TNF-α对颌骨骨髓间充质与牙周膜两种干细胞自噬水平的影响 被引量：2

1

作者 王璞 韦丽宾 +2 位作者 倪广晓 廉云敏 高岚 《现代口腔医学杂志》 CAS 2020年第1期14-16,共3页

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对颌骨骨髓间充质与牙周膜两种干细胞自噬水平的影响。方法分离培养人颌骨骨髓间充质干细胞(JBMMSCs)、牙周膜干细胞(PDLSCs),以0、20、50、100ng/mL TNF-α作用于细胞,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,并... 目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对颌骨骨髓间充质与牙周膜两种干细胞自噬水平的影响。方法分离培养人颌骨骨髓间充质干细胞(JBMMSCs)、牙周膜干细胞(PDLSCs),以0、20、50、100ng/mL TNF-α作用于细胞,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,并以定时定量RT-PCR、Western blot检测细胞自噬、凋亡表达。结果100ng/mL TNF-α下JBMMSCs、PDLSCs细胞凋亡明显增加,且高于20、50ng/mL(P<0.05);TNF-α作用1d后,JBMMSCs、PDLSCs LC3表达升高,P62表达降低,Bcl-2表达升高;TNF-α作用7d后,LC3表达降低,P62表达升高,Bcl-2表达下降。结论TNF-α可在一定条件下激活JBMMSCs、PDLSCs自噬,调控细胞凋亡。 展开更多

关键词 TNF-Α 颌骨骨髓间充质 牙周膜 干细胞 自噬

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衰老性骨质疏松微环境对颌骨骨髓间充质干细胞生物学功能的影响 被引量：9

2

作者 李胜丹 梁乙然 刘一涵 《中华老年口腔医学杂志》 2019年第4期198-203,238,共7页

目的:探讨衰老性骨质疏松微环境对颌骨骨髓间充质干细胞(Jaw bone-marrow-derived mesenchymal stem cells,JBMMSCs)生物学功能的影响。方法:分别取2月龄和20月龄SD(Sprague Daw ley)大鼠,分离其颌骨和股骨,并进行Micro-CT扫描,确定衰... 目的:探讨衰老性骨质疏松微环境对颌骨骨髓间充质干细胞(Jaw bone-marrow-derived mesenchymal stem cells,JBMMSCs)生物学功能的影响。方法:分别取2月龄和20月龄SD(Sprague Daw ley)大鼠,分离其颌骨和股骨,并进行Micro-CT扫描,确定衰老性骨质疏松大鼠模型建立成功;体外分离、培养并鉴定两组大鼠的JBMMSCs,通过克隆形成实验、CCK8实验和成骨诱导观察其增殖和成骨分化能力;并采用实时定量荧光PCR技术(Real-time PCR)对成骨诱导7d后的JBMMSCs成骨重要相关基因Runx2、OCN进行检测。结果:与2月龄大鼠相比,20月龄大鼠颌骨、股骨均出现了明显的骨质疏松,主要表现为骨密度及骨小梁强度下降;年轻和衰老大鼠JBMMSCs阳性表达CD29、CD90,阴性表达CD34、CD45,符合间充质干细胞特性;衰老组JBMMSCs的增殖、成骨分化能力以及Runx2 mRNA、OCN mRNA表达水平均显著下降(*P<0. 05)。结论:JBMMSCs增殖和成骨分化能力降低可能是导致颌骨骨质疏松的重要原因。 展开更多

关键词 颌骨骨髓间充质干细胞 自然衰老 骨质疏松 成骨分化

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氯化锂对人颌骨来源的骨髓间充质干细胞增殖及骨向分化能力的影响 被引量：8

3

作者 高丽娜 安莹 +2 位作者 杨昊 陈发明 金岩 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期203-208,共6页

目的:探讨氯化锂(LiCl)对颌骨来源的骨髓间充质干细胞(OF-BMMSCs)增殖及骨性分化的影响。方法:采用有限稀释法克隆化培养人颌骨来源的骨髓间充质干细胞;正常培养基中加入不同浓度LiCl(5、10、20、40 mmol/L),同时设立对照组(0 mmol/L);... 目的:探讨氯化锂(LiCl)对颌骨来源的骨髓间充质干细胞(OF-BMMSCs)增殖及骨性分化的影响。方法:采用有限稀释法克隆化培养人颌骨来源的骨髓间充质干细胞;正常培养基中加入不同浓度LiCl(5、10、20、40 mmol/L),同时设立对照组(0 mmol/L);运用MTT法分析不同浓度LiCl对人OF-BMMSCs增殖活性的影响;采用组织化学染色法、RT-PCR法测定不同浓度LiCl处理人OF-BMMSCs后的ALP活性及相关骨向分化基因(ALP,Runx-2,OCN)的表达。结果:5 mmol/L LiCl促进OF-BMMSCs增殖,对ALP、Runx-2、OCN表达的影响作用不明显(P>0.05),20和40 mmol/L LiCl抑制细胞增殖(P<0.05),促进ALP、Runx-2、OCN基因表达(P<0.05)。结论:LiCl能够促进人OF-BMMSCs的骨向分化。 展开更多

关键词 氯化锂 颌骨骨髓间充质干细胞 增殖 骨向分化

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TNF-α对牙周膜干细胞和颌骨骨髓间充质干细胞自噬水平的影响 被引量：8

