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基于高内涵分析技术的何首乌提取物及其主要成分肝毒性研究 被引量：38
1
作者 马喆 赵珺睿 +3 位作者 董冉冉 崔英 王萌 朱彦 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第22期4021-4029,共9页
目的建立高通量的高内涵分析(HCA)技术,探讨何首乌致肝损伤的可能物质及作用机制。方法人源肝癌细胞HepG2分别经不同质量浓度的何首乌不同极性提取物、何首乌主要单体成分二苯乙烯苷、芦荟大黄素、大黄素甲醚、儿茶素、大黄酚、大黄素... 目的建立高通量的高内涵分析(HCA)技术,探讨何首乌致肝损伤的可能物质及作用机制。方法人源肝癌细胞HepG2分别经不同质量浓度的何首乌不同极性提取物、何首乌主要单体成分二苯乙烯苷、芦荟大黄素、大黄素甲醚、儿茶素、大黄酚、大黄素、大黄酸、没食子酸孵育24 h后,利用Hoechst 33342等荧光探针对细胞进行染色,利用HCA技术检测并分析药物在不同浓度或不同孵育时间时对HepG2的细胞数目、细胞核形态、线粒体质量和线粒体膜电位的影响。结果何首乌醋酸乙酯提取物和二氯甲烷提取物在1 000μg/m L时对HepG2细胞增殖、形态和线粒体质量均有显著的影响,醋酸乙酯提取物还引起线粒体膜电位的明显下降。何首乌各单体成分在较低浓度(0.01、1μmol/L)时对细胞无显著影响;而在较高浓度(100μmol/L)时,芦荟大黄素、大黄素、大黄酸和没食子酸可引起细胞数目的明显下降,芦荟大黄素还引起细胞核的肿胀、导致细胞核面积增大。由大黄素和大黄酸的量效曲线可知,二者对细胞各指标的半数毒性浓度(TC50)值与文献报道基本一致。各成分不同孵育时间(24、48、72 h)对细胞数目和细胞核面积的影响未出现显著差异。结论蒽醌类成分芦荟大黄素、大黄素、大黄酸和没食子酸可能是何首乌致肝毒性的主要成分,由各单体对线粒体质量和线粒体膜电位的影响推测何首乌致肝毒性可能与线粒体介导的细胞凋亡有关。HCA技术适用于中药复杂体系的肝毒性评价。 展开更多
关键词 何首乌 高内涵分析技术 人源肝癌细胞HepG2 肝毒性 二苯乙烯苷 芦荟大黄素 大黄素甲醚 儿茶素 大黄酚 大黄素 大黄酸:没食子酸
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诃子鞣酸对乌头碱致H9C2细胞损伤的保护作用及机制 被引量：11
2
作者 韩舒 刘帅 +7 位作者 张乔 支美汝 刘凯洋 唐雅楠 韩喜桃 刘子琴 李飞 杜红 《北京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期645-652,共8页
目的通过研究诃子鞣酸对乌头碱致H9C2细胞损伤的保护作用,探讨蒙药诃子制草乌炮制减毒机制。方法以不同浓度的乌头碱、诃子鞣酸及乌头碱+诃子鞣酸分别作用于H9C2细胞,利用高内涵分析(HCA)技术检测并分析药物对H9C2细胞数量、细胞核面积... 目的通过研究诃子鞣酸对乌头碱致H9C2细胞损伤的保护作用,探讨蒙药诃子制草乌炮制减毒机制。方法以不同浓度的乌头碱、诃子鞣酸及乌头碱+诃子鞣酸分别作用于H9C2细胞,利用高内涵分析(HCA)技术检测并分析药物对H9C2细胞数量、细胞核面积、细胞核DNA含量、Ca^2+荧光强度及线粒体功能的影响。结果10、20μmol/L乌头碱作用于H9C2细胞24 h后,可导致细胞内Ca^2+超载;20μmol/L乌头碱可致H9C2细胞线粒体功能障碍;5、10、20μmol/L诃子鞣酸单独作用于H9C2细胞均无明显毒性;当10、20μmol/L诃子鞣酸与20μmol/L乌头碱共同作用于H9C2细胞24 h后,线粒体功能恢复,细胞内Ca^2+荧光强度降低;与对照组相比,无明显差异。结论乌头碱会引起H9C2细胞Ca^2+超载和线粒体功能障碍,可能是草乌致心肌细胞毒性的主要原因。诃子中的诃子鞣酸可明显抑制由乌头碱引起的Ca^2+超载,改善线粒体功能,起到解草乌毒的作用。 展开更多
关键词 诃子制草乌 乌头碱 诃子鞣酸 H9C2细胞 高内涵分析技术 炮制减毒
