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鸡白细胞介素18成熟蛋白的原核表达及抗体间接ELISA方法的建立
1
作者 苏倩倩 李恩扩 +2 位作者 张海滨 周霞 胡敬东 《山东农业科学》 2012年第4期5-9,共5页
将鸡白细胞介素18的成熟蛋白(chicken interleukin 18 mature protein,mChIL-18)基因在原核系统表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白。纯化后重组蛋白包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶... 将鸡白细胞介素18的成熟蛋白(chicken interleukin 18 mature protein,mChIL-18)基因在原核系统表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白。纯化后重组蛋白包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶标二抗稀释倍数,建立检测ChIL-18成熟蛋白抗体的间接ELISA方法。经方阵滴定结果确定最佳抗原包被质量浓度为4μg/ml,阳性血清稀释比例为1∶104,羊抗鼠IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释比例为1∶12 000,抗原抗体最佳结合时间是1.5 h,血清与二抗最适反应时间为1 h。阴性、阳性血清的判定标准为:被检样本的OD值是一组阴性样本OD值的2或3倍且OD450≥0.5,即为阳性,比值以P/N表示1,.5<P/N<2.0为可疑,P/N<1.5为阴性。本试验结果证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,为下一步单抗的筛选鉴定奠定了必要的基础。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素 18成熟蛋白(mChIL-18) 原核表达 蛋白纯化 间接ELISA
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鸡白细胞介素2增强传染性法氏囊病病毒多聚蛋白DNA疫苗免疫原性的研究 被引量：36
2
作者 于涟 李建荣 +2 位作者 黄耀伟 梁雪芽 孟松树 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期652-657,共6页
鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因是新近被确定的非哺乳类IL 2基因。将鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因和传染性法氏囊病病毒 (IBDV)多聚蛋白基因 (VP2 VP4 VP3 )分别插入真核表达载体pCI的CMV启动子下游 ,制备DNA疫苗 ,免疫 14日龄SPF鸡 ,14d... 鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因是新近被确定的非哺乳类IL 2基因。将鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因和传染性法氏囊病病毒 (IBDV)多聚蛋白基因 (VP2 VP4 VP3 )分别插入真核表达载体pCI的CMV启动子下游 ,制备DNA疫苗 ,免疫 14日龄SPF鸡 ,14d后二免 ,二免后 3d攻击标准强毒株。结果表明共注射鸡IL 2质粒能明显增强DNA疫苗对强毒攻击 ,保护率达 80 % ;能增强DNA疫苗诱导的中和抗体效价 (P <0 0 5 ) ;能显著促进鸡胸腺、脾脏和外周血液T淋巴细胞及法氏囊B淋巴细胞增殖反应 (P <0 0 5 )。这些结果提示鸡IL 2能明显增强IBDV多聚蛋白DNA疫苗的免疫原性 ,是一种优良的禽类DNA疫苗佐剂。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素2 IL-2 传染性法氏囊病病毒 多聚蛋白基因 DNA疫苗 免疫原性
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鸡白细胞介素2(IL-2)对鸡免疫功能的影响 被引量：19
3
作者 杨发龙 岳华 贾文祥 《中国家禽》 北大核心 2005年第19期17-20,共4页
