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实时荧光定量PCR检测鸭源鹅细小病毒方法的建立与应用
1
作者 杨挺懿 杨婧 +7 位作者 黄欣梅 韩凯凯 赵冬敏 章丽娇 刘宇卓 李银 张小飞 刘青涛 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期104-109,共6页
为建立一种快速且准确检测鸭源鹅细小病毒(D-GPV)的实时荧光定量PCR方法,本研究通过分析D-GPV基因序列的保守区设计并合成一对特异性引物,构建携带NS1基因的重组质粒作为标准品,绘制实时荧光定量PCR标准曲线,并进行敏感性、特异性、重... 为建立一种快速且准确检测鸭源鹅细小病毒(D-GPV)的实时荧光定量PCR方法,本研究通过分析D-GPV基因序列的保守区设计并合成一对特异性引物,构建携带NS1基因的重组质粒作为标准品,绘制实时荧光定量PCR标准曲线,并进行敏感性、特异性、重复性试验和临床样品的检测。结果显示,该方法标准曲线的的线性关系良好,相关系数为0.999;灵敏度高,检测底限为10拷贝;特异性与重复性好,与其他病毒无交叉反应,批间和批内变异系数均低于1%。该方法对人工感染D-GPV鸭泄殖腔拭子和咽拭子样品的检测结果显示,鸭在攻毒后第1 d即可以通过口腔和泄殖腔向外排毒,排毒量在第3 d达到高峰,排毒持续期可达到42 d。本研究所建立的实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性和稳定性好,可用于临床样品中的D-GPV检测。 展开更多
关键词 鸭源鹅细小病毒 实时荧光定量PCR 排毒
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番鸭细小病毒和鹅细小病毒的抗原相关性研究 被引量：16
2
作者 程晓霞 陈仕龙 +3 位作者 陈少莺 林锋强 王劭 朱小丽 《福建农业学报》 CAS 2013年第9期869-871,共3页
应用微量交叉中和试验(NT)和胶乳凝集抑制试验(LPAI)比较番鸭细小病毒、鹅细小病毒和番鸭源鹅细小病毒之间的抗原相关性。结果显示:3种病毒与同源抗血清的中和效价和LPAI效价均明显高于异源血清;番鸭细小病毒与番鸭源鹅细小病毒、鹅细... 应用微量交叉中和试验(NT)和胶乳凝集抑制试验(LPAI)比较番鸭细小病毒、鹅细小病毒和番鸭源鹅细小病毒之间的抗原相关性。结果显示:3种病毒与同源抗血清的中和效价和LPAI效价均明显高于异源血清;番鸭细小病毒与番鸭源鹅细小病毒、鹅细小病毒之间的R值均小于0.1;番鸭源鹅细小病毒与鹅细小病毒的R值大于0.25。结果表明番鸭细小病毒与鹅细小病毒(番鸭源或鹅源)的抗原相关性较低,提示番鸭源鹅细小病毒与鹅细小病毒属于同一血清型的不同亚型。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 番鸭源鹅细小病毒 鹅细小病毒 抗原相关性
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番鸭源鹅细小病毒VP2病毒样颗粒制备及免疫原性测定 被引量：3
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作者 肖世峰 王劭 +7 位作者 江丹丹 程晓霞 朱小丽 林锋强 俞博 董慧 陈仕龙 陈少莺 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期541-546,共6页
为制备杆状病毒表达系统表达的番鸭源鹅细小病毒(MDGPV)VP2蛋白形成的病毒样颗粒(VLPs),并测定其免疫原性,本研究通过PCR扩增得到MDGPV PT株VP2基因,通过杆状病毒表达系统构建了表达MDGPV VP2的重组杆状病毒MDGPV-rBV。以MOI 5的MDGPV-... 为制备杆状病毒表达系统表达的番鸭源鹅细小病毒(MDGPV)VP2蛋白形成的病毒样颗粒(VLPs),并测定其免疫原性,本研究通过PCR扩增得到MDGPV PT株VP2基因,通过杆状病毒表达系统构建了表达MDGPV VP2的重组杆状病毒MDGPV-rBV。以MOI 5的MDGPV-rBV感染Sf9细胞后,通过间接免疫荧光试验(IFA)检测结果显示,MDGPV-rBV感染的细胞出现亮绿色荧光;western blot检测VP2蛋白,结果显示在约65 ku处出现特异性条带,表明VP2蛋白正确表达。收集MDGPV-rBV感染的Sf9细胞制备细胞超薄切片样品,同时超速离心富集病毒样品,分别经透射电镜观察,可在细胞核观察到与MDGPV病毒粒子二十面体形态一致的VLPs,直径约20 nm,表明表达的VP2能够组装成VLPs。按常规方法制备VLPs油佐剂疫苗,以42μg/只VLPs经胸部肌肉注射免疫130日龄番鸭,免疫后2至7周每周采血并分离血清,利用GPV胶乳凝集抑制试验(LPAI)和微量中和试验检测免疫番鸭的MDGPV抗体效价,结果显示免疫后抗体效价逐渐升高,至第4周达到峰值,随后平缓下降,免疫番鸭的LPAI效价及中和效价峰值分别为4.9±1.10 log2、7±1.15 log2,以上结果表明构建的MDGPV VLPs具有良好免疫原性。本研究为MDGPV VLPs在疫苗和诊断试剂的开发应用奠定了基础。 展开更多
关键词 番鸭源鹅细小病毒 病毒样颗粒 免疫原性 番鸭
