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骨髓间充质干细胞分化为血管内皮细胞的实验研究 被引量：79
1
作者 方利君 付小兵 +4 位作者 孙同柱 李建福 程飚 杨银辉 王玉新 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 2003年第1期22-24,共3页
目的　探讨骨髓间充质干细胞 (MSCs)分化为肉芽组织中血管内皮细胞的可能性 ,及其参与创面修复的可能机制。　方法　抽取小型香猪的骨髓 ,经密度梯度离心分离、纯化MSCs,体外培养扩增后 ,应用溴脱氧尿嘧啶 (BrdU)标记技术标记细胞。于... 目的　探讨骨髓间充质干细胞 (MSCs)分化为肉芽组织中血管内皮细胞的可能性 ,及其参与创面修复的可能机制。　方法　抽取小型香猪的骨髓 ,经密度梯度离心分离、纯化MSCs,体外培养扩增后 ,应用溴脱氧尿嘧啶 (BrdU)标记技术标记细胞。于已抽取骨髓的小型香猪背部制作全层皮肤缺损创面 ,即刻以纤维蛋白胶为载体 ,将已标记的MSC回植到供体动物创面上。术后 2、4、6、8、12周切取创面组织 ,行BrdU和因子Ⅷ (FⅧ )免疫组织化学染色 ,进行对比观察。　结果　BrdU阳性的MSCs多聚集在创面肉芽组织中的小血管周围 ,且有个别血管内皮细胞也呈现BrdU阳性。部分BrdU阳性的MSCs胞浆中亦有FⅧ表达。　结论　创面愈合过程中 ,MSCs与肉芽组织中小血管的形成密切相关。在创面微环境下 ,MSCs可分化为血管内皮细胞 ,并参与创面修复。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 分化 血管内皮细胞 实验研究 分离 培养 创面 修复
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在体诱导骨髓间充质干细胞分化为表皮细胞的初步观察 被引量：63
2
作者 方利君 付小兵 +5 位作者 孙同柱 李建福 程飚 杨银辉 王玉新 王通 《中华创伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期212-214,共3页
目的　探讨骨髓间充质干细胞 (MSCs)分化为表皮细胞的可行性。　方法　抽取小型香猪的骨髓 ,经密度梯度离心分离、纯化间充质干细胞及培养扩增后 ,应用 5 -溴脱氧尿嘧啶 ( 5-BrdU)标记技术进行细胞标记。将已标记的细胞以注射方式回植... 目的　探讨骨髓间充质干细胞 (MSCs)分化为表皮细胞的可行性。　方法　抽取小型香猪的骨髓 ,经密度梯度离心分离、纯化间充质干细胞及培养扩增后 ,应用 5 -溴脱氧尿嘧啶 ( 5-BrdU)标记技术进行细胞标记。将已标记的细胞以注射方式回植到提供骨髓的香猪的皮内及皮下 ,分别于注射后 1,2周取材 ,常规石蜡包埋、连续切片 ,行 5 -BrdU和角蛋白免疫组织化学染色 ,对比研究。　结果　大多数 5 -BrdU阳性细胞聚集在真皮中的小血管周围。但有少数 5 -BrdU阳性标记细胞出现在表皮的棘层和颗粒层 ,并同时表达角蛋白。　结论　在皮肤微环境下骨髓间充质干细胞具有分化为表皮细胞的潜能。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 分化 表皮细胞 细胞分化 皮肤创伤 角蛋白
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大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定 被引量：84
3
作者 李晓峰 赵劲民 +3 位作者 苏伟 崔向荣 罗世兴 马爱国 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1721-1725,共5页
背景:骨髓间充质干细胞在骨髓中含量极低,体外培养难度较大。体外分离培养纯度高、活力强、生物特性均一的间充质干细胞,对组织工程及细胞的体内、体外实验显得至关重要。目的:建立大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化方法,并进行... 背景:骨髓间充质干细胞在骨髓中含量极低,体外培养难度较大。体外分离培养纯度高、活力强、生物特性均一的间充质干细胞,对组织工程及细胞的体内、体外实验显得至关重要。目的:建立大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化方法,并进行细胞形态学观察、表面标志物鉴定及多向分化能力检测。方法:通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞,进行形态学观察,绘制生长曲线,细胞周期分析,流式细胞仪检测细胞表面标记物,分别向成骨、成脂方向诱导分化。结果与结论:大鼠骨髓间充质干细胞生长以梭形细胞为主,呈放射状排列的细胞集落,细胞生长旺盛,可连续稳定传代10代以上。生长曲线及细胞周期显示骨髓间充质干细胞符合正常细胞生长特征且生长活跃。第3代骨髓间充质干细胞CD44,CD90,CD105均呈阳性表达,而CD34,CD45呈阴性表达。成脂、成骨诱导后,油红O染色、碱性磷酸酶染色、von Kossa法染色和茜素红染色均呈阳性。全骨髓贴壁培养法操作简单,可大量分离、纯化、扩增骨髓间充质干细胞,所获细胞具有间充质干细胞的一般生物学特性,经诱导培养后具有多向分化潜能。实验所用的全骨髓贴壁法法为组织工程提供充足的种子细胞来源具有重要的现实意义。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 原代培养 形态学 分化 鉴定