为研究鸡IL-2对雏鸡免疫功能的影响,进行了3个方面的试验。①对体液免疫及细胞免疫的影响。结果表明,鸡IL-2能明显提高鸡新城疫疫苗免疫后HI水平、T淋巴细胞增殖反应及ANAE+细胞百分数;②对雏鸡腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。结果表明使... 为研究鸡IL-2对雏鸡免疫功能的影响,进行了3个方面的试验。①对体液免疫及细胞免疫的影响。结果表明,鸡IL-2能明显提高鸡新城疫疫苗免疫后HI水平、T淋巴细胞增殖反应及ANAE+细胞百分数;②对雏鸡腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。结果表明使用IL-2与否对巨噬细胞的吞噬功能没有明显的影响;③人工感染法氏囊病的防治试验。在攻毒前后注射IL-2,均可明显降低发病率和死亡率。本研究结果表明,鸡IL-2可明显提高特异性免疫应答能力,与疫苗共同注射可作为佐剂提高疫苗的免疫原性,对法氏囊等病毒性疾病具有一定的防治作用。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素2 体液免疫 细胞免疫 巨噬细胞 传染性法氏囊病 白细胞介素 免疫功能 雏鸡 鸡IL-2 腹腔巨噬细胞
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鸡白细胞介素2口服免疫佐剂增强传染性法氏囊病病毒DNA疫苗免疫效果的研究 被引量：12
4
作者 谢荣辉 万旺军 +2 位作者 李龙 李建荣 于涟 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期237-242,共6页
将含萧山鸡白细胞介素2基因的真核表达质粒pCI-IL-2的减毒鼠伤寒沙门氏菌ZJ111(ZJ111/pCI-IL-2)口服接种小鼠和雏鸡,并与传染性法氏囊病病毒(IBDV)DNA疫苗联合免疫雏鸡观察其免疫效力.结果表明:利用减毒沙门氏菌作为载体的鸡白细胞介素... 将含萧山鸡白细胞介素2基因的真核表达质粒pCI-IL-2的减毒鼠伤寒沙门氏菌ZJ111(ZJ111/pCI-IL-2)口服接种小鼠和雏鸡,并与传染性法氏囊病病毒(IBDV)DNA疫苗联合免疫雏鸡观察其免疫效力.结果表明:利用减毒沙门氏菌作为载体的鸡白细胞介素2口服免疫增强剂具有相对的安全性.重组ZJ111/pCI-IL-2菌能明显增强IBDV DNA疫苗对强毒株攻击保护率;增强IBDV DNA疫苗诱导的抗体的效价(P<0.05);增强IBDV DNA疫苗所诱导的T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖反应(P<0.05).上述结果初步表明以减毒沙门氏菌为载体的白细胞介素2免疫增强剂具有良好的安全性和免疫增强作用,为研制低成本、实用化的禽类口服免疫增强剂奠定了基础. 展开更多
关键词 鸡白细胞介素2 传染性法氏囊病病毒 免疫增强
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白细胞介素18和鸡白细胞介素18 被引量：12
5
作者 潘蔚绮 李广兴 刘胜旺 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第1期123-128,共6页
白细胞介素 18是一种新发现的细胞因子 ,主要由单核巨噬细胞系统的细胞分泌。目前在分子水平上已经证明 ,人、哺乳动物和某些鸟类中都有 IL- 18存在。IL- 18在结构上属于 IL- 1家族 ,在功能上它与 IL- 12相似 ,且二者有协同效应。 IL- 1... 白细胞介素 18是一种新发现的细胞因子 ,主要由单核巨噬细胞系统的细胞分泌。目前在分子水平上已经证明 ,人、哺乳动物和某些鸟类中都有 IL- 18存在。IL- 18在结构上属于 IL- 1家族 ,在功能上它与 IL- 12相似 ,且二者有协同效应。 IL- 18具有多种生物学功能 ,它不仅可以增强 Th1型免疫反应 ,而且在 Th2型免疫反应中也发挥一定的作用。人类医学研究证明 IL- 18在抗微生物感染、抗肿瘤免疫中具有应用潜力。在集约化畜禽养殖业中 ,包括白细胞介素 18在内的细胞因子作为天然的免疫调节剂 ,目前已被公认为是一种可以替代传统疗法的新型治疗剂。鸡 IL- 18基因是最近才被发现的 ,由于它具有与人和哺乳动物相似的生物学功能 ,因而鸡 IL- 18在比较免疫学研究和禽病治疗中具有重要意义。 展开更多
关键词 白细胞介素18 鸡白细胞介素18 细胞因子 免疫调节剂 分布 分子结构 受体 生物学功能
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鸡α干扰素/白细胞介素2基因的融合表达及活性研究 被引量：16
6
作者 闫若潜 谢彩华 +3 位作者 吴志明 张志凌 刘光辉 刘梅芬 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期594-604,共11页
