利用RNA介导的抗病性获得抗2种病毒的转基因烟草 被引量：17

1

作者 白庆荣 朱俊华 +3 位作者 刘晓玲 朱常香 宋云枝 温孚江 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期148-154,共7页

RNA介导的病毒抗性(RMVR)是近年发展起来的一种新的植物抗病毒基因工程策略,具有抗病性强、抗性持久、生物安全性高等特点。利用该策略培育多抗病毒植株具有广阔的应用前景和重要的实践意义。本研究将非翻译的马铃薯X病毒的衣壳蛋白(PVX... RNA介导的病毒抗性(RMVR)是近年发展起来的一种新的植物抗病毒基因工程策略,具有抗病性强、抗性持久、生物安全性高等特点。利用该策略培育多抗病毒植株具有广阔的应用前景和重要的实践意义。本研究将非翻译的马铃薯X病毒的衣壳蛋白(PVX-CP)基因和非翻译的马铃薯Y病毒的衣壳蛋白(PVY-CP)基因组成嵌合基因,构建植物表达载体pROKXY,利用农杆菌介导法转化烟草NC89,获得6株对PVX和PVY的混合侵染表现为免疫的转基因植株。分子分析表明,这种抗性为RNA介导的病毒抗性。这一研究结果为利用RMVR进行植物多抗病毒育种提供了重要数据和资料。 展开更多

关键词 RNA介导的病毒抗性 马铃薯X病毒 马铃薯y病毒坏死株系 嵌合基因 转基因烟草

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hpRNA的茎环比例对RNA介导的病毒抗性产生的影响 被引量：7

2

作者 李云 宋云枝 +1 位作者 朱常香 温孚江 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期468-477,共10页

以马铃薯Y病毒坏死株系(PVYN)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因3′端50bp片段为hpRNA的茎,以pUC19不同长度的序列为hpRNA的环,构建了茎环比例分别为4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4和1∶8的植物表达载体。利用农杆菌介导法转化烟草品种NC... 以马铃薯Y病毒坏死株系(PVYN)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因3′端50bp片段为hpRNA的茎,以pUC19不同长度的序列为hpRNA的环,构建了茎环比例分别为4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4和1∶8的植物表达载体。利用农杆菌介导法转化烟草品种NC89,获得了多种转基因植株。室内抗病性检测发现:不同茎环比例的hpRNA介导的病毒抗性效率不同;茎环比例为4∶1、2∶1和1∶1时效率较高,抗性植株的比例达60%左右;随着环长度的逐渐增加,抗性植株的比例逐渐降低;当茎环比例为1∶8时,抗性植株的比例仅为9.52%。Southern blot分析结果表明:外源基因已整合于烟草的基因组中,且转基因植株的抗病性与转基因的拷贝数之间无明显的相关性。Northern blot分析结果表明:目的片段转录产物的积累量与植株的抗病性呈负相关,证明所获得的抗病性是RNA介导的。 展开更多

关键词 马铃薯y病毒坏死株系(PVy^N) RNA介导的病毒抗性 HPRNA 茎环比例

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烟草感染马铃薯Y病毒脉坏死株系后PPO活性及其同工酶变化的研究 被引量：13

3

作者 文才艺 吴元华 张艳红 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期328-330,共3页

感染马铃薯Y病毒脉坏死株系 (PVYN)后 ,敏感烟草体内的多酚氧化酶 (PPO)活性升高 ,而抗性烟草的PPO活性降低 ,但其活性值均高于敏感烟草健康植株 ;敏感烟草从接种PVYN 后第 8d起出现 2条新的PPO同工酶谱带 ,而且随着病害程度的加重其强... 感染马铃薯Y病毒脉坏死株系 (PVYN)后 ,敏感烟草体内的多酚氧化酶 (PPO)活性升高 ,而抗性烟草的PPO活性降低 ,但其活性值均高于敏感烟草健康植株 ;敏感烟草从接种PVYN 后第 8d起出现 2条新的PPO同工酶谱带 ,而且随着病害程度的加重其强度增加 ,抗性烟草则没有新的PPO同工酶谱带出现 .在未接种的情况下 ,抗性烟草体内的PPO活性明显高于敏感烟草 ,其PPO同工酶谱带数比敏感烟草多 展开更多

