,并首次建立起Hsa-miR-1基因的检测系统pEGFP-C1-CM1,该检测系统的建立将为今后Hsa-miR-1在肿瘤细胞中的研究提供准确、快捷的检测方法。 展开更多
关键词 Hsa-miR-1载体 Taqman探针检测 pcDNA-Hsa-miR-1 pEGFP-C1-CM1
下载PDF
广西巴马小型猪TRβ1基因真核表达载体的构建及鉴定 被引量：1
14
作者 申玉建 邹辉 +7 位作者 司景磊 吴延军 邱庆庆 杨秀荣 蒋钦杨 兰干球 郭亚芬 蒋和生 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期1890-1894,共5页
本试验为了克隆广西巴马小型猪甲状腺激素受体β1(TRβ1)基因编码序列并构建该基因的真核表达载体,取广西巴马小型猪肝脏组织作为材料,采用RT-PCR技术扩增出TRβ1基因编码序列,与pMD19-T-Simple载体连接,测序正确的重组质粒双酶切后,连... 本试验为了克隆广西巴马小型猪甲状腺激素受体β1(TRβ1)基因编码序列并构建该基因的真核表达载体,取广西巴马小型猪肝脏组织作为材料,采用RT-PCR技术扩增出TRβ1基因编码序列,与pMD19-T-Simple载体连接,测序正确的重组质粒双酶切后,连接pEGFP-N1载体,构建pEGFP-N1-TRβ1真核表达载体。经双酶切和测序鉴定后,重组质粒pEGFP-N1-TRβ1转染293T细胞,培养48 h后,在荧光显微镜下观察细胞荧光蛋白的表达情况。结果表明,本试验成功克隆了广西巴马小型猪的TRβ1基因cDNA序列,序列长度为1 368 bp,编码455个氨基酸,与参考序列的同源性为99.6%,有5处位点突变,且全为同义突变。阳性重组质粒pEGFP-N1-TRβ1转染293T细胞48 h后,在荧光显微镜下观测出绿色荧光表达。 展开更多
关键词 广西巴马小型猪 甲状腺激素受体β1(TRβ1) p EGFP-N1载体 重组质粒 真核表达载体
原文传递
rcan2基因的克隆及其在真核细胞中的表达 被引量：2
15
作者 时晓雨 赵艳娥 +1 位作者 孙越 骆静 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期282-286,共5页
本实验以ICR小鼠为实验材料,通过脑组织总mRNA提取、RT-PCR的方法分别扩增目的片段rcan2-L和rcan2-S,并将其构建到pEGFP-C1质粒中,获得序列正确的、用于真核细胞表达的重组质粒pEGFP-C1/rcan2-L和pEGFP-C1/rcan2-S,为进一步深入研究RCAN... 本实验以ICR小鼠为实验材料,通过脑组织总mRNA提取、RT-PCR的方法分别扩增目的片段rcan2-L和rcan2-S,并将其构建到pEGFP-C1质粒中,获得序列正确的、用于真核细胞表达的重组质粒pEGFP-C1/rcan2-L和pEGFP-C1/rcan2-S,为进一步深入研究RCAN2的功能奠定了基础. 展开更多
关键词 钙调神经磷酸酶 RCAN2 pEGFP-C1载体 克隆
下载PDF
人血管性血友病因子裂解蛋白酶pEGFP-N1真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达 被引量：1
16
作者 凌婧 马珍妮 +1 位作者 苏建 阮长耿 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期126-129,共4页
本研究旨在构建人血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)的pEGFP-N1真核表达载体,为进一步研究ADAMTS13在细胞内合成及其分泌提供有力工具。通过PCR方法获取目的基因片段,并在目的基因两端加上限制性酶切位点。限制性内切酶酶切后,连接... 本研究旨在构建人血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)的pEGFP-N1真核表达载体,为进一步研究ADAMTS13在细胞内合成及其分泌提供有力工具。通过PCR方法获取目的基因片段,并在目的基因两端加上限制性酶切位点。限制性内切酶酶切后,连接至pEGPF-N1真核表达载体。连接后获得质粒进行酶切鉴定及DNA测序验证,并转染HeLa细胞。通过荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达,Western blot方法鉴定所得蛋白。结果表明,酶切鉴定及DNA测序确认目的基因与载体正确连接,在荧光显微镜下观察到绿色荧光。Western blot显示,转染后HeLa细胞表达ADAMTS13蛋白。结论:成功构建了ADAMTS13-pEGFP-N1真核表达载体,为进一步研究ADAMTS13合成、分泌及其代谢的生理学机制提供了研究工具。 展开更多
