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血吸虫疫苗候选抗原-谷胱甘肽S转移酶(GST)抗原的研究近况
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作者 蔡志红 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 1994年第1期60-62,共3页
GST为一组具有解毒功能的酶。曼氏血吸虫及日本血吸虫水溶性26-28KD蛋白质抗原具有GST酶活性。这类蛋白质抗原被认为是目前很有希望的血吸虫疫苗候选抗原。本文就近年来对血吸虫GST的研究情况作一概述:1理化性质;2免疫学特性;3基因克隆... GST为一组具有解毒功能的酶。曼氏血吸虫及日本血吸虫水溶性26-28KD蛋白质抗原具有GST酶活性。这类蛋白质抗原被认为是目前很有希望的血吸虫疫苗候选抗原。本文就近年来对血吸虫GST的研究情况作一概述:1理化性质;2免疫学特性;3基因克隆及表达等。 展开更多
关键词 候选抗原 GST 蛋白质抗原 疫苗研制 免疫学特性 童虫 谷胱甘肽 融合蛋白 基因克隆 免疫原性
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大豆脱水应答元件结合蛋白(GmDREB1)的非融合原核表达及纯化 被引量:2
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作者 宫照龙 卓勤 +2 位作者 吴景欢 朴建华 杨晓光 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期392-398,共7页
目的大豆脱水应答元件结合蛋白(GmDREB1转录因子)基因是应用于转基因小麦中增强其耐旱、盐碱的基因,本研究拟探索获得与天然蛋白GmDREB1一致的蛋白表达纯化方法,以获得足量的蛋白纯品,为该外源蛋白的安全性评价奠定基础。方法将GmDREB1... 目的大豆脱水应答元件结合蛋白(GmDREB1转录因子)基因是应用于转基因小麦中增强其耐旱、盐碱的基因,本研究拟探索获得与天然蛋白GmDREB1一致的蛋白表达纯化方法,以获得足量的蛋白纯品,为该外源蛋白的安全性评价奠定基础。方法将GmDREB1基因克隆到原核表达载体pBV220中,构建重组表达载体pBV220-GmDREB1,转化E.coli DH5a进行诱导表达,通过优化GmDREB1基因密码子、改善诱导表达条件及选择合适的表达载体等实现目的蛋白的高效表达,对表达产物进行阳离子交换和分子筛等层析纯化,对获得的纯化蛋白进行序列、活性及免疫原性等测定。结果含序列优化目的基因的重组载体pBV220-GmDREB1转化E.coliDH5a后,经42℃诱导表达2小时,获得了以可溶性为主的GmDREB1蛋白,经层析纯化获得了与天然目的蛋白一致的蛋白纯品。结论利用本研究方法可得到在N端序列、活性及免疫原性等方面与天然GmDREB1蛋白一致的目的蛋白。 展开更多
关键词 转基因小麦 GmDREB1 转录因子 融合蛋白 原核表达 纯化 安全性评价
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人工合成人表皮生长因子在大肠杆菌中的表达
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作者 余榕捷 林剑 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 2002年第2期1-6,共6页
目的 :在大肠杆菌中高效表达人表皮生长因子 (hEGF) ,并探索提高外源基因在pET - 3c :BL(DE3)表达系统的表达水平的途径。方法 :根据大肠杆菌对密码的偏爱性 ,合成编码 5 3个氨基酸的hEGF基因 ,分别以非融合蛋白和融合蛋白两种方式表达... 目的 :在大肠杆菌中高效表达人表皮生长因子 (hEGF) ,并探索提高外源基因在pET - 3c :BL(DE3)表达系统的表达水平的途径。方法 :根据大肠杆菌对密码的偏爱性 ,合成编码 5 3个氨基酸的hEGF基因 ,分别以非融合蛋白和融合蛋白两种方式表达。计算机分析两者mRNA的翻译起始区 (translationinitiationregion ,TIR)的结构。结果 :融合蛋白表达产量为 2 7%,非融合蛋白的表达用SDS -PAGE检测不到 ,两者均具有促细胞增殖的活性。融合蛋白mRNA的TIR的ΔG值较非融合蛋白的高。结论 :在pET - 3c :BL2 1(DE3)大肠杆菌表达系统中 ,以融合蛋白方式表达人表皮生长因子 ,表达效率高且不影响其活性。此外 ,mRNA的TIR的结构可能是影响外源基因在本研究的表达系统的表达效率的一个重要因素。 展开更多
