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鸭肝炎病毒Ⅰ型VP3基因的克隆及原核表达 被引量：11
1
作者 刘家森 甘一迪 +5 位作者 姜骞 孟庆文 韩凌霞 司昌德 刘娣 曲连东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期587-590,共4页
参照鸭肝炎病毒Ⅰ型(DHV-Ⅰ)的基因组序列设计并合成了1对引物。通过RT-PCR方法扩增获得了DHV-Ⅰ病毒161/79/V结构蛋白VP3基因,并将VP3基因片段插入pGEX-6p-1表达载体,转化E.coli Rosetta-gami(DE3)pLysS。SDS-PAGE分析表明,经用0.1mmol... 参照鸭肝炎病毒Ⅰ型(DHV-Ⅰ)的基因组序列设计并合成了1对引物。通过RT-PCR方法扩增获得了DHV-Ⅰ病毒161/79/V结构蛋白VP3基因,并将VP3基因片段插入pGEX-6p-1表达载体,转化E.coli Rosetta-gami(DE3)pLysS。SDS-PAGE分析表明,经用0.1mmol/LIPTG于16℃诱导表达后,菌体裂解产物有特异的、分子质量约52ku的目的蛋白条带。Western-blotting检测表明,表达产物与DHV-Ⅰ阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒ⅰ型 VP3基因 克隆 原核表达
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鸭肝炎病毒Ⅰ型的分离及其鸡胚适应性 被引量：6
2
作者 李肖梁 方维焕 马有智 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2004年第6期37-38,共2页
关键词 鸭肝炎病毒ⅰ型 分离 鸡胚适应性 鸭 病毒性肝炎
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鸭肝炎病毒Ⅰ型结构基因vp1的原核表达及其抗原性分析 被引量：4
3
作者 甘一迪 刘家森 +4 位作者 姜骞 孟庆文 韩凌霞 司昌德 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期618-621,共4页
通过RT-PCR方法克隆出DHV-1:161/79/V结构蛋白vp1基因片段,将其克隆到pMD18-T载体中,测序结果为714bp。vp1经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,亚克隆到原核表达载体pET-32a(+),获得重组质粒pET-VP1,转入E.coli Rosetta-gami(DE3) pLysS,经IPTG诱... 通过RT-PCR方法克隆出DHV-1:161/79/V结构蛋白vp1基因片段,将其克隆到pMD18-T载体中,测序结果为714bp。vp1经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,亚克隆到原核表达载体pET-32a(+),获得重组质粒pET-VP1,转入E.coli Rosetta-gami(DE3) pLysS,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测结果表明在大肠杆菌中表达了1个相对分子量约为47ku的融合蛋白(Trx-His-VP1),将此融合蛋白用His-Ni+亲和层析法进行纯化。Western blot分析表明,Trx-His-VP1能与DHV-1阳性血清发生特异性反应,说明表达的结构蛋白VP1具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒ⅰ型 VP1基因 原核表达
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鸭肝炎病毒Ⅰ型的RT—PCR诊断方法的建立 被引量：3
4
作者 高骏 孙凤萍 +2 位作者 胡建华 王胜昌 易建中 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2008年第2期124-126,共3页
根据Genebank上发表的鸭肝炎病毒Ⅰ型(DHV-1)的部分序列设计了1对引物D1/D2,通过对反应条件的优化,建立起了有效的鸭肝炎病毒Ⅰ型的RT-PCR诊断方法。并应用此方法对近年在上海及周遍地区分离到的2株DHV-1分离毒进行了检测和测序鉴定,结... 根据Genebank上发表的鸭肝炎病毒Ⅰ型(DHV-1)的部分序列设计了1对引物D1/D2,通过对反应条件的优化,建立起了有效的鸭肝炎病毒Ⅰ型的RT-PCR诊断方法。并应用此方法对近年在上海及周遍地区分离到的2株DHV-1分离毒进行了检测和测序鉴定,结果证实此株分离毒为DHV-1病毒。结果显示建立的DHV-1的PCR诊断方法具有快速、准确的优点。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒ⅰ型 DHV-1 RT—PCR
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鸭肝炎病毒Ⅰ型基因片段的原核表达及单克隆抗体的制备 被引量：1
5
作者 高骏 孙凤萍 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第2期17-20,共4页
根据Genebank上已报道的鸭肝炎病毒Ⅰ型基因的全长序列,设计了1对引物,通过RT-PCR方法扩增出特异的DHV-Ⅰ基因片段;将该片段克隆入原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌Rosetta-gami(DE3),并用IPTG诱导表达后,通过Ni柱纯化,获得了表观分子... 根据Genebank上已报道的鸭肝炎病毒Ⅰ型基因的全长序列,设计了1对引物,通过RT-PCR方法扩增出特异的DHV-Ⅰ基因片段;将该片段克隆入原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌Rosetta-gami(DE3),并用IPTG诱导表达后,通过Ni柱纯化,获得了表观分子量在20kD左右的融合表达蛋白;将表达纯化后的蛋白作为抗原,免疫BALB/c健康小鼠,筛选和制备了1株DHV-Ⅰ单克隆抗体细胞株。Western-blot及ELISA分析表明:表达的重组蛋白均能与鸭DHV-Ⅰ阳性血清和制备的DHV-Ⅰ单克隆抗体产生反应。同时,制备的DHV-Ⅰ单克隆抗体除了能与重组蛋白反应,还能识别天然的DHV-Ⅰ病毒蛋白。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒ⅰ型 原核表达 单克隆抗体
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