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骨碎补结合组织工程软骨促进软骨再生及其机理研究 被引量：5
1
作者 牟明威 李春根 +3 位作者 李德魁 汪冠球 白松绵 张花 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第28期5420-5423,共4页
目的:评估骨碎补在促进软骨再生治疗中的价值及作用机制。方法:选取健康新西兰大耳白兔100只,采用随机数值表法随机分为5组,每组包含20只实验动物。A、B组:改建后进行肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)移植;C组:自体骨髓充质干细胞(MSCs... 目的:评估骨碎补在促进软骨再生治疗中的价值及作用机制。方法:选取健康新西兰大耳白兔100只,采用随机数值表法随机分为5组,每组包含20只实验动物。A、B组:改建后进行肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)移植;C组:自体骨髓充质干细胞(MSCs)复合,并进行改建ADM移植;D、E组:进行h IGF-1基因转染的MSCs复合,并改建ADM移植。B、C、E组实验动物结合喂养40%骨碎补汤,每只每日150ml,用药4周。A、D组不结合使用口服骨碎补汤。每组均在第4、8、12w时处死5只实验动物,切取关节软骨缺损部位并进行组织学观察,采用Masson三色染色法评估软骨细胞的形态变化,采用Wakitani组织学评分进行各组间形态学比较。结果:E组实验动物关节软骨的表面有比较完整的潮线,大部分比较光滑,变薄区可见零散的浅淡着色的纤维组织。在第4、8、12周,各组Wakitani组织学评分逐渐下降,但结合骨碎补的B、C、E三组下降更为显著(P<0.05),说明骨碎补可显著改善软骨组织缺损。结论:采用中药骨碎补结合工程软骨可以显著提高家兔膝关节软骨缺损修复的质量,为临床使用骨碎补治疗软骨病变提供了重要的依据。 展开更多
关键词 骨碎补 组织工程 软骨 骨髓充质干细胞
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骨髓间充质干细胞向神经细胞转化的研究 被引量：2
2
作者 马岚 汤桂成 《湖北民族学院学报（医学版）》 2008年第4期72-74,共3页
关键词 骨髓充质干细胞 转化 神经细胞
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大鼠骨髓间充质干细胞对子宫内膜的损伤修复 被引量：3
3
作者 林彤 李冬宏 +5 位作者 张鲁榕 郭玉佳 陈丽红 陈杏婷 连梅 林晨 《中国妇产科临床杂志》 CSCD 北大核心 2019年第3期240-242,共3页
目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymalstem cells,BMSCs)移植对大鼠子宫内膜损伤的修复作用。方法 45只雌性SD大鼠分为三组:正常组、模型组、BMSCs组,每组15只。除正常组外,其余两组大鼠采用95%乙醇宫腔注射法建立子宫内... 目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymalstem cells,BMSCs)移植对大鼠子宫内膜损伤的修复作用。方法 45只雌性SD大鼠分为三组:正常组、模型组、BMSCs组,每组15只。除正常组外,其余两组大鼠采用95%乙醇宫腔注射法建立子宫内膜损伤模型。正常组不予任何干预,模型组造模后注射PBS溶液,BMSCs组注射体外分离培养的雄性SD大鼠BMSCs悬液。14 d后切除子宫,观察子宫内膜形态学改变、子宫内膜厚度、用免疫组织化学方法检测子宫内膜角蛋白、波形蛋白、整合素β3的表达,通过对移植后子宫内膜组织的SRY DNA原位杂交来定位源自雄性供体的细胞。结果与正常组相比,模型组大鼠子宫内膜厚度显著变薄[(276.25±59.46)μm vs(413.52±68.67)μm,P <0.01],而BMSCs组大鼠子宫内膜的厚度[(347.22±87.56)μm]较模型组显著增加(P <0.05)。与正常组相比,模型组大鼠子宫内膜角蛋白、波形蛋白、整合素β3表达明显减少(P <0.01),而BMSCs组较模型组明显增加(P <0.05)。BMSCs组损伤侧子宫内膜组织中有SRY阳性细胞的定植,模型组则未见。结论 BMSCs移植能不同程度地促进大鼠损伤子宫内膜的修复。 展开更多
关键词 大鼠骨髓充质干细胞 子宫损伤模型 大鼠 SRY DNA
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骨髓间充质干细胞分化为血管内皮细胞的实验研究 被引量：79
4
作者 方利君 付小兵 +4 位作者 孙同柱 李建福 程飚 杨银辉 王玉新 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 2003年第1期22-24,共3页
