口蹄疫病毒非结构蛋白P3区的基因序列及分析 被引量：5

1

作者 刘在新 赵启祖 +6 位作者 张显升 江鹏斐 常惠芸 陈应理 李冬 魏怀录 谢庆阁 《中国病毒学》 CSCD 2002年第2期153-157,共5页

以口蹄疫Akesu/ 5 8分离株的 5 3代牛舌皮病料为材料 ,采用RT PCR法 ,扩增和克隆了两个约 1.5kb的DNA片段。核酸序列测得结果对接后 ,涵盖了全部P3区的基因序列。口蹄疫Akesu/ 5 8分离株基因组P3区的核酸序列共计 2 ,72 4nt,包括一个终... 以口蹄疫Akesu/ 5 8分离株的 5 3代牛舌皮病料为材料 ,采用RT PCR法 ,扩增和克隆了两个约 1.5kb的DNA片段。核酸序列测得结果对接后 ,涵盖了全部P3区的基因序列。口蹄疫Akesu/ 5 8分离株基因组P3区的核酸序列共计 2 ,72 4nt,包括一个终止密码子TAA ,共编码 90 7个氨基酸 ;其中非结构蛋白 3A的基因是 45 9nt,编码 15 3个氨基酸 ;3个 3B(VPg)基因分别是 6 9、72和 72nt,氨基酸分别为 2 3、2 4和 2 4;3C是 6 39nt,2 13个氨基酸 ;3D是1,413nt ,471个氨基酸。各蛋白间由Glu/Gly(Ser)连接。序列比较显示 :3A的C端易变 。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白p3区 基因序列

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抗丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3单链抗体的制备及免疫组织化学研究 被引量：27

2

作者 钟彦伟 王松山 +3 位作者 赵景民 成军 张玲霞 李莉 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期186-188,共3页

目的　研制抗丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3的人源噬菌体单链抗体 ,并探讨其在临床诊断中的应用价值。方法　以重组的丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3为固相抗原 ,利用亲和筛选的原理 ,从噬菌体抗体库中经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛... 目的　研制抗丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3的人源噬菌体单链抗体 ,并探讨其在临床诊断中的应用价值。方法　以重组的丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3为固相抗原 ,利用亲和筛选的原理 ,从噬菌体抗体库中经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验 (ELISA)、斑点免疫杂交试验和DNA序列分析 ,获得HCVNS3的人源单链抗体 ;用该抗体与不同来源的HCVNS3抗原进行反应 ;对 10例石蜡包埋的丙型肝炎患者肝组织进行免疫组化鉴定。结果　ELISA结果表明 ,所制备的HCVNS3人源单链抗体能与不同来源的HCVNS3抗原特异性结合 (吸光度A值为1 38) ;免疫组化结果表明 ,该抗体能够特异性识别丙型肝炎患者肝组织HCVNS3抗原 ,与正常肝组织及乙型肝炎病毒 (HBV)的表面抗原均无交叉反应。结论　此法制备的单链抗体亲和性好 ,特异性强 ,且制备方法简便 ,周期短 。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白NS3 单链抗体 免疫组织化学

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3反式激活SV40病毒早期启动子的研究 被引量：15

3

作者 刘妍 成军 +5 位作者 牟劲松 陆荫英 王建军 李克 王琳 张玲霞 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期44-46,共3页

聚合酶链反应(PCR)扩增丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3基因 ,克隆至真核表达载体pcDNA3 1(- )中 ,构建HCV　NS3基因真核表达载体 pcDNA3 1(- ) NS3;以该质粒转染肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞 ,免疫印迹方法 (Westernblotting)检测转染... 聚合酶链反应(PCR)扩增丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3基因 ,克隆至真核表达载体pcDNA3 1(- )中 ,构建HCV　NS3基因真核表达载体 pcDNA3 1(- ) NS3;以该质粒转染肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞 ,免疫印迹方法 (Westernblotting)检测转染细胞中HCVNS3蛋白的瞬时表达 ;与报告质粒pCAT3 promoter共转染HepG2细胞 ,用酶联免疫吸附方法 (ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶 (CAT)的表达活性。结果显示 ,质粒pcDNA3 1(- ) NS3在HepG2细胞瞬时表达HCVNS3蛋白 ,共转染实验中pcDNA3 1(- ) NS3组的CAT表达活性是空质粒对照组的 4 6倍。表明构建的表达载体能在哺乳动物细胞中表达出相应蛋白 ,并能够反式激活SV4 0病毒早期启动子。本研究为进一步克隆HCVNS3蛋白反式激活的靶基因 。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白NS3 反式激活 SV40病毒 早期启动子