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川续断皂苷Ⅵ诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化的研究 被引量：82
4
作者 武密山 赵素芝 +4 位作者 任立中 王茹 白霞 韩红伟 李彬 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期222-226,共5页
目的探讨川续断皂苷Ⅵ(akebia saponin D)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的影响。方法用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,选择合适的培养基,传代扩增。采用不同浓度的川续断皂苷Ⅵ对大鼠MSCs定向... 目的探讨川续断皂苷Ⅵ(akebia saponin D)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的影响。方法用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,选择合适的培养基,传代扩增。采用不同浓度的川续断皂苷Ⅵ对大鼠MSCs定向诱导分化,MTT法观察各组对MSCs的增殖作用并绘制细胞生长曲线;观察MSCs诱导分化过程中成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaliphosphatase,ALP)活性;采用ELISA法检测MSCs诱导分化过程中骨钙素(Osteo-calcin,OC)的含量;RT-PCR方法检测MSCs诱导分化过程中核心结合因子α-1(Cbfα1)mRNA表达。结果细胞生长曲线显示各组MSCs数量均随时间延长而增加,中、高浓度的川续断皂苷Ⅵ能明显提高MSCs分化为成骨细胞的ALP活性和骨钙素的含量,且使Cbfα1 mRNA的表达升高。结论川续断皂苷Ⅵ具有促进大鼠体外MSCs向成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高Cbfα1 mRNA的表达有关。 展开更多
关键词 川续断皂苷Ⅵ 骨髓间充质干细胞 成骨细胞 细胞增殖 细胞分化 碱性磷酸酶 核心结合因子α-1
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骨髓间充质干细胞的分离与培养 被引量：49
5
作者 艾国平 粟永萍 +4 位作者 闫国和 冉新泽 刘晓宏 罗成基 程天民 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期553-555,共3页
目的　摸索体外分离培养骨髓间充质干细胞的最佳条件 ,并观察其部分生物学活性。方法　采用常规的细胞培养传代技术以及光、电镜技术和细胞增殖活性检测法 ,观察不同贴壁时间、不同浓度血清、不同种植密度对骨髓间充质干细胞生长、增殖... 目的　摸索体外分离培养骨髓间充质干细胞的最佳条件 ,并观察其部分生物学活性。方法　采用常规的细胞培养传代技术以及光、电镜技术和细胞增殖活性检测法 ,观察不同贴壁时间、不同浓度血清、不同种植密度对骨髓间充质干细胞生长、增殖、形态的影响 ,并观察培养细胞的部分生物学特性。结果　以选用 4～ 2 4h贴壁的有核细胞 ,加入 5 %～ 1 0 %胎牛血清、种植密度(4～ 8)× 1 0 4个 /ml的培养条件为最适宜细胞生长 ;在此条件下 ,培养扩增的细胞仍具有干细胞多向分化性 ;其形态呈梭状 ,具有快速增殖的能力 ;培养细胞在 3～ 4d进入对数生长期 ,随后进入平台期 ,分裂相细胞明显减少 ;光镜下细胞呈梭状或类成纤维状 ,2～1 0代的细胞呈均质状 ;超微结构显示为早期幼稚细胞形态。结论　建立了骨髓间充质干细胞体外分离、培养的条件 ,探讨了骨髓间充质干细胞部分生物学特性 。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 组织工程学 细胞分离 细胞培养
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建立大鼠骨髓间充质干细胞稳定分离培养体系与鉴定 被引量：55
6
作者 杨丽 张荣华 +2 位作者 谢厚杰 蔡宇 黄丰 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1064-1068,共5页
