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H9N2亚型禽流感病毒基因组全长序列测定和各基因的遗传分析 被引量:21
1
作者 卢建红 刘秀梵 +2 位作者 邵卫星 张评浒 韦栋平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期434-441,共8页
用RT PCR技术及cDNA末端快速扩增法获得禽流感病毒分离株A Chicken Shanghai F 98(H9N2 )代表基因组全长的 8个基因片段。基因组序列比较及遗传进化分析结果表明 ,Chicken Shanghai F 98的 8个基因均不属于Quail HongKong G1 97亚系 ,... 用RT PCR技术及cDNA末端快速扩增法获得禽流感病毒分离株A Chicken Shanghai F 98(H9N2 )代表基因组全长的 8个基因片段。基因组序列比较及遗传进化分析结果表明 ,Chicken Shanghai F 98的 8个基因均不属于Quail HongKong G1 97亚系 ,与香港禽流感事件没有直接关系。它与Chicken Beijing 1 94的HA、NA、M、NS基因同源率分别为 96 7%、96 4%、97 5 %和 98 0 % ,这 4个基因属于Chicken Beijing 1 94亚系 ,其中 ,NA基因与Duck HongKong Y2 80 97的同源率为 97 4% ,而且它们均在 2 0 5位后缺失 9个核苷酸。而PB2、PB1、PA和NP基因与已知的 3个亚系关系较远 ,分别在相应的进化树上另成分支。因此 ,Chicken Shanghai F 98是两个以上不同基因亚系间发生自然重排的产物。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 基因组 序列测定 遗传分析
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微载体规模化培养MDCK细胞增殖H9N2亚型禽流感病毒的研究 被引量:24
2
作者 李春艳 肖晶 +1 位作者 李曦 刘娣 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1149-1153,共5页
目的探索H9N2亚型禽流感病毒株(A/Chiken/NX/9/99)在微载体大规模培养的MDCK细胞中的增殖规律,确定最佳增殖条件。方法将H9N2亚型禽流感病毒株接种到生长在24孔培养板上的MDCK细胞中进行增殖试验,检测接种不同感染剂量病毒、添加不同浓... 目的探索H9N2亚型禽流感病毒株(A/Chiken/NX/9/99)在微载体大规模培养的MDCK细胞中的增殖规律,确定最佳增殖条件。方法将H9N2亚型禽流感病毒株接种到生长在24孔培养板上的MDCK细胞中进行增殖试验,检测接种不同感染剂量病毒、添加不同浓度TPCK-胰酶、在不同pH值的培养液中培养,接毒后不同时间的病毒血凝素滴度(HA)。根据最佳增殖条件将病毒接种至生长在微载体上的MDCK细胞中,利用250 mL和5L转瓶逐级进行大规模增殖。结果最佳病毒增殖条件为TPCK-胰酶终浓度为10μg/mL,接毒剂量为MOI=0.025,培养液pH值为7.4,在此条件下,H9N2亚型禽流感病毒株(A/Chiken/NX/9/99)适应在250 mL和5L转瓶中微载体培养的MDCK细胞内大量增殖,病毒的最高血凝价均可达到9log2(1∶512)。结论本研究为以哺乳动物细胞为基质规模化生产禽流感疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 关键词:微载体 h9n2亚型禽流感病毒 MDCK细胞 规模化培养
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广东虫草抗禽流感病毒的初步研究 被引量:20
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作者 闫文娟 李泰辉 姜子德 《食用菌学报》 北大核心 2010年第3期64-66,共3页
以小鼠的肺指数为指标,研究广东虫草子实体对H9N2亚型禽流感病毒的抗性作用。结果表明:与病毒组相比,不同剂量广东虫草处理感染病毒小鼠的肺指数均有不同程度的降低;当其剂量为0.27 g/kg.bw时,肺指数抑制率可达22.1%,与病毒组相比差异... 以小鼠的肺指数为指标,研究广东虫草子实体对H9N2亚型禽流感病毒的抗性作用。结果表明:与病毒组相比,不同剂量广东虫草处理感染病毒小鼠的肺指数均有不同程度的降低;当其剂量为0.27 g/kg.bw时,肺指数抑制率可达22.1%,与病毒组相比差异显著。 展开更多
