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持续高糖状态对Kv11.1离子通道蛋白表达的影响
1
作者 韩稳琦 王毅 +3 位作者 陈海潮 尤红俊 邓纪钊 祁杰 《陕西医学杂志》 CAS 2024年第1期32-36,共5页
目的:探讨持续高浓度葡萄糖干预对Kv11.1离子通道蛋白表达的影响。方法:①采用双酶切法和基因重建技术将HERG基因插入到表达绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-N1中,构建Kv11.1离子通道蛋白的表达载体pEGFP-N1-HERG并测序验证。②pEGFP-N... 目的:探讨持续高浓度葡萄糖干预对Kv11.1离子通道蛋白表达的影响。方法:①采用双酶切法和基因重建技术将HERG基因插入到表达绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-N1中,构建Kv11.1离子通道蛋白的表达载体pEGFP-N1-HERG并测序验证。②pEGFP-N1-HERG表达载体鉴定成功后经脂质体转染HEK293T细胞,并通过不同糖浓度(5、17.5、30mmol/L)干预细胞48h后流式细胞仪检测细胞HERG离子通道蛋白绿色荧光平均表达量。结果:流式细胞仪检测pEGFP-N1-HERG融合蛋白平均荧光强度于不同浓度葡萄糖持续干预后分别为218.87(5mmol/L)、174.83(17.5mmol/L)、142.90(30mmol/L),三组间比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:持续高糖状态抑制Kv11.1离子通道蛋白的表达,为糖尿病患者长期高糖状态时QT间期延长提供理论依据并奠定实验基础。 展开更多
关键词 HERG基因 真核表达载体 高糖干预 Kv11.1 蛋白表达
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丹酚酸B对高糖干预下的人肾小管上皮细胞自噬相关蛋白的影响 被引量：2
2
作者 解加泳 朱强 +2 位作者 陈伟 高建民 丁昊 《贵州医药》 CAS 2017年第7期678-680,共3页
目的探究丹酚酸B对高糖干预下的人肾小管上皮细胞自噬相关蛋白的影响。方法根据人近端肾小管上皮细胞HK-2细胞培养方式的不同,分为对照组、葡萄糖组和实验组,对照组加入5.5mmol/L的葡萄糖;葡萄糖组加入葡萄糖的浓度分为10、20和30mmol/L... 目的探究丹酚酸B对高糖干预下的人肾小管上皮细胞自噬相关蛋白的影响。方法根据人近端肾小管上皮细胞HK-2细胞培养方式的不同,分为对照组、葡萄糖组和实验组,对照组加入5.5mmol/L的葡萄糖;葡萄糖组加入葡萄糖的浓度分为10、20和30mmol/L;实验组在培养基中分别加入丹酚酸B和葡萄糖(30mmol/L),丹酚酸B的浓度分为0.1、1、10和100μmol/L,培养24h。使用蛋白提取试剂盒分别提取3组培养细胞中的总蛋白,采用Bradford法测定不同培养组细胞自噬相关蛋白的含量,进行分析比较。结果随着葡萄糖刺激浓度的增高,p62蛋白表达增加。24h后,高糖可诱导HK-2细胞自噬相关蛋白p62表达增加,LC3表达减少,且呈剂量依赖性。与对照组相比,随着丹酚酸B干预剂量的增高,24h后的细胞LC3的表达增加,不同剂量丹酚酸B干预可减少高糖诱导下的p62蛋白的表达增加,同时LC3的表达得到明显恢复,且呈剂量依赖性(P<0.05)。Logistic回归分析的结果显示,LC3蛋白含量、p62蛋白含量是影响细胞自噬的独立影响因素。结论在高糖的干预下,不同剂量丹酚酸B干预可减少高糖诱导下的p62蛋白的表达增加,同时LC3的表达得到明显恢复,且呈剂量依赖性。 展开更多
关键词 丹酚酸B 高糖干预 肾小管上皮细胞 自噬相关蛋白
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