【目的】研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂以对鸡的病毒性疾病进行防治。【方法】采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头将鸡α干扰素(chicken interferon alpha,ChIFN-α)与鸡... 【目的】研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂以对鸡的病毒性疾病进行防治。【方法】采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头将鸡α干扰素(chicken interferon alpha,ChIFN-α)与鸡白细胞介素2(chicken interleukin-2,ChIL-2)基因构建成ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因并克隆入pGEM-T Easy载体,将嵌合基因亚克隆入pQE-30表达载体中进行原核表达。通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rChIFN-α-linker-ChIL-2)进行纯化。采用细胞病变抑制法检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在细胞上抑制水泡性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)增殖活性。采用ChIL-2ELISA试验方法检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白与抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性。分别测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚上对新城疫病毒(NDV)和禽流感H9N2亚型病毒(AIV H9N2)的抑制活性以测定其在鸡胚内抗病毒活性。分别测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内对NDV活疫苗和灭活疫苗的免疫增强作用以测定其在鸡体内的活性。【结果】成功构建并克隆了ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因。嵌合基因在大肠杆菌中表达的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白分子量大小约35.9kD,蛋白经纯化后纯度在96%以上。rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在CEF细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV和IBDV活性明显高于单一rChIFN-α的抗病毒活性;rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白可以和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应。IFN-α活性单位为200IU的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚内可明显降低NDV和AIV H9N2所引起的鸡胚死亡和胚体出血,并能显著延长鸡胚存活时间,但过高剂量的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白抑制鸡胚死亡和出血能力有所下降。合适剂量的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内具有显著的抗病毒活性和免疫增强活性。【结论】rChIFN-α-li 展开更多
关键词 鸡α干扰素 鸡白细胞介素2 嵌合基因 融合表达 活性
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鸡IL-2和IL-15基因真核表达质粒对禽流感疫苗的免疫增强作用 被引量：10
7
作者 胡慧琼 王红宁 +5 位作者 袁斌 周生 李晓英 黄勇 柳萍 徐永莉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期805-810,共6页
根据GenBank中的鸡IL-2和IL-15序列设计了2对引物,采用RT-PCR法从山地乌骨鸡外周血淋巴细胞RNA中克隆了IL-2和IL-15基因,与pcDNA3.1连接构建了真核表达质粒pDNAIL-2和pDNAIL-15,研究了其对禽流感灭活疫苗的免疫增强作用。结果显示,免疫... 根据GenBank中的鸡IL-2和IL-15序列设计了2对引物,采用RT-PCR法从山地乌骨鸡外周血淋巴细胞RNA中克隆了IL-2和IL-15基因,与pcDNA3.1连接构建了真核表达质粒pDNAIL-2和pDNAIL-15,研究了其对禽流感灭活疫苗的免疫增强作用。结果显示,免疫后第10d,pDNAIL-15+AI灭活疫苗组和pDNAIL-2+AI灭活疫苗组HI抗体水平显著高于AI灭活疫苗组(P<0.05)。免疫后第10 d,pDNAIL-15+AI灭活疫苗组CD4+淋巴细胞百分含量显著高于pDNAIL-2+AI灭活疫苗和AI灭活疫苗组(P<0.05);免疫后第23 d,pDNAIL-2+AI灭活疫苗组CD4+淋巴细胞百分率显著高于pDNAIL-15+AI灭活疫苗和AI灭活疫苗组(P<0.05)。证实pDNAIL-2和pDNAIL-15能提高禽流感灭活疫苗的免疫效果。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素-2 鸡白细胞介素-15 禽流感疫苗 HI抗体