4

作者 安莹 张立强 +3 位作者 薛芃 刘文佳 王勤涛 金岩 《口腔生物医学》 2015年第3期119-123,共5页

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)和颌骨骨髓间充质干细胞(jaw bone marrow mesenchymal stem cells,JBMMSCs)两种干细胞自噬水平的影响。方法:通过... 目的:探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)和颌骨骨髓间充质干细胞(jaw bone marrow mesenchymal stem cells,JBMMSCs)两种干细胞自噬水平的影响。方法:通过胰酶消化法体外分离培养PDLSCs/JBMMSCs,流式细胞仪及实时定量RT-PCR筛选短时间内不导致细胞凋亡的TNF-α的最大浓度,然后与PDLSCs/JBMMSCs共培养,Western blot检测不同时间点两种细胞自噬和凋亡的表达水平。结果:成功地筛选出TNF-α的最佳浓度为50 ng/m L。采用该浓度作用于PDLSCs/JBMMSCs,短期作用(24 h)可以激活细胞的自噬水平,凋亡水平下降;如果TNF-α持续作用,细胞的自噬水平反而下降,凋亡增加。结论:在一定的条件下,TNF-α可以激活PDLSCs/JBMMSCs的自噬水平,免于细胞发生凋亡。 展开更多

关键词 牙周膜干细胞 颌骨骨髓间充质干细胞 肿瘤坏死因子 自噬

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糖基化终末产物对人牙周膜干细胞和骨髓间充质干细胞骨向分化能力影响的比较研究 被引量：8

5

作者 杨琨 崔晓霞 +3 位作者 邓超 伍燕 刘琪 金岩 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2013年第6期366-370,375,共6页

目的:观察糖基化终末产物(AGEs)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)及人颌骨骨髓间充质干细胞(hBMMSCs)骨向分化能力的影响。方法:组织块法和有限稀释法克隆化培养hPDLSCs及hBMMSCs,流式细胞仪检测两种细胞表型分子表达,取第3代细胞分别在10μg/... 目的:观察糖基化终末产物(AGEs)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)及人颌骨骨髓间充质干细胞(hBMMSCs)骨向分化能力的影响。方法:组织块法和有限稀释法克隆化培养hPDLSCs及hBMMSCs,流式细胞仪检测两种细胞表型分子表达,取第3代细胞分别在10μg/mL AGEs刺激下进行矿化诱导,于诱导的21 d,茜素红染色、十六烷基吡啶定量观察钙结节形成情况、诱导7 d,碱性磷酸酶染色观察ALP活性、实时定量聚合酶链反应(real time PCR)和Western blot检测成骨相关基因及蛋白表达情况。结果:流式细胞仪显示两种细胞均阳性表达CD44、CD146、stro-1、CD90。成骨诱导21 d后茜素红染色和定量分析显示,hPDLSCs AGEs组矿化能力低于对照组;而hBMMSCs AGEs组矿化能力高于对照组(P<0.05)。成骨诱导7 d后,ALP染色显示,两种细胞ALP活性变化趋势与茜素红定量分析相同;RT-PCR检测hPDLSCs中ALP、Runx-2、Col-1、Runx-2mRNA表达水平均低于对照组,而hBMMSCs中各基因均高于对照组(P<0.05)。Western blot检测显示,各组Runx-2蛋白表达趋势与RT-PCR结果趋势相同。结论:AGEs抑制hPDLSC的骨向分化,促进hBMMSC骨向分化。 展开更多

关键词 糖基化终末产物 人牙周膜干细胞 人颌骨骨髓间充质干细胞 骨向分化

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Wnt/β-catenin信号通路对颌骨骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响 被引量：7

6

作者 谢冰 陈卓 《中华实用诊断与治疗杂志》 2021年第11期1153-1158,共6页

目的观察牙周炎患者及牙周健康者颌骨骨髓间充质干细胞(orofacial bone marrow mesenchymal stem cells, OBMSCs)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)及成骨因子表达变化,探讨Wnt/β-catenin信号通路对OBMSCs成骨分化的影响。方法... 目的观察牙周炎患者及牙周健康者颌骨骨髓间充质干细胞(orofacial bone marrow mesenchymal stem cells, OBMSCs)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)及成骨因子表达变化,探讨Wnt/β-catenin信号通路对OBMSCs成骨分化的影响。方法取3例中期牙周炎患者和3例牙周健康者正颌手术磨除的颌骨碎片,分离、提取OBMSCs,采用流式细胞术检测CD90、CD105、CD34、CD45阳性表达。取牙周健康者OBMSCs分为健康对照组、健康DKK1组、健康agonist 1组,取牙周炎患者OBMSCs分为牙周炎对照组、牙周炎DKK1组、牙周炎agonist 1组,健康DKK1组、牙周炎DKK1组加入20μmol/L Wnt/β-catenin信号通路抑制剂DKK1,健康agonist 1组、牙周炎agonist 1组加入20μmol/L Wnt/β-catenin信号通路激动剂Wnt agonist 1,健康对照组、牙周炎对照组不作处理。6组OBMSCs长至80%左右,加入成骨诱导液培养21 d,采用茜素红染色法观察矿化结节数;药物处理48 h后,采用ELISA法检测ALP活性的光密度值,采用Western blot法检测成骨细胞因子RUNX2、ALP、COL1A、β-catenin蛋白相对表达量。结果牙周炎患者与牙周健康者OBMSCs CD90和CD105呈阳性表达,CD34和CD45呈阴性表达,符合间充质干细胞的表面抗原特征。牙周炎agonist 1组矿化结节数量[(29.17±3.16)个]多于牙周炎对照组[(14.18±1.12)个]、牙周炎DKK1组[(3.29±0.79)个](P<0.05),牙周炎对照组多于牙周炎DKK1组(P<0.05);健康agonist 1组矿化结节数量[(44.17±4.62)个]多于健康对照组[(21.32±2.63)个]、健康DKK1组[(9.01±1.16)个](P<0.05),健康对照组多于健康DKK1组(P<0.05);牙周炎对照组矿化结节数量少于健康对照组(P<0.05),牙周炎DKK1组少于健康DKK1组(P<0.05),牙周炎agonist 1组少于健康agonist 1组(P<0.05)。牙周炎agonist 1组ALP活性的光密度值(0.57±0.06)高于牙周炎对照组(0.25±0.02)、牙周炎DKK1组(0.08±0.01)(P<0.05),牙周炎对照组高于牙周炎DKK1组(P<0.05);健康agonist 1组ALP活性的光密度值 展开更多