目的　探讨骨髓间充质干细胞 (MSCs)分化为肉芽组织中血管内皮细胞的可能性 ,及其参与创面修复的可能机制。　方法　抽取小型香猪的骨髓 ,经密度梯度离心分离、纯化MSCs,体外培养扩增后 ,应用溴脱氧尿嘧啶 (BrdU)标记技术标记细胞。于... 目的　探讨骨髓间充质干细胞 (MSCs)分化为肉芽组织中血管内皮细胞的可能性 ,及其参与创面修复的可能机制。　方法　抽取小型香猪的骨髓 ,经密度梯度离心分离、纯化MSCs,体外培养扩增后 ,应用溴脱氧尿嘧啶 (BrdU)标记技术标记细胞。于已抽取骨髓的小型香猪背部制作全层皮肤缺损创面 ,即刻以纤维蛋白胶为载体 ,将已标记的MSC回植到供体动物创面上。术后 2、4、6、8、12周切取创面组织 ,行BrdU和因子Ⅷ (FⅧ )免疫组织化学染色 ,进行对比观察。　结果　BrdU阳性的MSCs多聚集在创面肉芽组织中的小血管周围 ,且有个别血管内皮细胞也呈现BrdU阳性。部分BrdU阳性的MSCs胞浆中亦有FⅧ表达。　结论　创面愈合过程中 ,MSCs与肉芽组织中小血管的形成密切相关。在创面微环境下 ,MSCs可分化为血管内皮细胞 ,并参与创面修复。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 分化 血管内皮细胞 实验研究 分离 培养 创面 修复
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在体诱导骨髓间充质干细胞分化为表皮细胞的初步观察 被引量：63
5
作者 方利君 付小兵 +5 位作者 孙同柱 李建福 程飚 杨银辉 王玉新 王通 《中华创伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期212-214,共3页
目的　探讨骨髓间充质干细胞 (MSCs)分化为表皮细胞的可行性。　方法　抽取小型香猪的骨髓 ,经密度梯度离心分离、纯化间充质干细胞及培养扩增后 ,应用 5 -溴脱氧尿嘧啶 ( 5-BrdU)标记技术进行细胞标记。将已标记的细胞以注射方式回植... 目的　探讨骨髓间充质干细胞 (MSCs)分化为表皮细胞的可行性。　方法　抽取小型香猪的骨髓 ,经密度梯度离心分离、纯化间充质干细胞及培养扩增后 ,应用 5 -溴脱氧尿嘧啶 ( 5-BrdU)标记技术进行细胞标记。将已标记的细胞以注射方式回植到提供骨髓的香猪的皮内及皮下 ,分别于注射后 1,2周取材 ,常规石蜡包埋、连续切片 ,行 5 -BrdU和角蛋白免疫组织化学染色 ,对比研究。　结果　大多数 5 -BrdU阳性细胞聚集在真皮中的小血管周围。但有少数 5 -BrdU阳性标记细胞出现在表皮的棘层和颗粒层 ,并同时表达角蛋白。　结论　在皮肤微环境下骨髓间充质干细胞具有分化为表皮细胞的潜能。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 分化 表皮细胞 细胞分化 皮肤创伤 角蛋白
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大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定 被引量：84
6
作者 李晓峰 赵劲民 +3 位作者 苏伟 崔向荣 罗世兴 马爱国 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1721-1725,共5页
背景:骨髓间充质干细胞在骨髓中含量极低,体外培养难度较大。体外分离培养纯度高、活力强、生物特性均一的间充质干细胞,对组织工程及细胞的体内、体外实验显得至关重要。目的:建立大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化方法,并进行... 背景:骨髓间充质干细胞在骨髓中含量极低,体外培养难度较大。体外分离培养纯度高、活力强、生物特性均一的间充质干细胞,对组织工程及细胞的体内、体外实验显得至关重要。目的:建立大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化方法,并进行细胞形态学观察、表面标志物鉴定及多向分化能力检测。方法:通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞,进行形态学观察,绘制生长曲线,细胞周期分析,流式细胞仪检测细胞表面标记物,分别向成骨、成脂方向诱导分化。结果与结论:大鼠骨髓间充质干细胞生长以梭形细胞为主,呈放射状排列的细胞集落,细胞生长旺盛,可连续稳定传代10代以上。生长曲线及细胞周期显示骨髓间充质干细胞符合正常细胞生长特征且生长活跃。第3代骨髓间充质干细胞CD44,CD90,CD105均呈阳性表达,而CD34,CD45呈阴性表达。成脂、成骨诱导后,油红O染色、碱性磷酸酶染色、von Kossa法染色和茜素红染色均呈阳性。全骨髓贴壁培养法操作简单,可大量分离、纯化、扩增骨髓间充质干细胞,所获细胞具有间充质干细胞的一般生物学特性,经诱导培养后具有多向分化潜能。实验所用的全骨髓贴壁法法为组织工程提供充足的种子细胞来源具有重要的现实意义。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 原代培养 形态学 分化 鉴定