关键词 ADAMTS13 pEGFP-N1载体 载体构建 HELA细胞
下载PDF
Caveolin-1基因PEGFP-N1真核表达载体的构建及表达 被引量：1
17
作者 张姗妮 潘灵辉 《广西医科大学学报》 CAS 2009年第3期392-394,共3页
目的:克隆caveolin-1(CAV1)基因开放阅读框的cDNA序列,构建PEGFP-N1/CAV1的真核表达载体。方法:设计并合成带酶切位点及保护碱基的引物,RT-PCR法扩增caveolin-1基因,PEGFP-N1载体及caveolin-1基因片段进行限制性双酶切,电泳后回收切开的... 目的:克隆caveolin-1(CAV1)基因开放阅读框的cDNA序列,构建PEGFP-N1/CAV1的真核表达载体。方法:设计并合成带酶切位点及保护碱基的引物,RT-PCR法扩增caveolin-1基因,PEGFP-N1载体及caveolin-1基因片段进行限制性双酶切,电泳后回收切开的PEGFP-N1及caveolin-1片段,经连接反应后构建PEGFP-N1/CAV1真核表达载体。结果:PEGFP-N1/CAV1重组质粒经PCR电泳结果显示,得到一条在555bp的片段;重组质粒经限制性内酶切双酶切电泳结果证实,可释放一条在555bp的片段和4.8kbp的载体片段;重组质粒测序结果,经BLAST比对,100%符合;瞬时转染宫颈癌Hela细胞48h荧光显微镜及实时荧光定量PCR证实重组质粒在宫颈癌Hela中得到表达。结论:成功构建了同时携带有绿色荧光蛋白及G418筛选位点的PEGFP-N1/CAV1真核表达载体复合体。 展开更多
关键词 CAVEOLIN-1 PEGFP-N1载体 真核表达载体
下载PDF
bcl-2 RNAi表达载体的构建、鉴定及其对Raji细胞的干扰效果 被引量：1
18
作者 秦陈浩 申咏梅 +1 位作者 宋妙丽 冯萍 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2009年第3期406-410,共5页
目的构建bcl-2特异性RNAi真核细胞质粒表达载体,并研究其对B细胞淋巴瘤Raji细胞的干扰效果。方法根据GenBank提供的bcl-2cDNA序列,设计并合成两对短发夹结构的互补DNA序列,经退火形成互补双链,克隆至载体pGenensil-1构建重组质粒,予以... 目的构建bcl-2特异性RNAi真核细胞质粒表达载体,并研究其对B细胞淋巴瘤Raji细胞的干扰效果。方法根据GenBank提供的bcl-2cDNA序列,设计并合成两对短发夹结构的互补DNA序列,经退火形成互补双链,克隆至载体pGenensil-1构建重组质粒,予以酶切和DNA测序鉴定。脂质体介导重组质粒转染Raji细胞,采用RT-PCR法观察重组质粒对bcl-2mRNA表达的影响,流式细胞仪测定细胞凋亡。结果酶切及测序鉴定表明,成功构建bcl-2shRNA的质粒表达载体pGenesil-1-bcl-2-544和pGenesil-1-bcl-2-1009。转染Raji细胞48h后,RT-PCR结果显示Raji细胞中bcl-2mRNA表达分别下调了(31.95±3.02)%和(47.57±2.88)%,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示Raji细胞凋亡率分别为(14.25±0.84)%和(11.96±0.79)%,明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建bcl-2特异性RNAi真核细胞质粒表达载体,它能有效沉默bcl-2基因在B细胞淋巴瘤中的表达并促进B细胞淋巴瘤Raji细胞凋亡。 展开更多
关键词 RNAI BCL-2 B细胞淋巴瘤 RAJI细胞 pGenesil-1载体
原文传递
胰岛素样生长因子-1对糖尿病勃起功能障碍大鼠的治疗作用研究 被引量：1
19
作者 潘卫兵 朱琳 +4 位作者 何朝辉 朱斌 曹石金 谢礼仁 金岩 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第35期6831-6834,共4页