关键词 牙周炎 颌骨骨髓间充质干细胞 WNT/Β-CATENIN信号通路

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不同糖浓度对颌骨骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 被引量：6

7

作者 陈杨 胡赟 +3 位作者 杨兰 周洁 唐宇英 郑雷蕾 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期679-684,共6页

目的 研究不同糖浓度对颌骨骨髓间充质干细胞（orofacial bonemesenchymal stem cells,OFMSCs）增殖和成骨分化的影响。方法 体外分离、培养OFMSCs,成骨、成脂、成软骨分化诱导及鉴定,并使用不同含糖量培养基（5.5、11、16.5、25、44mmo... 目的 研究不同糖浓度对颌骨骨髓间充质干细胞（orofacial bonemesenchymal stem cells,OFMSCs）增殖和成骨分化的影响。方法 体外分离、培养OFMSCs,成骨、成脂、成软骨分化诱导及鉴定,并使用不同含糖量培养基（5.5、11、16.5、25、44mmol/L）培养OFMSCs,以5.5mmol/L基准糖浓度为对照组,其余组为实验组。采用CCK-8及流式细胞仪检测各组OFMSCs的增殖活性及增殖指数,OFMSCs成骨诱导后4、7d检测碱性磷酸酶（ALP）活性,21d进行茜素红染色及矿化定量分析,同时用RT-PCR检测3、7、14及21d相关成骨基因Runx2、Osterix的表达。结果 培养的OFMSCs成骨诱导21d后茜素红染色可见钙结节,成脂诱导14d后油红O染色可见红色脂滴,成软骨诱导14d后阿利新蓝染色可见蓝色胞浆;糖浓度在5.5~25mmol/L促进OFMSCs的增殖,但随着糖浓度的继续增加（25~44mmol/L）,OFMSCs的增殖活性受抑制;成骨诱导时,随着培养液糖浓度升高,ALP活性呈剂量依赖性降低（P〈0.05）;成骨诱导21d,茜素红染色和矿化定量分析显示,随着培养液糖浓度的升高,钙结节形成、矿化定量呈剂量依赖性减少;成骨诱导3、7、14及21d,RT-PCR检测结果显示,对照组Runx2、Osterix mRNA表达量高于实验组（P〈0.05）,各组Runx2、Osterix mRNA表达量均出现先上调再下调的趋势。结论 在一定范围的糖浓度内,糖浓度升高可促进OFMSCs的增殖;而糖浓度升高对成骨分化呈抑制效应。 展开更多

关键词 糖浓度 颌骨骨髓间充质干细胞 增殖 成骨分化

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miR-34a对人颌骨骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 被引量：6

8

作者 张勃昕 吉爱红 +6 位作者 曹正垚 孙秋望月 邓威 郭松松 王晨星 李怀奇 叶金海 《口腔生物医学》 2019年第1期1-5,共5页

目的:研究miR-34a对人颌骨骨髓间充质干细胞(hOBMSCs)成骨分化的影响。方法:实时定量RT-PCR检测miR-34家族在hOBMSCs成骨诱导过程中的表达情况;采用碱性磷酸酶及茜素红染色检测miR-34a对于hOBMSCs成骨分化能力的影响;Western blot检测hO... 目的:研究miR-34a对人颌骨骨髓间充质干细胞(hOBMSCs)成骨分化的影响。方法:实时定量RT-PCR检测miR-34家族在hOBMSCs成骨诱导过程中的表达情况;采用碱性磷酸酶及茜素红染色检测miR-34a对于hOBMSCs成骨分化能力的影响;Western blot检测hOBMSCs成骨分化过程中miR-34a对于成骨相关蛋白的影响,同时检测hOBMSCs在正常培养条件下miR-34a对于DKK1蛋白表达的影响;双荧光素酶报告基因检测miR-34a与DKK1的靶向关系;通过裸鼠皮下成骨实验检测miR-34a对于hOBMSCs体内成骨的影响。结果:在hOBMSCs成骨诱导过程中,miR-34家族的miRNA表达量均显著上升(P<0.05),其中miR-34a最为明显;过表达miR-34a可显著提高hBMSCs的体外成骨能力;miR-34a可以负向调节DKK1,同时双荧光素酶报告基因实验证实DKK1为miR-34a的靶基因;体内实验同样证实miR-34a可以促进hOBMSCs的成骨分化。结论:miR-34a可能通过抑制DKK1的表达,促进hOBMSCs的成骨分化。 展开更多

关键词 MIR-34A DKK1 人颌骨骨髓间充质干细胞 成骨分化

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槐角提取物对颌骨骨髓间充质干细胞成骨向分化的影响 被引量：1