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川续断皂苷Ⅵ诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化的研究 被引量：82
7
作者 武密山 赵素芝 +4 位作者 任立中 王茹 白霞 韩红伟 李彬 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期222-226,共5页
目的探讨川续断皂苷Ⅵ(akebia saponin D)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的影响。方法用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,选择合适的培养基,传代扩增。采用不同浓度的川续断皂苷Ⅵ对大鼠MSCs定向... 目的探讨川续断皂苷Ⅵ(akebia saponin D)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的影响。方法用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,选择合适的培养基,传代扩增。采用不同浓度的川续断皂苷Ⅵ对大鼠MSCs定向诱导分化,MTT法观察各组对MSCs的增殖作用并绘制细胞生长曲线;观察MSCs诱导分化过程中成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaliphosphatase,ALP)活性;采用ELISA法检测MSCs诱导分化过程中骨钙素(Osteo-calcin,OC)的含量;RT-PCR方法检测MSCs诱导分化过程中核心结合因子α-1(Cbfα1)mRNA表达。结果细胞生长曲线显示各组MSCs数量均随时间延长而增加,中、高浓度的川续断皂苷Ⅵ能明显提高MSCs分化为成骨细胞的ALP活性和骨钙素的含量,且使Cbfα1 mRNA的表达升高。结论川续断皂苷Ⅵ具有促进大鼠体外MSCs向成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高Cbfα1 mRNA的表达有关。 展开更多
关键词 川续断皂苷Ⅵ 骨髓间充质干细胞 成骨细胞 细胞增殖 细胞分化 碱性磷酸酶 核心结合因子α-1
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骨髓间充质干细胞的分离与培养 被引量：49
8
作者 艾国平 粟永萍 +4 位作者 闫国和 冉新泽 刘晓宏 罗成基 程天民 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期553-555,共3页
目的　摸索体外分离培养骨髓间充质干细胞的最佳条件 ,并观察其部分生物学活性。方法　采用常规的细胞培养传代技术以及光、电镜技术和细胞增殖活性检测法 ,观察不同贴壁时间、不同浓度血清、不同种植密度对骨髓间充质干细胞生长、增殖... 目的　摸索体外分离培养骨髓间充质干细胞的最佳条件 ,并观察其部分生物学活性。方法　采用常规的细胞培养传代技术以及光、电镜技术和细胞增殖活性检测法 ,观察不同贴壁时间、不同浓度血清、不同种植密度对骨髓间充质干细胞生长、增殖、形态的影响 ,并观察培养细胞的部分生物学特性。结果　以选用 4～ 2 4h贴壁的有核细胞 ,加入 5 %～ 1 0 %胎牛血清、种植密度(4～ 8)× 1 0 4个 /ml的培养条件为最适宜细胞生长 ;在此条件下 ,培养扩增的细胞仍具有干细胞多向分化性 ;其形态呈梭状 ,具有快速增殖的能力 ;培养细胞在 3～ 4d进入对数生长期 ,随后进入平台期 ,分裂相细胞明显减少 ;光镜下细胞呈梭状或类成纤维状 ,2～1 0代的细胞呈均质状 ;超微结构显示为早期幼稚细胞形态。结论　建立了骨髓间充质干细胞体外分离、培养的条件 ,探讨了骨髓间充质干细胞部分生物学特性 。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 组织工程学 细胞分离 细胞培养
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人骨髓间充质干细胞定向诱导分化为成骨细胞及其鉴定 被引量：58
9
作者 殷晓雪 陈仲强 +2 位作者 郭昭庆 马庆军 党耕町 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 2004年第2期88-91,共4页
