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人端粒酶催化亚单位启动子调控自杀基因HSV-TK肿瘤细胞特异性表达载体的构建 被引量：4
1
作者 唐小军 王艳萍 +2 位作者 周清华 车国卫 陈小禾 《生命科学研究》 CAS CSCD 2007年第3期273-278,共6页
将自杀基因TK插入质粒pGL3--hTp和pGL3-Control中,取代其上的荧光素酶基因,分别构建hTERT启动子和SV40启动子调控的TK基因表达质粒pGL3-hTp-TK和pGL3-SV40-TK,酶切和PCR鉴定结果显示重组质粒pGL3-hTp-TK和pGL3-SV40-TK构建成功;用脂质... 将自杀基因TK插入质粒pGL3--hTp和pGL3-Control中,取代其上的荧光素酶基因,分别构建hTERT启动子和SV40启动子调控的TK基因表达质粒pGL3-hTp-TK和pGL3-SV40-TK,酶切和PCR鉴定结果显示重组质粒pGL3-hTp-TK和pGL3-SV40-TK构建成功;用脂质体法将pGL3-hTp-TK和pGL3-SV40-TK瞬时转染端粒酶阳性的人肺腺癌细胞株A549及端粒酶阴性的人胚肺成纤维细胞株MRC-5,RT-PCR显示转染pGL3-SV40-TK的细胞A549和MRC-5均有TK mRNA表达,转染pGL3-hTp-TK的A549细胞中也有TK mRNA表达,但转染pGL3-hTp-TK的MRC-5细胞无TK mRNA表达.提示hTERT启动子可以调控自杀基因HSV-TK在肺癌细胞中靶向表达,可能是肿瘤靶向性基因治疗中比较理想的转录调控元件. 展开更多
关键词 肺癌 自杀基因 端粒酶催化亚单位 靶向性表达
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hTERT启动子调控osm基因表达在体外的抑癌作用 被引量：5
2
作者 杨义军 郑晓飞 +3 位作者 朱捷 吕星 罗瑛 孙志贤 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第6期575-578,共4页
背景与目的:肿瘤基因治疗中基因特异表达具有重要意义,构建特异表达载体是肿瘤基因治疗的基础。本研究探讨端粒酶催化亚基(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)启动子调控抑瘤素(oncostatinM,osm)基因在端粒酶阳性肿瘤细胞中表... 背景与目的:肿瘤基因治疗中基因特异表达具有重要意义,构建特异表达载体是肿瘤基因治疗的基础。本研究探讨端粒酶催化亚基(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)启动子调控抑瘤素(oncostatinM,osm)基因在端粒酶阳性肿瘤细胞中表达的特异性,以及osm对肿瘤细胞增殖的影响。方法:构建phTERT-osm表达载体,瞬时转染肿瘤细胞;采用RT-PCR法检测外源基因表达,用MTT法检测osm基因表达对肿瘤细胞生长的影响。结果:hTERT启动子调控osm基因在端粒酶阳性HepG2细胞中明显表达,而在正常人胚肺成纤维细胞(humanembryoniclungfibroblast,HEL)中未见表达。osm的表达对端粒酶阳性HepG2、HeLa、Glc和A549细胞的增殖有明显的抑制作用,抑制率为12.4%～46.0%;而对端粒酶阴性的HEL细胞没有明显的影响。结论:hTERT启动子在端粒酶阳性肿瘤细胞中能明显激活phTERT-osm载体表达osm,并抑制肿瘤细胞的生长。 展开更多
关键词 HTERT基因 启动子 osm基因 抑癌基因 端粒酶 肿瘤杀伤基因 靶向性表达 基因治疗
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人端粒酶催化亚单位启动子调控自杀基因HSV-TK靶向性表达治疗肺癌的体内外实验研究 被引量：3
3
作者 王艳萍 唐小军 +3 位作者 周清华 车国卫 陈小禾 朱大兴 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期701-705,共5页