9

作者 林惠 高云飞 +1 位作者 刘晶 马旭辉 《中国口腔颌面外科杂志》 CAS 2024年第1期23-28,共6页

目的 :探讨槐角提取物对颌骨骨髓间充质干细胞(jaw bone marrow mesenchymal stem cells,jBMSCs)成骨分化的影响。方法:采用CCK-8法检测10、25、50、100μmol/L槐角提取物溶液对jBMSCs增殖的影响,采用BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色、茜素红... 目的 :探讨槐角提取物对颌骨骨髓间充质干细胞(jaw bone marrow mesenchymal stem cells,jBMSCs)成骨分化的影响。方法:采用CCK-8法检测10、25、50、100μmol/L槐角提取物溶液对jBMSCs增殖的影响,采用BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色、茜素红染色检测10、25、50μmol/L槐角提取物溶液对jBMSCs成骨分化水平的影响,采用蛋白免疫印迹试验(Western blot)和实时定量荧光PCR检测槐角提取物溶液对jBMSCs成骨分化相关分子的蛋白和mRNA表达水平的影响。采用GraphPad Prism 9软件包对数据进行统计学分析。结果:100μmol/L槐角提取物溶液对jBMSCs有明显毒性作用(P<0.0001),10、25和50μmol/L浓度不影响细胞增殖(P>0.05)。与对照组相比,10、25和50μmol/L组的碱性磷酸酶活性、钙结节数量、成骨分化相关分子的蛋白和mRNA表达水平均逐渐升高。结论:10、25、50μmol/L浓度的槐角提取物能促进jBMSCs成骨向分化。 展开更多

关键词 槐角提取物 颌骨骨髓间充质干细胞 成骨向分化 细胞增殖

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组织特异性间充质干细胞的牙周再生对比 被引量：4

10

作者 朱斌 赵喜聪 +1 位作者 李楠 金岩 《口腔生物医学》 2015年第3期150-154,共5页

目的:对比不同特异性组织来源的间充质干细胞的牙周再生能力。方法:体外培养人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,h PDLSCs),人颌骨来源的骨髓间充质干细胞(human jaw-derived bone marrow-derived mesenchymal stem ... 目的:对比不同特异性组织来源的间充质干细胞的牙周再生能力。方法:体外培养人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,h PDLSCs),人颌骨来源的骨髓间充质干细胞(human jaw-derived bone marrow-derived mesenchymal stem cells,h JBMMSCs)和人髂骨来源的骨髓间充质干细胞(human iliac-derived BMMSCs,h IBMMSCs),成骨诱导后进行成骨指标检测。间接共培养JBMMSCs/IBMMSCs与PDLSCs,通过RT-PCR检测成骨相关基因,观察组织特异性来源的细胞间交互作用。构建JBMMSCs/IBMMSCs+PDLSCs细胞聚合体(cell aggregates,CAs),检测成骨基因表达以及裸鼠皮下8 w异位牙周再生能力。结果:经成骨诱导,h JBMMSCs的成骨相关指标表达均显著高于h IBMMSCs和h PDLSCs(P<0.05)。经JBMMSCs诱导的PDLSCs的成骨基因表达显著高于IBMMSCs(P<0.05);JBMMSCs+PDLSCs CAs成骨相关基因表达高于IBMMSCs+PDLSCs CAs(P<0.05),并且在裸鼠皮下异位再生牙周组织,前者形成排列规律的垂直于CBB表面的牙周膜样纤维,并且有更多新生骨基质沉淀。结论:PDLSCs和JBMMSCs是具有组织特异性的间充质干细胞,是更合适牙周组织再生的种子细胞。 展开更多

关键词 牙周再生 颌骨骨髓间充质干细胞 髂骨骨髓间充质干细胞 牙周膜干细胞 细胞聚合体 再生微环境

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lncRNA SNHG8抑制颌骨骨髓间充质干细胞成骨分化功能

11

作者 刁展秋 刘华 +2 位作者 杨昊清 刘惠娜 范志朋 《口腔生物医学》 2024年第4期185-192,共8页

目的:研究lncRNA SNHG8对颌骨骨髓间充质干细胞(JBMMSCs)成骨分化的影响。方法:通过慢病毒转染敲除或过表达JBMMSCs中lncRNA SNHG8,实时荧光定量PCR检测基因表达,碱性磷酸酶(ALP)活性测定、茜素红染色、钙离子定量以及Western blot检测J... 目的:研究lncRNA SNHG8对颌骨骨髓间充质干细胞(JBMMSCs)成骨分化的影响。方法:通过慢病毒转染敲除或过表达JBMMSCs中lncRNA SNHG8,实时荧光定量PCR检测基因表达,碱性磷酸酶(ALP)活性测定、茜素红染色、钙离子定量以及Western blot检测JBMMSCs的体外成骨分化能力,活性氧(ROS)染色检测ROS含量;lncRNA SNHG8敲低后的JBMMSCs与HA/TCP材料混合并植入裸鼠皮下,苏木素-伊红(HE)染色、Masson染色、免疫荧光染色检测JBMMSCs的体内成骨分化能力。结果:体外JBMMSCs中lncRNA SNHG8敲低后的ALP活性及体外矿化能力增强(P<0.01),骨涎蛋白(BSP)蛋白表达条带增强,lncRNA SNHG8过表达后ALP活性及体外矿化能力减弱(P<0.01),BSP蛋白表达条带减弱;敲除lncRNA SNHG8可上调MAPK通路中磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK),过表达SNHG8可抑制p-JNK表达;敲除lncRNA SNHG8可增强胞内ROS染色,过表达lncRNA SNHG8可抑制胞内ROS染色。lncRNA SNHG8敲除后的体内新骨形成增加(P<0.01),BSP、骨钙素(OCN)蛋白表达条带增强。结论:lncRNA SNHG8可通过JNK信号通路抑制JBMMSCs体内外成骨分化功能。 展开更多