关键词 广东虫草 h9n2亚型禽流感病毒 肺指数
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封闭式饲养鸡场H9N2亚型禽流感病毒HA基因在5年内的遗传变异 被引量:12
4
作者 刘红旗 张评浒 +4 位作者 刘秀梵 刘文博 贾立军 彭大新 程坚 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期706-711,共6页
选择一个于 1 998年开始发生H9亚型禽流感的封闭式大型养鸡场 ,连续 5年内分离到 2 2株H9N2亚型病毒 ,对其中 9株与 1 998年分离株进行HA基因序列和病毒抗原性的比较结果表明 ,这些分离株均与 1 998年的具有较高的序列同源性 ,且在本研... 选择一个于 1 998年开始发生H9亚型禽流感的封闭式大型养鸡场 ,连续 5年内分离到 2 2株H9N2亚型病毒 ,对其中 9株与 1 998年分离株进行HA基因序列和病毒抗原性的比较结果表明 ,这些分离株均与 1 998年的具有较高的序列同源性 ,且在本研究期内HA基因的这些变化尚未产生引起交叉保护性改变。初步推断这些分离株均系 1 998年分离株在场内循环传播变化得来 ,其HA基因的变异可能与频繁的疫苗免疫选择压力有关。这为进一步研究禽流感病毒变异的规律和制定正确的禽流感防治对策具有重要意义。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 血凝素基因 遗传变异 hA基因
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H9N2亚型禽流感病毒传播途径特性的比较及其表面基因序列分析 被引量:13
5
作者 石火英 陈素娟 +2 位作者 高崧 刘武杰 刘秀梵 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期26-30,共5页
选择中国大陆最早分离的H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)(缩写为SS株)和1998年大流行时期分离的H9N2亚型AIV A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)(缩写为F株)为研究对象... 选择中国大陆最早分离的H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)(缩写为SS株)和1998年大流行时期分离的H9N2亚型AIV A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)(缩写为F株)为研究对象,对其在SPF鸡体内的复制能力和传播途径特性比较后发现,F株在4周龄SPF鸡气管中的复制能力高于SS株,F株可以经气溶腔传播途径传播。SS株不能经气溶腔传播途径传播;利用反转录-聚合酶链反应(RT—PCR)方法获取F株和SS株的HA和NA基因的cDNA,序列分析得知,F株和SS株的HA和NA基因的同源性分别是96.6%和98.1%;HA基因的裂解位点氨基酸序列都是PARSSR↓GL。但有5个氨基酸的盖异,即166位N(F)→D(SS)、198位A(F)→V(SS)、217位V(F)→I(SS)、335位G(F)→R(SS)、504位L(F)→S(SS);2株病毒的NA基因在63~65住都存在氨基酸缺失,但在NA基因红细胞吸附位点的氨基酸序列不同,分别是IKKD—SRSG(F)和IKEDLRSG(SS)。F株和SS株的传播特性差异是否与其表面基因序列有关,有待进一步研究。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 F株 SS株 传播途径 hA和nA基因
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用8质粒病毒拯救系统产生H9N2/WSN重组A型流行性感冒病毒 被引量:9
6
作者 卢建红 邵卫星 +4 位作者 刘玉良 贾立军 韦栋平 石火英 刘秀梵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期48-53,共6页
