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人源鞘氨醇-1-磷酸裂解酶载体构建及表达分析
1
作者 徐凯 邱军强 +2 位作者 Willemijn Passtoors 张庆华 吴方 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期16-20,共5页
目的:为深入研究作为疾病靶点的人源鞘氨醇-1-磷酸裂解酶(hSPL)的功能及机制,构建原核表达载体以表达得到具有活性的hSPL用于后续的研究。方法:首先将hSPL基因的全长(SPL-C)和跨膜区外的截短片段(SPL-T)构建到pET28b表达载体。用Western... 目的:为深入研究作为疾病靶点的人源鞘氨醇-1-磷酸裂解酶(hSPL)的功能及机制,构建原核表达载体以表达得到具有活性的hSPL用于后续的研究。方法:首先将hSPL基因的全长(SPL-C)和跨膜区外的截短片段(SPL-T)构建到pET28b表达载体。用Western Blot和酶活检测比较大肠杆菌JM109、DH5α、Rosetta(DE3)、BL21(DE3)4种感受态细胞的表达情况。结果:成功构建hSPL原核表达载体,SPL-T在大肠杆菌Rosetta(DE3)和BL21(DE3)高表达,并且具有很强的活力。结论:得到在大肠杆菌Rosetta(DE3)和BL21(DE3)表达具有活力的hSPL-T裂解液上清,为下一步深入研究hSPL的酶学性质提供了很好的研究基础。 展开更多
关键词 鞘氨醇-1-磷酸裂解酶 鞘氨醇-1-磷酸盐 表达载体 原核表达 活性
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鞘氨醇1磷酸酯裂解酶1突变对小鼠脂类和脂肪代谢的影响
2
作者 刘世博 余璐 王辉 《新乡医学院学报》 CAS 2019年第3期201-205,共5页
目的探讨鞘氨醇1磷酸酯裂解酶1(SGPL1)突变对小鼠脂类和脂肪代谢的影响。方法 8只野生型(WT)小鼠(WT组)和4只SGPL1^(-/-)小鼠(SGPL1^(-/-)组)正常饮食喂养5周,每周称体质量。2组小鼠禁食12 h后分别采用葡萄糖耐量试验(GTT)和胰岛素耐量... 目的探讨鞘氨醇1磷酸酯裂解酶1(SGPL1)突变对小鼠脂类和脂肪代谢的影响。方法 8只野生型(WT)小鼠(WT组)和4只SGPL1^(-/-)小鼠(SGPL1^(-/-)组)正常饮食喂养5周,每周称体质量。2组小鼠禁食12 h后分别采用葡萄糖耐量试验(GTT)和胰岛素耐量试验(ITT)检测小鼠对胰岛素的敏感性。于第6周麻醉小鼠进行眼球取血,采用酶联免疫吸附试验检测小鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)水平。脊椎脱臼处死小鼠,解剖分离皮下脂肪组织(SAT)和附睾脂肪组织(EAT)并称其质量,计算SAT、EAT与体质量的比值;采用苏木精-伊红染色观察脂肪组织形态学变化,实时荧光定量聚合酶链反应检测小鼠脂肪组织中脂肪合成相关基因乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)、固醇调节元件结合蛋白1C(SREBP-1C)及脂肪分解相关基因羧酸酯酶1(CES1)、激素敏感脂肪酶(HSL)、脂蛋白脂酶(LPL)和脂肪酸氧化基因肉毒碱棕榈酰转移酶1(CPT1)、脂代谢调控基因过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPAR-γ) mRNA表达。结果 0～5周,WT组小鼠体质量呈缓慢增加趋势,SGPL1^(-/-)组小鼠体质量呈逐渐下降趋势。SGPL1^(-/-)组小鼠血清TC、TG、LDL、HDL水平均显著高于WT组(P <0. 05),SGPL1^(-/-)组小鼠SAT、EAT质量及其与体质量的比值均显著低于WT组(P <0. 05)。GTT、ITT结果显示,2组小鼠0、15、30、60、90、120 min时血糖水平比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。SGPL1^(-/-)组小鼠脂肪组织中FAS、SREBP-1C、CES1、HSL、LPL、CPT1和PPAR-γmRNA表达均显著高于WT组(P <0. 05),2组小鼠脂肪组织中ACC mRNA表达比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 SGPL1突变后小鼠血清脂类代谢紊乱,脂肪组织减少,脂肪合成和分解相关基因表达明显上调。 展开更多
关键词 鞘氨醇1磷酸酯裂解酶1 脂肪代谢 脂肪酸合成酶 脂蛋白脂酶
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