关键词 颌骨骨髓间充质干细胞 lncRNA SNHG8 成骨分化 活性氧 C-JUN氨基末端激酶

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3种口腔颌面部来源的间充质干细胞成血管内皮分化潜能的比较研究 被引量：4

12

作者 谢静 赵玉鸣 +7 位作者 饶南荃 汪晓彤 方滕姣子 李晓霞 翟越 李静芝 葛立宏 王媛媛 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期900-906,共7页

目的:研究来自口腔颌面部的脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)、牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSC)和颌骨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)的增殖能力及成... 目的:研究来自口腔颌面部的脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)、牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSC)和颌骨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)的增殖能力及成血管内皮细胞分化潜能,为血管组织工程再生种子细胞的选择提供依据。方法:取临床乳牙和恒牙牙髓组织及颌骨组织并采用酶消化法分离培养相应的间充质干细胞,流式细胞技术检测间充质干细胞相关表面抗原的表达。采用CCK-8(cell counting kit-8)法检测细胞的增殖能力。通过Matrigel三维培养技术诱导间充质干细胞成血管内皮细胞分化,并通过管腔计数及real-time PCR技术比较3种间充质干细胞的成血管内皮细胞分化能力。采用鸡胚绒毛尿囊膜(chick embryo chorioallantoic membrane,CAM)技术观察3种不同间充质干细胞新生血管能力。结果:3种干细胞均阳性表达CD73、CD90、CD105、CD146,阴性表达CD34、CD45,符合间充质干细胞表面标记物的表达规律。SHED和DPSC的CD146表达率多于BMSC,CCK-8法检测显示SHED的增殖能力最强。诱导后的3种细胞均可在Matrigel基质胶上形成管腔样结构,诱导后SHED和BMSC形成的血管总长度大于DPSC,SHED形成的管腔数多于BMSC和DPSC。real-time PCR结果显示几种成血管相关的细胞因子在不同细胞间表达存在差别。诱导后SHED的CD31、VEGFR2、vWF表达显著高于另外两种细胞。BMSC的VEGFR1表达量高于其他组,SHED高于DPSC。VEGF的表达在4组之间差异无统计学意义。3种细胞在CAM上计数新生血管数目显示较空白对照组差异无统计学意义,SHED组血管总长度较空白对照和BMSC大。结论:SHED、DPSC及BMSC均能向成血管内皮细胞方向诱导分化且在Matrigel培养基上形成血管和管腔,SHED具有更强的分化和形成管腔的能力,同时SHED较BMSC及DPSC具有更强的增殖能力。 展开更多

关键词 脱落乳牙牙髓干细胞 牙髓干细胞 颌骨骨髓间充质干细胞 血管内皮细胞分化 细胞增殖

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甲基转移酶METTL3介导m6A甲基化调控犬JBMMSCs成骨分化

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作者 陈翌 蒋丽花 黄旋平 《海南医学院学报》 CAS 北大核心 2024年第11期811-816,823,共7页

目的:探究甲基转移酶METTL3对颌骨骨髓间充质干细胞(Jaw bone marrow mesenchymal stem cells, JBMMSCs)增殖、迁移及成骨分化的影响。方法:体外培养JBMMSCs,慢病毒转染构建沉默METTL3基因细胞模型,转染后siMETTL3组JBMMSCs mRNA水平(P&... 目的:探究甲基转移酶METTL3对颌骨骨髓间充质干细胞(Jaw bone marrow mesenchymal stem cells, JBMMSCs)增殖、迁移及成骨分化的影响。方法:体外培养JBMMSCs,慢病毒转染构建沉默METTL3基因细胞模型,转染后siMETTL3组JBMMSCs mRNA水平(P<0.001)及蛋白水平(P<0.01)下降。检测两组细胞的增殖、迁移、碱性磷酸酶活性、钙沉积以及成骨相关因子骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA及蛋白水平。结果:与沉默对照(siNC)组相比,siMETTL3组培养24、48、72、96 h的增殖活性降低(P<0.001),24 h后细胞迁移能力下降(P<0.05)。成骨诱导7 d后siMETTL3组碱性磷酸酶活性下降,21 d后矿化沉积较siNC组少。qRT-PCR及Western Blot显示,OCN的mRNA(P<0.001)和蛋白(P<0.05)表达水平降低。结论:沉默METTL3可抑制JBMMSCs的增殖、迁移及成骨分化。 展开更多

关键词 METTL3 颌骨骨髓间充质干细胞 成骨分化 m6A甲基化

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绝经后骨质疏松小鼠颌骨骨髓间充质干细胞差异miRNA检测及靶基因分析

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作者 杨杉杉 张为 +1 位作者 胡小华 杨晓红 《上海口腔医学》 CAS 2024年第6期561-571,共11页

