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携人胰岛素基因的“可控”型腺病毒载体的构建与初步验证
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作者 杨丽斌 斯朗扎西 +4 位作者 李元朝 何威 王儒鹏 周春丽 张斌 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第11期1744-1747,共4页
目的:设计并构建一种"可控"型腺病毒载体,该腺病毒载体在加入诱导剂后能自行消亡,从而解决其激发宿主免疫及产生复制型腺病毒等问题,为临床提供一种更安全的外源基因载体。方法:以传统Ad EasyTM腺病毒载体系统为基础,将Cre-Lo... 目的:设计并构建一种"可控"型腺病毒载体,该腺病毒载体在加入诱导剂后能自行消亡,从而解决其激发宿主免疫及产生复制型腺病毒等问题,为临床提供一种更安全的外源基因载体。方法:以传统Ad EasyTM腺病毒载体系统为基础,将Cre-Lox P定点敲除系统的Cre酶基因安置在Tet-On诱导表达系统的下游,而在穿梭质粒右臂基因组上下游分别插入一个Lox P位点,构建成"可控"型腺病毒穿梭质粒,并插入全长人胰岛素基因,感染大鼠骨髓间充质干细胞,观察诱导剂加入前后细胞荧光蛋白表达及人胰岛素分泌情况。结果:成功构建携全长人胰岛素基因的"可控"型重组腺病毒Ad Easy N/INS,转染QBI-293A细胞和大鼠骨髓间充质干细胞后,均可观察到绿色荧光的表达,在加入诱导剂Dox后,荧光细胞数/总细胞数的比值及胰岛素水平均显著降低。结论:成功构建了携带人胰岛素全长基因的新型"可控"型腺病毒载体,该新型重组腺病毒可像传统载体一样感染BMCs,且能加入诱导剂后迅速降解,实现了外源基因载体的可控性。 展开更多
关键词 “可控”型腺病毒载体 人胰岛素 降解
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