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3反式激活基因6的克隆化研究 被引量：6

4

作者 邵清 成军 +5 位作者 白雪帆 王琳 张健 梁耀东 刘敏 李强 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2003年第3期245-247,共3页

目的　丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 3 (NS3 )是一种具有显著反式激活作用的病毒蛋白质。为了探索HCVNS3病毒蛋白反式激活作用的新的靶基因 ,我们应用微矩阵 (microarray)技术对于转染和末转染的肝母细胞瘤细胞系HepG2进行分析。研究... 目的　丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 3 (NS3 )是一种具有显著反式激活作用的病毒蛋白质。为了探索HCVNS3病毒蛋白反式激活作用的新的靶基因 ,我们应用微矩阵 (microarray)技术对于转染和末转染的肝母细胞瘤细胞系HepG2进行分析。研究结果将有助于阐明HCV感染相关疾病的发病机制。方法　根据HCV H病毒株序列设计、合成序列特异性的引物。以含有全长HCV H株cDNA的pBRTM 3 0 11质粒DNA作为模板 ,进行多聚酶链反应 (PCR)扩增 ,获得的HCVNS3编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定 ,构建真核表达载体pcDNA3 .1(-) NS3。以pcDNA3 .1(-) NS3转染肝母细胞瘤细胞系HepG2 ,提取总RNA ,逆转录为cDNA后进行表达谱基因芯片分析。应用分子生物学技术 ,结合生物信息学技术 (bioinformatics) ,克隆HCVNS3反式激活作用的新的靶基因。结果　构建了真核表达载体pcDNA3 .1(-) NS3 ,经过限制性内切酶作图分析和核苷酸序列分析证实正确无误。以pcDNA3 .1(-) NS3转染HepG2后提取总RNA ,逆转录后进行表达谱基因芯片技术分析。应用分子克隆技术结合生物信息学技术克隆NS3反式激活的新型靶基因 ,命名为NS3TP6,新基因的编码基因序列全长为 414个核苷酸 (nt) ,编码产物由 13 8个氨基酸残基 (aa)组成。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白NS3 反式激活 基因克隆化 微矩阵

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登革2型病毒NS3蛋白NTPase/RNA解旋酶结构域的原核表达及活性研究 被引量：4

5

作者 陈亚洁 李劲松 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期890-894,共5页

目的表达登革病毒非结构蛋白NS3 NTPase/RNA解旋酶结构域(dNS3),纯化表达产物并对其活性作初步研究。方法提取感染登革2型病毒的BHK221细胞总RNA,RT2PCR扩增目的基因,经NcoⅠ、HindⅢ双酶切后连入表达载体pET28a,转化宿主菌BL21(DE3),... 目的表达登革病毒非结构蛋白NS3 NTPase/RNA解旋酶结构域(dNS3),纯化表达产物并对其活性作初步研究。方法提取感染登革2型病毒的BHK221细胞总RNA,RT2PCR扩增目的基因,经NcoⅠ、HindⅢ双酶切后连入表达载体pET28a,转化宿主菌BL21(DE3),优化诱导表达条件,SDS-PAGE和免疫印迹鉴定表达蛋白。表达产物经亲和层析纯化,超滤浓缩脱盐,孔雀绿钼酸铵法检测NTPase活性。结果成功构建重组表达载体pET28a2dNS3并在大肠杆菌中获得可溶性表达,纯化产物经测定具有良好的NTPase活性及抗原性。体外条件下证实登革2型病毒非结构蛋白NS5(RDRP)对dNS3的ATPase活性有促进作用,提示在病毒复制时NS3与NS5间的相互作用对NS3的生物活性及对病毒复制过程可能具有调控作用。结论本研究为基于抑制NS3 NTPase/RNA解旋酶活性的抗病毒药物的筛选提供了实验依据。 展开更多

关键词 登革病毒 非结构蛋白NS3 NTpASE 原核表达

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3抗原模拟表位的筛选和鉴定st 被引量：3

6

作者 钟彦伟 成军 +6 位作者 王刚 田小军 陈新华 李克 李莉 张玲霞 陈菊梅 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期93-96,共4页

