龙眼胚胎F3H基因的cDNA克隆及序列分析 被引量：13

1

作者 章希娟 许鸿川 +3 位作者 游向荣 李燕 陈清西 陈伟 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1581-1586,共6页

采用IEF/SDS-PAGE双向电泳技术,对'立冬本'龙眼合子胚发育不同时期的蛋白质进行分离,通过MALDI-TOF/TOF鉴定到其中一个上调差异表达的蛋白为黄烷酮-3-羟化酶(flavanone 3-hydroxy-lase,F3H)。以'立冬本'龙眼胚胎cDNA为... 采用IEF/SDS-PAGE双向电泳技术,对'立冬本'龙眼合子胚发育不同时期的蛋白质进行分离,通过MALDI-TOF/TOF鉴定到其中一个上调差异表达的蛋白为黄烷酮-3-羟化酶(flavanone 3-hydroxy-lase,F3H)。以'立冬本'龙眼胚胎cDNA为模板,采用RT-PCR和RACE技术,获得F3H基因cDNA1404bp全长序列。序列分析表明,F3H基因共编码365个氨基酸,其cDNA序列与柑橘、苹果、棉花等F3H基因的同源性均高达80%以上,该基因在GenBank中登录号为EF468104。 展开更多

关键词 龙眼 胚胎 黄烷酮-3-羟化酶 基因克隆 序列分析

原文传递

苦荞黄烷酮3-羟化酶基因F3H的克隆及序列分析 被引量：18

2

作者 张华玲 黄元射 +3 位作者 杨春贤 吴觐宇 陆俊 张启堂 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期447-452,共6页

为提高黄酮代谢途径中的关键酶活性,增加苦荞黄酮类化合物的合成量,根据已知植物的F3H基因同源序列,采用RT-PCR和RACE结合的方法,克隆了苦荞黄酮代谢途径中关键酶基因F3H,命名为FtF3H(GenBank登录号:FJ456858)。序列分析结果表明,FtF3H... 为提高黄酮代谢途径中的关键酶活性,增加苦荞黄酮类化合物的合成量,根据已知植物的F3H基因同源序列,采用RT-PCR和RACE结合的方法,克隆了苦荞黄酮代谢途径中关键酶基因F3H,命名为FtF3H(GenBank登录号:FJ456858)。序列分析结果表明,FtF3H基因长1369bp,编码367个氨基酸,该氨基酸序列及其cDNA序列与葡萄、牵牛F3H等的同源性约80%。二级结构预测表明,随机卷曲是FtF3H蛋白最大量的结构元件,而α-螺旋和β-片层则散布于整个蛋白质中;三维结构建模预测FtF3H蛋白具有铁离子结合位点及2-O-酮戊二酸结合位点等F3H蛋白典型结构。 展开更多

关键词 苦荞 黄烷酮-3-羟化酶 基因克隆 序列分析

下载PDF 职称材料

化橘红黄酮类生物合成中功能基因的克隆与序列分析 被引量：6

3

作者 文海涛 赵红英 +1 位作者 林励 方桂芳 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1686-1689,共4页

目的:克隆获得广东道地药材化橘红黄酮类化合物生物合成中几个重要功能基因。方法:利用CTAB-LiCl法提取高质量的化橘红总RNA,采用RT-PCR技术克隆基因。结果:克隆获得了化橘红黄酮类生物合成中三个重要功能基因,它们分别为查尔酮合成酶基... 目的:克隆获得广东道地药材化橘红黄酮类化合物生物合成中几个重要功能基因。方法:利用CTAB-LiCl法提取高质量的化橘红总RNA,采用RT-PCR技术克隆基因。结果:克隆获得了化橘红黄酮类生物合成中三个重要功能基因,它们分别为查尔酮合成酶基因,该基因编码区全长1173 bp,编码391个氨基酸,NCBI序列登录号:GQ892059;黄烷酮-3-羟化酶基因,该基因编码区全长1 086 bp,编码362个氨基酸,登录号:GU323284;查尔酮异构酶基因,该基因全长666 bp,编码222个氨基酸,登录号:GU323285。结论:CTAB-LiCl法能提取高质量的化橘红总RNA,克隆获得的三个功能基因都具有开放阅读框。 展开更多

关键词 化橘红 黄酮类 功能基因 查尔酮合成酶 黄烷酮-3-羟化酶 查尔酮异构酶

下载PDF 职称材料

独行菜La F3H基因克隆、序列分析及原核表达 被引量：6

4

作者 赵乐 马利刚 +3 位作者 张金燕 冯卫生 匡海学 郑晓珂 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第23期5626-5632,共7页