目的:通过生物信息学方法探讨绝经后骨质疏松(postmenopausal osteoporosis,POP)小鼠模型颌骨骨髓间充质干细胞(mandibular bone marrow mesenchymstem cells,MBMSCs)的差异miRNA表达谱和miRNA预测靶基因,为POP的诊治和预防提供新的靶... 目的:通过生物信息学方法探讨绝经后骨质疏松(postmenopausal osteoporosis,POP)小鼠模型颌骨骨髓间充质干细胞(mandibular bone marrow mesenchymstem cells,MBMSCs)的差异miRNA表达谱和miRNA预测靶基因,为POP的诊治和预防提供新的靶点。方法:通过卵巢切除术建立绝经后骨质疏松小鼠模型,采用全骨髓贴壁法获取MBMSCs,利用微阵列测序技术对MBMSCs进行芯片检测。随后,对检测结果进行miRNA鉴定和预测分析,并预测miRNA的靶基因。对预测靶基因结果进行基因本体论(GO)分析、基因数据库(KEGG)富集分析以及蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络分析,通过Degree、Betweenness和Closeness等3种算法筛选出关键Hub基因。采用GraphPad Prism 8.0及R语言对数据进行统计学分析。结果:以P<0.05为阈值,获得84个差异表达miRNA,其中,上调33个,下调51个。对84个差异miRNA的预测靶基因mRNA进行GO、KEGG富集分析,发现涉及多种生物学过程及相关通路,其中,130个靶基因mRNA富集于“调节干细胞多能性”的信号通路,对富集于该通路的130个预测靶基因mRNA绘制PPI网络图并进行Hub基因筛选,最终得到可靠度较高的7个Hub基因,分别是Ctnnβ1、Hras、Kras、Akt1、Mapk3、Smad3和Smad2。其中,与OP有显著相关性的基因分别是Ctnnβ1、Akt1、Mapk3、Smad3和Smad2。结论:在POP小鼠MBMSCs细胞中发现的差异miRNA,有可能作为POP潜在的生物标志物,为POP的诊治提供新的思路及理论依据。 展开更多

关键词 绝经后骨质疏松症 颌骨骨髓间充质干细胞 差异miRNA表达谱 生物信息学

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糖尿病骨质疏松来源颌骨骨髓间充质干细胞成骨分化能力的研究

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作者 郑颖 王港 +3 位作者 胡琳 张夏茹 时权 刘洪臣 《中华老年口腔医学杂志》 2024年第2期65-70,共6页

目的探究糖尿病骨质疏松来源颌骨骨髓间充质干细胞(rJBMMSCs)成骨分化能力及生物学特性是否发生改变。方法使用GK大鼠建立糖尿病骨质疏松(DOP)模型,建模成功后取大鼠下颌骨提取细胞,并进行干细胞鉴定,以正常Wistar大鼠作为对照组。CCK-... 目的探究糖尿病骨质疏松来源颌骨骨髓间充质干细胞(rJBMMSCs)成骨分化能力及生物学特性是否发生改变。方法使用GK大鼠建立糖尿病骨质疏松(DOP)模型,建模成功后取大鼠下颌骨提取细胞,并进行干细胞鉴定,以正常Wistar大鼠作为对照组。CCK-8检测细胞增殖能力,平板克隆法检测细胞克隆形成能力,划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞周期。通过碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红(ARS)染色、qRT-PCR以及Westernblot检测其成骨分化能力。结果DOPrJBMMSCs的细胞增殖能力、克隆形成能力、细胞迁移能力均较对照组减弱。ALP染色及活性分析显示DOP组较对照组染色面积小且颜色浅,ALP活性显著降低。ARS染色显示DOP组矿化结节明显较对照组少,其OD值明显小于对照组。qRT-PCR以及Western blot结果显示DOP组的成骨相关因子在mRNA水平及蛋白水平表达均显著下降。结论相较于对照组,DOP rJBMMSCs的生物学特性发生改变,其成骨分化能力明显受损。 展开更多

关键词 糖尿病骨质疏松 颌骨骨髓间充质干细胞 成骨分化 生物学特性 大鼠

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MYSM1对大鼠颌骨骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化能力的影响

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作者 杨琳 杨燕美 +3 位作者 李朋礼 陈琦 胡雅雯 顾斌 《解放军医学院学报》 CAS 2024年第6期659-665,F0003,共8页

背景去泛素化酶能够调控骨骼生长发育,MYSM1基因缺失会造成全身骨骼疏松,当前并无MYSM1对颌骨发育影响的研究。目的探讨MYSM1对颌骨来源的骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响。方法分离10只8周Wistar大鼠下颌骨,利用组织消化法分离培... 背景去泛素化酶能够调控骨骼生长发育,MYSM1基因缺失会造成全身骨骼疏松,当前并无MYSM1对颌骨发育影响的研究。目的探讨MYSM1对颌骨来源的骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响。方法分离10只8周Wistar大鼠下颌骨,利用组织消化法分离培养颌骨骨髓间充质干细胞(jaw bone marrow mesenchymal stem cells,JBMMSCs)。取生长良好的第3~5代JBMMSCs进行成骨诱导,利用qPCR、Western blot技术检测成骨标志物OCN、Runx2、ALP及去泛素化酶MYSM1的变化。分别利用空转染慢病毒和MYSM1敲低的慢病毒转染JBMMSCs,设置对照组和敲低组细胞,qPCR检测敲低效率。CCK-8、细胞克隆形成实验检测其敲低MYSM1对细胞的增殖能力影响,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。空转染慢病毒和敲低MYSM1的JBMMSCs成骨诱导7 d后利用qPCR技术、ALP、茜素红染色检测成骨的表达变化。结果JBMMSCs成骨诱导成功后,MYSM1的mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。CCK-8显示对照组和敲低组的细胞增殖能力无统计学差异(P>0.05),两组间细胞集落形成实验和细胞迁移能力有统计学差异(P<0.05)。敲低组JBMMSCs在成骨诱导7 d后OCN、Runx2、ALP的mRNA表达水平降低(P<0.05),ALP、茜素红染色浅于对照组。结论敲低MYSM1并未对JBMMSs的增殖和迁移能力造成显著影响,而敲低MYSM1的JBMMSCs成骨分化能力降低。 展开更多