目的　探讨将成人骨髓间充质干细胞 (MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的方法 ,并对所诱导细胞的成骨特性进行鉴定。　方法　分离人骨髓 ,梯度离心并结合全骨髓法进行培养 ,培养基中添加成骨诱导剂地塞米松、β-甘油磷酸钠及抗坏血酸。贴壁... 目的　探讨将成人骨髓间充质干细胞 (MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的方法 ,并对所诱导细胞的成骨特性进行鉴定。　方法　分离人骨髓 ,梯度离心并结合全骨髓法进行培养 ,培养基中添加成骨诱导剂地塞米松、β-甘油磷酸钠及抗坏血酸。贴壁细胞传代 ,取第 3代细胞鉴定其成骨特性 ;在倒置相差显微镜下观察细胞形态 ,钙 -钴法染色检测碱性磷酸酶 (AL P)表达 ,免疫组织化学检测 型胶原表达 ,原位杂交检测骨连接素 (ON)、骨桥素 (OP)表达 ,Von Kos-sa染色检测钙结节形成。　结果　第 3代人 MSCs呈典型的成骨细胞形态 ,可连续传代 10次 ;AL P染色阳性率达 85 % ; 型胶原、ON和 OP表达阳性 ;Von Kossa染色可见钙结节形成。　结论　成功地将人 MSCs诱导分化为成骨细胞 ,所诱导的细胞具有典型的成骨细胞特性。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 成骨诱导 成骨分化 成骨细胞 细胞鉴定 组织工程 成骨特性
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建立大鼠骨髓间充质干细胞稳定分离培养体系与鉴定 被引量：55
10
作者 杨丽 张荣华 +2 位作者 谢厚杰 蔡宇 黄丰 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1064-1068,共5页
背景:骨髓间充质干细胞作为种子细胞在组织工程等领域应用广泛,建立稳定的分离培养体系和统一鉴定标准尤为重要。目的:以不同方法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,并进行细胞形态学观察、表面标志物鉴定及多向分化能力检测。设计、时... 背景:骨髓间充质干细胞作为种子细胞在组织工程等领域应用广泛,建立稳定的分离培养体系和统一鉴定标准尤为重要。目的:以不同方法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,并进行细胞形态学观察、表面标志物鉴定及多向分化能力检测。设计、时间及地点:细胞学体外对比观察,于2005-08/12在暨南大学完成。材料:SPF级3月龄SD雌性大鼠5只,由中山大学实验动物中心提供。方法:无菌条件下分离大鼠双下肢,低糖DMEM培养液冲出骨髓,分别运用全骨髓贴壁法和密度梯度离心法体外分离骨髓间充质干细胞,利用差速贴壁原理对细胞进行纯化扩增。取生长状态良好的第3代骨髓间充质干细胞,分别加入成骨、成脂、成软骨诱导培养基,培养14d。主要观察指标:倒置相差显微镜下观察骨髓间充质干细胞的生长状态,流式细胞仪检测细胞表面标志物的表达,采用碱性磷酸酶染色鉴定成骨能力,以油红O染色鉴定成脂能力,以甲苯胺蓝染色鉴定成软骨能力。结果:与密度梯度离心法相比,全骨髓贴壁法分离获得的骨髓间充质干细胞贴壁时间短,增殖快,经传代后能够纯化。第3代骨髓间充质干细胞形态单一均匀,呈典型的极性漩涡状生长,不表达造血前体细胞标志抗原CD34和白细胞标志抗原CD45,表达整合素家族成员CD29和黏附分子CD44,经诱导后碱性磷酸酶染色、油红O染色和甲苯胺蓝染色均呈阳性。结论:采用全骨髓贴壁法可稳定获得均质性良好的大鼠骨髓间充质干细胞,效果优于密度梯度离心法。经全骨髓贴壁法体外分离培养的细胞在形态学、细胞表面标志物表达和多向分化能力方面具有干细胞生物学特性,经鉴定为大鼠骨髓间充质干细胞。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 大鼠 分离 鉴定
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成人骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为胰岛样细胞团的研究 被引量：42
11
作者 李艳华 白慈贤 +2 位作者 谢超 陈琳 裴雪涛 《自然科学进展》 北大核心 2003年第6期593-597,共5页
体外扩增和定向诱导成人骨髓间充质干细胞(MSC)向胰岛样细胞分化,从正常成人骨髓中分离MSC,在含10％胎牛血清的αMEM培养基中对其进行纯化和扩增,用bFGF,EGF等因子诱导MSC向nestin阳性的祖细胞(NIP)分化;用高糖无血清培养基和β细胞调... 体外扩增和定向诱导成人骨髓间充质干细胞(MSC)向胰岛样细胞分化,从正常成人骨髓中分离MSC,在含10％胎牛血清的αMEM培养基中对其进行纯化和扩增,用bFGF,EGF等因子诱导MSC向nestin阳性的祖细胞(NIP)分化;用高糖无血清培养基和β细胞调节素、尼克酰胺等诱导NIP向胰岛样细胞分化,用RT-PCR法检测诱导前后nestin,ngn3,IPF-1,胰岛素,胰高血糖素基因的表达;双硫腙染色鉴定胰岛样的细胞团;免疫组织化学法检测诱导前后nestin,胰岛素,胰高血糖素,生长抑素蛋白的表达;放射免疫分析法检测诱导前后细胞分泌胰岛素情况。结果表明MSC经第一阶段的诱导后可分化成NIP,继续诱导6d后变圆的细胞逐渐增多,并聚集成团,双硫腙染色阳性,免疫组化实验证明经两阶段诱导后的细胞表达胰岛素、胰高血糖素、生长抑素等内分泌激素,放免分析结果表明诱导的胰岛样细胞团可以分泌胰岛素,糖反应性较弱。以上结果表明成人骨髓间充质干细胞在体外可以被诱导分化为胰岛样细胞团,这将为解决糖尿病细胞治疗所面临的供者细胞不足、移植排斥反应等问题提供一个新的方案。 展开更多