目的为了研究独行菜黄酮类化合物生物合成途径的关键基因,从独行菜中克隆了黄烷酮-3-羟化酶(flavanone-3-hydroxylase,F3H)基因,命名为LaF3H,并进行序列分析、原核表达和纯化。方法根据独行菜转录组数据中LaF3H基因序列设计特异性引物,... 目的为了研究独行菜黄酮类化合物生物合成途径的关键基因,从独行菜中克隆了黄烷酮-3-羟化酶(flavanone-3-hydroxylase,F3H)基因,命名为LaF3H,并进行序列分析、原核表达和纯化。方法根据独行菜转录组数据中LaF3H基因序列设计特异性引物,克隆LaF3H基因的cDNA序列,构建pET-32a-LaF3H原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达LaF3H重组蛋白。结果 LaF3H基因开放阅读框(ORF)长1080bp,编码359个氨基酸,其蛋白质相对分子质量为40 320。序列分析结果表明LaF3H具有F3H蛋白的5个保守基序,系统进化分析结果显示LaF3H蛋白与拟南芥等十字花科植物F3H蛋白同源性较高。通过构建原核表达载体pET-32a-LaF3H,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达LaF3H重组蛋白,利用Ni2+亲和色谱得到了纯化的LaF3H重组蛋白。结论克隆了LaF3H基因,获得LaF3H纯化蛋白,为下一步制备LaF3H蛋白抗体、酶学活性检测,研究LaF3H基因在独行菜黄酮类化合物生物合成途径中的功能奠定基础。 展开更多

关键词 独行菜 黄烷酮-3-羟化酶 基因克隆 序列分析 原核表达

原文传递

白菜黄烷酮-3-羟化酶基因的电子克隆与序列分析 被引量：3

5

作者 马光 梁菲菲 +2 位作者 郭继平 齐善厚 仲璐 《北方园艺》 CAS 北大核心 2012年第17期116-118,共3页

现根据同源基因相对保守性,利用已知的油菜F3H基因序列,采用电子克隆的方法获得了白菜F3H基因的cDNA序列;并采用生物信息工具对白菜F3H的性质包括氨基酸序列组成,物理和化学性质,疏水性或亲水性,二级和三级结构的特点进行了研究。结果表... 现根据同源基因相对保守性,利用已知的油菜F3H基因序列,采用电子克隆的方法获得了白菜F3H基因的cDNA序列;并采用生物信息工具对白菜F3H的性质包括氨基酸序列组成,物理和化学性质,疏水性或亲水性,二级和三级结构的特点进行了研究。结果表明:白菜F3H基因cDNA全长为1 228bp,包含1个完整的开放读码框(1 077bp),编码358个氨基酸。其分子量为40 104.6Da,等电点为5.45;其三维结构显示其是具有7个螺旋和12个折叠和一些不规则卷曲组成的球状结构。 展开更多

关键词 黄烷酮-3-羟化酶 白菜 电子克隆

下载PDF 职称材料

柑橘香橙素生成途径关键酶黄烷酮-3-羟化酶特性分析及原核表达 被引量：2

6

作者 黄旭 田苗苗 +3 位作者 肖妃垚 刘娟 王振 单杨 《食品科学技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期65-72,共8页

香橙素是柑橘类黄酮的重要组成,黄烷酮-3-羟化酶是香橙素生成途径中的关键作用酶。对黄烷酮-3-羟化酶的特点进行总结与分析并在大肠杆菌中进行表达。首先从NCBI数据库筛选了来自柑橘、陆地棉、玉米、水母雪莲和欧芹的5种f3h,对其进行理... 香橙素是柑橘类黄酮的重要组成,黄烷酮-3-羟化酶是香橙素生成途径中的关键作用酶。对黄烷酮-3-羟化酶的特点进行总结与分析并在大肠杆菌中进行表达。首先从NCBI数据库筛选了来自柑橘、陆地棉、玉米、水母雪莲和欧芹的5种f3h,对其进行理化性质、蛋白质二三级结构、序列比对等生物信息学分析并以大肠杆菌为宿主进行表达。发现5种来源的f3h,其基因开放阅读框为1032~1119 bp,编码343~372个氨基酸,蛋白分子质量为38.89~41.45 kDa,理论等电点在5.43~5.96,且不同物种F3H的理化性质、结构域和蛋白质结构也有一定的相似性。通过构建大肠杆菌表达体系发现:黄烷酮-3-羟化酶均能进行原核表达,除去来源于水母雪莲的F3H未检测到香橙素的生成,其余4种F3H均能将柚皮素转化为香橙素且产物生成量不同,其中ZmF3H生成量最高达20.12 mg/L。 展开更多