背景:骨髓间充质干细胞作为种子细胞在组织工程等领域应用广泛,建立稳定的分离培养体系和统一鉴定标准尤为重要。目的:以不同方法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,并进行细胞形态学观察、表面标志物鉴定及多向分化能力检测。设计、时... 背景:骨髓间充质干细胞作为种子细胞在组织工程等领域应用广泛,建立稳定的分离培养体系和统一鉴定标准尤为重要。目的:以不同方法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,并进行细胞形态学观察、表面标志物鉴定及多向分化能力检测。设计、时间及地点:细胞学体外对比观察,于2005-08/12在暨南大学完成。材料:SPF级3月龄SD雌性大鼠5只,由中山大学实验动物中心提供。方法:无菌条件下分离大鼠双下肢,低糖DMEM培养液冲出骨髓,分别运用全骨髓贴壁法和密度梯度离心法体外分离骨髓间充质干细胞,利用差速贴壁原理对细胞进行纯化扩增。取生长状态良好的第3代骨髓间充质干细胞,分别加入成骨、成脂、成软骨诱导培养基,培养14d。主要观察指标:倒置相差显微镜下观察骨髓间充质干细胞的生长状态,流式细胞仪检测细胞表面标志物的表达,采用碱性磷酸酶染色鉴定成骨能力,以油红O染色鉴定成脂能力,以甲苯胺蓝染色鉴定成软骨能力。结果:与密度梯度离心法相比,全骨髓贴壁法分离获得的骨髓间充质干细胞贴壁时间短,增殖快,经传代后能够纯化。第3代骨髓间充质干细胞形态单一均匀,呈典型的极性漩涡状生长,不表达造血前体细胞标志抗原CD34和白细胞标志抗原CD45,表达整合素家族成员CD29和黏附分子CD44,经诱导后碱性磷酸酶染色、油红O染色和甲苯胺蓝染色均呈阳性。结论:采用全骨髓贴壁法可稳定获得均质性良好的大鼠骨髓间充质干细胞,效果优于密度梯度离心法。经全骨髓贴壁法体外分离培养的细胞在形态学、细胞表面标志物表达和多向分化能力方面具有干细胞生物学特性,经鉴定为大鼠骨髓间充质干细胞。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 大鼠 分离 鉴定
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补肾法诱导间充质干细胞向神经方向分化研究 被引量：52
7
作者 张进 徐志伟 《现代医院》 2004年第9期15-17,共3页
目的　在干细胞具先天之精属性新理论指导下 ,探讨补肾中药龟板对间充质干细胞的体外诱导作用。方法　体外分离培养间充质干细胞 ,以龟板水煎液对其进行体外诱导 ,免疫组化鉴定NSE、Nestin、GFAP等标志。结果　龟板可体外诱导间充质干... 目的　在干细胞具先天之精属性新理论指导下 ,探讨补肾中药龟板对间充质干细胞的体外诱导作用。方法　体外分离培养间充质干细胞 ,以龟板水煎液对其进行体外诱导 ,免疫组化鉴定NSE、Nestin、GFAP等标志。结果　龟板可体外诱导间充质干细胞转分化为神经干细胞 ,但还没有被诱导为神经元样细胞与星形胶质细胞。结论　补肾法可促进干细胞之间的相互转换 ,初步验证了干细胞具先天之精属性新理论。 展开更多
关键词 补肾法 骨髓间充质干细胞 神经干细胞 细胞分化 龟板 先天之精
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人骨髓间充质干细胞在成年大鼠脑内的迁移及分化 被引量：34
8
作者 侯玲玲 郑敏 +6 位作者 王冬梅 袁红丰 李海民 陈琳 白慈贤 张涌 裴雪涛 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期153-159,共7页
骨髓间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSCs)是目前备受关注的一类具有多向分化潜能的组织干细胞 ,体外可以分化为骨、软骨、脂肪等多种细胞。因此 ,MSCs是细胞治疗和基因治疗的种子细胞之一。为了探索MSCs的迁移和分化趋势 ,为帕金... 骨髓间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSCs)是目前备受关注的一类具有多向分化潜能的组织干细胞 ,体外可以分化为骨、软骨、脂肪等多种细胞。因此 ,MSCs是细胞治疗和基因治疗的种子细胞之一。为了探索MSCs的迁移和分化趋势 ,为帕金森病 (Parkinsondisease,PD)的干细胞治疗提供理论和实验依据 ,本实验将体外扩增并转染增强型绿色荧光蛋白 (enhancedgreenfluorescentprotein ,EGFP)的人骨髓MSCs注入PD大鼠脑内纹状体 ,观察了人骨髓MSCs在大鼠脑内的存活、迁移、分化以及注射MSCs前后大鼠的行为变化。结果表明 ,人骨髓MSCs在大鼠脑内可存活较长时间 ( 10周以上 ) ;随着时间的延长 ,MSCs迁移范围扩大 ,分布于纹状体、胼胝体、皮质以及脑内血管壁 ;免疫组化法检测证实MSCs在大鼠脑内表达人神经丝蛋白 (neurofilament,NF)、神经元特异性烯醇化酶 (neuron specificeno lase,NSE)以及胶质原纤维酸性蛋白 ( glialfibrillaryacidprotein ,GFAP) ;PD大鼠的异常行为有所缓解 ,转圈数由 8 86±2 0 9r/min下降到 4 87± 2 0 6r/min ,统计学分析P <0 0 5为差异显著。以上观察结果表明 。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 大鼠 脑 分化 迁移