关键词 人表皮生长因子 融合蛋白 融合蛋白 大肠杆菌表达系统
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IL-13融合蛋白表达载体与非融合蛋白表达载体的构建与比较
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作者 王文 孙汭 +4 位作者 田志刚 王郡甫 刘杰 张建华 刘钟瑸 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 1997年第5期224-228,共5页
采用RT-PCR技术直接从激活的健康人外周血单个核细胞中扩增得到hIL-13的基因片段,通过DNA重组技术分别将其插入到含有PRPL启动子的高效表达载体pBV220及含tac启动子、lac1阻遏蛋白基因及凝血酶识别位点的融合蛋白表达载体pGEX-4T-... 采用RT-PCR技术直接从激活的健康人外周血单个核细胞中扩增得到hIL-13的基因片段,通过DNA重组技术分别将其插入到含有PRPL启动子的高效表达载体pBV220及含tac启动子、lac1阻遏蛋白基因及凝血酶识别位点的融合蛋白表达载体pGEX-4T-2中,成功地构建了hIL-13的原核非融含蛋白表达菌株hIL-13-PBV220/DHS5a及融合蛋白表达菌株hIL-13-PGEX-4T-2/TG1,分别经42℃热诱导及异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)化学诱导后,SDS-PAGE结果表明IL-13仅以GST融合蛋白的形式在E.coli中获得了表达,表达量约占菌体蛋白总量的10%~30%。IL-13的蛋白单体在原核细胞中表达量很低。 展开更多
关键词 IL-13 融合蛋白 融合蛋白 表达载体
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prk基因非融合表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达 被引量:1
5
作者 江汕 冯振卿 +3 位作者 江千里 李玉华 徐玮 管晓虹 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期341-343,共3页
目的:构建prk基因的非融合表达载体,并诱导表达。方法:PCR扩增并回收prk基因片段,将其与亚克隆载体pMD18-T重组,通过蓝/白斑筛选、酶谱分析和序列测定鉴定出重组质粒,然后从该重组质粒上切下prk基因片段,再克隆至非融合表达载体pBV220中... 目的:构建prk基因的非融合表达载体,并诱导表达。方法:PCR扩增并回收prk基因片段,将其与亚克隆载体pMD18-T重组,通过蓝/白斑筛选、酶谱分析和序列测定鉴定出重组质粒,然后从该重组质粒上切下prk基因片段,再克隆至非融合表达载体pBV220中,酶谱分析鉴定出正向重组质粒,诱导含有正向重组质粒的宿主菌表达蛋白,提取全菌总蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。结果:成功构建并筛选出pBV220正向重组质粒,经热诱导表达,得到一可溶性的相对分子质量为65ku的重组蛋白。结论:pBV220-prk表达载体的成功构建和表达,说明扩增所得的基因具有正确的阅读框架,使获得天然Prk蛋白成为可能,为进一步研究prk基因的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 prk基因 激酶 基因表达 融合蛋白
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恶性疟原虫多表位重组疫苗在大肠杆菌中的表达及纯化 被引量:1
6
作者 陈白虹 李明 +1 位作者 吴岚晓 赖声礼 《广东医学》 CAS CSCD 2000年第5期365-367,共3页