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抗肾纤维化药物高内涵筛选模型的建立及应用 被引量：9
3
作者 孙雪娇 刘祎 +6 位作者 李城 王曦廷 吴清华 张宇欣 栗世铀 李亚东 李彧 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期327-334,共8页
目的建立可用于高内涵分析的肾纤维化体外的细胞模型,为抗肾纤维化中药化合物的筛选和机制研究奠定基础。方法本研究通过TGF-β1诱导正常大鼠肾成纤维细胞NRK49F,以肌成纤维细胞标志α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)作为检测指标,通过高内涵... 目的建立可用于高内涵分析的肾纤维化体外的细胞模型,为抗肾纤维化中药化合物的筛选和机制研究奠定基础。方法本研究通过TGF-β1诱导正常大鼠肾成纤维细胞NRK49F,以肌成纤维细胞标志α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)作为检测指标,通过高内涵成像分析系统对α-SMA荧光表达强度进行检测分析,并对细胞种板密度、诱导时间、诱导培养基中血清浓度等各种条件进行优化,建立稳定的肾纤维化体外模型。在此基础上以TGF-β1受体阻滞剂SB525334和姜黄素、大黄素对模型进行验证。并进一步探讨吡非尼酮是否具有抗肾纤维化功效。结果实验通过对细胞密度、诱导时间、培养基中血清浓度进行优化,确立了可用于高内涵分析的NRK49F肾纤维化体外模型的建立条件。SB525334、姜黄素、大黄素和吡非尼酮均能减少TGF-β1诱导的α-SMA过表达,抑制NRK49F的活化。结论实验建立了可用于高内涵筛选技术的肾纤维化体外模型,并能相对稳定地筛选具有抗肾纤维化作用的药物。吡非尼酮在本模型中抑制了成纤维化细胞向肌成纤维细胞转化,提示其可能具有抗肾纤维化作用,为抗肾纤维化药物初筛对象的选择提供了思路。 展开更多
关键词 肾纤维化 细胞模型 高内涵分析技术 NRK49F Α-SMA 中药化合物
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基于高内涵分析技术研究山萘酚的人肾近曲小管细胞HK-2毒性及机制 被引量：3
4
作者 路青瑜 郭丽 +2 位作者 李娇 杨付梅 孙黔云 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第2期121-129,共9页
目的基于高内涵分析技术探究山萘酚的肾细胞毒性作用及机制。方法人肾近曲小管细胞HK-2分为细胞对照组(二甲亚砜终浓度<0.01%)、山萘酚5,10,20,50和100μmol·L^(-1)组及多柔比星(Dox)10μmol·L^(-1)组。Hoechst 33342染色... 目的基于高内涵分析技术探究山萘酚的肾细胞毒性作用及机制。方法人肾近曲小管细胞HK-2分为细胞对照组(二甲亚砜终浓度<0.01%)、山萘酚5,10,20,50和100μmol·L^(-1)组及多柔比星(Dox)10μmol·L^(-1)组。Hoechst 33342染色和噻唑蓝(MTT)比色法分别检测活细胞数目和细胞存活率;荧光探针DCFH-DA,Mito-Tracker Red CMXRos和Fluo-4 AM分别检测活性氧(ROS)、线粒体膜电位(MMP)和Ca^(2+)内流水平;化学发光法检测细胞ATP含量;AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡率;Hoechst 33342染色检测DNA含量;免疫荧光法检测NF-κB p65入核情况,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路蛋白〔p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、c-Jun N端激酶(JNK)、p-JNK、细胞外信号调节激酶(ERK)和p-ERK〕和酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)通路蛋白(p-STAT3和STAT3)的表达。