关键词 烟草 马铃薯y病毒脉坏死株系 多酚氧化酶 同工酶

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烟草感染PVY^N后叶脉坏死与总酚、类黄酮及PPO关系研究 被引量：15

4

作者 吴元华 钟丽娟 赵秀香 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期398-402,共5页

本文采用常规摩擦接种和比色法研究了烟草感染PVYN后叶脉坏死与总酚、类黄酮及PPO的关系。试验结果表明:感病品种K326接种PVYN后总酚和类黄酮含量升高,且接种处理与未接种对照间总酚和类黄酮含量的差别随症状表现的加重有递增趋势;就部... 本文采用常规摩擦接种和比色法研究了烟草感染PVYN后叶脉坏死与总酚、类黄酮及PPO的关系。试验结果表明:感病品种K326接种PVYN后总酚和类黄酮含量升高,且接种处理与未接种对照间总酚和类黄酮含量的差别随症状表现的加重有递增趋势;就部位而言,与根部及叶部相比,坏死严重的叶脉中总酚和类黄酮含量增加幅度最大,其含量分别增加了149.23%和152.97%;其PPO活性在接种PVYN后3d时出现第一个高峰,比对照高213.61%,随后降至最低,但仍比对照高130.77%,在接种PVYN后15d,坏死症状表现严重时,又迅速升高。抗病品种VAM接种PVYN后无异常症状,其总酚和类黄酮含量也升高,但升高幅度不大,不同部位总酚及类黄酮含量增加的幅度也均小于25%,其PPO活性在接种PVYN后稍有升高,但基本保持一个水平。 展开更多

关键词 烟草 马铃薯y病毒脉坏死株系 总酚 类黄酮 多酚氧化酶

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铜元素诱导烟草抗PVY^N相关生理生化及信号物质的研究 被引量：6

5

作者 李鑫 吴元华 +1 位作者 顾晶晶 赵秀香 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期536-540,共5页

通过气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)及生理生化指标的测定,研究了铜(Cu)元素诱导感染PVYN的烟株信号物质的积累及对系统抗性的影响。结果表明:喷施Cu元素能延迟烟株显症和叶脉出现褐色坏死时间,降低发病程度,病毒增殖受到抑制,烟株... 通过气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)及生理生化指标的测定,研究了铜(Cu)元素诱导感染PVYN的烟株信号物质的积累及对系统抗性的影响。结果表明:喷施Cu元素能延迟烟株显症和叶脉出现褐色坏死时间,降低发病程度,病毒增殖受到抑制,烟株体内的与抗性相关物质如脯氨酸及可溶性糖含量升高,电解质的外渗减少。此外,Cu元素处理能诱导信号物质水杨酸和乙烯的积累,水杨酸含量在接种后15d达到最大量3.93μg·g-1,为接种对照的1.3倍;而乙烯释放量在3～9d内均高于接种对照,在12d时乙烯释放量显著低于接种对照,分析认为前期Cu元素处理后诱导了乙烯释放的增强,进行抗性信号的传递。因此,喷施Cu元素后可以诱导烟草植株产生抗病性,增强烟草对PVYN侵染的抵抗力,并且诱导了相关抗性信号的传递。 展开更多

关键词 烟草 铜 马铃薯y病毒脉坏死株系(PVyN) 诱导抗性 信号物质

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马铃薯Y病毒脉坏株系(PVY^N)的侵染对烟草光合作用和呼吸作用的影响 被引量：2

6

作者 文才艺 吴元华 张艳红 《襄樊学院学报》 1999年第2期34-36,共3页

感染马铃薯Y病毒脉坏死株系后，烟草叶片的叶绿素含量和Hill反应活性均明显降低，光合速率在接种后2天出现增高现象，随后逐渐降低，呼吸速在接种的后2～6天明显降低，显症初期呼吸速率增高，随后大幅度降低．

关键词 烟草 马铃薯y病毒脉坏死株系 光合作用 呼吸作用 生理特性 叶绿素 Hill反应活性 光合速率

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铜元素诱导烟草抗马铃薯Y病毒脉坏死株系机理研究 被引量：3