目的 在体外表达和纯化目的蛋白 ,为下一步抗攻击试验提供安全有效的产品。方法 将化学合成的恶性疟原虫保护性抗原复合基因 (HGFSP)与表达载体pRSET重组 ,在大肠杆菌BL2 1进行表达 :工程菌经超声破菌、离心、离子交换层析、疏水层析... 目的 在体外表达和纯化目的蛋白 ,为下一步抗攻击试验提供安全有效的产品。方法 将化学合成的恶性疟原虫保护性抗原复合基因 (HGFSP)与表达载体pRSET重组 ,在大肠杆菌BL2 1进行表达 :工程菌经超声破菌、离心、离子交换层析、疏水层析、分子筛层析等步骤纯化。结果 SDS -PAGE显示表达产物以非融合、可溶性的形式表达 ,相对分子质量为 2 3kDa ,占总菌体蛋白的 2 3 65 % ;纯度可达 95 %以上。Western -blot分析表明表达产物具有免疫原性。结论 成功构建pRSET -HGFSP重组表达系统并得到高效表达 。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 融合蛋白 多表位重组疫苗
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RTA和RTA-KEEL/KDEL基因的表达及细胞毒性 被引量:1
7
作者 廖鹏 马青原 +4 位作者 刘文森 万家余 邢丽杰 李吉平 高宏伟 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第6期475-478,共4页
目的构建蓖麻毒素A链(RTA)和RTA-KEEL/KDEL基因表达载体,并检测重组蛋白的细胞毒性作用。方法用PCR法从蓖麻毒素基因组中扩增出RTA及RTA-KEEL/KDEL基因,连接T载体,测序正确后,定向插入质粒pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-RTA和pE... 目的构建蓖麻毒素A链(RTA)和RTA-KEEL/KDEL基因表达载体,并检测重组蛋白的细胞毒性作用。方法用PCR法从蓖麻毒素基因组中扩增出RTA及RTA-KEEL/KDEL基因,连接T载体,测序正确后,定向插入质粒pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-RTA和pET-28a-RTA-KEEL/KDEL,转化感受态E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行鉴定。结果所表达的RTA及RTA-KEEL/KDEL非融合蛋白经SDS-PAGE分析,相对分子质量约为31000,Westernblot分析具有反应原性,MTS法检测,RTA-KEEL/KDEL对CHO细胞具有比RTA更强的杀伤作用。结论已成功构建RTA和RTA-KEEL/KDEL表达载体,表达的重组蛋白具有生物学活性。 展开更多
关键词 蓖麻毒素A链 融合蛋白 原核表达 细胞毒性
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抗日本血吸虫(中国大陆株)基因工程苗的研究进展
8
作者 施福恢 《畜牧兽医科技信息》 1997年第9期2-3,共2页
我所与英国伦敦大学Taylor教授合作对日本血吸虫病疫苗特别是基因工程苗进行了研究。通过派出去、请进来和会议交流等各种形式,至今我所对目前较有希望成为日本血吸虫候选疫苗已能进行基因克隆和蛋白质表达的如酶类:Sj28GST;肌球蛋白类:... 我所与英国伦敦大学Taylor教授合作对日本血吸虫病疫苗特别是基因工程苗进行了研究。通过派出去、请进来和会议交流等各种形式,至今我所对目前较有希望成为日本血吸虫候选疫苗已能进行基因克隆和蛋白质表达的如酶类:Sj28GST;肌球蛋白类:C-Sjr97kD paramyosin;表膜蛋白类:H-Sj23kD大亲水区等,并进行实验动物绵羊和黄、水牛的保护效果试验,取得了较好的减虫和减卵效果。通过1993年荷兰莱登会议。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 中国大陆株 基因工程苗 抗日本血吸虫 基因克隆 家蚕核型多角体病毒 副肌球蛋白 融合蛋白 GST基因 蛋白
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非融合rIL-24蛋白的制备及活性鉴定
9
