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LPS通过ROS/p38/MAPK信号通路对鹅胚肝细胞凋亡的影响 被引量：1
1
作者 钟粤韵 杨舒展 +7 位作者 陈非玥 陆智儿 李冰心 李婉雁 田允波 黄运茂 许丹宁 曹楠 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2224-2232,共9页
【目的】建立鹅胚肝细胞的分离培养技术,探索脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)影响鹅胚肝细胞凋亡的作用机制,为鹅肝脏功能相关研究提供参考依据。【方法】选取16~18日龄无特定病原鹅胚,无菌条件下取鹅胚肝脏并用2%胶原酶Ⅳ消化,过细胞... 【目的】建立鹅胚肝细胞的分离培养技术,探索脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)影响鹅胚肝细胞凋亡的作用机制,为鹅肝脏功能相关研究提供参考依据。【方法】选取16~18日龄无特定病原鹅胚,无菌条件下取鹅胚肝脏并用2%胶原酶Ⅳ消化,过细胞筛后分离培养鹅胚肝细胞并进行PAS染色鉴定。在鹅胚肝细胞中添加不同浓度(0(对照组)、0.1、1.0、10μg/mL)LPS,分别于12、24、36 h收集细胞,采用试剂盒检测鹅胚肝细胞内活性氧(ROS)水平,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR检测细胞凋亡关键基因(caspase3、caspase9、p38)mRNA表达量。【结果】试验成功从鹅胚中分离出肝细胞并进行培养,鹅胚肝细胞形态完整,贴壁率高,存活率高,能稳定生长。PAS染色结果显示,鹅胚肝细胞质呈深浅不一的紫红色,肝细胞核呈蓝色。添加不同浓度LPS后发现,鹅胚肝细胞有氧化损伤情况,其中1.0μg/mL LPS组鹅胚肝细胞内ROS水平升高。添加LPS后鹅胚肝细胞晚期细胞凋亡受到抑制,除36 h外,细胞凋亡关键基因caspase 3、caspase 9、p 38表达量均显著降低(P<0.05)。【结论】本研究建立了较稳定的鹅胚肝细胞分离培养方法,添加不同浓度LPS后鹅胚肝细胞内ROS水平升高,激活p38/MAPK通路,且细胞凋亡受到一定抑制。 展开更多
关键词 鹅胚肝细胞 脂多糖(LPS) ROS/p38/MAPK信号通路 细胞凋亡
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甜菜碱对鹅胚原代肝细胞脂肪代谢和DNA甲基化的影响及调控机制 被引量：1
2
作者 杨芷 杨雨 +2 位作者 阳金金 王志跃 杨海明 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期2918-2926,共9页
本试验旨在研究甜菜碱对鹅胚原代肝细胞脂肪代谢和DNA甲基化的影响及调控机制。以鹅胚原代肝细胞为试验对象,试验1:研究不同浓度[0(对照)、2.5、5.0和10.0 mmol/L]甜菜碱培养液对鹅胚原代肝细胞DNA甲基化相关酶活性和泛酰巯基乙胺酶-1(V... 本试验旨在研究甜菜碱对鹅胚原代肝细胞脂肪代谢和DNA甲基化的影响及调控机制。以鹅胚原代肝细胞为试验对象,试验1:研究不同浓度[0(对照)、2.5、5.0和10.0 mmol/L]甜菜碱培养液对鹅胚原代肝细胞DNA甲基化相关酶活性和泛酰巯基乙胺酶-1(VNN-1)启动子区域DNA甲基化的影响;试验2:研究不同处理[正常培养液(对照)、5.0μmol/L DNA甲基化酶抑制剂(AZA)、5.0 mmol/L甜菜碱、5.0μmol/L AZA+5.0 mmol/L甜菜碱]培养液对鹅胚原代肝细胞VNN-1和脂肪酸合成酶(FAS)基因表达的影响,探索VNN-1启动子区域甲基化调控基因表达的分子机制。结果表明:1)2.5、5.0和10.0 mmol/L甜菜碱组肝细胞的低密度脂蛋白(LDL)含量显著低于对照组(P<0.05)。2)S-腺苷甲硫氨酸/S-腺苷同型半胱氨酸(SAM/SAH)比值随着甜菜碱浓度的增加呈上升趋势,呈显著一次线性关系(P<0.05)。3)5.0和10.0 mmol/L甜菜碱组肝细胞VNN-1基因表达量显著低于对照组和2.5 mmol/L甜菜碱组(P<0.05);5.0和10.0 mmol/L甜菜碱组肝细胞VNN-1启动子区域DNA甲基化水平显著高于对照组(P<0.05)。4)AZA处理96 h时,AZA组和AZA+甜菜碱组肝细胞中VNN-1基因表达量显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,处理48 h时,AZA处理显著提高了肝细胞中FAS基因表达量(P<0.05)。综上所述,鹅胚原代肝细胞培养液中添加甜菜碱能抑制肝细胞的脂质积累,提高细胞总体的DNA甲基化水平,且VNN-1启动子区域的甲基化负反馈调节其基因表达。AZA抑制DNA甲基化后发现VNN-1和FAS的高表达与DNA去甲基化相关。 展开更多
关键词 甜菜碱 鹅胚原代肝细胞 VNN-1 脂质代谢 DNA甲基化
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