关键词 糖尿病 细胞治疗 成人骨髓间充质干细胞 胰岛样细胞团 细胞分化 体外定向诱导
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补肾法诱导间充质干细胞向神经方向分化研究 被引量：52
12
作者 张进 徐志伟 《现代医院》 2004年第9期15-17,共3页
目的　在干细胞具先天之精属性新理论指导下 ,探讨补肾中药龟板对间充质干细胞的体外诱导作用。方法　体外分离培养间充质干细胞 ,以龟板水煎液对其进行体外诱导 ,免疫组化鉴定NSE、Nestin、GFAP等标志。结果　龟板可体外诱导间充质干... 目的　在干细胞具先天之精属性新理论指导下 ,探讨补肾中药龟板对间充质干细胞的体外诱导作用。方法　体外分离培养间充质干细胞 ,以龟板水煎液对其进行体外诱导 ,免疫组化鉴定NSE、Nestin、GFAP等标志。结果　龟板可体外诱导间充质干细胞转分化为神经干细胞 ,但还没有被诱导为神经元样细胞与星形胶质细胞。结论　补肾法可促进干细胞之间的相互转换 ,初步验证了干细胞具先天之精属性新理论。 展开更多
关键词 补肾法 骨髓间充质干细胞 神经干细胞 细胞分化 龟板 先天之精
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人骨髓间充质干细胞在成年大鼠脑内的迁移及分化 被引量：34
13
作者 侯玲玲 郑敏 +6 位作者 王冬梅 袁红丰 李海民 陈琳 白慈贤 张涌 裴雪涛 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期153-159,共7页
骨髓间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSCs)是目前备受关注的一类具有多向分化潜能的组织干细胞 ,体外可以分化为骨、软骨、脂肪等多种细胞。因此 ,MSCs是细胞治疗和基因治疗的种子细胞之一。为了探索MSCs的迁移和分化趋势 ,为帕金... 骨髓间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSCs)是目前备受关注的一类具有多向分化潜能的组织干细胞 ,体外可以分化为骨、软骨、脂肪等多种细胞。因此 ,MSCs是细胞治疗和基因治疗的种子细胞之一。为了探索MSCs的迁移和分化趋势 ,为帕金森病 (Parkinsondisease,PD)的干细胞治疗提供理论和实验依据 ,本实验将体外扩增并转染增强型绿色荧光蛋白 (enhancedgreenfluorescentprotein ,EGFP)的人骨髓MSCs注入PD大鼠脑内纹状体 ,观察了人骨髓MSCs在大鼠脑内的存活、迁移、分化以及注射MSCs前后大鼠的行为变化。结果表明 ,人骨髓MSCs在大鼠脑内可存活较长时间 ( 10周以上 ) ;随着时间的延长 ,MSCs迁移范围扩大 ,分布于纹状体、胼胝体、皮质以及脑内血管壁 ;免疫组化法检测证实MSCs在大鼠脑内表达人神经丝蛋白 (neurofilament,NF)、神经元特异性烯醇化酶 (neuron specificeno lase,NSE)以及胶质原纤维酸性蛋白 ( glialfibrillaryacidprotein ,GFAP) ;PD大鼠的异常行为有所缓解 ,转圈数由 8 86±2 0 9r/min下降到 4 87± 2 0 6r/min ,统计学分析P <0 0 5为差异显著。以上观察结果表明 。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 大鼠 脑 分化 迁移
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淫羊藿苷促进羊骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化 被引量：58
14
作者 吴涛 徐俊昌 +1 位作者 南开辉 裴国献 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2009年第19期3725-3729,共5页