作者 杨珺 张小贤 +1 位作者 张卫军 邹全明 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期289-293,共5页
目的制备非融合的rIL-24蛋白,鉴定其体外诱导肿瘤细胞凋亡活性。方法为制备非融合IL-24蛋白,将IL-24基因插入到pET32a(+)上KpnⅠ与BamHⅠ之间,构建表达载体IL-24/pET32a,IPTG诱导在E.coliBL21(DE3)中表达。洗涤后的包涵体溶解在2 mol/L... 目的制备非融合的rIL-24蛋白,鉴定其体外诱导肿瘤细胞凋亡活性。方法为制备非融合IL-24蛋白,将IL-24基因插入到pET32a(+)上KpnⅠ与BamHⅠ之间,构建表达载体IL-24/pET32a,IPTG诱导在E.coliBL21(DE3)中表达。洗涤后的包涵体溶解在2 mol/L尿素(pH9.0)中,采用镍离子亲和色谱和凝胶分子筛的二步法纯化,肠激酶酶切(肠激酶与蛋白1∶400,pH7.5处理36 h),再用亲和柱色谱纯化制备非融合的rIL-24。MTT法和形态学观察分析rIL-24体外诱导肿瘤细胞凋亡的活性。结果重组工程菌以包涵体形式表达出相对分子质量约为35 000的融合蛋白。包涵体经洗涤、溶解及二步纯化得到纯度大于95%的Trx-IL-24。融合蛋白用肠激酶酶切之后,经亲和色谱制备得到纯度大于98%的非融合蛋白rIL-24。rIL-24显著诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡(P<0.05),而对正常人肺成纤维细胞NHLF没有影响。结论IL-24基因在E.coli中高效表达,并获得高纯度、在体外明显诱导乳腺癌细胞凋亡的非融合蛋白rIL-24,预示其具有肿瘤治疗应用的前景。 展开更多
关键词 rIL-24 融合蛋白 纯化 诱导肿瘤细胞凋亡
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恶性疟原虫疫苗研究Ⅹ.MSP1中类表皮生长因子1与PfCMR基因在大肠杆菌中的表达及其产物的初步鉴定
10
作者 李学荣 余新炳 +3 位作者 罗树红 陈观今 徐劲 方建民 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1998年第3期9-12,共4页
目的克隆并表达恶性疟原虫重组复合抗原,为疟疾疫苗研究奠定基础。方法将恶性疟原虫MSP1中类表皮生长因子1(EGF—1)基因与人工化学合成的抗原复合基因PfCMR串接,插入高效非融合型蛋白表达载体PBV220,转化大肠杆菌DH5a.转化菌经42... 目的克隆并表达恶性疟原虫重组复合抗原,为疟疾疫苗研究奠定基础。方法将恶性疟原虫MSP1中类表皮生长因子1(EGF—1)基因与人工化学合成的抗原复合基因PfCMR串接,插入高效非融合型蛋白表达载体PBV220,转化大肠杆菌DH5a.转化菌经42℃热诱导表达,表达产物用Westernblot和Dot—ELISA分析。结果构建成功重组质粒PBV220/PfCMR—EGF─1,经热诱导后表达出合外源基因产物的非融合蛋白质,分子量为16.5kDa,表达产物与恶性疟原虫抗原免疫鼠血清产生特异免疫反应。工程菌连续传代,未见重组质粒丢失,表达效率无明显改变。结论用表达载体pBV220表达出的恶性疟原虫重组复合抗原具有一定的免疫活性。该重组质粒可在宿主菌DH5a内长期稳定存在。 展开更多
关键词 恶性 疟原虫 复合基因 融合蛋白 疟疾疫苗
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重组恶性疟多表位杂合蛋白在大肠杆菌中的表达
11
作者 陈白虹 李明 +1 位作者 张宏斌 赖声礼 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2000年第3期129-134,共6页
将化学合成的恶性疟原虫保护性抗原复合基因 ( HGFSP)与表达载体 p RSET重组并转化大肠杆菌BL2 1 ,工程菌经 IPTG诱导后 ,HGFSP得到高效表达。 SDS- PAGE结果显示表达产物以非融合、可溶性的形式表达 ,分子量为 2 3k Da,占总菌体蛋白的 ... 将化学合成的恶性疟原虫保护性抗原复合基因 ( HGFSP)与表达载体 p RSET重组并转化大肠杆菌BL2 1 ,工程菌经 IPTG诱导后 ,HGFSP得到高效表达。 SDS- PAGE结果显示表达产物以非融合、可溶性的形式表达 ,分子量为 2 3k Da,占总菌体蛋白的 2 3.65%。Dot- ELISA和 Western- blot分析表明表达产物具有免疫原性。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 融合蛋白 表达疫苗 大肠杆菌