7

作者 李鑫 顾晶晶 +2 位作者 赵秀香 李立梅 吴元华 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期226-230,共5页

采用病情指数调查、DAS-ELISA和生理生化指标测定的方法,研究了铜(Cu)元素对烟草抗马铃薯Y病毒脉坏死株系(Potatovirus Y-vein necrosis strain,PVYN)的室内效果及对植株抗病性的诱导作用。结果表明:喷施不同浓度的铜元素均能延迟烟株... 采用病情指数调查、DAS-ELISA和生理生化指标测定的方法,研究了铜(Cu)元素对烟草抗马铃薯Y病毒脉坏死株系(Potatovirus Y-vein necrosis strain,PVYN)的室内效果及对植株抗病性的诱导作用。结果表明:喷施不同浓度的铜元素均能延迟烟株显症和叶脉出现褐色坏死时间,降低发病程度,烟株体内病毒含量也明显减少,当Cu元素浓度为0.8mg/L时,效果最显著。单独喷施Cu元素(0.8mg/L)和喷施Cu元素后再接种PVYN的处理,均能提高烟株体内叶绿素a、叶绿素b含量及苯丙氨酸解氨酶活性;另外,单独喷施Cu元素处理烟株后能诱导总酚和类黄酮含量的提高,但喷施Cu元素后接种PVYN的烟株中总酚和类黄酮的含量在接种处理后3d内迅速上升高于对照,随后下降,在6d后虽又呈缓慢上升趋势,但仍明显低于对照。总酚和类黄酮的含量与叶脉褐变密切相关,因此总酚和类黄酮含量的降低可减轻植株褐变。研究表明,Cu元素具有诱导抗病性、增强烟草对PVYN侵染的抵抗能力。 展开更多

关键词 烟草 铜 马铃薯y病毒脉坏死株系 诱导抗性

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转基因烟草感染马铃薯Y病毒脉坏死株系后某些酶活性变化的比较研究 被引量：3

8

作者 文才艺 吴元华 张艳红 《襄樊学院学报》 1999年第5期56-59,共4页

烟草感染马铃薯Y病毒脉坏死株系后，过氧化物酶活性升高，但非转基因敏感烟草升高的幅度大于转基因抗病烟草；同时，非转基固敏感烟草的苯丙氨酸解氨酶和多酚氧化酶活性均增高，并且都出现两个活性高峰，但转基因抗病烟草的苯丙氨酸解... 烟草感染马铃薯Y病毒脉坏死株系后，过氧化物酶活性升高，但非转基因敏感烟草升高的幅度大于转基因抗病烟草；同时，非转基固敏感烟草的苯丙氨酸解氨酶和多酚氧化酶活性均增高，并且都出现两个活性高峰，但转基因抗病烟草的苯丙氨酸解氨酶活性仅出现第一个活性高峰，随后其活性值降低并逐渐恢复至未接种时的水平，而多酚氧化酶活性则降低；在未感染PVYN的情况下，转基因抗病烟草的过氧化物酶、苯丙氨酸解氨酶和多酚氧化酶活性均比非转基因敏感烟草高． 展开更多

关键词 烟草 马铃薯y病毒脉坏死株系 过氧化物酶 苯丙氨酸解氨酶 多酚氧化酶

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马铃薯Y病毒脉坏死株系(PVY^N)外壳蛋白基因的克隆、表达及其间接ELISA方法的建立 被引量：3

9

作者 高方方 吴忠义 +2 位作者 黄丛林 孙惠生 曾申明 《中国农学通报》 CSCD 2008年第3期82-86,共5页

【目的】制备马铃薯Y病毒脉坏死株系(PVYN)多克隆抗体,建立间接ELISA法用于检测PVYN病毒。【方法】依据PVYN的CP基因序列设计引物,利用RT-PCR方法获得CP基因并连接构建到原核表达载体,进行原核表达,以纯化的重组蛋白作为抗原免疫新西兰... 【目的】制备马铃薯Y病毒脉坏死株系(PVYN)多克隆抗体,建立间接ELISA法用于检测PVYN病毒。【方法】依据PVYN的CP基因序列设计引物,利用RT-PCR方法获得CP基因并连接构建到原核表达载体,进行原核表达,以纯化的重组蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,获得PVYN的抗血清并纯化。【结果】测序结果与其他已知序列比较,PVYNCP基因的核苷酸同源性95%,推断氨基酸的同源性达98%。以纯化蛋白为抗原进行免疫,成功获得了PVYN外壳蛋白抗血清,纯化后的IgG采用间接ELISA法检测抗原,抗体效价达1:500,使用该抗体稀释度检测感染植株,结果呈阳性。【研究结论】通过分子生物学途径获得了PVYN的多克隆抗体,建立的间接ELISA方法可以用于PVYN的病毒检测。 展开更多