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重组鸡白细胞介素-2对禽流感灭活疫苗免疫增强作用的研究 被引量：14
8
作者 牛泽 任晓峰 +3 位作者 曾岩 刘明 卢春颖 李广兴 《中国家禽》 北大核心 2010年第3期20-23,共4页
为研究重组鸡白细胞介素-2(IL-2)对H5N1亚型禽流感灭活苗的免疫效果,将重组IL-2蛋白和禽流感灭活疫苗联合免疫14日龄SPF鸡,免疫后每周测定一次血清抗体效价﹑脾脏T淋巴细胞亚群,最后计算攻毒保护率。试验结果表明:重组IL-2蛋白具有增强... 为研究重组鸡白细胞介素-2(IL-2)对H5N1亚型禽流感灭活苗的免疫效果,将重组IL-2蛋白和禽流感灭活疫苗联合免疫14日龄SPF鸡,免疫后每周测定一次血清抗体效价﹑脾脏T淋巴细胞亚群,最后计算攻毒保护率。试验结果表明:重组IL-2蛋白具有增强禽流感疫苗免疫效果的作用,提高了血清中的抗体水平﹑增加了脾脏T淋巴细胞CD4+﹑CD8+亚群数量。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素-2 禽流感灭活疫苗 免疫效果
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重组鸡IL-2对禽流感灭活苗免疫增强作用试验 被引量：11
9
作者 徐前明 李祥瑞 《动物医学进展》 CSCD 2006年第10期99-101,共3页
使用重组鸡白介素-2作为免疫佐剂,检测chIL-2对禽流感病毒H9亚型灭活疫苗的免疫增强作用。将1日龄的AA肉雏鸡,随机分为7组,每组10只,采用胸部肌肉注射方式进行免疫,对照组仅接种H9亚型禽流感灭活疫苗,试验组分别同时接种H9亚型禽流感灭... 使用重组鸡白介素-2作为免疫佐剂,检测chIL-2对禽流感病毒H9亚型灭活疫苗的免疫增强作用。将1日龄的AA肉雏鸡,随机分为7组,每组10只,采用胸部肌肉注射方式进行免疫,对照组仅接种H9亚型禽流感灭活疫苗,试验组分别同时接种H9亚型禽流感灭活疫苗0.5 mL和不同剂量(0.01 mg^1 mg)的鸡IL-2。每7 d静脉采血,采用血凝和血凝抑制方法检测机体中抗体水平变化情况。结果表明,接种重组鸡IL-2的试验组动物能在2月内保持高抗体水平,且在免疫后第10周,其平均抗体水平仍高于疫苗对照组3.6个~4.5个滴度,表明了重组鸡IL-2蛋白对H9亚型禽流感灭活疫苗具有免疫增强作用。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素2 禽流感病毒 灭活疫苗 免疫增强
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鸡白细胞介素2真核表达质粒的构建、表达及对AIV疫苗免疫增强作用研究 被引量：9
10
作者 由振强 于涟 +2 位作者 翁继锋 许健 徐根亮 《浙江农业学报》 CSCD 2005年第6期350-353,共4页
将鸡白细胞介素2(ChIL-2)基因亚克隆入pCI载体中,pEGFP-N1载体中的EGFP基因酶切后连入质粒pCI-ChIL-2中,构建真核表达质粒pCI-ChIL-2-EGFP,该载体表达ChIL-2-EGFP融合蛋白。重组质粒在脂质体作用下转染Vero细胞、鸡胚成纤维细胞(CEF)和... 将鸡白细胞介素2(ChIL-2)基因亚克隆入pCI载体中,pEGFP-N1载体中的EGFP基因酶切后连入质粒pCI-ChIL-2中,构建真核表达质粒pCI-ChIL-2-EGFP,该载体表达ChIL-2-EGFP融合蛋白。重组质粒在脂质体作用下转染Vero细胞、鸡胚成纤维细胞(CEF)和外周血淋巴细胞(PBLC),荧光显微镜观察到融合蛋白在体外能稳定表达。HI试验显示,pCI-ChIL-2-EGFP与AIV疫苗共注射可明显提高AIV疫苗的免疫原性。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素2 EGFP 真核表达 AIV
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鸡白细胞介素-6的原核表达及其对疫苗免疫增强效果的研究 被引量：10
11
作者 谢彩华 闫若潜 +4 位作者 崔保安 赵雪丽 吴志明 张志凌 张健 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期557-561,共5页