目的　筛选丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3(HCVNS3)特异性噬菌体模拟表位 ,为抗 HCV的疫苗研究探索新途径。方法　以抗 HCVNS3的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工合成的噬菌体随机七肽库进行 3轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ... 目的　筛选丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3(HCVNS3)特异性噬菌体模拟表位 ,为抗 HCV的疫苗研究探索新途径。方法　以抗 HCVNS3的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工合成的噬菌体随机七肽库进行 3轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ,随机挑取 6 0个克隆 ,经噬菌体酶联免疫吸附法 (ELISA)鉴定并进行交叉反应实验以及竞争抑制性结合实验 ,最后对所选克隆进行DNA序列分析 ,以确定HCVNS3抗原的模拟表位。结果　经噬菌体富集后 ,从随机筛选的 6 0个克隆中得到 13个阳性克隆 ,确定氨基酸序列SRNTxKL为HCVNS3的模拟表位。结论　用噬菌体七肽库成功筛选得到HCVNS3的模拟表位。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白NS3抗原 模拟表位 疫苗研究 丙型肝炎 治疗

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牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白NS3的研究进展 被引量：3

7

作者 侯佩莉 孙涛 何洪彬 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第5期68-72,共5页

非结构蛋白NS3是致细胞病变型牛病毒性腹泻病毒的分子标记蛋白,它具有多种生物学功能。研究结果表明,NS3在病毒非结构蛋白的加工、成熟、基因组复制与转录过程中以及宿主细胞致细胞病变效应的产生中起重要作用。文章总结了NS3的生物学... 非结构蛋白NS3是致细胞病变型牛病毒性腹泻病毒的分子标记蛋白,它具有多种生物学功能。研究结果表明,NS3在病毒非结构蛋白的加工、成熟、基因组复制与转录过程中以及宿主细胞致细胞病变效应的产生中起重要作用。文章总结了NS3的生物学特性及其相关功能,为阐明NS3的致细胞病变作用机理奠定基础。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 非结构蛋白NS3 产生机制 细胞凋亡

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丙型肝炎病毒NS3蛋白生物学功能研究进展 被引量：1

8

作者 王志鹏 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1006-1007,共2页

关键词 丙型肝炎病毒 功能研究进展 NS3蛋白 非结构蛋白NS3 慢性丙型肝炎 HCV复制 生物学功能 生命健康 持续感染 肝细胞癌 宿主细胞 研究热点 进展综述 微生物 肝硬化

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HCV NS3及其对信号转导途径的影响 被引量：2

9

作者 牟劲松 刘妍 《国外医学（流行病学．传染病学分册）》 2002年第6期342-345,共4页

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3(HCV NS3)在HCV多聚蛋白的成熟和病毒复制过程中发挥了重要作用,同时通过蛋白质之间的相互作用,对肝细胞的生长、代谢,甚至恶性转化产生影响。本文就HCV NS3及其对信号转导途径的影响作了综述。

关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白NS3 信号转导 基因结构

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丙型肝炎病毒蛋白作用于细胞信号转导途径的研究进展 被引量：1

10

作者 薛梅 代解杰 夏雪山 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2009年第6期470-474,共5页

细胞信号转导异常往往与人类疾病的发生、发展密切相关。一些病毒致病和感染机制即为病毒抗原蛋白作用宿主细胞信号转导途径,导致宿主细胞内信号转导发生紊乱。丙型肝炎病毒(HCV)是引发慢性丙型肝炎,导致肝硬化和肝细胞癌发生的主要病原... 细胞信号转导异常往往与人类疾病的发生、发展密切相关。一些病毒致病和感染机制即为病毒抗原蛋白作用宿主细胞信号转导途径,导致宿主细胞内信号转导发生紊乱。丙型肝炎病毒(HCV)是引发慢性丙型肝炎,导致肝硬化和肝细胞癌发生的主要病原体,但目前HCV的致病机制与宿主内持续感染机制尚不清楚。HCV致病机制可能与HCV表达的蛋白质干扰宿主细胞信号转导途径而导致异常的细胞信号转导有关。研究HCV蛋白对宿主细胞信号转导途径的影响不仅有助于阐明其致病机制,还能为新药设计和寻找新的治疗方法提供新思路和新靶点。本文主要综述了近年来国内外有关HCV蛋白作用细胞信号转导途径的研究进展。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 细胞信号转导 核心蛋白 包膜蛋白E2 非结构蛋白NS3 非结构蛋白NS5A

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戊型肝炎病毒ORF3蛋白对人肝癌细胞中Ⅰ型干扰素及ISG15蛋白表达的影响 被引量：1

11

作者 黄莹 田德英 张振纲 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2017年第3期161-163,178,共4页