目的研究人类单纯疱疹病毒的胸苷激酶(HSV-TK)/更昔洛韦(GCV)治疗系统在人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子的调控下对肺癌细胞A549的体外靶向性增殖抑制作用和对裸鼠体内A549移植瘤的治疗效果。方法1用已构建的hTERT启动子和SV40启动子... 目的研究人类单纯疱疹病毒的胸苷激酶(HSV-TK)/更昔洛韦(GCV)治疗系统在人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子的调控下对肺癌细胞A549的体外靶向性增殖抑制作用和对裸鼠体内A549移植瘤的治疗效果。方法1用已构建的hTERT启动子和SV40启动子调控的TK基因表达质粒pGL3-hTp-TK和pGL3-SV40-TK转染端粒酶阳性的人肺腺癌细胞A549及端粒酶阴性的人胚肺细胞MRC-5,RT-PCR方法检测转染细胞中TK基因的表达情况;2MTT法检测GCV对上述转染细胞体外增殖的抑制作用;并应用流式细胞仪检测GCV对上述转染细胞凋亡的影响;3将A549细胞接种于裸鼠皮下,研究pGL3-hTp-TK/GCV和pGL3-SV40-TK/GCV对移植瘤的体内生长抑制作用。结果1转染pGL3-SV40-TK的A549和MRC-5细胞均有TK mRNA表达,转染pGL3-hTp-TK的A549细胞也有TK mRNA表达,但MRC-5细胞无TK mRNA表达;2GCV对转染pGL3-SV40-TK的A549、MRC-5细胞和转染pGL3-hTp-TK的A549细胞的体外增殖均有明显抑制作用,对转染pGL3-hTp-TK的MRC-5细胞无明显抑制作用;转染pGL3-SV40-TK和pGL3-hTp-TK的A549细胞经GCV处理后细胞凋亡指数(分别为21.58%和23.19%)均显著高于转染pGL3-hTp的A549细胞及空白对照,转染pGL3-SV40-TK的MRC-5细胞凋亡指数(9.35%)显著高于对照组,而转染pGL3-hTp-TK的MRC-5细胞凋亡指数(0.88%)无明显升高;3pGL3-SV40-TK/GCV和pGL3-hTp-TK/GCV治疗系统对裸鼠A549移植瘤的生长具有明显抑制作用,抑瘤率分别为46.7%和40.5%,均显著高于各阴性对照组(分别为9.7%,14.3%,7.0%和8.0%)。结论hTERT启动子可以调控HSV-TK基因在肺癌细胞中靶向性表达,HSV-TK/GCV治疗系统在hTERT启动子调控下对肺癌细胞A549的体外增殖和裸鼠体内的移植瘤生长均有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 肺癌 自杀基因 端粒酶催化亚单位 靶向性表达
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TK基因治疗胃肠道肿瘤的研究进展 被引量：2
4
作者 刘占奎 张超 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第7期1064-1067,共4页
胃癌是我国人群中发病率和死亡率均占第一位的恶性肿瘤,近年来大肠癌的发病率呈明显上升趋势.胃肠道肿瘤的治疗以手术治疗为主,同是辅以化疗,但化疗对肿瘤非特异性,敏感性低,全身副作用大,效果欠佳,5 a生存率在50%左右.肿瘤的基因治疗... 胃癌是我国人群中发病率和死亡率均占第一位的恶性肿瘤,近年来大肠癌的发病率呈明显上升趋势.胃肠道肿瘤的治疗以手术治疗为主,同是辅以化疗,但化疗对肿瘤非特异性,敏感性低,全身副作用大,效果欠佳,5 a生存率在50%左右.肿瘤的基因治疗是近年来研究的热点,尤其是TK基因治疗胃肠道肿瘤的研究取得了令人瞩目的成就,本文收集国内外近期文献,就TK基因的作用机制、载体、靶向性表达、旁观者效应以及其在胃肠道肿瘤的应用进行了综述. 展开更多
关键词 TK基因治疗 胃肠道肿瘤 逆转录病毒 靶向性表达 腺相关病毒
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hTERT启动子的克隆及hTERT启动子/SV40增强子在食管癌细胞中的转录活性 被引量：1
5
作者 唐小军 戴天阳 +1 位作者 廖斌 詹福生 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1230-1233,共4页