背景:寻找一种简单有效、安全价廉且可替代生长因子的生物活性物质,是骨组织工程的客观要求,中药来源的植物黄酮淫羊藿苷可通过提高成骨细胞功能促进成骨,但是对骨髓间充质干细胞的作用尚未明确。目的:探讨淫羊藿苷对羊骨髓间充质干细... 背景:寻找一种简单有效、安全价廉且可替代生长因子的生物活性物质,是骨组织工程的客观要求,中药来源的植物黄酮淫羊藿苷可通过提高成骨细胞功能促进成骨,但是对骨髓间充质干细胞的作用尚未明确。目的:探讨淫羊藿苷对羊骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-09/2009-02在南方医院创伤骨科实验室完成。材料:清洁级成年雄性中国青山羊3只,由南方医院实验动物中心提供。淫羊藿苷标准品由中国药品生物制品检定所提供,批号110737-200312,纯度98.3%。方法:体外分离培养羊骨髓间充质干细胞,传至第3代后,按2×103/孔接种至96孔板,分别加入100,10,1,0.1μmol/L淫羊藿苷培养基150μL进行培养;设立对照组,仅加入等量普通DMSO培养基。主要观察指标:采用MTT法检测细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期,通过碱性磷酸酶试剂盒测定细胞碱性磷酸酶活性,放免法检测细胞骨钙素表达,茜素红染色观察钙化结节形成能力。结果:0.1μmol/L淫羊藿苷可明显促进羊骨髓间充质干细胞增殖,增加S期和G2/M期细胞数量;随着淫羊藿苷浓度的增加,促细胞增殖活性降低,100μmol/L淫羊藿苷表现为明显的抑制细胞增殖作用。淫羊藿苷呈剂量依赖性促进羊骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素表达。10,100μmol/L淫羊藿苷诱导钙化结节形成能力优于0.1和1μmol/L淫羊藿苷,对照组羊骨髓间充质干细胞未形成钙化结节。结论:淫羊藿苷对羊骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化具有促进作用,可被视为一种良好的骨诱导活性因子。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 羊骨髓间充质干细胞 增殖 成骨分化
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骨髓间充质干细胞表达神经营养因子及治疗脊髓损伤的研究 被引量：49
15
作者 吴永超 郑启新 +3 位作者 谢宗平 王运涛 郝杰 刘晓帆 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期139-141,i001,共4页
目的　研究大鼠骨髓间充质干细胞 (BMSC)表达脑源性神经营养因子 (BDNF)和神经生长因子 (NGF)以及BMSC移植对脊髓损伤的治疗作用。方法　取大鼠骨髓培养BMSC并传代 ,进行CD44、CD45和CD71免疫细胞化学染色鉴定。逆转录 聚合酶链反应 (R... 目的　研究大鼠骨髓间充质干细胞 (BMSC)表达脑源性神经营养因子 (BDNF)和神经生长因子 (NGF)以及BMSC移植对脊髓损伤的治疗作用。方法　取大鼠骨髓培养BMSC并传代 ,进行CD44、CD45和CD71免疫细胞化学染色鉴定。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测BM SC中BDNF和NGFmRNA的表达。用NYU方法建立大鼠脊髓损伤模型 ,将 15 0 0 0个BMSC注射到损伤脊髓中。 1～ 5周后进行BBB运动功能评分 ,观察BMSC在脊髓中的迁移 ,进行NF、GFAP和Gal C免疫荧光检测。结果　BMSC贴壁生长 ,免疫细胞染色CD44 (+ )、CD45 (-)和CD71(+ ) ,表达BDNF和NGFmRNA。移植BMSC后脊髓损伤的大鼠运动功能改善 ,5周后BBB评分从对照组的 (11.6± 1.7)分提高到 (15 .4± 2 .2 )分。BMSC在脊髓内向头、尾两侧迁移约 5mm ,未检测出向神经细胞诱导转化。结论　BMSC表达神经营养因子BDNF和NGF ,移植后能促进大鼠脊髓损伤的运动功能恢复。 展开更多
关键词 脊髓损伤 表达 BMSC 大鼠 BDNF NGF 治疗 RNA 骨髓间充质干细胞 神经营养因子
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骨髓间充质干细胞自体移植提高猪皮肤创面修复质量的初步研究 被引量：37
16
作者 付小兵 方利君 +2 位作者 王玉新 孙同柱 程飚 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期920-924,共5页