关键词 柑橘 黄烷酮-3-羟化酶 生成途径 特征分析 原核表达

下载PDF 职称材料

玉米黄烷酮-3-羟化酶原核表达条件对香橙素生成量的影响 被引量：1

7

作者 黄旭 王振 +4 位作者 刘娟 肖妃垚 田苗苗 郭佳婧 单杨 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期38-43,共6页

香橙素是类黄酮代谢途径中重要的中间化合物,黄烷酮-3-羟化酶(flavanone-3-hydroxylase,F3H)能以柚皮素为底物催化C;位接羟基从而生成香橙素。为实现香橙素绿色发展,该研究利用微生物法,对来自玉米的Zmf3h构建大肠杆菌原核表达系统后诱... 香橙素是类黄酮代谢途径中重要的中间化合物,黄烷酮-3-羟化酶(flavanone-3-hydroxylase,F3H)能以柚皮素为底物催化C;位接羟基从而生成香橙素。为实现香橙素绿色发展,该研究利用微生物法,对来自玉米的Zmf3h构建大肠杆菌原核表达系统后诱导ZmF3H蛋白表达。通过发酵实验验证ZmF3H在胞内可溶性表达并成功催化生成香橙素。为提高香橙素产量,对蛋白表达阶段的菌体密度、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导剂浓度、诱导时间和诱导温度等条件进行优化实验。单因素试验结果表明各实验组分别在菌种密度OD;=0.8~1.0,IPTG终浓度为0.6 mmol/L,诱导温度在23℃,诱导8 h时可明显提高香橙素生成量,综合各单因素优化条件进行实验验证后发现香橙素生成量为(32.27±1.98)mg/L,与初始条件相比提高了60.39%。 展开更多

关键词 香橙素 黄烷酮-3-羟化酶 原核表达 表达条件优化

下载PDF 职称材料

红花菜豆黄烷酮-3-羟化酶基因电子克隆及序列分析（英文） 被引量：2

8

作者 马光 郭继平 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2014年第4期6-9,33,共5页

黄烷酮-3-羟化酶(F3H)是植物类黄酮物质生物合成途径中的一个关键酶。本文利用电子克隆的方法,采用已经报道的大豆F3H基因cDNA序列为种子序列,搜索红花菜豆EST数据库,获得了假定的红花菜豆F3H基因cDNA的序列。根据假定的cDNA序列设计引... 黄烷酮-3-羟化酶(F3H)是植物类黄酮物质生物合成途径中的一个关键酶。本文利用电子克隆的方法,采用已经报道的大豆F3H基因cDNA序列为种子序列,搜索红花菜豆EST数据库,获得了假定的红花菜豆F3H基因cDNA的序列。根据假定的cDNA序列设计引物,采用RT-PCR的方法获得了红花菜豆F3H基因cDNA的编码序列。并采用生物信息工具对红花菜豆F3H的性质包括氨基酸序列组成、物理和化学性质、二级和三级结构的特点进行了研究。结果表明,红花菜豆F3H基因cDNA包含一个1128 bp的完整的开放读码框,其编码蛋白由375个氨基酸组成。与大豆黄烷酮-3-羟化酶同源性为92%。其二级结构含有40.8%α螺旋和39.73%无规则卷曲,β折叠较少为4.53%。采用同源模建的方式分析其三维立体结构,表明其三维结构是一个紧密的球状结构。 展开更多

关键词 黄烷酮-3-羟化酶 三维结构 序列分析 RT-PCR 生物信息学

原文传递

不同植物源的黄烷酮-3-羟化酶的催化特性

9

作者 张欣宇 董潞娜 +3 位作者 曹浩 刘加鼎 赵百锁 王海胜 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期875-887,共13页