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骨髓间充质干细胞表达神经营养因子及治疗脊髓损伤的研究 被引量：49
9
作者 吴永超 郑启新 +3 位作者 谢宗平 王运涛 郝杰 刘晓帆 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期139-141,i001,共4页
目的　研究大鼠骨髓间充质干细胞 (BMSC)表达脑源性神经营养因子 (BDNF)和神经生长因子 (NGF)以及BMSC移植对脊髓损伤的治疗作用。方法　取大鼠骨髓培养BMSC并传代 ,进行CD44、CD45和CD71免疫细胞化学染色鉴定。逆转录 聚合酶链反应 (R... 目的　研究大鼠骨髓间充质干细胞 (BMSC)表达脑源性神经营养因子 (BDNF)和神经生长因子 (NGF)以及BMSC移植对脊髓损伤的治疗作用。方法　取大鼠骨髓培养BMSC并传代 ,进行CD44、CD45和CD71免疫细胞化学染色鉴定。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测BM SC中BDNF和NGFmRNA的表达。用NYU方法建立大鼠脊髓损伤模型 ,将 15 0 0 0个BMSC注射到损伤脊髓中。 1～ 5周后进行BBB运动功能评分 ,观察BMSC在脊髓中的迁移 ,进行NF、GFAP和Gal C免疫荧光检测。结果　BMSC贴壁生长 ,免疫细胞染色CD44 (+ )、CD45 (-)和CD71(+ ) ,表达BDNF和NGFmRNA。移植BMSC后脊髓损伤的大鼠运动功能改善 ,5周后BBB评分从对照组的 (11.6± 1.7)分提高到 (15 .4± 2 .2 )分。BMSC在脊髓内向头、尾两侧迁移约 5mm ,未检测出向神经细胞诱导转化。结论　BMSC表达神经营养因子BDNF和NGF ,移植后能促进大鼠脊髓损伤的运动功能恢复。 展开更多
关键词 脊髓损伤 表达 BMSC 大鼠 BDNF NGF 治疗 RNA 骨髓间充质干细胞 神经营养因子
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骨髓间充质干细胞自体移植提高猪皮肤创面修复质量的初步研究 被引量：37
10
作者 付小兵 方利君 +2 位作者 王玉新 孙同柱 程飚 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期920-924,共5页
目的　探讨骨髓间充质干细胞 (MSCs)局部移植对提高猪皮肤烫伤创面组织修复质量的作用 ,为临床皮肤损伤后功能性修复提供新的治疗方法。方法　抽取 6只小型香猪的骨髓 ,经体外培养并纯化MSCs,应用 5 溴脱氧尿嘧啶 (BrdU)标记技术进行... 目的　探讨骨髓间充质干细胞 (MSCs)局部移植对提高猪皮肤烫伤创面组织修复质量的作用 ,为临床皮肤损伤后功能性修复提供新的治疗方法。方法　抽取 6只小型香猪的骨髓 ,经体外培养并纯化MSCs,应用 5 溴脱氧尿嘧啶 (BrdU)标记技术进行标记。猪背部皮肤中线两侧各制备 6个面积为 2 5 4cm2 的深Ⅱ0 烫伤创面 ,将已标记的MSCs( 2× 10 6)以注射方式回植到提供骨髓猪的创面下 ,将创面随机分为 6组 ,即空白对照组、MSCs治疗组、MSCs +碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)治疗组、bFGF治疗组、MSCs+表皮细胞生长因子 (EGF)治疗组以及EGF治疗组。分别于伤后 7、14、2 1、4 2d采用大体观察、常规组织学检查、免疫组织化学及免疫荧光化学染色动态观察创面愈合情况。结果　实验猪皮肤烫伤后 7d开始 ,各组创面逐渐缩小 ,伤后 2 1d ,大部分创面愈合。虽然不同时间点各治疗组创面面积缩小率差异无显著意义 ,但以MSCs +bFGF治疗组最为明显 ,伤后第 14天和 2 1天创面缩小的面积比其他 5组大 15 %～ 2 0 %。半定量评价结果显示MSCs +bFGF治疗组肉芽组织中血管密度较大 ,为 +++,而其他组别仅为 +～ ++。再上皮化的新生表皮在MSCs +bFGF治疗组较其余 5组厚 ,并有上皮角形成。半定量分析可见神经纤维在MSCs +bFGF治疗组较其他 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 自体移植 猪 皮肤 创面修复 MSCS 创面组织
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心肌细胞裂解液对骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化诱导作用的研究 被引量：40
11
作者 袁岩 陈连凤 +3 位作者 张抒扬 吴炜 陈浩 严晓伟 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期170-173,共4页