把禽流行性感冒(流感)病毒A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因cDNA克隆至polⅠpolⅡ双向转录和表达载体pHW2000,用这两种质粒与8质粒病毒拯救系统中流感病毒A/WSN/33(H1N1)6个内部基因cDNA的质粒组合(6+2重... 把禽流行性感冒(流感)病毒A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因cDNA克隆至polⅠpolⅡ双向转录和表达载体pHW2000,用这两种质粒与8质粒病毒拯救系统中流感病毒A/WSN/33(H1N1)6个内部基因cDNA的质粒组合(6+2重排),共转染COS 1细胞,产生了能在鸡胚中高滴度增殖的H9N2/WSN重组病毒。用A/WSN/33的8个基因cDNA质粒作对照,也产生了转染子病毒。经过EID50测定和MDCK感染实验,新基因型H9N2/WSN病毒感染鸡胚的能力强(EID50为10-11/0.2ml),而且对鸡胚的毒力弱,在不加胰酶的情况下不使MDCK细胞产生病变。经电镜观察,两个转染子病毒的形态与野生型流感病毒相似。反向遗传操作技术的建立,为对禽流感病毒基因功能和疫苗构建等方面的研究提供了新的手段。 展开更多
关键词 A型流行性感冒病毒 h9n2亚型禽流感病毒 共转染 8质粒系统 反向遗传操作技术 血凝素 神经氨酸酶
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H_9N_2亚型禽流感病毒诱导蛋鸡免疫器官细胞凋亡的动态变化 被引量:10
7
作者 谷长勤 罗玲 +3 位作者 胡薛英 张万坡 周诗其 程国富 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期12-14,共3页
应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素化的dUTP切口末端标记(即TUNEL)法和透射电镜(TEM),对人工感染H9N2亚型禽流感病毒蛋鸡的脾脏、胸腺、法氏囊和盲肠扁桃体进行了细胞凋亡动态研究。结果显示,感染蛋鸡脾脏、胸腺、法氏囊中细胞凋亡... 应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素化的dUTP切口末端标记(即TUNEL)法和透射电镜(TEM),对人工感染H9N2亚型禽流感病毒蛋鸡的脾脏、胸腺、法氏囊和盲肠扁桃体进行了细胞凋亡动态研究。结果显示,感染蛋鸡脾脏、胸腺、法氏囊中细胞凋亡率升高。接种后3d,脾脏和法氏囊的细胞凋亡率升至最高值分别为6.2%和1.7%,随后下降,但在接种后14d仍显著高于对照组(P<0.05)。胸腺的细胞凋亡率从接种后3~21d均极显著地高于对照组(P<0.01)。而盲肠扁桃体的细胞凋亡率在整个试验期间变化不明显。电镜下凋亡细胞呈典型的形态学特征:细胞染色质固缩并凝结成块,聚集在核膜周边呈新月状或环状小体。结果表明,H9N2亚型禽流感病毒感染蛋鸡能诱导免疫器官的细胞凋亡。 展开更多
关键词 细胞凋亡 h9n2亚型禽流感病毒 蛋鸡
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岗梅根水提物在小鼠体内抗H9N2亚型禽流感病毒实验研究 被引量:12
8
作者 李耿 汪天呈 +4 位作者 姚海燕 陈建新 吴依娜 林吉 赖小平 《环球中医药》 CAS 2012年第2期84-87,共4页
目的观察岗梅根水提物对滴鼻感染H9N2亚型禽流感病毒小鼠的保护作用。方法以磷酸奥司他韦为阳性药,通过H9N2亚型禽流感病毒滴鼻感染小鼠,分别建立小鼠病毒性肺炎动物模型和病毒感染致小鼠死亡的动物模型,观察小鼠肺部病变和死亡情况,以... 目的观察岗梅根水提物对滴鼻感染H9N2亚型禽流感病毒小鼠的保护作用。方法以磷酸奥司他韦为阳性药,通过H9N2亚型禽流感病毒滴鼻感染小鼠,分别建立小鼠病毒性肺炎动物模型和病毒感染致小鼠死亡的动物模型,观察小鼠肺部病变和死亡情况,以肺指数及小鼠死亡率作为观测指标,评价岗梅根水提物对感染H9N2亚型禽流感病毒小鼠的保护效果。结果岗梅根水提物中、低剂量组可显著降低禽流感病毒感染小鼠的肺指数(P<0.01);降低禽流感病毒感染小鼠死亡率,延长其存活时间(P<0.01)。结论岗梅根水提物对滴鼻感染H9N2亚型禽流感病毒小鼠具有良好的保护作用。 展开更多
关键词 岗梅根水提物 小鼠 h9n2亚型禽流感病毒 体内 肺指数 死亡保护率
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H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因序列的初步分析 被引量:11
9