目的　探讨骨髓间充质干细胞 (MSCs)局部移植对提高猪皮肤烫伤创面组织修复质量的作用 ,为临床皮肤损伤后功能性修复提供新的治疗方法。方法　抽取 6只小型香猪的骨髓 ,经体外培养并纯化MSCs,应用 5 溴脱氧尿嘧啶 (BrdU)标记技术进行... 目的　探讨骨髓间充质干细胞 (MSCs)局部移植对提高猪皮肤烫伤创面组织修复质量的作用 ,为临床皮肤损伤后功能性修复提供新的治疗方法。方法　抽取 6只小型香猪的骨髓 ,经体外培养并纯化MSCs,应用 5 溴脱氧尿嘧啶 (BrdU)标记技术进行标记。猪背部皮肤中线两侧各制备 6个面积为 2 5 4cm2 的深Ⅱ0 烫伤创面 ,将已标记的MSCs( 2× 10 6)以注射方式回植到提供骨髓猪的创面下 ,将创面随机分为 6组 ,即空白对照组、MSCs治疗组、MSCs +碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)治疗组、bFGF治疗组、MSCs+表皮细胞生长因子 (EGF)治疗组以及EGF治疗组。分别于伤后 7、14、2 1、4 2d采用大体观察、常规组织学检查、免疫组织化学及免疫荧光化学染色动态观察创面愈合情况。结果　实验猪皮肤烫伤后 7d开始 ,各组创面逐渐缩小 ,伤后 2 1d ,大部分创面愈合。虽然不同时间点各治疗组创面面积缩小率差异无显著意义 ,但以MSCs +bFGF治疗组最为明显 ,伤后第 14天和 2 1天创面缩小的面积比其他 5组大 15 %～ 2 0 %。半定量评价结果显示MSCs +bFGF治疗组肉芽组织中血管密度较大 ,为 +++,而其他组别仅为 +～ ++。再上皮化的新生表皮在MSCs +bFGF治疗组较其余 5组厚 ,并有上皮角形成。半定量分析可见神经纤维在MSCs +bFGF治疗组较其他 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 自体移植 猪 皮肤 创面修复 MSCS 创面组织
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心肌细胞裂解液对骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化诱导作用的研究 被引量：40
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作者 袁岩 陈连凤 +3 位作者 张抒扬 吴炜 陈浩 严晓伟 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期170-173,共4页
目的　通过向骨髓间充质干细胞 (MSCs)培养体系中添加心肌细胞裂解液的方法,体外模拟心肌微环境,观察MSCs向心肌细胞分化的诱导作用,并与诱导分化剂 5 氮杂胞苷 ( 5 aza)比较。方法　分离新生乳鼠的心肌细胞并制成心肌细胞裂解液,自成... 目的　通过向骨髓间充质干细胞 (MSCs)培养体系中添加心肌细胞裂解液的方法,体外模拟心肌微环境,观察MSCs向心肌细胞分化的诱导作用,并与诱导分化剂 5 氮杂胞苷 ( 5 aza)比较。方法　分离新生乳鼠的心肌细胞并制成心肌细胞裂解液,自成年大鼠骨髓中分离MSCs,用含有心肌细胞裂解液的培养基(A组)、含有 5 aza的培养基 (B组 )、含有 5 aza和心肌细胞裂解液的培养基(C组)以及普通培养基(对照组)培养。观察细胞形态的改变,并通过免疫组化分析分化后细胞表达α 肌动蛋白、心脏特异性肌钙蛋白T(cTnT)、连接蛋白 43及CD31的情况。结果　A、B组的MSCs在培养 1周后均形成肌细胞形态,并且均表达α 肌动蛋白和cTnT;A组MSCs分化的肌样细胞所含的肌纤维较B组更丰实,细胞生长趋势也优于B组,并且可以表达CD31;B组MSCs分化的肌样细胞不表达CD31;对照组细胞仅表达α 肌动蛋白。结论　心肌细胞裂解液是体外诱导MSCs分化为心肌样细胞的理想条件,优于传统的 5 aza,在心肌细胞移植技术中可以用于体外模拟心肌细胞微环境。 展开更多
关键词 心肌细胞 CD31 表达 分化诱导 骨髓间充质干细胞 Α-肌动蛋白 对照组 成肌细胞 心肌样细胞 培养基
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龟板对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨分化的影响 被引量：41
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作者 黎晖 周健洪 +4 位作者 陈东风 杜少辉 李伊为 邓汝东 张赛霞 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 2005年第3期159-161,共3页
目的探讨益肾中药龟板对大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)体外向成骨分化的影响。方法使用密度梯度法分离成年大鼠骨髓间充质干细胞,观察在培养液中添加不同浓度龟板血清条件下MSCs的成骨变化。应用形态学、碱性磷酸酶... 目的探讨益肾中药龟板对大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)体外向成骨分化的影响。方法使用密度梯度法分离成年大鼠骨髓间充质干细胞,观察在培养液中添加不同浓度龟板血清条件下MSCs的成骨变化。应用形态学、碱性磷酸酶组织化学染色、VonKossa染色、骨钙素测定等方法观察细胞成骨活性。结果形态学表明,MSCs贴壁细胞呈集落生长,有成纤维细胞外观。龟板组碱性磷酸酶、钙化结节、骨钙素明显升高,与对照组比较具有显著性差异(P<0.05)。结论MSCs受龟板诱导高效地向成骨细胞分化,可以为体内骨组织工程提供种子细胞。 展开更多