【背景】黄烷酮-3-羟化酶(flavanone-3-hydroxylase,F3H)是黄酮类化合物代谢途径中的关键酶之一,不同植物来源的F3H催化特性可能存在差异,并对黄酮类化合物的生物合成产生重要影响。【目的】比较分析不同植物源F3H的酶学性质、异源催化... 【背景】黄烷酮-3-羟化酶(flavanone-3-hydroxylase,F3H)是黄酮类化合物代谢途径中的关键酶之一,不同植物来源的F3H催化特性可能存在差异,并对黄酮类化合物的生物合成产生重要影响。【目的】比较分析不同植物源F3H的酶学性质、异源催化能力差异,为今后在黄酮类化合物代谢工程中F3H的选用提供参考。【方法】通过系统进化分析选择来自茶树(Camellia sinensis)、银杏(Ginkgo biloba)和大豆(Glycine max)的F3H基因,诱导表达后用亲和层析对F3H进行纯化,以柚皮素为底物表征不同植物来源F3H的酶学性质;采用单因素分析法对F3H在原核宿主Escherichia coli和真核宿主Saccharomyces cerevisiae体内的催化活性进行分析。【结果】酶学性质分析发现,CsF3H、GbF3H和GmF3H的最适反应温度分别为40、40和35℃,最适反应pH值分别为7.5、7.0和7.5。催化动力学研究发现,CsF3H的k_(cat)/K_(m)为0.36 L/(mmol·s),高于GbF3H和GmF3H。体内催化实验表明,当底物柚皮素的浓度为500μmol/L时,CsF3H、GmF3H单基因大肠杆菌工程菌对柚皮素的转化率达80%以上,而GbF3H工程菌对柚皮素的转化率仅为23.8%;3种单基因酵母工程菌对柚皮素的转化率都在40%左右,没有明显差异。【结论】不同植物源的F3H催化活性存在差异,而且同一种F3H在原核底盘细胞与真核底盘细胞中催化能力也存在较大差异,3种F3H中CsF3H具有优良的催化性能,并在原核底盘细胞内有较好的应用潜力。 展开更多

关键词 黄烷酮-3-羟化酶 酶学性质 异源表达 二氢山奈酚 柚皮素

原文传递

CiF3H基因克隆及功能分析 被引量：3

10

作者 杨飞芸 白洁 +1 位作者 杨天瑞 王瑞刚 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期53-60,共8页

黄烷酮-3-羟化酶(F3H)是类黄酮合成途径的中枢位点,调控代谢途径中黄酮醇和花青素合成。文章根据转录组数据库中F3H基因中间片段设计特异引物,以中间锦鸡儿cDNA为模板,克隆得到CiF3H基因全长,通过序列分析、系统进化分析加以确认。qRT-... 黄烷酮-3-羟化酶(F3H)是类黄酮合成途径的中枢位点,调控代谢途径中黄酮醇和花青素合成。文章根据转录组数据库中F3H基因中间片段设计特异引物,以中间锦鸡儿cDNA为模板,克隆得到CiF3H基因全长,通过序列分析、系统进化分析加以确认。qRT-PCR检测分析发现,中间锦鸡儿CiF3H基因受紫外、NaCl和ABA等胁迫诱导时表达模式具有相同规律。CiF3H基因在叶和根中表达量相当,茎中较少。异源表达CiF3H基因拟南芥的总黄酮含量少量增加,花青素含量降低。 展开更多

关键词 黄烷酮-3-羟化酶(F3H) 中间锦鸡儿 总黄酮含量 花青素含量 转基因拟南芥

下载PDF 职称材料

三色堇花色素合成途径中部分结构基因的克隆及生物信息学分析 被引量：1

11

作者 龚胜 孙海燕 +4 位作者 张珂 曾媛 李婧 王健 李新国 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2015年第7期133-142,共10页

【目的】对三色堇花色素合成的3个结构基因VwCHS、VzvCHI和VwF3H进行克隆以及生物信息学分析。【方法】利用RAcE／PcR技术克隆得到VwCHS、‰cHf和VzvF3H基因的全长序列，并通过在线分析软件对其生物信息学进行分析。【结果】获得VwCHS、... 【目的】对三色堇花色素合成的3个结构基因VwCHS、VzvCHI和VwF3H进行克隆以及生物信息学分析。【方法】利用RAcE／PcR技术克隆得到VwCHS、‰cHf和VzvF3H基因的全长序列，并通过在线分析软件对其生物信息学进行分析。【结果】获得VwCHS、VwCHI和VwF3H的cDNA全长分别是1481，975和1361bp；经多重序列比对发现这3个基因编码的氨基酸与其他植物相关氨基酸一致性较高，主要集中在62％～90％，并且在CHS氨基酸序列中有4个催化活性位点（Cys171、Phe222、His310、Asn343），在CHI氨基酸序列中有4个催化活性位点（Thr50、Tyr108、Asn115、Ser192），在VwF3H氨基酸序列中有5个催化活性位点（Asp218、His253、Arg215、Arg284、Ser286）；VwCHS、VwCHI、VwF3H的蛋白质分子量分别为9．91，5．37，4．1ku，等电点为5．02，5．16，5．44；二级结构预测发现，vwCHs和VwCHI二级结构主要是0t螺旋，分别占43．39％和41．89％，VwF3H的蛋白质二级结构主要是无规则卷曲，占42．30％；聚类分析发现VwCHS、VwCHI和VwF3H分别归属于各自的聚类簇。【结论1VwCHS、VwCHI和VwF3H是不存在信号肽的非跨膜蛋白。 展开更多