作者 李曦 于康震 +1 位作者 田国斌 唐秀英 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2003年第2期29-30,共2页
关键词 序列分析 h9n2亚型禽流感病毒 血凝集 基因序列
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H9N2亚型禽流感病毒与其他病原混合感染的研究进展 被引量:10
10
作者 江宁 尹航 +3 位作者 张岩威 李紫馨 池晓娟 王松 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第9期3447-3455,共9页
H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)属于低致病性AIV,但因其分布广泛、传播迅速,可引起感染家禽生产性能下降,给家禽业带来了极大的经济损失。H9N2亚型AIV在感染家禽过程中可引起严重的免疫抑制,使家禽极易继发上呼吸道细... H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)属于低致病性AIV,但因其分布广泛、传播迅速,可引起感染家禽生产性能下降,给家禽业带来了极大的经济损失。H9N2亚型AIV在感染家禽过程中可引起严重的免疫抑制,使家禽极易继发上呼吸道细菌、消化道细菌等感染,从而导致H9N2亚型AIV致病力增强,细菌黏附定植能力增强,家禽死亡率显著升高。另外,H9N2亚型AIV还能与禽传染性支气管炎病毒、禽传染性法氏囊病病毒、新城疫病毒等发生混合感染,病毒入侵时有可能出现协同作用或颉颃作用,从而相互促进或抑制病毒的复制和排毒;H9N2亚型AIV还极易发生突变或与其他亚型流感病毒在混合感染时发生基因重组产生感染人的新亚型毒株,给人类健康和公共卫生安全带来重大威胁。作者综述了H9N2亚型AIV与其他病原混合感染的研究进展,通过阐述H9N2亚型AIV与细菌或病毒混合感染的协同或颉颃作用,以期为临床上H9N2亚型AIV混合感染的防治提供参考。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 细菌 病毒 混合感染
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2018-2019年广东地区H9N2亚型禽流感病毒HA基因的遗传进化分析 被引量:10
11
作者 宋才良 廖志宏 +6 位作者 沈勇 王焕 李鸿鑫 蔺文成 陈伟国 张新珩 谢青梅 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1976-1981,2012,共7页
近年来H9N2亚型禽流感病毒(AIV) h9.4.2.5分支在我国广泛流行。为了解广东地区H9N2 AIV的遗传与变异特点及进化规律,采用RT-PCR技术对自2018-2019年分离到的5株H9N2 AIV的HA与NA基因进行扩增、测序和序列比对。结果显示,5株病毒分离株... 近年来H9N2亚型禽流感病毒(AIV) h9.4.2.5分支在我国广泛流行。为了解广东地区H9N2 AIV的遗传与变异特点及进化规律,采用RT-PCR技术对自2018-2019年分离到的5株H9N2 AIV的HA与NA基因进行扩增、测序和序列比对。结果显示,5株病毒分离株的HA基因在遗传进化树中依然均属于h9.4.2.5分支,NA基因均属于Y280-like分支;分离到的5株H9N2 AIV在HA裂解位点处均只有1个碱性氨基酸(R),与低致病性AIV的特征相符;所有菌株受体结合位点第234位氨基酸是亮氨酸(L),显示出典型的人流感病毒受体结合特性;分离株均缺乏218~220位糖基化位点,同时增加了313~315位糖基化位点。研究表明流行毒株在不同程度上发生了基因重组,导致与现有疫苗的抗原匹配存在差异,因此要积极关注禽流感防控中出现的新问题。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 hA基因 遗传进化
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2012~2015年H9N2亚型AIV分离株HA基因的克隆及序列分析 被引量:8
12
作者 叶贺佳 梁昭平 +2 位作者 彭特 仇微红 许利娜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第5期1148-1155,共8页