目的克隆hTERT启动子核心序列,研究hTERT启动子/SV40增强子在食管癌细胞中的联合转录活性。方法以人基因组DNA为模板,PCR扩增hTERT启动子核心片段;将其分别插入荧光素酶基因报告质粒pGL3-Basic和pGL3-Enhancer中,构建hTERT启动子调控的... 目的克隆hTERT启动子核心序列,研究hTERT启动子/SV40增强子在食管癌细胞中的联合转录活性。方法以人基因组DNA为模板,PCR扩增hTERT启动子核心片段;将其分别插入荧光素酶基因报告质粒pGL3-Basic和pGL3-Enhancer中,构建hTERT启动子调控的表达载体pGL3-hTERTp和由hTERT启动子/SV40增强子联合调控的表达载体pGL3-hTERTp-SV40en,将上述重组质粒分别瞬时转染食管癌细胞Eca-109、EC1和人胚肺成纤维细胞MRC-5,用荧光素酶检测试剂盒检测转染细胞中荧光素酶基因的表达水平并以此计算hTERT启动子和hTERT启动子/SV40增强子在各种细胞中的转录活性。结果克隆出长213bp的hTETR启动子核心片段,DNA测序结果与GenBank中hTERT启动子的碱基序列完全一致;成功构建真核表达载体pGL3-hTER-Tp和pGL3-hTERTp-SV40en;hTETR启动子在食管癌细胞Eca-109和EC1中均有转录活性,在MRC-5细胞中无明显转录活性;hTERT启动子/SV40增强子在食管癌细胞Eca-109和EC1中的转录活性显著高于hTETR启动子的单独转录活性。结论 hTERT启动子在食管癌细胞中具有靶向性转录活性,SV40增强子能显著增强hTERT启动子在食管癌细胞中的转录活性,有可能作为肿瘤靶向性基因治疗的转录调控元件。 展开更多
关键词 HTERT 启动子 SV40增强子 食管癌 靶向性表达
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腺病毒介导的CD基因在人胰腺癌细胞中的靶向性表达 被引量：1
6
作者 张世能 袁世珍 《中山医科大学学报》 CSCD 2000年第3期176-178,共3页
【目的】探讨腺病毒介导的大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶 (E .coliCD)基因在胰腺癌细胞中靶向性表达的可能性及其作用。【方法】将含癌胚抗原 (carcinoembryonicantigenCEA)启动子的重组腺病毒感染人胰腺癌SW1990细胞 (CEA+ )、Capan 2细胞 (CE... 【目的】探讨腺病毒介导的大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶 (E .coliCD)基因在胰腺癌细胞中靶向性表达的可能性及其作用。【方法】将含癌胚抗原 (carcinoembryonicantigenCEA)启动子的重组腺病毒感染人胰腺癌SW1990细胞 (CEA+ )、Capan 2细胞 (CEA-)和人宫颈癌Hela细胞 ,观察CD基因在 3种细胞中的表达及细胞对 5 FC的敏感性差异。【结果】腺病毒介导CD基因仅在SW1990细胞中呈专一性表达 ,转导CD基因的SW1990细胞对 5 FC的敏感性明显提高。【结论】含CEA启动子的CD基因疗法可能是胰腺癌靶向性基因治疗的可行途径。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 腺病毒 CD基因 基因治疗 靶向性表达
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hTERT启动子调控的异种抗原基因α-1,3GT表达载体的构建及其在肺癌细胞中的靶向表达 被引量：1
7
作者 朱圣明 郑鸿 +5 位作者 秦凤 王宇 王竹 骆志国 丁珺 王艳萍 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期452-457,共6页
目的:构建人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子调控的异种移植抗原α-1,3半乳糖基转移酶(α-1,3galactosyltransferase,α-1,3GT)基因真核表达载体,研究其调控的α-1,3GT在肿瘤细胞中的靶向表达。方... 目的:构建人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子调控的异种移植抗原α-1,3半乳糖基转移酶(α-1,3galactosyltransferase,α-1,3GT)基因真核表达载体,研究其调控的α-1,3GT在肿瘤细胞中的靶向表达。方法:将前期克隆并测序正确的猪α-1,3GT基因定向克隆到pEGFP-hTERTp质粒中,构建α-1,3GT真核表达载体pEGFP-hTERTp-GT。分别将pEGFP-hTERTp-GT和CMV启动子调控的α-1,3GT真核表达质粒pEGFP-N1-GT转染端粒酶阳性的人肺癌细胞A549及端粒酶阴性的正常人胚肺成纤维细胞MRC-5。RT-PCR检测转染细胞中α-1,3GTmRNA的表达,免疫荧光法和流式细胞仪检测α-gal抗原的表达。结果:成功构建了pEGFP-hTERTp-GT真核表达载体。转染pEGFP-N1-GT的A549和MRC-5中均有α-1,3GTmRNA的表达;转染pEGFP-hTERTp-GT的A549中有α-1,3GTmRNA的表达,而端粒酶阴性的MRC-5细胞中无α-1,3GTmRNA的表达。转染pEGFP-N1-GT的A549和MRC-5中均可表达异种移植抗原α-gal;转染pEGFP-hTER-Tp-GT质粒的A549中有α-gal的表达,而MRC-5细胞中无α-gal的表达(P<0.01)。结论:hTERT启动子调控的α-1,3GT基因能靶向性表达在端粒酶阳性的肺癌细胞中,并合成异种移植抗原α-gal。 展开更多