关键词 三色堇 查尔酮合成酶(CHS) 查尔酮异构酶(CHI) 黄烷酮-3-羟化酶(F3H) 生物信息学 基因克隆

下载PDF 职称材料

桑树黄烷酮-3-羟化酶基因的克隆及在35份桑种质资源植株叶片中的表达差异 被引量：1

12

作者 尚亚君 钱娇 +5 位作者 倪红梅 方荣俊 潘刚 赵卫国 张林 刘利 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期775-782,共8页

黄烷酮-3-羟化酶（F3H）是黄酮类化合物合成途径的关键酶之一,其催化黄烷酮合成的二氢黄酮醇又可经不同代谢途径合成花青素等多种黄酮类物质。以鲁桑（Morus multicaulis）品种育711号植株的幼叶cD NA为模板,利用RT-PCR和RACE技术克隆... 黄烷酮-3-羟化酶（F3H）是黄酮类化合物合成途径的关键酶之一,其催化黄烷酮合成的二氢黄酮醇又可经不同代谢途径合成花青素等多种黄酮类物质。以鲁桑（Morus multicaulis）品种育711号植株的幼叶cD NA为模板,利用RT-PCR和RACE技术克隆了桑树F3H基因cD NA的全长序列,将该基因命名为MmF 3H（GenB ank登录号：KU301748）。该基因开放阅读框（ORF）长1 095 bp,编码一个含有365个氨基酸残基的多肽,预测蛋白质分子质量为40.15 kD,等电点为4.93。该基因编码氨基酸序列与川桑（Morus notabilis）F3H的序列相似度高达98%,与其它5种植物F3H也具有较高的序列相似度（79%~82%）,说明F3H基因编码的氨基酸序列具有较高的保守性;系统进化树也显示来自鲁桑的F3H序列与来自川桑的F3H序列聚在一枝,亲缘关系最近。qRT-PCR检测MmF 3H基因在35份桑种质资源植株幼叶中的表达水平存在较大差异,相对表达量较高的达到0.784 5,而较低的仅为0.012 1;用分光光度法测定35份桑种质资源植株桑叶片中的总黄酮和总花青素含量也存在较大差异,而且总黄酮含量的差异与MmF 3H基因表达水平的差异具有一定相关性,推测MmF 3H催化生成的产物属于黄酮类化合物合成途径的上游产物。 展开更多

关键词 桑树黄烷酮-3-羟化酶 基因克隆 表达水平 黄酮类化合物 花青素 种质差异

下载PDF 职称材料

黄花蒿黄烷酮3-羟化酶基因AaF3H的克隆及其在烟草中的表达

13

作者 龙金花 龚志华 +2 位作者 田娜 刘硕谦 肖文军 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期2601-2609,共9页

通过SMART-RACE技术从黄花蒿中克隆得到了2 136 bp的黄烷酮3-羟化酶基因AaF3H的cDNA全长序列,该序列包含一个1 092 bp的完整编码区,编码364个氨基酸组成的蛋白。该蛋白的分子量为41.18 k D,理论等电点(p I)为5.67,是一种稳定的非分泌和... 通过SMART-RACE技术从黄花蒿中克隆得到了2 136 bp的黄烷酮3-羟化酶基因AaF3H的cDNA全长序列,该序列包含一个1 092 bp的完整编码区,编码364个氨基酸组成的蛋白。该蛋白的分子量为41.18 k D,理论等电点(p I)为5.67,是一种稳定的非分泌和非跨膜的亲水性蛋白,共有13个磷酸化位点,属于典型的2OG-FeⅡ_Oxy加氧酶超家族,二级结构以无规则卷曲为主。利用NCBI分析表明,AaF3H与菊花F3H蛋白的一致性达97%。经基因克隆、农杆菌介导将该基因转入烟草中,结果显示,相较于野生烟草,过表达AaF3H基因能显著转化柚皮素,说明AaF3H基因在黄花蒿黄酮类物质的生物合成中起重要作用,也为进一步研究黄花蒿中黄酮类物质的生物合成调控提供了基础。 展开更多