结果与细胞对照组相比,山萘酚5,10,20,50和100μmol·L^(-1)组活细胞数目明显减少(P<0.05,P<0.01);山萘酚10,20,50和100μmol·L^(-1)组细胞存活率显著下降(P<0.05,P<0.01);山萘酚10,20,50和100μmol·L^(-1)组细胞ROS水平升高(P<0.05,P<0.01);山萘酚5,10,20,50和100μmol·L^(-1)组细胞MMP下降(P<0.01);山萘酚50和100μmol·L^(-1)组细胞Ca^(2+)内流水平明显升高(P<0.05,P<0.01),ATP含量明显降低(P<0.05,P<0.01);山萘酚20,50和100μmol·L^(-1)组细胞凋亡率均明显升高(P<0.05,P<0.01);山萘酚各剂量组DNA含量均无明显变化。免疫荧光检测结果显示,山萘酚50和100μmol·L^(-1)使NF-κB p65发生磷酸化并入核;山萘酚上调MAPK通路p-p38 MAPK,p-ERK,p-JNK和JNK蛋白及JAK2/STAT3通路p-STAT3蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论山萘酚对HK-2细胞有明显毒性,机制与其促进ROS水平升高而介导氧化应激损伤和细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 高内涵分析技术 山萘酚 肾毒性 NF-ΚB
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高内涵筛选技术在中药作用机制及物质基础研究中的应用进展
5
作者 李星雨 王婧 +6 位作者 陈思凯 高峰 欧莉 李敏 奚苗苗 董泰玮 卫培峰 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期121-128,共8页
中药的现代化研究一直存在药效物质基础筛选复杂且筛选不全面,作用机制研究靶点多且认识不深入的问题,致使其研究结果存在不确定性及不充分性,无法得到国际认可。而高内涵筛选技术(High-content screening,HCS)又称高内涵分析技术(High-... 中药的现代化研究一直存在药效物质基础筛选复杂且筛选不全面,作用机制研究靶点多且认识不深入的问题,致使其研究结果存在不确定性及不充分性,无法得到国际认可。而高内涵筛选技术(High-content screening,HCS)又称高内涵分析技术(High-content analysis,HCA),作为一项高通量、多靶点、多通道、全自动化的分析技术,能够量化分析大量细胞对药物的特异性反应图像,可在中药的现代化研究中以匹配中药及其复方多靶点作用的应用特性,对其进行作用机制及物质基础研究,以提高中药疗效、扩大用药范围、保障用药安全并使其结果具有相当的国际认可度。文章简要介绍了高内涵筛选的原理及其在中药作用机制及物质基础研究中的应用进展,从实例中,思考其优势与限制及对中药现代化研究做出的贡献。 展开更多
关键词 高内涵分析技术 高内涵筛选技术 中药 物质基础 作用机制 信号采集 安全性评价
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以诃子为研究对象建立高内涵肝毒性分析方法与验证 被引量：4
6
作者 程源 王志斌 +3 位作者 金家金 高阳 左泽平 胡宇驰 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期1077-1080,共4页