为了解近年来中国部分地区H9N2亚型禽流感病毒流行特点及遗传进化情况,利用RT-PCR方法扩增2012~2015年分离的17株H9N2亚型禽流感病毒的HA基因片段,并进行序列测定和遗传进化分析,同时对HA蛋白的裂解位点、受体结合位点和潜在的糖基化... 为了解近年来中国部分地区H9N2亚型禽流感病毒流行特点及遗传进化情况,利用RT-PCR方法扩增2012~2015年分离的17株H9N2亚型禽流感病毒的HA基因片段,并进行序列测定和遗传进化分析,同时对HA蛋白的裂解位点、受体结合位点和潜在的糖基化位点进行分析.结果显示,17株H9N2亚型禽流感病毒HA基因核苷酸和推导的氨基酸同源性分别为87%~100%和75%~100%,均属于Y280-1ike亚系毒株.HA基因裂解位点均为非连续碱性氨基酸,属于低致病力毒株.HA基因受体结合位点149、198、234和235位氨基酸存在变异,其中,16株分离毒株的234位氨基酸由Q突变为L,表现出人流感病毒受体结合特征.潜在糖基化位点分析结果显示,11株病毒在218位氨基酸处缺失1个糖基化位点,4株病毒在492位氨基酸处缺失1个糖基化位点,17株病毒在313位氨基酸处增加1个糖基化位点.研究结果表明,应加强对H9N2亚型AIV的流行病学监测,关注疫苗毒株与流行毒株的差异. 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 hA基因 克隆 序列分析
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2016年~2018年山东地区25株H9N2亚型禽流感病毒分子分析 被引量:8
13
作者 陈照坤 鲁梅 +7 位作者 黄小莹 马鑫鑫 朱凤珠 黄庆华 古曙光 杨少华 许传田 崔宁 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期958-963,共6页
H9N2亚型禽流感(AI)持续在我国鸡群中广泛流行,为了明确山东及周边养殖场H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的分子进化情况,本研究对2016年~2018年间从山东及周边养殖场病鸡中分离鉴定得到的25株H9N2亚型AIV分别纯化后进行全基因组测序和遗传演... H9N2亚型禽流感(AI)持续在我国鸡群中广泛流行,为了明确山东及周边养殖场H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的分子进化情况,本研究对2016年~2018年间从山东及周边养殖场病鸡中分离鉴定得到的25株H9N2亚型AIV分别纯化后进行全基因组测序和遗传演化分析,并分析序列中重要氨基酸位点的变异情况。全基因组序列分析显示:25株H9N2 AIV 8个基因节段均属于欧亚谱系,但8个基因节段的分子进化关系呈现出基因多样性:HA、NA基因来自Y280-like,25株分离株HA基因之间的同源性为92.8%~99.9%,NA基因之间的同源性为91.0%~99.9%;PB2基因来自G9-like;PB1、PA、NP、NS基因来自F98-like;M基因来自G1-like。HA蛋白的受体结合位点149、198、234和235位点变异最多,25株分离株HA均出现Q234L突变(相当于H3第226位氨基酸);21株分离株在HA蛋白218~300位糖基化位点缺失,所有分离株均在313~315位出现潜在的糖基化位点;仅3株分离株的NA蛋白在402位出现糖基化位点,而NA蛋白在264位有11株分离株出现了潜在糖基化位点;5株分离株在PB2蛋白的627位点发生变异,1株在PB2蛋白的714位点发生变异。以上结果表明,近3年山东周边地区流行的H9N2 AIV是由不同进化方式而来,部分重要氨基酸位点出现了变异,具有潜在感染哺乳动物的可能性,因此需加强H9N2 AIV的分离鉴定,密切监测其遗传变异情况。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 分子进化 糖基化 突变 hA基因
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克感利咽口服液在小鼠体内抗H9N2亚型禽流感病毒的作用 被引量:7
14
作者 李耿 申小花 +3 位作者 陈建新 苏子仁 曾惠芳 赖小平 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期496-498,共3页