目的：研究携有胰岛素样生长因子-1（IGF-1）基因的重组单纯疱疹病毒-1（HSV-1）载体对糖尿病大鼠勃起功能障碍（erectile dysfunction,ED）病变的治疗作用。方法：选用8周龄雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠,应用链脲佐菌素（Streptozotoc... 目的：研究携有胰岛素样生长因子-1（IGF-1）基因的重组单纯疱疹病毒-1（HSV-1）载体对糖尿病大鼠勃起功能障碍（erectile dysfunction,ED）病变的治疗作用。方法：选用8周龄雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠,应用链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）诱导糖尿病8周,阿朴吗啡（apomorphine,APO,80 ug/kg）皮下注射进行阴茎勃起试验,筛选出糖尿病ED大鼠模型。随机选取SPF级雄性SD大鼠10只为CN组,从筛选出DMED大鼠模型中随机选取40只,分为DM组,IGF-1组,INS组,IGF-1＋INS组,每组10只。DM组、IGF-1组、INS组、IGF-1＋INS组分别或同时每只给予胰岛素6 U/d和（或）5×10^8 pfu单纯HSV-1-IGF-1载体。基因治疗21天后,对各组大鼠的阴茎海绵体内压（ICP）进行测定。结果：电刺激诱导ICP值在CN组为（43.40±3.26）cm H2O,DM组为（13.46±1.70）cm H2O,IGF-1组（25.34±1.93）cm H2O,INS组（28.79±2.01）cm H2O,IGF-1＋INS组（42.21±2.13）cm H2O。各组的IGF-1阳性细胞百分比分别为CN组为（68.24±7.16）,DM组为（55.74±5.02）,IGF-1组（71.08±7.08）,INS组（70.35±3.89）,IGF-1＋INS组（72.90±2.64）。结论：糖尿病大鼠ED的发生与发展可能与大鼠阴茎中IGF-1表达水平降低有关,通过引入可表达的IGF-1基因和INS治疗可在一定程度上改善大鼠阴茎勃起功能。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子-1 重组单纯疱疹病毒-1载体 糖尿病 勃起功能障碍
原文传递
水牛p21基因在卵母细胞体外成熟过程中的表达及其真核表达载体构建 被引量：1
20
作者 郑海英 黄玥萌 +6 位作者 杨春艳 鄢胜飞 李孟琪 于农淇 郑威 黄加祥 尚江华 《动物医学进展》 北大核心 2018年第10期18-24,共7页
旨在检测p21基因在水牛卵母细胞体外成熟过程中的表达变化,并克隆摩拉水牛p21基因CDs序列,构建真核表达载体。收集体外成熟培养不同时期(0、6、12、24h)和不同形态[有第1极体(first polar body,PB1)PB1和无PB1]的水牛卵母细胞,通过RT-q... 旨在检测p21基因在水牛卵母细胞体外成熟过程中的表达变化,并克隆摩拉水牛p21基因CDs序列,构建真核表达载体。收集体外成熟培养不同时期(0、6、12、24h)和不同形态[有第1极体(first polar body,PB1)PB1和无PB1]的水牛卵母细胞,通过RT-qPCR检测其p21mRNA相对表达量。同时利用RTPCR技术从摩拉水牛卵巢颗粒细胞中扩增出p21基因编码序列,插入pEGFP-N1真核表达载体中,构建出重组质粒。将重组质粒pEGFP-N1-p21转染水牛颗粒细胞,并于培养24h和48h后观察转染细胞的荧光表达情况。收集转染48h后的颗粒细胞,通过RT-qPCR检测p21mRNA相对表达量。结果显示,成熟培养6h的卵母细胞p21mRNA表达量显著高于成熟培养0、12、24h的表达量(P<0.05),有PB1的卵母细胞中p21mRNA的表达量显著高于无PB1的卵母细胞(P<0.05);重组质粒pEGFP-N1-p21转染颗粒细胞后,有绿色荧光蛋白表达,且与转染pEGFP-N1和空白组相比,pEGFP-N1-p21转染组的p21mRNA表达量显著升高。结果表明,在体外成熟培养过程中均能检测到水牛卵母细胞p21mRNA表达量,成功构建了摩拉水牛p21基因真核表达载体,为下一步研究p21基因在水牛卵母细胞成熟和胚胎发育过程中的功能和调控奠定了基础。 展开更多
关键词 摩拉水牛 P21基因表达 颗粒细胞 pEGFP-N1载体
下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 4 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部