目的:以诃子的水提物(沉淀)和醇提物(上清液)为研究对象建立高内涵肝毒性分析方法,并通过整体动物实验验证高内涵分析(HCS)方法的可靠性。方法:在Hep G2人肝癌细胞上,采用HCS技术,进行诃子两个不同极性部位的细胞毒性试验;对ICR小鼠进... 目的:以诃子的水提物(沉淀)和醇提物(上清液)为研究对象建立高内涵肝毒性分析方法,并通过整体动物实验验证高内涵分析(HCS)方法的可靠性。方法:在Hep G2人肝癌细胞上,采用HCS技术,进行诃子两个不同极性部位的细胞毒性试验;对ICR小鼠进行灌胃,测定血清中谷草转氨酶(AST)、谷氨酸转氨酶(ALT)水平。结果:沉淀与上清液均具有肝毒性,且上清液毒性较强,HCS显示均为阳性。与空白组相比,沉淀给药组引起血清中ALT水平升高(P<0.01);上清液给药组导致小鼠体质量降低,血清中ALT、AST水平升高(P<0.01)。结论:HCS分析方法与整体动物实验具有较好的一致性,且HCS在肝毒性预测中显示出较高的灵敏性和特异性,充分地体现了本方法的可靠性,其作为一种快速、高效、通量化的细胞毒性检测方法值得在中药毒理学评价中广泛开展。 展开更多
关键词 诃子 高内涵分析技术 肝毒性 细胞毒性检测
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利用高内涵分析技术进行药物肾细胞毒性筛选的研究 被引量：2
7
作者 肖珠 王志斌 +4 位作者 郑虎占 王立娜 高阳 程源 胡宇驰 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第14期1246-1250,共5页
目的探讨利用高内涵分析技术对药物进行肾毒性筛选的可行性。方法选择罗格列酮(rosiglitazone)为阴性药,缬氨霉素(valinomycin)为阳性药,利用高内涵分析技术,通过检测细胞数目(cell number)、DNA含量(DNA intensity)、细胞膜通透性(cell... 目的探讨利用高内涵分析技术对药物进行肾毒性筛选的可行性。方法选择罗格列酮(rosiglitazone)为阴性药,缬氨霉素(valinomycin)为阳性药,利用高内涵分析技术,通过检测细胞数目(cell number)、DNA含量(DNA intensity)、细胞膜通透性(cell permeability)、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)、细胞色素C(cytochrome C)的释放这5个指标,建立高内涵HK-2肾细胞毒性筛选模型并利用具有明显肾毒性的药物马兜铃酸A(aristolochic acid A)和顺铂(cisplatin)对该模型进行验证。结果缬氨霉素、顺铂和马兜铃酸A可以检测到明确的HK-2肾细胞毒性,而罗格列酮即使在药物浓度为最大血药浓度的1 000倍情况下仍然不会检测到明显的HK-2肾细胞毒性。结论基于HK-2肾细胞,高内涵平台可以用于对药物进行肾细胞毒性筛选。 展开更多
关键词 高内涵分析技术 肾毒性 毒性筛选
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迷迭香酸对CHO细胞DNA损伤的防护作用
8
作者 夭建华 高茜 +4 位作者 李雪梅 黄海涛 管莹 米其利 罗瑛 《香料香精化妆品》 CAS 2016年第1期33-36,共4页
采用高内涵分析技术测定DNA损伤/双键断裂的标志物γH2AX,来研究迷迭香酸对细胞DNA损伤的防护作用。即通过在体外对CHO细胞施予迷迭香酸,再诱导DNA损伤,对致损后的细胞进行γH2AX及Hoechst双荧光染色标记,最后通过分析γH2AX的荧光强度... 采用高内涵分析技术测定DNA损伤/双键断裂的标志物γH2AX,来研究迷迭香酸对细胞DNA损伤的防护作用。即通过在体外对CHO细胞施予迷迭香酸,再诱导DNA损伤,对致损后的细胞进行γH2AX及Hoechst双荧光染色标记,最后通过分析γH2AX的荧光强度从而对细胞DNA损伤程度进行半定量检测。结果发现,施予迷迭香酸的细胞与对照相比较,DNA损伤程度降低,表明迷迭香酸对CHO细胞的DNA损伤具有防护作用。 展开更多
关键词 CHO细胞 迷迭香酸 高内涵分析技术 γH2AX
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大鼠脑皮质星形胶质细胞的原代培养、纯化及采用HCA技术进行GFAP鉴定 被引量：16
9
作者 刘检 王宇红 +2 位作者 徐雅岚 杨蕙 李薇 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期581-587,共7页