目的观察克感利咽口服液对滴鼻感染H9N2亚型禽流感病毒的小鼠的保护作用。方法以达菲为阳性对照药,通过小鼠滴鼻感染H9N2亚型禽流感病毒,分别建立小鼠禽流感病毒性肺炎动物模型和禽流感病毒感染致小鼠死亡的动物模型,研究克感利咽口服... 目的观察克感利咽口服液对滴鼻感染H9N2亚型禽流感病毒的小鼠的保护作用。方法以达菲为阳性对照药,通过小鼠滴鼻感染H9N2亚型禽流感病毒,分别建立小鼠禽流感病毒性肺炎动物模型和禽流感病毒感染致小鼠死亡的动物模型,研究克感利咽口服液体内对感染H9N2亚型禽流感病毒小鼠的保护效果。结果克感利咽口服液可显著降低禽流感病毒性肺炎小鼠的肺指数,减少染毒小鼠的死亡数,延长平均存活时间。结论克感利咽口服液对滴鼻感染禽流感病毒H9N2亚型的小鼠有一定的保护作用。 展开更多
关键词 克感利咽口服液 禽流感 h9n2亚型禽流感病毒 小鼠 体内
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H9N2亚型禽流感病毒对鸡的免疫抑制机制 被引量:7
15
作者 刘青涛 李银 +6 位作者 刘娜 杨婧 韩凯凯 刘宇卓 赵冬敏 黄欣梅 田宇杰 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期368-373,共6页
通过评价H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)感染对于鸡新城疫和传染性支气管炎活疫苗免疫效力的影响,研究了H9N2 AIVs的免疫抑制机理。结果显示,H9N2 AIVs感染可降低鸡对鸡新城疫和传染性支气管炎活疫苗的抗体应答,但与对照组相比差异并不显著;... 通过评价H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)感染对于鸡新城疫和传染性支气管炎活疫苗免疫效力的影响,研究了H9N2 AIVs的免疫抑制机理。结果显示,H9N2 AIVs感染可降低鸡对鸡新城疫和传染性支气管炎活疫苗的抗体应答,但与对照组相比差异并不显著;而流式分析结果显示,与对照组相比H9N2 AIVs感染可显著降低鸡外周血中CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞的比率(P<0.05);抗原特异性的T淋巴细胞增殖试验结果显示,与对照组相比H9N2 AIVs感染鸡的外周血T淋巴细胞增殖活性显著下降(P<0.05);另外,H9N2 AIV感染还导致鸡血清中细胞因子IFN-γ和IL-4应答水平的下降,其中IFN-γ的应答水平与对照组相比差异显著(P<0.05)。说明H9N2 AIVs感染可抑制鸡的免疫应答,其中对细胞免疫应答的抑制更为明显。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 免疫抑制
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H9亚型禽流感病毒HF株的分离鉴定和免疫原性评价 被引量:7
16
作者 程艺 田辉 +6 位作者 张亚 薛景景 盛东北 刘武杰 王婉冰 张盼涛 田克恭 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第9期2945-2952,共8页
2015年,从安徽合肥某养鸡场分离出一株H9N2亚型禽流感病毒(AIV),命名为HF株。该毒株鸡胚半数感染量(EID50)为10^9.17/0.1 mL,最小致死量的平均死亡时间(MDT)为87 h。对其HA基因分析发现,其氨基酸裂解位点为RSSR↓GLF,符合低致病性AIV特... 2015年,从安徽合肥某养鸡场分离出一株H9N2亚型禽流感病毒(AIV),命名为HF株。该毒株鸡胚半数感染量(EID50)为10^9.17/0.1 mL,最小致死量的平均死亡时间(MDT)为87 h。对其HA基因分析发现,其氨基酸裂解位点为RSSR↓GLF,符合低致病性AIV特征;HA基因的遗传进化分析结果表明,该分离株属于h9.4.2.5谱系,符合当前毒株流行趋势。将HF株与2006-2018年分离自全国各地的10株H9N2亚型AIV分离株同时制备灭活疫苗,免疫SPF鸡,制备阳性血清,通过交叉血凝抑制试验分析病毒抗原性,结果显示HF株与2014年之前毒株抗原相关性介于0.50~0.56之间,与2014年及之后毒株抗原相关性介于0.89~1.00之间,表明该分离株与2014年之后的流行毒株具有良好的抗原相关性。用0.2%甲醛灭活HF株病毒液,其HA效价在灭活前后未发生变化;用灭活抗原制备油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡,免疫后21 d HI抗体效价几何平均值达到9.0log2以上,可使免疫鸡完全抵抗H9亚型AIV的感染,提供100%的攻毒保护。研究结果表明,HF株具有良好的免疫原性,可作为疫苗候选株用于H9N2亚型禽流感疫苗的研制。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 分离鉴定 遗传进化 免疫原性