目的　通过向骨髓间充质干细胞 (MSCs)培养体系中添加心肌细胞裂解液的方法,体外模拟心肌微环境,观察MSCs向心肌细胞分化的诱导作用,并与诱导分化剂 5 氮杂胞苷 ( 5 aza)比较。方法　分离新生乳鼠的心肌细胞并制成心肌细胞裂解液,自成... 目的　通过向骨髓间充质干细胞 (MSCs)培养体系中添加心肌细胞裂解液的方法,体外模拟心肌微环境,观察MSCs向心肌细胞分化的诱导作用,并与诱导分化剂 5 氮杂胞苷 ( 5 aza)比较。方法　分离新生乳鼠的心肌细胞并制成心肌细胞裂解液,自成年大鼠骨髓中分离MSCs,用含有心肌细胞裂解液的培养基(A组)、含有 5 aza的培养基 (B组 )、含有 5 aza和心肌细胞裂解液的培养基(C组)以及普通培养基(对照组)培养。观察细胞形态的改变,并通过免疫组化分析分化后细胞表达α 肌动蛋白、心脏特异性肌钙蛋白T(cTnT)、连接蛋白 43及CD31的情况。结果　A、B组的MSCs在培养 1周后均形成肌细胞形态,并且均表达α 肌动蛋白和cTnT;A组MSCs分化的肌样细胞所含的肌纤维较B组更丰实,细胞生长趋势也优于B组,并且可以表达CD31;B组MSCs分化的肌样细胞不表达CD31;对照组细胞仅表达α 肌动蛋白。结论　心肌细胞裂解液是体外诱导MSCs分化为心肌样细胞的理想条件,优于传统的 5 aza,在心肌细胞移植技术中可以用于体外模拟心肌细胞微环境。 展开更多
关键词 心肌细胞 CD31 表达 分化诱导 骨髓间充质干细胞 Α-肌动蛋白 对照组 成肌细胞 心肌样细胞 培养基
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龟板对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨分化的影响 被引量：41
12
作者 黎晖 周健洪 +4 位作者 陈东风 杜少辉 李伊为 邓汝东 张赛霞 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 2005年第3期159-161,共3页
目的探讨益肾中药龟板对大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)体外向成骨分化的影响。方法使用密度梯度法分离成年大鼠骨髓间充质干细胞,观察在培养液中添加不同浓度龟板血清条件下MSCs的成骨变化。应用形态学、碱性磷酸酶... 目的探讨益肾中药龟板对大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)体外向成骨分化的影响。方法使用密度梯度法分离成年大鼠骨髓间充质干细胞,观察在培养液中添加不同浓度龟板血清条件下MSCs的成骨变化。应用形态学、碱性磷酸酶组织化学染色、VonKossa染色、骨钙素测定等方法观察细胞成骨活性。结果形态学表明,MSCs贴壁细胞呈集落生长,有成纤维细胞外观。龟板组碱性磷酸酶、钙化结节、骨钙素明显升高,与对照组比较具有显著性差异(P<0.05)。结论MSCs受龟板诱导高效地向成骨细胞分化,可以为体内骨组织工程提供种子细胞。 展开更多
关键词 龟板 骨髓间充质干细胞 成骨细胞 药理学
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杜仲叶提取物诱导羊骨髓间充质干细胞成骨及抑制其成脂肪分化 被引量：48
13
作者 陈伟才 罗军 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1960-1964,共5页
背景:传统诱导剂只具有单纯诱导成骨或成脂的分化作用,应用较为局限。杜仲叶提取物具有提高骨密度、抑制骨吸收、调节骨代谢功能的药效作用,可促进成骨细胞增殖和碱性磷酸酶分泌。目的:探讨杜仲叶提取物诱导羊骨髓间充质干细胞向成骨细... 背景:传统诱导剂只具有单纯诱导成骨或成脂的分化作用,应用较为局限。杜仲叶提取物具有提高骨密度、抑制骨吸收、调节骨代谢功能的药效作用,可促进成骨细胞增殖和碱性磷酸酶分泌。目的:探讨杜仲叶提取物诱导羊骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的同时,是否具有抑制成脂肪分化的作用。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-02/10在南昌大学第二附属医院分子中心实验室完成。材料:健康12月龄羊6只,由南昌大学提供。杜仲叶提取物由江西师大生物技术公司制备。方法:采用全骨髓法体外分离培养羊骨髓间充质干细胞,取第3代细胞,设立6组:空白对照组,加入DMEM+胎牛血清;传统成骨诱导剂组,加入含地塞米松、β-甘油磷酸钠、抗坏血酸的DMEM高糖培养基;传统成骨诱导剂+杜仲叶提取物组,在传统诱导剂组基础上加入10-5g/mL杜仲叶提取物;10-4,10-5,10-6g/mL杜仲叶提取物组分别加入对应质量浓度的杜仲叶提取物。同时另取第3代细胞行成脂肪诱导,分组同上,仅将传统成骨诱导剂更换为传统成脂诱导剂。主要观察指标:成骨诱导后,钙钴法检测碱性磷酸酶活性,VonKossa法观察矿化结节的形成,RT-PCR法检测成骨细胞中Cbfa1mRNA基因的表达;成脂诱导后,油红O染色观察骨髓间充质干细胞成脂分化情况。结果:与空白对照组比较,各成骨诱导组细胞内碱性磷酸酶合成增多,形成矿化结节,且传统成骨诱导剂+杜仲叶提取物组、10-4,10-5g/mL杜仲叶提取物组诱导成骨情况优于传统成骨诱导剂组、10-6g/mL杜仲叶提取物组;RT-PCR显示各成骨诱导组均能高效扩增出171bp的Cbfa1基因转录片段,且成骨细胞中Cbfa1mRNA表达水平差异无显著性意义(P>0.05)。油红O染色结果显示,加入杜仲叶提取物的各成脂诱导组,其脂滴数量明显少于传统成脂诱导剂组。结论:杜仲叶提取物能诱导体外分离纯化培养的羊� 展开更多