本研究采用PCR技术,扩增、克隆了鸡白细胞介素-6(ChIL-6)成熟肽基因并进行原核表达,对表达的鸡白细胞介素-6组蛋白(rChIL-6)通过尿素变性、复性液复性、PBS溶液透析等步骤进行纯化,经测定rChIL-6的促小鼠脾脏淋巴母细胞的增殖能力来评... 本研究采用PCR技术,扩增、克隆了鸡白细胞介素-6(ChIL-6)成熟肽基因并进行原核表达,对表达的鸡白细胞介素-6组蛋白(rChIL-6)通过尿素变性、复性液复性、PBS溶液透析等步骤进行纯化,经测定rChIL-6的促小鼠脾脏淋巴母细胞的增殖能力来评估重组蛋白的生物学活性;用4个不同浓度的rChIL-6在不同部位与NDV活疫苗、AIVH5N1灭活疫苗同时肌肉注射来评价其免疫增强作用。研究结果表明,表达rChIL-6为25ku左右,经纯化后的蛋白纯度在95%以上;100pg/mLrChIL-6注射组具有较高的促小鼠脾淋巴母细胞增殖活性;不同浓度的rChIL-6注射组对NDV和AIVH5N1疫苗都具有较好的免疫增强作用,但对其免疫抗体产生时间及抗体滴度峰值出现和维持时间均没有明显的影响,其中0.03μg/mLrChIL-6浓度注射组的对鸡疫苗的免疫增强作用最明显,过高或过低浓度的rChIL-6对疫苗免疫增强作用不显著。这些研究为新型免疫增强佐剂开发以及鸡免疫失败性疫病的预防和治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素-6 基因克隆 蛋白表达 免疫活性 免疫增强
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鸭的类似鸡白细胞介素2基因的克隆及遗传进化分析 被引量：11
12
作者 王金勇 周继勇 +2 位作者 陈吉刚 张中华 腾巧泱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期545-548,共4页
通过 RT- PCR和 DNA测序技术 ,克隆和测定了绍兴麻鸭的一种类似鸡白细胞介素 2 ( IL- 2 )基因的核苷酸序列 ,并构建了该基因编码蛋白的三维结构分子模型。结果显示 ,绍兴麻鸭的类似于鸡 IL - 2基因的核苷酸长度由 74 8个碱基组成 ,编码... 通过 RT- PCR和 DNA测序技术 ,克隆和测定了绍兴麻鸭的一种类似鸡白细胞介素 2 ( IL- 2 )基因的核苷酸序列 ,并构建了该基因编码蛋白的三维结构分子模型。结果显示 ,绍兴麻鸭的类似于鸡 IL - 2基因的核苷酸长度由 74 8个碱基组成 ,编码产物为由 14 0个氨基酸残基组成的多肽 ,编码产物中含有 2 1个氨基酸残基组成的信号肽。绍兴麻鸭的类似于鸡 IL- 2基因的核苷酸及编码产物 ,与鸡和火鸡 IL- 2的一致性分别为 71.4 %～ 72 .1%和 5 5 .0 %～ 5 7.9% ,与哺乳类等动物 IL- 2的一致性分别为 2 2 .1%～ 2 8.8%和 14 .3%～ 17.1%。对绍兴麻鸭的类似于鸡 IL- 2基因蛋白编码产物的系统进化树分析表明 ,其编码产物与鸡和火鸡 IL- 2具有较远的亲缘关系。绍兴麻鸭的类似于鸡 IL- 2基因编码产物的三维结构 ,预测由 4个α-螺旋结构和 2个β折叠组成。这些研究结果预示 ,鸭的类似于鸡 IL - 2基因编码产物 ,在生物学功能上与哺乳动物和其他禽类具有很大的差异。 展开更多
关键词 鸭 类似鸡白细胞介素2 基因克隆 遗传进化 RT-PCR 免疫调节因子
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重组鸡白细胞介素2的诱导表达与生物学活性测定 被引量：7
13
作者 陈吉刚 陈维虎 +5 位作者 周继勇 王金勇 齐静 郑肖娟 俞照正 孙红霞 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期1034-1039,共6页
将去除信号肽的鸡IL-2基因编码框克隆到原核表达载体pBAD/HisB,实现了重组鸡IL-2(rchIL-2)蛋白在大肠杆菌中的高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达蛋白的分子量约为18kD。用rchIL-2为抗原制备了单克隆抗体和多克隆抗体,建立了检测rchIL-2... 将去除信号肽的鸡IL-2基因编码框克隆到原核表达载体pBAD/HisB,实现了重组鸡IL-2(rchIL-2)蛋白在大肠杆菌中的高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达蛋白的分子量约为18kD。用rchIL-2为抗原制备了单克隆抗体和多克隆抗体,建立了检测rchIL-2含量的抗原捕获ELISA,探讨了天然chIL-2蛋白的体外表达动力学。非变性条件下纯化的rchIL-2(0.4ng)对ConA活化的鸡T淋巴细胞具有明显的增殖活性,而对鸭及鹅的T淋巴细胞无增殖活性。抗chIL-2多克隆抗体可完全中和rchIL-2和天然chIL-2蛋白的生物学活性,而单克隆抗体无中和rchIL-2和天然chIL-2蛋白生物学活性的功能。这些研究结果证实,大肠杆菌表达的rchIL-2及其多克隆抗体拥有生物学功能,而获得的单克隆抗体不具有chIL-2的中和特性。 展开更多