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25株H9N2亚型禽流感病毒HA基因的遗传进化分析 被引量:7
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作者 程冰花 王爱华 +5 位作者 刁有祥 李川川 张英 张璐 杨国平 赵丹丹 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期889-895,共7页
为了解山东省不同地区H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的变异情况,本研究汇集了2012-2013年间从山东省不同地区发病家禽中分离到的25株H9N2亚型AIV,采用RT-PCR技术扩增其HA基因,并进行测序和遗传进化分析。结果显示,25株病毒HA基因的开放阅... 为了解山东省不同地区H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的变异情况,本研究汇集了2012-2013年间从山东省不同地区发病家禽中分离到的25株H9N2亚型AIV,采用RT-PCR技术扩增其HA基因,并进行测序和遗传进化分析。结果显示,25株病毒HA基因的开放阅读框全长为1 683bp,共编码560个氨基酸,其核苷酸和氨基酸同源性分别为94.5%-100.0%和93.8%-100.0%;遗传进化分析表明25株病毒分离株均属于欧亚分支中的Y280-like亚分支;HA蛋白有7-9个潜在糖基化位点,其中218位糖基化位点缺失,145位新增糖基化位点;25株病毒分离株HA蛋白裂解位点均为RSSR↓GIF,符合低致病力AIV的特征。受体结合位点较保守,234位受体结合位点均为L(亮氨酸),仅198位受体结合位点存在变异。分离的病毒株具有与人唾液酸α-2,6受体结合的特性,此类毒株的流行在公共卫生上值得重视。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 hA基因 遗传进化分析
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三株鸭源H9N2亚型禽流感病毒福建株全基因的测序及遗传进化分析 被引量:7
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作者 万春和 傅光华 +3 位作者 施少华 程龙飞 陈红梅 黄瑜 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期362-367,共6页
为明确3株鸭源H9N2亚型禽流感病毒福建株A/Muscovy duck/Fujian/CL/1997(H9N2)(简称CL株)、A/duck/Fujian/MH/2003(H9N2)(简称MH株)和A/duck/Fujian/FQ2/2007(H9N2)(简称FQ2株)全基因组的分子特征和遗传进化情况,采用RT-PCR方法扩增这3... 为明确3株鸭源H9N2亚型禽流感病毒福建株A/Muscovy duck/Fujian/CL/1997(H9N2)(简称CL株)、A/duck/Fujian/MH/2003(H9N2)(简称MH株)和A/duck/Fujian/FQ2/2007(H9N2)(简称FQ2株)全基因组的分子特征和遗传进化情况,采用RT-PCR方法扩增这3株病毒全基因片段,并进行序列比较及遗传进化分析。结果表明,所克隆的8个基因片段均有完整的开放阅读框,其血凝素基因蛋白裂解位点的氨基酸组成为-RSSR*GLF-,为不连续的碱性氨基酸,其静脉接种指数远小于1.2,均符合低致病性AIVHA蛋白裂解位点特征;CL株和MH株的HA基因在遗传进化上属于常见的CK/BJ/1/94群系;FQ2株HA基因在遗传进化上属于DK/HK/Y280/97群系,3株H9N2亚型AIV HA基因在遗传进化上均属于经典的欧亚种系。3株H9N2亚型AIV NA基因颈部均存在缺失,CL株和MH株的NA基因在遗传进化上属于常见的CK/BJ/1/94群系,FQ2株NA基因在遗传进化上属于G1群系。CL株和MH株的其他6个基因在遗传进化上均和经典的CK/BJ/1/94一致,而FQ2株则可能是由不同流感病毒基因亚系间发生自然重排的产物。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 全基因 序列分析 遗传进化