关键词 杜仲叶提取物 骨髓间充质干细胞 成骨 成脂 RT-PCR
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纳米晶胶原基骨和骨髓间充质干细胞复合修复兔股骨头坏死缺损的研究 被引量：45
14
作者 孙伟 李子荣 +3 位作者 史振才 张念非 李艳 崔福斋 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期703-706,共4页
目的探讨采用纳米晶胶原基骨(nano-hydroxyapatite collagen,nHAC)和骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)复合材料修复兔股骨头坏死骨缺损的可行性. 方法 2004年6月～10月,取45只成年新西兰大白兔制成双侧股骨头内骨... 目的探讨采用纳米晶胶原基骨(nano-hydroxyapatite collagen,nHAC)和骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)复合材料修复兔股骨头坏死骨缺损的可行性. 方法 2004年6月～10月,取45只成年新西兰大白兔制成双侧股骨头内骨缺损模型,随机分为3组进行修复,A组:骨缺损不填充任何材料;B组:骨缺损填充单纯nHAC;C组:骨缺损填充nHAC与MSCs的复合材料.术后3组分别于4、8和12周对股骨头行影像学和组织学观察. 结果影像学和组织学显示C组复合材料有良好的诱导成骨能力,术后4周即有明显的成骨反应和新骨形成,12周基本修复股骨头的骨缺损区;B组材料修复能力较C组差,但B组和C组均优于A组.B组和C组对nHAC无明显异物反应. 结论 nHAC有较强的传导成骨作用,是修复兔股骨头骨缺损的良好移植材料;复合MSCs后能促进骨缺损的修复,对股骨头坏死的治疗有较大价值. 展开更多
关键词 股骨头 坏死 纳米晶胶原基骨 骨髓间充质干细胞 复合材料 修复
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龟板含药血清体外诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元 被引量：36
15
作者 陈东风 杜少辉 +1 位作者 李伊为 黎辉 《广州中医药大学学报》 CAS 2003年第3期224-226,共3页
[目的]观察龟板含药血清体外诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的能力。[方法]采用龟板含药血清体外定向诱导第五代骨髓间充质干细胞,免疫组化鉴定神经丝蛋白(NFP)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。[结果]成年大鼠骨髓间充质干... [目的]观察龟板含药血清体外诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的能力。[方法]采用龟板含药血清体外定向诱导第五代骨髓间充质干细胞,免疫组化鉴定神经丝蛋白(NFP)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。[结果]成年大鼠骨髓间充质干细胞受龟板血清诱导后神经元样细胞NF表达阳性,诱导后12 h,神经元样细胞NF阳性表达达到高峰。[结论]龟板含药血清可以在体外诱导成年大鼠骨髓间充质分化为神经元。 展开更多
关键词 龟板 体外诱导 成年大鼠 骨髓间充质干细胞 细胞分化 神经元 超微结构 含药血清
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椎间盘源性腰痛的诊疗进展 被引量：49
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作者 彭宝淦 《中国疼痛医学杂志》 CAS CSCD 2015年第5期321-326,共6页