关键词 黄花蒿 黄烷酮-3-羟化酶基因 克隆 序列分析 转化烟草

原文传递

芜菁黄烷酮3-羟化酶基因的克隆、序列分析及表达 被引量：11

14

作者 许志茹 崔国新 +2 位作者 李春雷 孙燕 李玉花 《分子植物育种》 CAS CSCD 2008年第4期787-792,共6页

花青素是一类重要的植物次生代谢产物,黄烷酮3-羟化酶(F3H)是花青素生物合成早期阶段的重要催化酶。利用UV-A处理津田芜菁(Tsuda turnip)和赤丸芜菁(Yurugi Akamaru turnip)块根24h后提取总RNA,通过RT-PCR方法克隆了BrF3H基因。津田芜... 花青素是一类重要的植物次生代谢产物,黄烷酮3-羟化酶(F3H)是花青素生物合成早期阶段的重要催化酶。利用UV-A处理津田芜菁(Tsuda turnip)和赤丸芜菁(Yurugi Akamaru turnip)块根24h后提取总RNA,通过RT-PCR方法克隆了BrF3H基因。津田芜菁和赤丸芜菁的F3H基因完全相同。BrF3H的开放读码框为1077bp,编码358个氨基酸。氨基酸序列分析显示,BrF3H与甘蓝型油菜(Brassica napus)F3H-1的同源性为99%。Northern杂交结果显示,UV-A可以诱导BrF3H表达,基因的表达量与处理时间呈相关。 展开更多

关键词 芜菁 黄烷酮3-羟化酶基因 克隆与表达 序列分析

下载PDF 职称材料

石蒜黄烷酮3–羟化酶基因LrF3H的克隆及表达分析 被引量：11

15

作者 黄春红 高燕会 +2 位作者 朱玉球 童再康 姜小凤 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期960-970,共11页

采用RT-PCR和RACE技术相结合的方法,从石蒜花瓣中克隆到1个黄烷酮3–羟化酶(F3H)基因的cDNA全长序列,全长1293bp,包含1098bp的完整开放阅读框,编码365个氨基酸;氨基酸序列比对显示该序列编码的氨基酸与水仙的F3H具有高达91%的同源性,将... 采用RT-PCR和RACE技术相结合的方法,从石蒜花瓣中克隆到1个黄烷酮3–羟化酶(F3H)基因的cDNA全长序列,全长1293bp,包含1098bp的完整开放阅读框,编码365个氨基酸;氨基酸序列比对显示该序列编码的氨基酸与水仙的F3H具有高达91%的同源性,将其命名为LrF3H。二级结构预测表明,随机卷曲是LrF3H蛋白最大量的结构元件,而α–螺旋和延伸链散布于整个蛋白中。保守结构域预测表明该基因编码的蛋白具有典型的F3H蛋白功能结构域,其保守结构域中含有铁离子及2–O–酮戊二酸结合位点,属于2OG-FeⅡ_Oxy双加氧酶超家族。实时荧光定量PCR分析表明,LrF3H在整个花发育过程中均表达,而且从初蕾期到盛开期随着花瓣着色加深表达量逐渐增加,盛开期表达量最高,之后随着花朵萎蔫表达量下降;在不同器官中,LrF3H的表达量在花瓣和花葶中最高,而在根、鳞茎和叶片中都很低,推测该基因在石蒜花色形成过程中起着关键作用。 展开更多

关键词 石蒜 黄烷酮3–羟化酶 基因克隆 表达

原文传递

百合黄烷酮3-羟化酶基因LhSorF3H的克隆与表达 被引量：10

16

作者 张星 杨捷 +2 位作者 彭梦笛 贾桂霞 何恒斌 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2325-2331,共7页