关键词 人端粒酶逆转录酶 肺肿瘤 α-半乳糖基 α-1 3半乳糖基转移酶 靶向性表达
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肿瘤特异性结核抗原Ag85A基因慢病毒表达载体构建 被引量：1
8
作者 王小勇 廖斌 +4 位作者 于海清 刘高华 李多 肖琳琳 唐小军 《中国胸心血管外科临床杂志》 CAS CSCD 2015年第11期1050-1055,共6页
目的构建小鼠端粒酶催化亚单位启动子(murine telomerase catalytic subunit promoter,PmTERT)调控的结核杆菌抗原基因Ag85A肿瘤特异性慢病毒表达载体,为肿瘤靶向性免疫基因治疗的研究奠定基础。方法用聚合酶链式反应(polymerase chain ... 目的构建小鼠端粒酶催化亚单位启动子(murine telomerase catalytic subunit promoter,PmTERT)调控的结核杆菌抗原基因Ag85A肿瘤特异性慢病毒表达载体,为肿瘤靶向性免疫基因治疗的研究奠定基础。方法用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法克隆PmTERT用荧光素酶(luciferase)活性检测方法研究PmTERT在小鼠和人肿瘤细胞及正常细胞中的转录活性。通过核酸分子克隆方法分别构建巨细胞病毒(cytomegalo virus,CMV)启动子和PmTERT调控的Ag85A基因慢病毒表达载体并用基因测序和Western blot方法对重组载体进行鉴定。结果本研究克隆的331 bp大小的PmTERT在小鼠Lewis肺癌细胞、人A549肺癌细胞、EC-109食管癌细胞中均有转录活性在小鼠NIH3T3胚胎成纤维细胞和人MRC-5胚肾成纤维细胞中无转录活性;成功构建分别由CMV启动子和PmTERT调控的Ag85A基因慢病毒表达载体pLVX-Ag85A-CMV和pLVXAg85A-PmTERT;感染pLVX-Ag85A-CMV的Lewis细胞和NIH3T3细胞均有Ag85A蛋白表达感染pLVX-Ag85APmTERT的Lewis细胞有Ag85A表达感染pLVX-Ag85A-PmTERT的NIH3T3细胞无g85A表达。结论PmTERT具有肿瘤特异性转录活性,其驱动的结核杆菌抗原基因可以在肿瘤细胞中靶向性表达。 展开更多
关键词 肿瘤 免疫基因治疗 端粒酶催化亚单位启动子 靶向性表达 结核杆菌抗原Ag85A
原文传递
hTERT启动子核心序列的克隆及其在肺癌细胞中靶向转录活性的研究
9
作者 唐小军 廖斌 詹福生 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第6期466-467,共2页
背景与目的构建人端粒酶催化亚单位（hTERT）启动子核心片段调控的绿色荧光蛋白（EGFP）基因表达质粒，并初步研究hTERT启动子在肺癌细胞和正常细胞中的转录活性。 方法以人胚肾293细胞（HEK293）基因组DNA为模板，应用PCR方法，克隆hT... 背景与目的构建人端粒酶催化亚单位（hTERT）启动子核心片段调控的绿色荧光蛋白（EGFP）基因表达质粒，并初步研究hTERT启动子在肺癌细胞和正常细胞中的转录活性。 方法以人胚肾293细胞（HEK293）基因组DNA为模板，应用PCR方法，克隆hTERT启动子核心片段，将其插入无启动子的绿色荧光蛋白（EGFP）基因报告质粒载体pEGFP—1的多克隆位点中，构建成hTETR启动子调控的EGFP表达质粒pEGFP—1—hTERTp；用脂质体转染法将pEGFP—1—hTERTp分别转染肺癌细胞A549和人胚肺成纤维细胞MRC-5，观察hTERT启动子在上述细胞中的转录活性。 展开更多
关键词 人端粒酶催化亚单位 启动子 肺癌 靶向性表达 绿色荧光蛋白
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