关键词 去泛素化酶 MYSM1 颌骨骨髓间充质干细胞 成骨分化 细胞增殖

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颌骨骨髓间充质干细胞成骨分化过程中线粒体功能变化的研究

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作者 薛蕊 江小霞 +4 位作者 张宇 刘留 赵千 刘家霖 徐璐璐 《解放军医学院学报》 CAS 2024年第6期666-672,共7页

背景线粒体对成骨分化起着关键调控作用,但颌骨骨髓间充质干细胞(jaw bone marrow mesenchymal stem cells,JBMMSCs)成骨分化过程中线粒体功能的变化尚不明确。目的探究JBMMSCs成骨分化过程中线粒体功能的变化。方法提取小鼠JBMMSCs进... 背景线粒体对成骨分化起着关键调控作用,但颌骨骨髓间充质干细胞(jaw bone marrow mesenchymal stem cells,JBMMSCs)成骨分化过程中线粒体功能的变化尚不明确。目的探究JBMMSCs成骨分化过程中线粒体功能的变化。方法提取小鼠JBMMSCs进行培养并进行鉴定。采用第3代JBMMSCs接种于孔板内,设置为对照组、成骨诱导3 d组、成骨诱导7 d组;检测ATP含量和柠檬酸合酶活性;RT-qPCR检测线粒体功能相关标志物MFN1、MFN2、NRF1、PGC-1α的mRNA表达;Western blot分析线粒体功能相关标志物MFN1、MFN2、FIS1、COXⅣ的蛋白表达;JC-1染色评估线粒体膜电位。结果提取的JBMMSCs形态呈长梭形,具有三向分化潜能。与对照组相比,成骨诱导7 d时,ATP含量和柠檬酸合酶活性增加(P均<0.05);RT-qPCR结果表明,线粒体功能相关标志物MFN1、MFN2、NRF1、PGC-1α的mRNA表达上调(P<0.05);Western blot结果显示,MFN1、MFN2、FIS1、COXⅣ的蛋白表达上调(P均<0.05);JC-1染色结果证实,线粒体膜电位升高(P<0.05)。结论JBMMSCs成骨分化过程中线粒体功能相关标志物均表达上调,提示线粒体功能增强。 展开更多

关键词 颌骨骨髓间充质干细胞 成骨分化 ATP 线粒体动力学 线粒体生物发生

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糖尿病大鼠颌骨结构及颌骨骨髓间充质干细胞成骨分化的研究 被引量：3

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作者 陆玖青 吕佳姝 +1 位作者 谢亚佳 甄蕾 《口腔颌面外科杂志》 CAS 2020年第3期144-149,共6页

目的:研究糖尿病对大鼠颌骨结构和颌骨来源骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化能力的影响,并初步探讨其可能的机制。方法:采用链脲佐菌素腹腔注射建立大鼠糖尿病模型,正常对照组注射等量柠檬酸-柠檬... 目的:研究糖尿病对大鼠颌骨结构和颌骨来源骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化能力的影响,并初步探讨其可能的机制。方法:采用链脲佐菌素腹腔注射建立大鼠糖尿病模型,正常对照组注射等量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,每周监测血糖。建模成功后8周处死2组大鼠,微型CT(micro-CT)扫描重建上颌骨,测量牙槽骨吸收和颌骨骨形态学参数值。无菌条件下分离2组大鼠下颌骨,获取颌骨BMSCs。CCK-8法检测细胞增殖能力,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和活性测定检测2组细胞ALP表达,茜素红染色和定量分析检测2组细胞钙结节形成能力,实时荧光定量PCR检测成骨相关基因Runx2和OCN的mRNA表达,western blot检测NF-κB p65核蛋白表达。结果:与正常对照组相比,糖尿病组大鼠牙槽骨吸收增加(P<0.05),颌骨骨体积分数(bone volume/total volume,BV/TV)降低(P<0.05),骨小梁数目(trabecular number,Tb.N)减少(P<0.05),骨小梁间隙(trabecular space,Tb.Sp)增加(P<0.05)。成功分离、培养糖尿病大鼠颌骨来源的BMSCs,与正常大鼠颌骨BMSCs相比,细胞增殖能力降低(P<0.05),ALP活性和钙结节形成减少(P<0.05),成骨相关基因Runx2和OCN mRNA表达下降(P<0.05),NF-κB p65核蛋白表达增多(P<0.05)。结论:糖尿病可影响大鼠颌骨结构,降低颌骨BMSCs成骨分化能力,机制可能与NF-κB信号通路激活相关。 展开更多

关键词 糖尿病 颌骨骨髓间充质干细胞 增殖 成骨分化 NF-ΚB信号通路

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神经生长因子对小鼠颌骨骨髓间充质干细胞增殖、迁移、分化及凋亡的影响 被引量：2

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作者 王雅迪 刘一涵 +4 位作者 张鹤扬 徐振华 刘水蓉 江小霞 贺慧霞 《解放军医学院学报》 CAS 北大核心 2023年第5期541-548,共8页