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3种鸭源细小病毒的抗原相关性研究
4
作者 程晓霞 朱小丽 +5 位作者 林锋强 王劭 陈仕龙 肖世峰 陈少莺 俞伏松 《中国农学通报》 2018年第4期143-146,共4页
为了明确番鸭细小病毒(MPV F株)、番鸭源鹅细小病毒(MD-GPV PT株)和鸭短喙型鹅细小病毒(SBDS-GPV M15株)的抗原相关性,本研究应用微量中和试验(NT)和胶乳凝集抑制试验(LPAI)测定了3种病毒分别与同源和异源血清的中和抗体和LPAI抗体效价... 为了明确番鸭细小病毒(MPV F株)、番鸭源鹅细小病毒(MD-GPV PT株)和鸭短喙型鹅细小病毒(SBDS-GPV M15株)的抗原相关性,本研究应用微量中和试验(NT)和胶乳凝集抑制试验(LPAI)测定了3种病毒分别与同源和异源血清的中和抗体和LPAI抗体效价,分析三者之间的抗原相关性。结果显示:3种病毒与同源抗血清的中和效价和LPAI效价均明显高于异源血清;MPV与MD-GPV和SBDS-GPV之间的中和抗体效价R值分别为0.01和0.02,LPAI抗体效价R值分别为0.03和0.04;MD-GPV和SBDSGPV中和抗体和LPAI抗体效价R值均为0.35。表明MPV与GPV(包括MD-GPV和SBDS-GPV)之间的抗原相关性较低;MD-GPV与SBDS-GPV抗原相关性较高,为同一血清型的不同亚型。研究结果为有效防控不同鸭源细小病毒感染提供了理论依据。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 番鸭源鹅细小病毒 鸭短喙型鹅细小病毒 胶乳凝集抑制试验(LPAI) 微量中和试验(NT) 抗原相关性
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2018—2019年华东华南地区水禽细小病毒的进化分析
5
作者 李艳 孙永锋 +3 位作者 解红梅 李佳暖 赵传昊 李舫 《现代畜牧科技》 2022年第12期5-7,共3页
鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)严重危害水禽产业。自2015年以来,一种新型鸭源鹅细小病毒(N-GPV)在中国大陆持续爆发,给水禽产业造成重大经济损失。水禽细小病毒(WPV)病因再次引起研究人员的关注。本研究在2018—2019年期间,从中... 鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)严重危害水禽产业。自2015年以来,一种新型鸭源鹅细小病毒(N-GPV)在中国大陆持续爆发,给水禽产业造成重大经济损失。水禽细小病毒(WPV)病因再次引起研究人员的关注。本研究在2018—2019年期间,从中国东部和南部地区采集426份疑似细小病毒患病水禽组织样本,PCR检测总阳性率为51.2%(218/426)。最终,获得30个分离株,并对其VP3基因进行测序,进化树分析结果表明:分离株分布在7个分支,并与经典的GPV分支关系相近。本研究为水禽细小病毒(WPVs)疫苗的研发提供了候选株,仍需对水禽细小病毒进行连续不断的流行病学监测。 展开更多
关键词 水禽细小病毒 VP3基因 进化树分析 新型鸭源鹅细小病毒 重组
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鸭源新型鹅细小病毒核酸探针的制备与应用 被引量：2
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作者 李鹏飞 张瑞华 +5 位作者 宋莎莎 王玮 陈君豪 蓝晶晶 谢之景 姜世金 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2073-2077,共5页
近年来,我国大陆地区暴发了一种由新型鹅细小病毒（NGPV）感染引起的鸭“短喙侏儒综合征”的疫病。为了建立一种特异性好、灵敏度高适合临床大批量样本检测的方法,本试验将鸭源NGPV的VP3保守区域1段长390bp的序列克隆制成核酸探针。特... 近年来,我国大陆地区暴发了一种由新型鹅细小病毒（NGPV）感染引起的鸭“短喙侏儒综合征”的疫病。为了建立一种特异性好、灵敏度高适合临床大批量样本检测的方法,本试验将鸭源NGPV的VP3保守区域1段长390bp的序列克隆制成核酸探针。特异性试验结果表明,制备的该核酸探针特异性高,只与鹅细小病毒（GPV）反应;灵敏性试验结果表明,针对NGPV最低检出量约为6pg。应用该核酸探针对来自山东、江苏、安徽3省的87只疑患“短喙长舌-侏儒综合征”的樱桃谷肉鸭的870份组织脏器进行检测,结果个体阳性率为89.7%（78/87）,检测的10种组织脏器中均有NGPV检出,说明该病毒对樱桃谷鸭具有广泛的组织嗜性。同时,利用PCR方法对采集的样品进行检测,比较发现与核酸探针法的阳性个体检出率及阳性个体检出符合率为100%。以上结果表明,制备的NGPV核酸探针特异性强,灵敏性高,适合不同来源的NGPV临床批量诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 鸭源新型鹅细小病毒 核酸探针 斑点杂交
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