目的:探讨基因Ⅲ型戊型肝炎病毒(HEV)非结构蛋白开放阅读框3(ORF3)对体外培养的人肝癌PLC/PRF/5细胞中Ⅰ型干扰素(IFN-α和IFN-β)及干扰素刺激基因(ISG)15蛋白表达的影响。方法:分别用基因Ⅲ型戊型肝炎病毒ORF3质粒及空载质粒转染PLC/P... 目的:探讨基因Ⅲ型戊型肝炎病毒(HEV)非结构蛋白开放阅读框3(ORF3)对体外培养的人肝癌PLC/PRF/5细胞中Ⅰ型干扰素(IFN-α和IFN-β)及干扰素刺激基因(ISG)15蛋白表达的影响。方法:分别用基因Ⅲ型戊型肝炎病毒ORF3质粒及空载质粒转染PLC/PRF/5细胞,在转染之后不同时间点(0h,8h,12h,24h,48h,72h,120h),用ELISA方法检测细胞上清液中Ⅰ型干扰素的含量,并用Western blot方法检测ISG15蛋白的表达。结果:ORF3组细胞上清液中IFN-α、β的水平均比空载组及空白组升高,而空载组与空白组之间无明显改变。并且ORF3组细胞中ISG15蛋白的表达增加,而空载组与空白组无明显改变。结论:基因Ⅲ型HEV的非结构蛋白ORF3促进Ⅰ型干扰素(IFN-α和IFN-β)及ISG15蛋白的表达。 展开更多

关键词 肝炎 戊型 病毒 非结构蛋白ORF3 Ⅰ型干扰素 干扰素刺激基因15

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柯萨奇B4病毒非结构蛋白P_2C重组质粒的构建 被引量：1

12

作者 高久春 黄红兰 李凡 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期583-585,共3页

目的:构建柯萨奇B4病毒非结构蛋白P2C重组质粒。方法:用RT-PCR技术,从柯萨奇B4病毒中钓取非结构蛋白P2CcDNA片段,克隆入PUCm-T载体,转化大肠杆菌DH5α,构建重组质粒。结果:以柯萨奇B4病毒的总RNA为模板,扩增出987bp大小的片段,克隆入PUC... 目的:构建柯萨奇B4病毒非结构蛋白P2C重组质粒。方法:用RT-PCR技术,从柯萨奇B4病毒中钓取非结构蛋白P2CcDNA片段,克隆入PUCm-T载体,转化大肠杆菌DH5α,构建重组质粒。结果:以柯萨奇B4病毒的总RNA为模板,扩增出987bp大小的片段,克隆入PUCm-T载体,用BamHⅠ、HindⅢ双酶切鉴定,与非结构蛋白P2C的PCR扩增产物片段大小一致。结论:成功地构建了柯萨奇B4病毒非结构蛋白P2C重组质粒。 展开更多

关键词 柯萨奇B4病毒(CVB4) 1型糖尿病 非结构蛋白p2C 重组质粒

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3的研究进展

13

作者 寇小格 梁东良 +2 位作者 雷艳君 袁育康 范桂香 《国外医学（病毒学分册）》 2001年第6期173-177,共5页

丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 NS3共有 6 31个氨基酸组成 ,具有丝氨酸蛋白酶和三磷酸核苷酶 (NTPase)和螺旋酶 (Helicase)的功能 ,在 HCV多聚蛋白的成熟和病毒复制过程中发挥重要作用。非结构蛋白NS3具有较强的免疫原性和抗原性 ,是检... 丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 NS3共有 6 31个氨基酸组成 ,具有丝氨酸蛋白酶和三磷酸核苷酶 (NTPase)和螺旋酶 (Helicase)的功能 ,在 HCV多聚蛋白的成熟和病毒复制过程中发挥重要作用。非结构蛋白NS3具有较强的免疫原性和抗原性 ,是检测 HCV感染的主要抗原之一。近年的研究发现 NS3内部的裂解产物更具有致癌潜能。此外 ,NS3蛋白还参与 NS5 A的超磷酸化修饰过程等。 展开更多

关键词 NTpASE HELICASE 丙型肝炎病毒 非结构蛋白VS3

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SARS冠状病毒非结构蛋白质NSP3突变体构建及其对类泛素分子DUB活性 被引量：1

14

作者 杨星星 邢雅玲 +1 位作者 陈晓娟 陈忠斌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1061-1069,共9页