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白细胞间素的现状及未来
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作者 王克恭 《兽医导刊》 1993年第3期34-38,共5页
从1968年由 Dumonde 首次提出淋巴因子的概念后,人们愈来愈意识到免疫效应介质(习惯上常叫作淋巴因子,这是一个总称,其中包括具有各种功能的活性物质,因其效应功能的差异,分别给以不同的名称。)在介导机体免疫中起着重要的作用。70年代... 从1968年由 Dumonde 首次提出淋巴因子的概念后,人们愈来愈意识到免疫效应介质(习惯上常叫作淋巴因子,这是一个总称,其中包括具有各种功能的活性物质,因其效应功能的差异,分别给以不同的名称。)在介导机体免疫中起着重要的作用。70年代末随着分子生物学和分子免疫学的发展,人们已能确定并纯化多种对免疫效应细胞和其他机体细胞具有广泛调节作用的效应介质。 展开更多
关键词 免疫效应 效应功能 淋巴因子 机体细胞 免疫应答 活性物质 抗原提呈细胞 细胞因子 融合蛋白 杀伤细胞
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牛肠激酶轻链在大肠杆菌中的非融合表达及生物学活性分析
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作者 王京红 于晓甜 +2 位作者 唐铭泽 杨洪鸣 唐金宝 《药物生物技术》 CAS 2019年第1期1-4,共4页
该研究尝试利用大肠杆菌表达体系以非融合蛋白形式表达牛肠激酶轻链(EK_(LC))。利用基因重组技术构建重组表达载体p6×His-D_4K-EK_(LC)并转化至E. coli DH5α,37℃过夜培养,超声破壁法释放菌体蛋白并收集包涵体,考察包涵体在不同... 该研究尝试利用大肠杆菌表达体系以非融合蛋白形式表达牛肠激酶轻链(EK_(LC))。利用基因重组技术构建重组表达载体p6×His-D_4K-EK_(LC)并转化至E. coli DH5α,37℃过夜培养,超声破壁法释放菌体蛋白并收集包涵体,考察包涵体在不同浓度下的复性效率。复性后的目的蛋白经金属离子亲和层析纯化,并以EK_(LC)自切方式移除重组EK_(LC)的N-端6×His-D_4K序列得到具有天然N-端氨基酸序列的EK_(LC),酶活性测定结果显示该研究所制备的重组EK_(LC)高于商品化牛肠激酶。重组EK_(LC)在大肠杆菌中非融合表达成功,为实现EK_(LC)的经济、高效制备研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 重组牛肠激酶轻链 大肠杆菌 融合蛋白 表达 包涵体 活性分析
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产姜黄素大肠杆菌工程菌的构建 被引量:4
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作者 张乐 丁宁 +6 位作者 海燕 闫雅茹 李娜 李赛男 屠鹏飞 刘晓 史社坡 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期2077-2084,共8页
姜黄素是姜科植物的特征性成分,具有重要的药理活性。文中利用姜黄素生物合成关键酶β-酮酰辅酶A合酶(Diketide-CoA synthase,DCS)基因和姜黄素合酶(Curcumin synthase,CURS)基因构建非天然融合基因DCS::CURS,并将其与4-香豆酰辅酶A连接... 姜黄素是姜科植物的特征性成分,具有重要的药理活性。