为了探究百合花色的调控机制,以东方百合品种‘索邦’(Sorbonne)的花蕾为试验材料,根据前期转录组测序结果,成功克隆出黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)基因的编码序列和基因组序列,其中,编码序列全长1 110bp,可编码369个... 为了探究百合花色的调控机制,以东方百合品种‘索邦’(Sorbonne)的花蕾为试验材料,根据前期转录组测序结果,成功克隆出黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)基因的编码序列和基因组序列,其中,编码序列全长1 110bp,可编码369个氨基酸;基因组序列全长1 438bp,包含3个外显子和2个内含子,命名该基因为LhSorF3 H(GenBank登录号为MF614135)。生物信息学分析结果显示,黄烷酮3-羟化酶在进化上具有较高的保守性。LhSorF3 H编码的蛋白与郁金香(Tulipafosteriana)最为相似。半定量RT-PCR结果显示,LhSorF3H在花被、柱头以及花柱中表达明显,在花丝、子房、嫩茎、茎生根及上部叶片中表达较弱,而在花药和中下部叶片中基本不表达。LhSorF3 H在不同发育阶段的花被片中均有表达(S2和S6阶段除外);黑暗处理使LhSorF3 H表达降低,黑暗处理2h的LhSorF3 H表达量降到最低,之后表达量开始上升;转入光照条件后,LhSorF3H的表达水平持续增加。研究表明,LhSorF3 H基因对昼夜节律和光照具有双重响应的特性。 展开更多

关键词 百合'索邦’ 黄烷酮3羟化酶基因 克隆 表达

下载PDF 职称材料

金花茶黄烷酮3-羟化酶基因CnF3H的克隆及表达分析 被引量：6

17

作者 周兴文 殷恒福 +1 位作者 朱宇林 李纪元 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期2051-2057,共7页

本研究利用反转录PCR和RACE方法,从中国珍稀濒危植物金花茶(Camellia nitidissima)花瓣中获得了黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)基因的c DNA全长,命名为Cn F3H,Gen Bank登录号为HQ290517。碱基序列分析表明,该Cn F3H基因c ... 本研究利用反转录PCR和RACE方法,从中国珍稀濒危植物金花茶(Camellia nitidissima)花瓣中获得了黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)基因的c DNA全长,命名为Cn F3H,Gen Bank登录号为HQ290517。碱基序列分析表明,该Cn F3H基因c DNA序列全长为1 360 bp,5'非翻译区(untranslated regions,UTR)长54 bp,3'UTR长202 bp,开放阅读框长为1 104 bp编码367个氨基酸。氨基酸序列比对分析表明,Cn F3H与茶(C.sinensis)F3H同源性高达99%。二级结构预测表明,无规则卷曲在Cn F3H蛋白结构中所占比例最大,其次为α-螺旋和延伸链。相对荧光定量PCR分析表明,Cn F3H基因的表达量在幼蕾期、初蕾期和膨大期的表达量较高,之后逐渐降低;Cn F3H基因在花器官不同部位中均有表达,其表达量高低顺序为雄蕊、花瓣、萼片、雌蕊和苞片。本研究为全面深入地研究金花茶花色形成的分子调控机理提供了充实的理论依据。 展开更多

关键词 金花茶 黄烷酮3-羟化酶 基因克隆 表达

原文传递

花生黄烷酮3-羟化酶基因AhF3H的克隆和表达分析 被引量：6

18

作者 李明 王玉红 +5 位作者 李长生 侯蕾 赵传志 赵术珍 夏晗 王兴军 《山东农业科学》 2013年第11期1-6,共6页

利用花生转录组测序结果和GenBank EST数据库,首次从花生中克隆了黄烷酮3-羟化酶基因,命名为AhF3H,GenBank登录号为KF312218。氨基酸序列分析表明,AhF3H与其他植物F3H有较高的同源性。进化树分析表明,AhF3H与大豆、野生大豆F3H的亲缘关... 利用花生转录组测序结果和GenBank EST数据库,首次从花生中克隆了黄烷酮3-羟化酶基因,命名为AhF3H,GenBank登录号为KF312218。氨基酸序列分析表明,AhF3H与其他植物F3H有较高的同源性。进化树分析表明,AhF3H与大豆、野生大豆F3H的亲缘关系较近。在花生紫色种质材料及丰花1号中,AhF3H的相对表达水平同花青素含量呈正相关,表明AhF3H在花生花青素合成代谢过程中具有重要作用。 展开更多

