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马β_2-微球蛋白基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的高效表达与纯化
被引量：
1
1
作者
童铁钢
刘光亮
+4 位作者
徐树兰
王群
肖一红
孟庆文
吴东来
《中国兽医科技》
CSCD
北大核心
2005年第11期851-855,共5页
为了构建马MHCⅠ四聚体分子,从马外周血单核细胞(PBMC)中提取总RNA,采用RT-PCR技术对去除信号肽部分的2βm基因进行了扩增,将其RT-PCR产物经纯化、BamHⅠ+XhoⅠ双酶切后与经同样处理的原核表达载体pET-28a(+)进行连接,转化入感受态细胞B...
为了构建马MHCⅠ四聚体分子,从马外周血单核细胞(PBMC)中提取总RNA,采用RT-PCR技术对去除信号肽部分的2βm基因进行了扩增,将其RT-PCR产物经纯化、BamHⅠ+XhoⅠ双酶切后与经同样处理的原核表达载体pET-28a(+)进行连接,转化入感受态细胞BL21(DE3)。将筛选出的阳性克隆进行测序、诱导表达并将其表达产物进行纯化。结果表明,去除信号肽部分的马2βm基因全长300 bp,含有1个开放阅读框,编码一由99个氨基酸组成的成熟蛋白;表达产物以包涵体的形式存在,经SDS-PAGE和Western-blotting分析,重组蛋白的分子质量约为15 ku,且具有免疫生物学活性。
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关键词
马
β
2-
微
球蛋白
基因
克隆
表达
纯化
下载PDF
职称材料
题名
马β_2-微球蛋白基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的高效表达与纯化
被引量：
1
1
作者
童铁钢
刘光亮
徐树兰
王群
肖一红
孟庆文
吴东来
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
出处
《中国兽医科技》
CSCD
北大核心
2005年第11期851-855,共5页
文摘
为了构建马MHCⅠ四聚体分子,从马外周血单核细胞(PBMC)中提取总RNA,采用RT-PCR技术对去除信号肽部分的2βm基因进行了扩增,将其RT-PCR产物经纯化、BamHⅠ+XhoⅠ双酶切后与经同样处理的原核表达载体pET-28a(+)进行连接,转化入感受态细胞BL21(DE3)。将筛选出的阳性克隆进行测序、诱导表达并将其表达产物进行纯化。结果表明,去除信号肽部分的马2βm基因全长300 bp,含有1个开放阅读框,编码一由99个氨基酸组成的成熟蛋白;表达产物以包涵体的形式存在,经SDS-PAGE和Western-blotting分析,重组蛋白的分子质量约为15 ku,且具有免疫生物学活性。
关键词
马
β
2-
微
球蛋白
基因
克隆
表达
纯化
Keywords
equine
β
2
-microglobulin
gene
cloning
expression
purification
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
马β_2-微球蛋白基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的高效表达与纯化
童铁钢
刘光亮
徐树兰
王群
肖一红
孟庆文
吴东来
《中国兽医科技》
CSCD
北大核心
2005
1
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