关键词 龟板 骨髓间充质干细胞 成骨细胞 药理学
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杜仲叶提取物诱导羊骨髓间充质干细胞成骨及抑制其成脂肪分化 被引量：48
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作者 陈伟才 罗军 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1960-1964,共5页
背景:传统诱导剂只具有单纯诱导成骨或成脂的分化作用,应用较为局限。杜仲叶提取物具有提高骨密度、抑制骨吸收、调节骨代谢功能的药效作用,可促进成骨细胞增殖和碱性磷酸酶分泌。目的:探讨杜仲叶提取物诱导羊骨髓间充质干细胞向成骨细... 背景:传统诱导剂只具有单纯诱导成骨或成脂的分化作用,应用较为局限。杜仲叶提取物具有提高骨密度、抑制骨吸收、调节骨代谢功能的药效作用,可促进成骨细胞增殖和碱性磷酸酶分泌。目的:探讨杜仲叶提取物诱导羊骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的同时,是否具有抑制成脂肪分化的作用。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-02/10在南昌大学第二附属医院分子中心实验室完成。材料:健康12月龄羊6只,由南昌大学提供。杜仲叶提取物由江西师大生物技术公司制备。方法:采用全骨髓法体外分离培养羊骨髓间充质干细胞,取第3代细胞,设立6组:空白对照组,加入DMEM+胎牛血清;传统成骨诱导剂组,加入含地塞米松、β-甘油磷酸钠、抗坏血酸的DMEM高糖培养基;传统成骨诱导剂+杜仲叶提取物组,在传统诱导剂组基础上加入10-5g/mL杜仲叶提取物;10-4,10-5,10-6g/mL杜仲叶提取物组分别加入对应质量浓度的杜仲叶提取物。同时另取第3代细胞行成脂肪诱导,分组同上,仅将传统成骨诱导剂更换为传统成脂诱导剂。主要观察指标:成骨诱导后,钙钴法检测碱性磷酸酶活性,VonKossa法观察矿化结节的形成,RT-PCR法检测成骨细胞中Cbfa1mRNA基因的表达;成脂诱导后,油红O染色观察骨髓间充质干细胞成脂分化情况。结果:与空白对照组比较,各成骨诱导组细胞内碱性磷酸酶合成增多,形成矿化结节,且传统成骨诱导剂+杜仲叶提取物组、10-4,10-5g/mL杜仲叶提取物组诱导成骨情况优于传统成骨诱导剂组、10-6g/mL杜仲叶提取物组;RT-PCR显示各成骨诱导组均能高效扩增出171bp的Cbfa1基因转录片段,且成骨细胞中Cbfa1mRNA表达水平差异无显著性意义(P>0.05)。油红O染色结果显示,加入杜仲叶提取物的各成脂诱导组,其脂滴数量明显少于传统成脂诱导剂组。结论:杜仲叶提取物能诱导体外分离纯化培养的羊� 展开更多
关键词 杜仲叶提取物 骨髓间充质干细胞 成骨 成脂 RT-PCR
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纳米晶胶原基骨和骨髓间充质干细胞复合修复兔股骨头坏死缺损的研究 被引量：45
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作者 孙伟 李子荣 +3 位作者 史振才 张念非 李艳 崔福斋 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期703-706,共4页
目的探讨采用纳米晶胶原基骨(nano-hydroxyapatite collagen,nHAC)和骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)复合材料修复兔股骨头坏死骨缺损的可行性. 方法 2004年6月～10月,取45只成年新西兰大白兔制成双侧股骨头内骨... 目的探讨采用纳米晶胶原基骨(nano-hydroxyapatite collagen,nHAC)和骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)复合材料修复兔股骨头坏死骨缺损的可行性. 方法 2004年6月～10月,取45只成年新西兰大白兔制成双侧股骨头内骨缺损模型,随机分为3组进行修复,A组:骨缺损不填充任何材料;B组:骨缺损填充单纯nHAC;C组:骨缺损填充nHAC与MSCs的复合材料.术后3组分别于4、8和12周对股骨头行影像学和组织学观察. 结果影像学和组织学显示C组复合材料有良好的诱导成骨能力,术后4周即有明显的成骨反应和新骨形成,12周基本修复股骨头的骨缺损区;B组材料修复能力较C组差,但B组和C组均优于A组.B组和C组对nHAC无明显异物反应. 结论 nHAC有较强的传导成骨作用,是修复兔股骨头骨缺损的良好移植材料;复合MSCs后能促进骨缺损的修复,对股骨头坏死的治疗有较大价值. 展开更多
关键词 股骨头 坏死 纳米晶胶原基骨 骨髓间充质干细胞 复合材料 修复
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