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高压静脉注射转染法建立脂源性炎症介导的肝癌小鼠模型
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作者 卢羿同 杨嘉蒙 +1 位作者 赵俊龙 秦鸿雁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期122-129,共8页
目的利用高压静脉注射转染法经小鼠尾静脉转染蛋白激酶B(AKT)、β联蛋白(β-catenin)及睡美人转座子质粒建立伴脂肪肝的炎癌转化小鼠肝癌模型并对该模型进行鉴定。方法选取6~8周龄雄性C57BL/6小鼠,通过高压静脉注射转染法在短时间内(5~9... 目的利用高压静脉注射转染法经小鼠尾静脉转染蛋白激酶B(AKT)、β联蛋白(β-catenin)及睡美人转座子质粒建立伴脂肪肝的炎癌转化小鼠肝癌模型并对该模型进行鉴定。方法选取6~8周龄雄性C57BL/6小鼠,通过高压静脉注射转染法在短时间内(5~9 s)经尾静脉注射含目的DNA的等渗生理溶液(20μg myrAKT、20μgΔN90-β-catenin和4μg Sleeping Beauty transposase溶于2 mL生理盐水),对照组采用相同方法注射对照质粒。于建模8、12、16周后,处死小鼠并收集血清及肝组织,提取RNA。HE染色检测肝脏组织结构及炎性细胞浸润程度;油红O染色检测肝细胞内脂质沉积情况;天狼星红和Masson染色检测肝组织纤维化程度;免疫组织化学染色检测肝组织KI-67抗原(ki67)表达显示细胞增殖活性、检测CD31表达显示微血管密度及分布情况;实时荧光定量PCR检测肝组织肿瘤标志物甲胎蛋白(AFP)的mRNA表达;流式细胞术检测肝组织内各免疫细胞亚群数量变化。结果小鼠经高压静脉注射转染法建模16周后,实验组小鼠成瘤率100%(20/20)。与对照组相比,实验组小鼠体质量增长缓慢,肝质量显著增加。HE染色结果显示,大量肝细胞出现脂肪变,炎性细胞浸润增多,肝癌组织内肿瘤细胞为类圆形或不规则形,核质比失调,异型性显著,呈团块状分布;ki67阳性细胞数增加。血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、γ谷氨酰转肽酶(γ-GT)、碱性磷酸酶(ALP)水平显著升高,AFP mRNA表达显著上升,CD31表达检测显示微血管密度增加且结构紊乱。流式细胞术分析肝脏中大量炎性细胞浸润,且以髓系及淋巴系为主。结论通过高压静脉注射转染法在肝细胞中激活AKT和β-catenin成功建立了伴发脂肪肝的炎癌转化小鼠肝癌模型,且方法简便,诱导时间短,成瘤率高,重复性强。 展开更多
关键词 肝癌 炎症 高压静脉注射转染法 睡美人转座子(Sleeping beauty transposon) β联蛋白(β-catenin) 蛋白激酶B(AKT)
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