SARS冠状病毒(SARS-CoV)非结构蛋白NSP3编码的木瓜蛋白酶样蛋白酶(PLpro)对泛素样分子(Ubl)具有去泛素化酶(DUB)活性,但目前有关NSP3 DUB活性研究的报道甚少.本研究构建包含Nsp3基因N末端不同结构域的突变体,并检测NSP3及其一系列突变... SARS冠状病毒(SARS-CoV)非结构蛋白NSP3编码的木瓜蛋白酶样蛋白酶(PLpro)对泛素样分子(Ubl)具有去泛素化酶(DUB)活性,但目前有关NSP3 DUB活性研究的报道甚少.本研究构建包含Nsp3基因N末端不同结构域的突变体,并检测NSP3及其一系列突变体对类泛素分子ISG15和SUMO所修饰蛋白质分子的作用特性.实验结果表明,NSP3及其突变体NSP3AD,NSP3AE,NSP3AF具有一定的去ISG15活性,而其突变体NSP3AC则没有去ISG15(DeISGylation)活性.研究结果提示,SARS NSP3具有一定的体内去ISG15活性,并且这种活性主要依赖于Nsp3基因编码的PLpro.但SARS NSP3及其突变体NSP3AC,NSP3AD,NSP3AE和NSP3AF并不具有去SUMO(DeSUMOylation)活性.SARS冠状病毒NSP3对类泛素样分子作用特性的研究为后续NSP3的生物学特性及其对干扰素通路的调控研究奠定了基础. 展开更多

关键词 SARS冠状病毒 非结构蛋白质3(NSp3) 去泛素化酶(DUB) 干扰素刺激基因15 (ISGl5) SUMO

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由蛋白底物到丙肝药物西米匹韦

15

作者 郭宗儒 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1353-1356,共4页

新药创制是复杂的智力活动,涉及科学研究、技术创造、产品开发和医疗效果等多维科技活动。每个药物都有自身的研发轨迹,而构建化学结构是最重要的环节,因为它涵盖了药效、药代、安全性和生物药剂学等性质。本栏目以药物化学视角,对有代... 新药创制是复杂的智力活动,涉及科学研究、技术创造、产品开发和医疗效果等多维科技活动。每个药物都有自身的研发轨迹,而构建化学结构是最重要的环节,因为它涵盖了药效、药代、安全性和生物药剂学等性质。本栏目以药物化学视角,对有代表性的药物的成功构建,加以剖析和解读。西米匹韦是继特拉匹韦与波西匹韦(本刊2014,7:1084-1088;2014,8:1208-1210)FDA批准的第三个丙肝治疗药,虽然作用靶标相同,但结构类型为大环化合物,不含有亲电性基团,不与酶发生共价结合。本品也是以酶的裂解产物多肽为起始物,但由六肽演化成非肽性口服药物的过程中,进行了药物化学、结构生物学、分子模拟、有机合成等多学科领域的研究,体现了新药研究的鲜明个性、复杂性和风险性。 展开更多

关键词 丝氨酸蛋白酶 非结构蛋白NS3 药物 丙肝 丙型病毒性肝炎 NS4A蛋白 裂解产物 底物

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3致肝癌机制的研究进展

16

作者 李琪 徐可树 《临床肝胆病杂志》 CAS 2005年第4期257-259,共3页

大量研究显示丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)持续感染肝细胞能导致肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC),但其致癌机制目前还不十分清楚.HCV是一种RNA病毒,其基因组不能整合到宿主染色体中引起基因突变,可能是通过其表达的蛋... 大量研究显示丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)持续感染肝细胞能导致肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC),但其致癌机制目前还不十分清楚.HCV是一种RNA病毒,其基因组不能整合到宿主染色体中引起基因突变,可能是通过其表达的蛋白质引起细胞转化.由于HCV NS3含有多种蛋白酶活性,因而推测HCV NS3在肝细胞癌的形成过程中具有重要作用,本文就HCV NS3致癌机制的研究进展作一综述. 展开更多

关键词 非结构蛋白NS3 丙型肝炎病毒 carcinoma 肝癌 肝细胞癌 致癌机制 RNA病毒 蛋白酶活性 HCV

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牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白p7 的克隆和原核表达纯化