背景神经生长因子(nerve growth factor,NGF)是神经营养因子中的一类,能够促进中枢及外周神经元加速生长,修复损伤的神经系统,有研究证实NGF能促进中胚层来源的长骨骨髓间充质干细胞的成骨分化及骨形成,而NGF对外胚层来源的颌骨骨髓间... 背景神经生长因子(nerve growth factor,NGF)是神经营养因子中的一类,能够促进中枢及外周神经元加速生长,修复损伤的神经系统,有研究证实NGF能促进中胚层来源的长骨骨髓间充质干细胞的成骨分化及骨形成,而NGF对外胚层来源的颌骨骨髓间充质干细胞(jaw bone marrow mesenchymal stem cells,JBMMSCs)生物学特性的影响尚不明确。目的探讨NGF对JBMMSCs增殖、迁移、分化及凋亡特性的影响。方法原代培养小鼠JBMMSCs并鉴定。取第二代JBMMSCs加入含50 ng/mL NGF培养液孵育72h后,通过CCK-8、qRT-PCR、Western blot及免疫荧光(immunofluorescence,IF)等方法检测细胞增殖及其相关标志物MCM-2、Ki67的表达;qRT-PCR、Western blot检测凋亡相关标志物Bcl-3、Bax的表达;划痕实验检测JBMMSCs迁移能力;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色、qRT-PCR、Western blot及IF检测成骨相关标志物表达。结果CCK-8结果显示,50 ng/mL NGF可显著增强JBMMSCs第3天及第5天的OD值,Western blot及IF结果显示,50 ng/mL NGF可显著增强JBMMSCs中增殖标志物Ki67、MCM-2的蛋白水平;划痕实验结果显示,50 ng/mL NGF可显著提高JBMMSCs的迁移率,有效缩小各个时间点的划痕面积;50 ng/mL NGF可有效增强JBMMSCs的碱性磷酸酶活性,上调ALP、OCN、RUNX2、BMP2的mRNA表达水平及ALP、OCN、BMP2、OPN、RUNX2的蛋白水平;此外,50 ng/mL NGF还可上调Bcl-2的mRNA及蛋白表达水平,下调Bax的mRNA及蛋白表达水平。结论50 ng/mL NGF能有效提高JBMMSCs增殖、迁移及成骨分化能力,同时抑制其凋亡。 展开更多

关键词 颌骨骨髓间充质干细胞 神经生长因子 增殖 凋亡 迁移 干细胞成骨分化

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2型糖尿病对大鼠颌骨骨髓间充质干细胞生物学特性的影响及其机制研究 被引量：2

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作者 李天琪 孟祥博 +4 位作者 霍娜 蔡川 李帅臣 周孙欣 张彤 《解放军医学院学报》 CAS 北大核心 2023年第4期372-379,387,共9页

背景2型糖尿病患者骨代谢异常,颌骨骨质和骨量都发生明显改变,是牙周炎的全身促进因素之一。Wnt信号通路可以促进干细胞矿化并修复骨组织缺损。然而2型糖尿病影响下Wnt信号通路是否参与了对颌骨骨髓间充质干细胞(jaw bone marrow mesenc... 背景2型糖尿病患者骨代谢异常,颌骨骨质和骨量都发生明显改变,是牙周炎的全身促进因素之一。Wnt信号通路可以促进干细胞矿化并修复骨组织缺损。然而2型糖尿病影响下Wnt信号通路是否参与了对颌骨骨髓间充质干细胞(jaw bone marrow mesenchymal stem cells,JBMMSCs)的成骨分化调控仍未可知。目的研究2型糖尿病对大鼠JBMMSCs增殖及分化等生物学特性的影响,并对其机制进行初步探索。方法选取连续两周随机血糖≥16.7mmoL/L的13周龄GK大鼠为2型糖尿病组,相同周龄的Wistar大鼠作为对照组,两组各10只;无菌条件下采用骨髓冲洗法与骨片消化法相结合的方法分离培养两组JBMMSCs作为研究对象。CCK-8法检测并比较两组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞被诱导凋亡的能力。对JBMMSCs进行成骨、成脂诱导后,qRT-PCR评估成骨、成脂及Wnt信号通路相关基因的表达改变,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测成骨诱导后ALP的表达变化,茜素红染色比较钙结节形成能力,油红O染色检测成脂诱导后脂滴形成能力。结果与对照组相比,2型糖尿病组JBMMSCs的增殖及克隆形成能力降低,凋亡早期与晚期的细胞比例增加(P<0.05)。两组JBMMSCs成骨诱导后成骨相关基因ALP、OCN和Runx2 mRNA表达升高,但2型糖尿病组低于对照组(P<0.05),2型糖尿病组钙结节形成能力和ALP染色面积及密度较对照组低(P<0.05)。成脂诱导后,成脂相关基因的表达和脂滴的形成较对照组减少(P<0.05)。2型糖尿病组JBMMSCs成骨诱导7 d后Wnt信号通路相关分子Wnt4、Wnt5a、Wnt7b的mRNA表达较对照组升高,β-catenin的表达水平较对照组低。结论2型糖尿病影响大鼠颌骨骨髓间充质干细胞的增殖和克隆、抑制成骨及成脂分化能力,其成骨能力的降低可能与Wnt信号通路相关。 展开更多

关键词 2型糖尿病 颌骨骨髓间充质干细胞 成骨分化 WNT信号通路 GK大鼠

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