关键词 马铃薯y病毒脉坏死株系 原核表达 多克隆抗体 ELISA

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硼元素抗烟草马铃薯Y病毒脉坏死株系(PVY^N)的应用研究 被引量：2

10

作者 李鑫 吴元华 +2 位作者 刘伟 王有福 曹冬梅 《世界农药》 CAS 2012年第6期36-37,40,共3页

采用营养元素硼对烟草植株进行喷施处理后接种马铃薯Y病毒脉坏死株系(PVY^N),对感染植株的病情指数及体内病毒含量进行了测定。结果表明:采用不同浓度硼元素5(B1)、10(B2)、20(B3)、30(B4)和40(B5)mg/L处理烟株24 h后再接种PVY^N,对烟... 采用营养元素硼对烟草植株进行喷施处理后接种马铃薯Y病毒脉坏死株系(PVY^N),对感染植株的病情指数及体内病毒含量进行了测定。结果表明:采用不同浓度硼元素5(B1)、10(B2)、20(B3)、30(B4)和40(B5)mg/L处理烟株24 h后再接种PVY^N,对烟草感病后体内病毒的增殖有一定的抑制作用,能明显降低烟株体内病毒含量。其中以B3处理对PVY^N抗性最好,喷施24 h后接种PVY^N为硼元素的最佳诱抗时间,且从表观上看,亦可延迟脉坏死症状的发生。由此可见,硼元素对抑制PVY^N效果显著,可作为一种新型药剂进行开发。 展开更多

关键词 硼元素 马铃薯y病毒脉坏死株系 抗性

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硫酸镁对烟草感染PVY^N后病情及防御酶系活性的影响 被引量：1

11

作者 顾晶晶 李鑫 +1 位作者 赵秀香 吴元华 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期286-290,共5页

对叶面喷施240mg·L-1硫酸镁溶液后,烟草幼苗感染烟草马铃薯Y病毒脉坏死株系(Potato Virus Y-vein necrosis,PVYN)的发病情况、病毒含量及防御酶系活性进行研究。结果表明:烟草幼苗经240 mg·L-1 MgSO4处理,再接种PVYN后其发病... 对叶面喷施240mg·L-1硫酸镁溶液后,烟草幼苗感染烟草马铃薯Y病毒脉坏死株系(Potato Virus Y-vein necrosis,PVYN)的发病情况、病毒含量及防御酶系活性进行研究。结果表明:烟草幼苗经240 mg·L-1 MgSO4处理,再接种PVYN后其发病程度减轻,病情指数及幼苗叶片中病毒含量均低于未喷施MgSO4的对照。叶面单独喷施MgSO4处理和喷施后接种PVYN处理,对苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)的活性均有较强的促进作用,烟草幼苗接种PVYN后,PAL在处理第6天时达到酶活高峰(2.63U·g-1FW),POD、PPO的活性在接种PVYN后第15天时产生高于对照处理的酶活高峰,峰值分别为55.76U·g-1FW和10.62U·g-1FW;但喷施MgSO4对过氧化氢酶(CAT)活性影响较小。本研究证实,MgSO4具有较强的诱导植物产生抗病毒的能力,可明显提高植株的抗病性。 展开更多

关键词 烟草 马铃薯y病毒脉坏死株系(PVyN) 苯丙氨酸解氨酶 过氧化物酶 多酚氧化酶 过氧化氢酶 MgSO4

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半巢式RT-Realtime PCR检测马铃薯Y病毒脉坏死株系 被引量：1