关键词 重组鸡白细胞介素2 诱导表达 生物学活性 单克隆抗体 多克隆抗体 抗原捕获ELISA 淋巴因子
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鸡白细胞介素-18基因的原核表达及多克隆抗血清的制备 被引量：11
14
作者 刘胜旺 潘蔚绮 +2 位作者 孔宪刚 李广兴 夏春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期427-430,共4页
将编码鸡白细胞介素 - 18(interleukin- 18,IL- 18)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体 p PROEXTMHT中 ,构建重组质粒并进行确证性序列测定。然后将重组质粒转化大肠杆菌 DH5α并用 IPTG于 37℃诱导培养。表达的融合蛋白主要以包涵体... 将编码鸡白细胞介素 - 18(interleukin- 18,IL- 18)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体 p PROEXTMHT中 ,构建重组质粒并进行确证性序列测定。然后将重组质粒转化大肠杆菌 DH5α并用 IPTG于 37℃诱导培养。表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在 ,目的蛋白表达量占菌体蛋白的 30 %。 SDS- PAGE和 Western blot分析显示 ,表达的鸡 IL-18融合蛋白相对分子质量约为 2 30 0 0。包涵体被 6 mol/ L 盐酸胍裂解后 ,通过镍离子亲和树脂进行了纯化。用所获得的重组鸡 IL- 18融合蛋白及其纯化产物经 3次肌肉注射豚鼠 ,制备豚鼠抗鸡 IL- 18多克隆抗血清 ,并用琼脂扩散试验多克隆抗血清进行了证明。本试验成功的原核表达、纯化了鸡 IL- 18融合蛋白 ,并制备了抗鸡 IL- 18多克隆抗血清 ,为下一阶段关于鸡 IL - 展开更多
关键词 鸡白细胞介素-18基因 原核表达 多克隆抗血清 重组蛋白 制备 细胞因子
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重组鸡白细胞介素6对不同种类疫苗的免疫增强作用 被引量：11
15
作者 闫若潜 谢彩华 +4 位作者 吴志明 李桂喜 张志凌 张健 刘梅芬 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期494-500,共7页
为评价重组鸡白细胞介素6(rChIL-6)在商品鸡体内对不同种类疫苗的免疫增强作用,采用不同接种方式,应用rChIL-6分别对不同种类新城疫病毒(NDV)单联疫苗和新城疫病毒-传染性支气管炎病毒-禽流感病毒H9亚型三联疫苗(NDV-IBV-H9)进行了免疫... 为评价重组鸡白细胞介素6(rChIL-6)在商品鸡体内对不同种类疫苗的免疫增强作用,采用不同接种方式,应用rChIL-6分别对不同种类新城疫病毒(NDV)单联疫苗和新城疫病毒-传染性支气管炎病毒-禽流感病毒H9亚型三联疫苗(NDV-IBV-H9)进行了免疫增强试验以及传染性法氏囊病病毒(IBDV)单联油乳剂灭活疫苗的免疫增强田间试验,并进行了将rChIL-6与NDV Ⅳ系预混合乳化制备成的灭活疫苗的免疫试验。结果表明,将rChIL-6与NDVⅣ系、Ⅰ系活疫苗预混合后分别采用滴鼻点眼、肌肉注射接种方式的免疫增强效果优于其他方式;rChIL-6与NDV抗原预混后制备成油乳剂灭活疫苗的免疫增强效果优于将相同抗原量的NDV油乳剂灭活疫苗和rChIL-6同时分点免疫接种。rChIL-6对NDV油乳剂灭活疫苗的免疫增强效果优于活疫苗,对NDV单联灭活疫苗的免疫增强效果优于NDV-IBV-H9三联灭活疫苗。田间试验表明,rChIL-6对IBDV油乳剂灭活疫苗首免和二免都具有显著的免疫增强作用,二免的免疫增强效果优于首免。这些研究结果为进一步开展新型鸡基因工程免疫增强剂研究奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡 重组鸡白细胞介素6 疫苗 免疫增强作用 新城疫 传染性法氏囊病 禽流感H9N2亚型
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重组鸡白细胞介素18(rChIL-18)对MDV感染SPF鸡细胞免疫的影响 被引量：9
16
作者 李宏梅 胡敬东 +4 位作者 郭慧君 郑玉姝 刘翠艳 田兆菊 赵宏坤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期624-627,共4页