关键词 花生 花青素 黄烷酮3-羟化酶 基因表达

下载PDF 职称材料

日本落叶松LkF3H2基因克隆及调控类黄酮代谢功能研究

19

作者 李灿 蒋湘宁 盖颖 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期245-252,共8页

【目的】日本落叶松黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase 2,LkF3H2)基因在类黄酮生物合成过程中发挥着重要的调控功能。探究LkF3H2基因在日本落叶松中发挥的具体功能和植物类黄酮生物代谢过程。【方法】根据实验室前期转录组数据克... 【目的】日本落叶松黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase 2,LkF3H2)基因在类黄酮生物合成过程中发挥着重要的调控功能。探究LkF3H2基因在日本落叶松中发挥的具体功能和植物类黄酮生物代谢过程。【方法】根据实验室前期转录组数据克隆日本落叶松LkF3H2基因并进行生物信息学分析及组织表达分析。随后将该基因转化烟草进行转基因烟草组织表达分析及类黄酮含量测定,以探究基因表达量与类黄酮含量之间的关系。【结果】LkF3H2基因cDNA序列长度为1074 bp,其蛋白编码358个氨基酸,分子式C_(1785)H_(2807)N_(481)O_(541)S_(18),分子量为40.24 kD,该蛋白是不稳定的亲水性蛋白且不含信号肽;同时系统进化分析得出日本落叶松LkF3H2与火炬松、辐射松、白云杉和欧洲云杉F3H亲缘关系较近并且该蛋白含有保守结构域2OG-Fe(Ⅱ)oxygenase superfamily,属于2-酮戊二酸依赖性双加氧家族。另外组织表达分析显示LkF3H2基因在一月龄日本落叶松幼苗叶中表达量最高,在一年生日本落叶松幼苗茎中表达量最高,并且在转基因烟草叶中也显示了最高的表达量。值得一提的是,转基因烟草叶中的类黄酮含量也是最高的,其次为茎和根,转基因烟草中类黄酮含量与LkF3H2基因表达量呈正相关关系。【结论】日本落叶松LkF3H2基因属于2-酮戊二酸依赖性双加氧家族并且在类黄酮生物合成过程中发挥着重要功能。 展开更多

关键词 黄烷酮3-羟化酶基因 转基因烟草 组织表达 类黄酮

下载PDF 职称材料

比利时杜鹃花黄烷酮3-羟化酶基因克隆及功能分析 被引量：1

20

作者 蒋宝鑫 吴泽航 +5 位作者 杨国霞 吕思佳 贾永红 吴月燕 周若一 谢晓鸿 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期653-669,共17页

黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)是植物花青素(anthocyanin)合成过程中的关键酶。本研究以红色比利时杜鹃花(Rhododendron hybridum Hort.)不同发育时期的花瓣为实验材料,利用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)... 黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)是植物花青素(anthocyanin)合成过程中的关键酶。本研究以红色比利时杜鹃花(Rhododendron hybridum Hort.)不同发育时期的花瓣为实验材料,利用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)和cDNA末端快速克隆(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术对比利时杜鹃花黄烷酮3-羟化酶(Rhododendron hybridum Hort.flavanone 3-hydroxylase,RhF3H)基因进行克隆,并进行生物信息学分析;利用qRT-PCR技术对不同发育时期花瓣RhF3H基因表达量进行分析;构建pET-28a-RhF3H原核表达载体对RhF3H蛋白进行制备和纯化;构建pCAMBIA1302-RhF3H过表达载体,通过农杆菌介导法进行拟南芥遗传转化研究。结果表明,比利时杜鹃花RhF3H基因全长为1245 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)为1092 bp,编码363个氨基酸,含有Fe2+结合基序和2-酮戊二酸结合基序的双加氧酶超家族。系统进化分析表明,比利时杜鹃花RhF3H蛋白与越橘F3H蛋白亲缘关系最近;实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)分析表明,在不同发育时期花瓣中,红色比利时杜鹃花RhF3H基因的表达水平呈先上升后下降的趋势,在初开期表达量最高;原核表达结果表明,构建原核表达载体pET-28a-RhF3H诱导蛋白大小约为40 kDa,与理论值相近;成功获得转基因RhF3H拟南芥植株,PCR鉴定和β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase,GUS)染色证明RhF3H基因整合到拟南芥植株基因组中。qRT-PCR、总黄酮和花青素含量分析显示,相对于野生型,RhF3H在转基因拟南芥植株中显著高表达,其总黄酮和花青素含量也显著增加。本研究为探究杜鹃花RhF3H基因功能提供一定的理论基础,对杜鹃花花色的分子机理有重要的研究价值。 展开更多

关键词 比利时杜鹃花 黄烷酮3-羟化酶 基因克隆 生物信息学分析 原核表达 转基因拟南芥植株

原文传递