大量的研究表明椎间盘是腰痛的主要起源部位,椎间盘源性腰痛占慢性腰痛的39%。它的病理学特征是通过纤维环的放射性裂隙和随之的血管化肉芽组织和伤害性神经纤维沿着撕裂长入的组织修复过程。椎间盘源性腰痛可分为两种类型,即由纤维环... 大量的研究表明椎间盘是腰痛的主要起源部位,椎间盘源性腰痛占慢性腰痛的39%。它的病理学特征是通过纤维环的放射性裂隙和随之的血管化肉芽组织和伤害性神经纤维沿着撕裂长入的组织修复过程。椎间盘源性腰痛可分为两种类型,即由纤维环破裂引起的腰痛和由终板破裂引起的腰痛。椎间盘源性腰痛的临床表现缺乏特异性,不具备诊断价值。虽然腰椎间盘造影术目前仍有争议,但它是诊断椎间盘源性腰痛的最重要工具。治疗椎间盘源性腰痛的传统方法包括保守治疗或者外科手术。作为治疗选择,瞄准改变椎间盘内力学环境或去除椎间盘内神经分布的椎间盘内治疗,如电热纤维环成形术或射频热凝治疗最近几年被提倡,但缺乏支持这些治疗的理论基础。基于目前对椎间盘源性腰痛发病机制的理解,即神经纤维长入和炎症,亚甲蓝椎间盘内注射是一种非常安全和有效的方法。腰椎融合手术是经长期临床实践证明的有效的治疗腰痛的方法。为了克服融合手术引起相邻节段退变的问题,各种非融合技术应运而生,如人工髓核置换术,人工椎间盘置换术等。这些非融合技术的长期疗效还有待进一步观察。最近,应用生物学技术修复或再生退变椎间盘成为研究热点。生物学治疗方法包括椎间盘内生长因子注射,转基因治疗和细胞注射治疗。基础和临床研究发现,椎间盘内间充质干细胞移植可能是一种很有希望的治疗方法。 展开更多
关键词 椎间盘源性腰痛 纤维环破裂 终板破裂 椎间盘造影术 腰椎融合术 人工椎间盘置换术 骨髓间充质干细胞 脐带间充质干细胞 移植
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黄芪甲苷体外诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的实验研究 被引量：41
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作者 冼绍祥 杨忠奇 +2 位作者 汪朝晖 李南夷 赵立诚 《广州中医药大学学报》 CAS 2007年第1期37-40,共4页
【目的】观察黄芪甲苷体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)定向分化为心肌样细胞的作用。【方法】采用密度梯度离心和贴壁培养法分离大鼠MSCs,反复传代及纯化后,取第3代MSCs,采用流式细胞仪检测细胞表面抗原CD34和CD44;取第8代MSCs进行分组... 【目的】观察黄芪甲苷体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)定向分化为心肌样细胞的作用。【方法】采用密度梯度离心和贴壁培养法分离大鼠MSCs,反复传代及纯化后,取第3代MSCs,采用流式细胞仪检测细胞表面抗原CD34和CD44;取第8代MSCs进行分组诱导:黄芪甲苷组(终浓度为250 mg/L)、5-氮胞苷(5-aza,终浓度为10μmol/L)、黄芪甲苷加5-aza组(终浓度分别为250 mg/L与10μmol/L),并设空白对照组,诱导后继续培养4周;计算心肌样细胞诱导率,采用免疫组化法鉴定诱导后MSCs中结蛋白(Desmin)和心肌特异性肌钙蛋白I(cTnI)的表达,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法鉴定诱导后MSCs中心肌特异性蛋白α-心肌肌球蛋白重链(-αMHC)和β-心肌肌球蛋白重链(-βMHC)信使核糖核酸(mRNA)的表达。【结果】原代培养的MSCs首先形成集落,传代细胞体积变大,诱导后细胞呈梭形,并出现肌管;MSCs表面抗原CD44表达阳性,而骨髓造血干细胞表面抗原CD34表达阴性,表明本实验方法所得细胞为均一的MSCs细胞群;各组在不同时间的心肌样细胞诱导率无明显差异;免疫组化结果显示诱导后MSCs表达心肌特异性蛋白Desmin和cTnI;RT-PCR结果显示诱导后MSCs表达成熟的心肌特异性蛋白-αMHC和-βMHC。【结论】黄芪甲苷可在体外诱导大鼠MSCs定向分化为心肌样细胞,但诱导率仍有待提高。 展开更多
关键词 黄芪甲苷/药理学 心肌梗死/中药疗法 骨髓间充质干细胞 细胞培养
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骨碎补含药血清经wnt/β-catenin信号通路对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 被引量：45
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作者 陈云刚 谭国庆 +1 位作者 任维龙 徐展望 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期830-836,共7页
目的研究骨碎补含药血清经wnt/β-catenin信号通路对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的作用,探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度含药血清干预BMSCs,CCK-8法分别检测血清干预BMSCs 3、5、7、9 d ... 目的研究骨碎补含药血清经wnt/β-catenin信号通路对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的作用,探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度含药血清干预BMSCs,CCK-8法分别检测血清干预BMSCs 3、5、7、9 d BMSCs的增殖能力,连续诱导7、10、14 d并进行ALP活性检测,诱导21 d后茜素红染色评价BMSCs的矿化能力,RT-PCR法检测β-catenin、LRP5、GSK-3β、RUNX-2及Osteriex mRNA表达;ELISA法检测细胞内β-catenin、LRP5蛋白表达量。