用马立克氏病病毒(MDV)感染5日龄SPF鸡后,取21日龄和35日龄鸡的淋巴细胞,运用3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞对ConA和重组鸡白细胞介素18(rChIL-18)的反应,并用MTT法检测NK细胞和CTL对MD肿瘤细胞系CU147的杀伤活性及rChIL-18和IFN-γ对它们... 用马立克氏病病毒(MDV)感染5日龄SPF鸡后,取21日龄和35日龄鸡的淋巴细胞,运用3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞对ConA和重组鸡白细胞介素18(rChIL-18)的反应,并用MTT法检测NK细胞和CTL对MD肿瘤细胞系CU147的杀伤活性及rChIL-18和IFN-γ对它们的作用。结果显示,SPF鸡感染MDV后淋转水平显著下降,NK细胞、CTL杀伤活性在感染后21日龄时升高,而在35日龄时NK细胞杀伤活性显著下降。rChIL-18对对照组和感染组SPF鸡的淋转水平和杀伤活性均有提高作用,同样IFN-γ也具有提高NK细胞和CTL杀伤活性的作用。 展开更多
关键词 重组鸡白细胞介素-18(rChIL-18) 细胞杀伤活性 马立克氏病病毒 细胞免疫 SPF鸡
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传染性法氏囊病病毒VP2/4/3-ChIL-2融合基因DNA疫苗免疫原性研究 被引量：7
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作者 万旺军 谢荣辉 +3 位作者 李龙 许健 郑江涛 于涟 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期137-143,共7页
应用重叠延伸剪切技术(splicing by overlapping extension,SOE),经3次PCR将传染性法氏囊病病毒(infectiousbursal disease virus,IBDV)多聚蛋白(VP2/4/3)基因和鸡白细胞介素2(Chicken IL-2,ChIL-2)基因进行融合,定向插入真核表达载体pC... 应用重叠延伸剪切技术(splicing by overlapping extension,SOE),经3次PCR将传染性法氏囊病病毒(infectiousbursal disease virus,IBDV)多聚蛋白(VP2/4/3)基因和鸡白细胞介素2(Chicken IL-2,ChIL-2)基因进行融合,定向插入真核表达载体pCI的CMV启动子下游,获得重组质粒pCI-VP2/4/3-IL-2和pCI-IL-2-VP2/4/3。将其制备成DNA疫苗,肌肉注射14日龄非免疫鸡,2周后加强免疫,定期测定鸡抗IBDV血清ELISA抗体效价及病毒中和抗体效价。加强免疫后3周用IBDV标准强毒株攻击,连续观察3天后全部扑杀,计算保护率及囊体比,并进行组织病理学检查。结果表明:1)融合基因重组质粒pCI-VP2/4/3-IL-2、pCI-IL-2-VP2/4/3免疫后能明显增强IBDVDNA疫苗对强毒的攻击保护(保护率分别为83.3%、91.6%),显著高于pCI-VP2/4/3单独免疫对照组(58.3%);2)诱导产生的抗IBDV血清ELISA抗体效价明显增高(P<0.05),同时能提高DNA疫苗诱导产生的中和抗体效价(P<0.05);3)能显著促进鸡外周血液T淋巴细胞增殖反应。上述结果提示:IBDV VP2/4/3与ChIL-2基因融合后发挥了相互协同作用,ChIL-2产生了分子免疫佐剂效应;融合基因DNA疫苗能增强IBDV DNA疫苗的免疫原性,促进了机体特异性免疫应答。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 鸡白细胞介素2 基因融合 DNA疫苗 免疫原性
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鸡IL-15基因的克隆与序列分析 被引量：9
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作者 独军政 刘胜旺 +2 位作者 孔宪刚 陈怀涛 夏春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期107-111,共5页
参照已发表的鸡IL_15cDNA序列 ,设计合成引物 ,应用反转录_聚合酶链反应 (ReverseTranscription_PolymeraseChainReaction ,RT_PCR)技术从有丝分裂原ConA活化 4 8小时的白来航鸡脾淋巴细胞中克隆到了鸡IL_15cDNA ,并对单独的三个阳性克... 参照已发表的鸡IL_15cDNA序列 ,设计合成引物 ,应用反转录_聚合酶链反应 (ReverseTranscription_PolymeraseChainReaction ,RT_PCR)技术从有丝分裂原ConA活化 4 8小时的白来航鸡脾淋巴细胞中克隆到了鸡IL_15cDNA ,并对单独的三个阳性克隆分别进行了核苷酸序列测定 ,核苷酸与推导的氨基酸序列分析显示 ,本研究所用白来航鸡IL_15cDNA5’非编码区有两个框外ATG起始密码子 ,开放阅读框由 5 6 1bp组成 ,编码 187个氨基酸 ,其中N端信号肽含有 6 6个氨基酸 ,在第 4 8、14 9和 16 6位的天冬酰胺残基上有三个潜在的N糖基化位点。