17

作者 付强 郭妍婷 +1 位作者 杨莉 史慧君 《中国畜禽种业》 2021年第5期43-45,共3页

为了对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)p7蛋白进行表达和纯化,本研究开展p7基因克隆、原核表达载体构建和原核表达分析。依据GenBank数据库中BVDV毒株NADL的p7基因设计引物,以BVDV NADL的cDNA为模版,PCR扩增p7基因,测序鉴定后将其克隆至pCold-MB... 为了对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)p7蛋白进行表达和纯化,本研究开展p7基因克隆、原核表达载体构建和原核表达分析。依据GenBank数据库中BVDV毒株NADL的p7基因设计引物,以BVDV NADL的cDNA为模版,PCR扩增p7基因,测序鉴定后将其克隆至pCold-MBP原核表达载体中;优化蛋白诱导的IPTG浓度,过夜低温诱导p7蛋白表达,并使用Ni-TED琼脂糖树脂进行蛋白纯化。结果显示,成功克隆p7基因,与GenBank数据库中p7基因同源性100%;成功构建pCold-MBP-p7载体;IPTG浓度为1.2mM时诱导效果最佳;成功表达和纯化MBP-p7融合蛋白。结论:诱导表达纯化获得MBP-p7融合蛋白,为后续构建p7蛋白的多克隆和单克隆抗体提供重要的材料和平台。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 非结构蛋白p7 基因克隆 原核表达纯化

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慢性病毒性肝炎抗病毒治疗的发展方向

18

作者 成军 《继续医学教育》 2006年第7期8-11,共4页

关键词 慢性病毒性肝炎 抗病毒治疗 聚乙二醇化干扰素 非结构蛋白NS3 慢性乙型肝炎 慢性丙型肝炎 利巴韦林 阿德福韦酯 病毒学应答 核苷类似物

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应用抑制性消减杂交技术克隆丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3反式激活的相关基因 被引量：20

19

作者 牟劲松 刘妍 +6 位作者 王刚 成军 段惠娟 李克 陆荫英 王琳 王惠芬 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第4期399-403,共5页

目的:应用抑制性消减杂交技术(SSH)构建丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白3(NS3)反式激活的相关基因cDNA消减文库,克隆HCV NS3反式激活相关基因。方法:以HCV NS3表达质粒pcDNA3.1(-)-NS3转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后... 目的:应用抑制性消减杂交技术(SSH)构建丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白3(NS3)反式激活的相关基因cDNA消减文库,克隆HCV NS3反式激活相关基因。方法:以HCV NS3表达质粒pcDNA3.1(-)-NS3转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果:文库扩增后得到70个白色克隆,经菌落PCR分析,得到56个200-1000 b插入片段。对所得片段测序,并进行同源性分析,获得6个差异表达的未知序列,可能是NS3反式激活的新的靶基因。结论:成功构建HCV NS3反式激活的相关基因cDNA消减文库,为今后进一步分析、研究病毒蛋白的致病机制奠定基础。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 抑制性消减杂交技术 非结构蛋白3 克隆 细胞裂解液 病毒蛋白 NS3 反式激活 基因

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HCV NS3/4A基因外来表达对Huh7细胞凋亡及DNA损伤应答的影响 被引量：8

20

作者 任来峰 唐子执 +4 位作者 吴惠文 许宁 刘刚 曾鸣 郭莲娣 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1110-1115,共6页

NS3/4A是丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)编码的丝氨酸蛋白酶复合体,是病毒完成自身复制周期的必要成分。该研究为调查NS3/4A对细胞凋亡及DNA损伤应答(DNA-damage response,DDR)的影响,在Huh7细胞中表达了外来NS3/4A基因。通过DAP... NS3/4A是丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)编码的丝氨酸蛋白酶复合体,是病毒完成自身复制周期的必要成分。该研究为调查NS3/4A对细胞凋亡及DNA损伤应答(DNA-damage response,DDR)的影响,在Huh7细胞中表达了外来NS3/4A基因。通过DAPI染色和MTT分析显示,外来表达NS3/4A显著诱导细胞的凋亡和增殖活力的下降。免疫荧光检测结果表明,NS3/4A可明显增加细胞内源性DNA双链断裂(double strand breaks,DSBs)损伤(γH2AX灶点升高);而进一步用X-ray诱导细胞外源性DSBs损伤后,外来表达NS3/4A的细胞显示出明显的DSBs损伤修复缺陷(减缓的γH2AX灶点消退)。免疫印迹法检测结果显示,NS3/4A可抑制喜树碱(Camptothecin,CPT)诱导的ATM第1 981位丝氨酸的磷酸化(pATM1 981)。以上结果提示,NS3/4A基因外来表达可引起细胞DNA损伤,抑制ATM介导的DSBs损伤修复信号,诱导细胞凋亡通路的活化。 展开更多

关键词 DNA损伤 丙型肝炎病毒 DNA双链断裂 非结构蛋白3 4A

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