12

作者 耿金培 粟智平 +2 位作者 张京萱 方绍庆 王真 《植物检疫》 北大核心 2009年第3期17-20,共4页

马铃薯Y病毒脉坏死株系(Potato virusY,PVYn)是马铃薯中一个非常重要的病毒病害。本文根据PVYn基因组中RNA依赖的RNA聚合酶基因序列保守区域,设计合成了3条巢式PCR引物和1条TaqMAN荧光探针,建立了半巢式RT-Realtime PCR检测PVYn的新方... 马铃薯Y病毒脉坏死株系(Potato virusY,PVYn)是马铃薯中一个非常重要的病毒病害。本文根据PVYn基因组中RNA依赖的RNA聚合酶基因序列保守区域,设计合成了3条巢式PCR引物和1条TaqMAN荧光探针,建立了半巢式RT-Realtime PCR检测PVYn的新方法。该方法采用E.Z.N.ATM快速提取植物总RNA,并有机地结合了巢式PCR和TaqMAN探针检测技术。第二步半巢式RT-Realtime PCR既是对第一步信号的进一步放大,也是对第一步PCR产物的确认,因此,检测的准确性、灵敏度比巢式PCR、Real time PCR等方法高。实验结果表明,该方法检测灵敏度可达4fg/μL植物总RNA。 展开更多

关键词 马铃薯y病毒脉坏死株系(PVyN) 半巢式RT-Realtime PCR 检测

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烟草感染马铃薯Y病毒脉坏死株系后内源激素的变化 被引量：6

13

作者 钟丽娟 赵秀香 +2 位作者 贾玉才 宋影 吴元华 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第15期3724-3725,共2页

研究了烟草抗病品种VAM和感病品种K326感染马铃薯Y病毒脉坏死株系(PVYN)后体内乙烯和吲哚乙酸(IAA)的变化及其与发病的关系。结果表明,乙烯生成速率增加和IAA含量的升高与PVYN引起的烟草叶脉坏死密切相关。抗病品种VAM随接种时间的延长... 研究了烟草抗病品种VAM和感病品种K326感染马铃薯Y病毒脉坏死株系(PVYN)后体内乙烯和吲哚乙酸(IAA)的变化及其与发病的关系。结果表明,乙烯生成速率增加和IAA含量的升高与PVYN引起的烟草叶脉坏死密切相关。抗病品种VAM随接种时间的延长,乙烯生成速率和IAA含量的变化比较平缓,而感病品种K326随症状表现的加重,乙烯生成速率和IAA含量的变化非常显著。 展开更多

关键词 烟草 马铃薯y病毒脉坏死株系(PVy^N) 乙烯 吲哚乙酸

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巢式-多重RT-Realtime PCR检测马铃薯Y病毒脉坏死株系的方法 被引量：1

14

作者 粟智平 耿金培 +2 位作者 杨益娥 钟响 张京萱 《检验检疫科学》 2009年第4期8-11,共4页

马铃薯Y病毒脉坏死株系(Potato virus Yvein necrosis strain,PVYn)是马铃薯中一个非常重要的病毒病害。本研究根据PVYn基因组中RNA依赖的RNA聚合酶(RNA dependentRNA polymerase,RDRP)基因序列保守区域,设计合成了两对巢式PCR引物和一... 马铃薯Y病毒脉坏死株系(Potato virus Yvein necrosis strain,PVYn)是马铃薯中一个非常重要的病毒病害。本研究根据PVYn基因组中RNA依赖的RNA聚合酶(RNA dependentRNA polymerase,RDRP)基因序列保守区域,设计合成了两对巢式PCR引物和一条TaqMAN荧光探针,建立了巢式-多重RT-Real-time PCR检测PVYn的新方法。该方法采用E.Z.N.ATM快速提取植物总RNA,并有机地结合了巢式PCR、多重PCR和探针检测技术。实验结果表明,本方法检测的准确性、灵敏度比巢式PCR、单重Real time PCR等方法高。该方法检测灵敏度可达3 fg/μL植物总RNA。利用四对引物和一条TaqMAN探针对PCR阳性产物进行确认,检测的准确性比其它方法高。 展开更多

关键词 马铃薯y病毒脉坏死株系(PVy^N) 巢式-多重RT-RealtimePCR 检测

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