成熟的鸡IL_15含有 4个高度保守的半胱氨酸(Cysteine)残基 ,可形成两个链内二硫键。与已发表的鸡IL_15基因序列相比 ,该序列编码区第 36 5、397、4 0 7、4 5 7、4 74、5 5 6、5 5 7位的核苷酸发生了变化 ,分别由A、C、G、G、A、A、T依次变成了G、T、T、T、G、A、T ,推导的氨基酸序列在第 12 2、133、136、15 3和 186位发生了改变 ,分别由原来的天冬氨酸、精氨酸、色氨酸、丙氨酸、丙氨酸依次变成了甘氨酸、色氨酸、亮氨酸、丝氨酸和异亮氨酸 ,其中第 4 74位碱基的变化是同义突变 。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素15 基因克隆 序列
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鸡IL-6真核表达载体的构建及其对新城疫LaSota疫苗的免疫增强作用研究 被引量：7
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作者 刘蕊娜 邹年莉 +2 位作者 王红宁 柳萍 黄勇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期93-97,共5页
利用RT-PCR方法从ConA诱导的鸡脾淋巴细胞RNA中扩增出IL-6基因,与pCI-neo连接构建真核表达质粒pCI-IL-6,并研究pCI-IL-6在CEF细胞中的表达及其对新城疫LaSota疫苗的免疫增强作用。研究发现,pCI-IL-6在CEF细胞中得到表达,pCI-IL-6和LaSot... 利用RT-PCR方法从ConA诱导的鸡脾淋巴细胞RNA中扩增出IL-6基因,与pCI-neo连接构建真核表达质粒pCI-IL-6,并研究pCI-IL-6在CEF细胞中的表达及其对新城疫LaSota疫苗的免疫增强作用。研究发现,pCI-IL-6在CEF细胞中得到表达,pCI-IL-6和LaSota疫苗联合免疫组HI抗体、CD4+、CD8+和CD3+T淋巴细胞百分含量从免疫后第14天起均高于LaSota疫苗单独免疫组。其中,HI抗体效价在第14、21和35天时差异显著(P<0.05),在第28天时差异极显著(P<0.01);CD4+、CD8+和CD3+T淋巴细胞百分含量在第14天后表现为差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。在免疫后第35天进行攻毒,pCI-IL-6和LaSota疫苗联合免疫组的保护率为89.5%,而LaSota疫苗单独免疫组的保护率为76.5%。结果表明,pCI-IL-6真核表达质粒在鸡体内成功表达,并能明显提高新城疫LaSota疫苗的免疫效果,具有免疫增强作用。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素-6 真核表达载体 新城疫LaSota疫苗 免疫效果
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鸡白细胞介素4基因的克隆及其原核表达 被引量：8
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作者 戴华 郑佳玉 +3 位作者 陈俊华 孙林 潘志明 焦新安 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期473-477,共5页
应用RT-PCR技术,从被诱导的鸡脾脏淋巴细胞中扩增鸡白细胞介素-4(ChIL-4)基因cDNA,经克隆筛选和测序后,构建出重组质粒pGEX-6P-ChIL-4和pET-ChIL-4,分别转化相应的受体菌,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,结果表明ChIL-4基因在上述载体中均获... 应用RT-PCR技术,从被诱导的鸡脾脏淋巴细胞中扩增鸡白细胞介素-4(ChIL-4)基因cDNA,经克隆筛选和测序后,构建出重组质粒pGEX-6P-ChIL-4和pET-ChIL-4,分别转化相应的受体菌,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,结果表明ChIL-4基因在上述载体中均获得表达,融合蛋白大小分别为38ku和18ku,Westernblot结果也显示,在相对分子质量38ku和18ku位置有特异性条带。这为重组ChIL-4的规模化生产、疫苗佐剂的研制及其单克隆抗体的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素-4 CDNA 克隆 表达
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