结果骨碎补含药血清具有明显的促进BMSCs增殖的作用,在一定的时间段提高了ALP活性,促进钙化结节形成;上调wnt/β-catenin信号通路β-catenin、LRP5、RUNX-2及Osteriex mRNA表达;下调GSK-3βmRNA表达,上调β-catenin、LRP5蛋白表达。结论骨碎补含药血清可以促进BMSCs的增殖及成骨分化,其机制与激活wnt/β-catenin信号通路,上调β-catenin、LRP5、RUNX-2及Osteriex mRNA表达,下调GSK-3βmRNA表达及上调β-catenin、LRP5蛋白表达密切相关。 展开更多
关键词 骨碎补 含药血清 骨髓间充质干细胞 WNT/Β-CATENIN 增殖 碱性磷酸酶 成骨分化
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骨髓间质干细胞向软骨细胞表型定向诱导分化的实验研究 被引量：26
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作者 夏万尧 商庆新 +3 位作者 崔磊 徐蓉 丁小邦 曹谊林 《中华整形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期12-14,共3页
目的　研究体外培养的猪骨髓间质干细胞 (BoneMarrowStemCells,MSCs)在特定培养液作用下向软骨细胞表型转化 ,探讨其作为组织工程化软骨的种子细胞的可行性。方法　取成年崇明长枫杂交猪髂骨骨髓 5ml,在低糖DMEM完全培养液培养 2周 ,传... 目的　研究体外培养的猪骨髓间质干细胞 (BoneMarrowStemCells,MSCs)在特定培养液作用下向软骨细胞表型转化 ,探讨其作为组织工程化软骨的种子细胞的可行性。方法　取成年崇明长枫杂交猪髂骨骨髓 5ml,在低糖DMEM完全培养液培养 2周 ,传代后以高糖DMEM无血清特定培养液诱导 (含胰岛素 2mg L、转铁蛋白 3mg L、丙酮酸 10 0mg L、地塞米松 10 - 7mol L、TGF β110ng ml) ,在相差显微镜和电镜下进行观察 ,免疫组化检测Ⅱ型胶原分泌 ,原位杂交检测Ⅱ型胶原mRNA表达。结果　细胞形态由成纤维样梭形向多角形、多边形转变 ,透视电镜观察见大量扩张粗面内质网、高尔基体、线粒体。诱导培养后第 7,14dⅡ型胶原免疫组化阳性 ,同时原位杂交检测Ⅱ型胶原mRNA表达呈阳性。结论　MSCs在特定培养液诱导下能向软骨细胞表型转化 ,并能分泌软骨特异性基质 ,有可能成为软骨组织工程较理想的种子细胞来源的应用前景。 展开更多
关键词 组织工程 骨髓间充质干细胞 分化 软骨细胞表型 动物实验
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骨碎补总黄酮促进骨质疏松性骨折愈合中参与Wnt/β-catenin信号通路的初步研究 被引量：43
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作者 史岩 马秋野 +1 位作者 喻一东 丁勇 《中医药学报》 CAS 2018年第2期49-52,共4页
目的:从细胞分子水平观察骨碎补总黄酮对骨髓间充质干细胞成骨或成脂分化中的影响并探讨其可能的分子作用机制。方法:采用全骨髓贴壁培养法、消化控制法培养取自SD大鼠的骨髓间充质干细胞,后将其分别置于成骨培养基培养,运用流式细胞仪... 目的:从细胞分子水平观察骨碎补总黄酮对骨髓间充质干细胞成骨或成脂分化中的影响并探讨其可能的分子作用机制。方法:采用全骨髓贴壁培养法、消化控制法培养取自SD大鼠的骨髓间充质干细胞,后将其分别置于成骨培养基培养,运用流式细胞仪鉴定所分化细胞。选取Wnt/β-catenin信号通路中的"活化枢纽":β-catenin,BMSCs成骨分化特异性转录因子:核心结合因子(Core binding factorα1,cbfα1,又名RunX2)、BMSCs向成脂分化中的重要转录因子:过氧化物酶体增生激活受体γ(peroxisome proliferative activated receptor gamma,PPARG),通过RT-PCR法检测不同浓度TFRD诱导后细胞因子的mRNA表达。实验均采用第3代细胞。结果:骨碎补总黄酮药物浓度在0.010μmol/L时,显著提高了BMSCs中的β-catenin和RunX2 mRNA表达水平(与对照组比较,P<0.05)。与对照组相比,各实验组对PPARG mRNA表达未表现出明显的下调作用(P<0.05)。结论:骨碎补总黄酮对骨髓间充质干细胞的成骨分化有一定促进作用,其机制可能与上调Wnt/β-catenin信号通路相关因子表达有关,暂未发现其对BMSCs成脂分化有直接作用。 展开更多
关键词 骨碎补总黄酮 骨髓间充质干细胞 成骨分化
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