文中利用姜黄素生物合成关键酶β-酮酰辅酶A合酶(Diketide-CoA synthase,DCS)基因和姜黄素合酶(Curcumin synthase,CURS)基因构建非天然融合基因DCS::CURS,并将其与4-香豆酰辅酶A连接酶(4-coumarate coenzyme A ligase,4CL)和乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl coenzyme A carboxylase,ACC)基因共同引入大肠杆菌Escherichia coli,构建由阿魏酸合成姜黄素的工程大肠杆菌,利用LB培养基和改良的M9培养基进行两步发酵。通过对生长培养阶段诱导蛋白表达方法和发酵培养阶段接种菌体量、培养基组成及发酵培养时间等条件的优化,并在发酵培养阶段加入大孔吸附树脂降低产物在培养液中的累积等方法,姜黄素的合成产率达到386.8mg/L。本研究首次将非天然融合基因DCS::CURS用于合成姜黄素工程菌的构建,得到了姜黄素产率较高的大肠杆菌菌株,为后续通过进一步复杂的代谢网络优化、构建姜黄素合成能力更强的工程菌提供参考。 展开更多
关键词 大肠杆菌 姜黄素 天然融合蛋白 工程菌
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以柞蚕NPV为载体在柞蚕蛹体内表达外源基因获得成功
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作者 范琦 《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第8期5-5,共1页
辽宁省农科院大连生物技术研究所张春发等人利用柞蚕核型多角体病毒(ApNpV)组建成转移载体,并以此载体携带外源基因(人白细胞介素-4、DE糖蛋白)在草地贪夜蛾Sf9昆虫细胞、柞蚕卵巢细胞以及柞蚕蛹活体中表达成功。实验表明,表达产物的确... 辽宁省农科院大连生物技术研究所张春发等人利用柞蚕核型多角体病毒(ApNpV)组建成转移载体,并以此载体携带外源基因(人白细胞介素-4、DE糖蛋白)在草地贪夜蛾Sf9昆虫细胞、柞蚕卵巢细胞以及柞蚕蛹活体中表达成功。实验表明,表达产物的确以非融合蛋白形式出现,从而建立了柞蚕NpV载体—柞蚕蛹活体宿主表达系统。这是继菌苜蓿纹夜蛾核多角体病毒(AcNpV)—Sf9细胞载体表达系统和家蚕核多角体病毒(BmNpV)——家蚕幼虫载体表达系统以后又一个昆虫杆状病毒载体达表系统。 展开更多
关键词 柞蚕蛹 外源基因 NPV 载体表达 昆虫细胞 杆状病毒 表达产物 融合蛋白 卵巢细胞 转移载体
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骨唾液蛋白非融合荧光蛋白载体的构建及其在特异性骨转移乳腺癌细胞中的稳定表达 被引量:3
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作者 杜红延 王捷 +3 位作者 郭勇 郑霖 杨静 刘大志 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期410-412,共3页
目的构建骨唾液蛋白(BSP)非融合荧光表达载体,建立稳定高效表达BSP和荧光蛋白的乳腺癌细胞系,为进一步研究BSP在乳腺癌细胞骨转移中的作用奠定基础。方法从构建好的pB hBSP载体中用PCR方法扩增hBSP基因,通过BglⅡ和PstⅠ两个限制性酶切... 目的构建骨唾液蛋白(BSP)非融合荧光表达载体,建立稳定高效表达BSP和荧光蛋白的乳腺癌细胞系,为进一步研究BSP在乳腺癌细胞骨转移中的作用奠定基础。方法从构建好的pB hBSP载体中用PCR方法扩增hBSP基因,通过BglⅡ和PstⅠ两个限制性酶切位点定向克隆至真核表达载体pIRES2EGFP,构建重组载体pIRES2hBSP EGFP。利用脂质体转染的方法将构建好的重组质粒转入特异性骨转移的乳腺癌细胞株MDA MB231BO中,并利用G418和流式细胞仪筛选阳性克隆。结果成功构建hB SP和EGFP非融合表达的真核表达载体pIRES2hBSP EGFP,并成功转染特异骨转移的乳腺癌细胞株,获得hBSP的稳定转染细胞株,荧光显微镜下可观察到荧光蛋白标记。结论真核表达载体pIRES2hBSP EGFP的构建及hBSP稳定转染细胞株的获得为研究BSP在乳腺癌骨转移中的作用奠定了的基础。 展开更多
关键词 骨唾液蛋白 荧光蛋白 乳腺癌细胞 基因转染 稳定表达 融合荧光蛋白载体 特异性骨转移
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