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H9N2亚型禽流感病毒糖基化位点突变株的构建与生物学特性研究 被引量:6
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作者 廖昌韬 曾凡桂 +4 位作者 严专强 覃健萍 曹永长 谢青梅 陈峰 《动物医学进展》 北大核心 2018年第7期18-22,共5页
为了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白第200位N-糖基化位点的功能,利用流感病毒8质粒反向遗传系统拯救出重组病毒r-WZP株(缺失HA基因第200位N-糖基化位点)和r-WZP200株(含有HA基因第200位N-糖基化位点)。两株病毒的内部基因来自病毒株A/... 为了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白第200位N-糖基化位点的功能,利用流感病毒8质粒反向遗传系统拯救出重组病毒r-WZP株(缺失HA基因第200位N-糖基化位点)和r-WZP200株(含有HA基因第200位N-糖基化位点)。两株病毒的内部基因来自病毒株A/Puerto Rico/8/34(H1N1),HA基因与NA基因均来自H9N2AIV流行毒株。结果表明,两株病毒均能够在SPF鸡胚中稳定增殖,这一位点的缺失致使病毒与鸡红细胞的结合能力下降,HA效价热稳定性提高,对SPF鸡胚的致死能力增强,对进一步研究H9N2亚型AIV HA蛋白N-糖基化位点的功能具有重要的参考价值。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 hA基因 n-糖基化位点
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H9N2亚型禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达 被引量:6
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作者 张民秀 谢芝勋 +6 位作者 黄莉 谢志勤 刘加波 谢丽基 邓显文 罗思思 黄娇玲 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期859-864,共6页
为了获得具有良好免疫活性的H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白,本研究利用Bac-to-Bac昆虫-杆状病毒表达系统对H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白进行表达。运用PCR对H9N2亚型禽流感病毒HA基因进行扩增,将HA基因连接于转移载体pFastBacDual的BamHⅠ和Hin... 为了获得具有良好免疫活性的H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白,本研究利用Bac-to-Bac昆虫-杆状病毒表达系统对H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白进行表达。运用PCR对H9N2亚型禽流感病毒HA基因进行扩增,将HA基因连接于转移载体pFastBacDual的BamHⅠ和HindⅢ两个酶切位点之间,构成pFastBacDual-HA重组载体;将pFastBacDual-HA转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,利用蓝白斑筛选法和PCR方法对阳性菌落筛选重组杆粒Bacmid-HA;重组杆粒Bacmid-HA对Sf9昆虫细胞进行了转染,获得重组杆状病毒rBV-HA;运用SDS-PAGE电泳和Western blotting分析rBV-HA感染的细胞和细胞上清。结果表明,重组HA蛋白大小约为65 kD;Western blotting分析显示,HA蛋白与免疫H9N2禽流感病毒后获得的阳性血清具有良好的特异性反应,为进一步研制针对HA蛋白的H9N2亚型AIV亚单位疫苗和研发H9亚型ELISA抗体检测试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 hA蛋白 Bac—to—Bac昆虫-杆状病毒表达系统
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