目的探索大鼠脑皮质星形胶质细胞(astrocyte,AS)的分离、原代培养及纯化方法,采用高内涵细胞成像分析技术(high content analysis,HCA)对其进行胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)鉴定。方法取2、3 d的新生SD大鼠... 目的探索大鼠脑皮质星形胶质细胞(astrocyte,AS)的分离、原代培养及纯化方法,采用高内涵细胞成像分析技术(high content analysis,HCA)对其进行胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)鉴定。方法取2、3 d的新生SD大鼠,体视显微镜下获取大脑皮质,机械分离成1 mm3组织碎块,采用质量分数为0.25%的胰蛋白酶和0.2%的胶原酶(体积比为1∶1)消化后进行体外培养,分别观察接种1 h、3 d、5 d后原代AS基本形态结构,酶消化3 min后,接种30 min,5 d后传代AS基本形态结构;采用多次、多阶段的差速贴壁和震荡相结合的方法纯化细胞;采用HCA技术对AS进行GFAP免疫细胞化学鉴定。结果采用本法培养的大鼠脑皮质星形胶质细胞,数量多、活性佳、纯度高,胞突丰富且细长,并相互交织成网,呈现典型而良好的生长状态;经本法纯化后的星形胶质细胞,细胞纯度明显提高;经HCA技术进行GFAP鉴定,AS纯度质量分数达98%以上,且图片质量佳。结论建立了一种大鼠脑皮质星形胶质细胞原代培养及纯化方法,采用高内涵细胞成像分析技术进行GFAP鉴定的图片质量明显优于传统方法,该技术值得推广和应用。 展开更多
关键词 脑皮质 星形胶质细胞 原代培养 纯化 高内涵细胞成像分析技术(HCA) 鉴定 胶质纤维酸性蛋白(GFAP)
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优化的SD大鼠小胶质细胞原代培养、纯化及采用高内涵细胞成像分析技术进行的细胞鉴定 被引量：3
10
作者 刘检 王宇红 +3 位作者 凌佳 刘林 孟盼 杨蕙 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期968-973,共6页
目的建立一种优化的大鼠小胶质细胞(microglia,MG)原代培养及纯化方法,采用高内涵细胞成像分析技术(high content analysis,HCA)对其进行细胞鉴定。方法取1 d的新生SD大鼠,解剖显微镜下分离大脑皮质,机械剪碎成1 mm^3组织块,加入质量分... 目的建立一种优化的大鼠小胶质细胞(microglia,MG)原代培养及纯化方法,采用高内涵细胞成像分析技术(high content analysis,HCA)对其进行细胞鉴定。方法取1 d的新生SD大鼠,解剖显微镜下分离大脑皮质,机械剪碎成1 mm^3组织块,加入质量分数为0. 125%的胰蛋白酶和质量分数为0. 1%的胶原酶(体积比为1∶1)消化10 min后进行体外培养,分别观察接种5、7 d后小胶质细胞基本形态结构;采用低速震摇+温和消化+差速贴壁的三联法纯化细胞,分别观察纯化1、3、6 d后小胶质细胞基本形态结构;采用HCA技术对小胶质细胞进行其特异性抗体(ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba-1)免疫细胞化学染色鉴定。结果经优化法培养的小胶质细胞,数量多、纯度高、活性好,细胞胞体狭长,突起形状不规则,呈单极、双极、蜘蛛状或其它分枝状,且分别可见静息态与活化态的细胞,并呈现典型的小胶质细胞特征和良好的生长状态;经优化法培养的小胶质细胞,采用HCA进行Iba-1免疫细胞化学染色鉴定,MG纯度质量分数达98%以上。结论建立了一种小胶质细胞原代培养及纯化方法,同时采用HCA技术成功对其进行细胞鉴定,为后续小胶质细胞相关体外研究奠定了良好的实验基础。 展开更多
关键词 小胶质细胞 原代培养 纯化 鉴定 小胶质细胞特异性抗体(Iba-1) 高内涵细胞成像分析技术(HCA)
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