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通过扩大非甲羟戊酸途径以实现S-柠檬烯在E.coli中的生物合成 被引量：1
1
作者 王建辉 艾莹 杨冬 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期167-171,共5页
单萜烯系香叶基焦磷酸(GPP)环化后的产物.其在食品化工医药能源等领域具有广泛的应用.目前,单萜烯主要从植物精油中纯化获得,因而产量受到限制.代谢工程是近来的新兴生物工程技术.通过改造代谢通路,可以实现在微生物中生产各类重要的产... 单萜烯系香叶基焦磷酸(GPP)环化后的产物.其在食品化工医药能源等领域具有广泛的应用.目前,单萜烯主要从植物精油中纯化获得,因而产量受到限制.代谢工程是近来的新兴生物工程技术.通过改造代谢通路,可以实现在微生物中生产各类重要的产物.要实现单萜烯的微生物生产,除了要引入相应的萜烯合成酶外,还需要提高其上游产物,即异戊二烯焦磷酸(IPP)和GPP的供给.在本项工作中,我们首次通过放大E.coli的非甲羟戊酸途径,增加了IPP前体的合成,再结合引入GPP合酶及S-柠檬烯合成酶,实现了在细菌内生物合成S-柠檬烯.本研究为未来通过微生物发酵方法生产各类单萜烯产物提供了基础. 展开更多
关键词 单萜烯 柠檬烯 非甲羟戊酸 甲基赤藓糖-4-磷酸途径 大肠杆菌 异戊二烯
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类异戊二烯非甲羟戊酸代谢途径的分子生物学研究进展 被引量：18
2
作者 兰文智 余龙江 +1 位作者 蔡永君 李默怡 《西北植物学报》 CAS CSCD 2001年第5期1039-1047,共9页
近期发现的类异戊二烯非甲羟戊酸代谢途径是类异戊二烯化合物生物合成的另一途径。文章对该代谢途径的分子生物学研究进展进行了综述。重点介绍非甲羟戊酸代谢途径的发现和 5 -磷酸脱氧木糖合成酶、5 -磷酸脱氧木糖还原异构酶。
关键词 类异戊二烯化合物 非甲羟戊酸代谢途径 酚分子克隆 次生代谢物
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磷甘霉素和洛伐它汀处理对中国红豆杉悬浮培养细胞生物合成紫杉醇的影响 被引量：10
3
作者 刘智 余龙江 +1 位作者 李春艳 赵春芳 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期199-204,共6页
采用非甲羟戊酸途径抑制剂磷甘霉素和甲羟戊酸途径抑制剂洛伐它汀对中国红豆杉悬浮细胞培养物进行处理。在添加和未添加茉莉酸甲酯诱导的情况下,前者使紫杉醇产量减少了2/5和1/5,后者使紫杉醇产量减少了1/6和1/10,表明两种途径对紫杉醇... 采用非甲羟戊酸途径抑制剂磷甘霉素和甲羟戊酸途径抑制剂洛伐它汀对中国红豆杉悬浮细胞培养物进行处理。在添加和未添加茉莉酸甲酯诱导的情况下,前者使紫杉醇产量减少了2/5和1/5,后者使紫杉醇产量减少了1/6和1/10,表明两种途径对紫杉醇的生物合成都具有贡献,其中非甲羟戊酸途径贡献较大;通过定量PCR技术分别检测两条途径的关键酶5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶(DXR)和3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)mRNA水平的变化,发现两种抑制剂都能够激活hmgr和dxr的转录,表明两种代谢途径之间存在协同作用,共同为紫杉醇的生物合成提供前体。 展开更多
关键词 中国红豆杉(Taxus chinensis) 甲羟戊酸途径 非甲羟戊酸途径 异戊烯焦磷酸(IPP) 紫杉醇 定量PCR
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红豆杉细胞非甲羟戊酸途径关键酶基因dxr的克隆与分析 被引量：13
4
作者 郑清平 余龙江 +3 位作者 刘智 李默怡 向福 杨秦 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期548-553,共6页
近几年的研究表明 ,非甲羟戊酸途径可能是紫杉醇合成的主要途径 ,通过对各种不同来源的非甲羟戊酸途径关键酶 5_磷酸脱氧木酮糖还原异构酶 (DXR)基因同源区域进行比较 ,设计出简并引物 ,利用RT_PCR技术从中国红豆杉 (Taxuschinensis)悬... 近几年的研究表明 ,非甲羟戊酸途径可能是紫杉醇合成的主要途径 ,通过对各种不同来源的非甲羟戊酸途径关键酶 5_磷酸脱氧木酮糖还原异构酶 (DXR)基因同源区域进行比较 ,设计出简并引物 ,利用RT_PCR技术从中国红豆杉 (Taxuschinensis)悬浮细胞中扩增出 5 35bp的基因片段。同源序列比对发现 ,推断的蛋白质序列与Arabi dopsisthaliana (Q9XFS9)、Menthaxpiperita (Q9XES0 )、Synechococcuselongatus (Q8DK30 )、Synechocystissp .PCC 6 80 3(Q5 5 6 6 3)、Nostocsp .PCC 71 2 0 (Q8YP4 9)、Synechococcusleopoliensis (Q9RKT1 )的一致性分别达到 95 %、94 %、80 %、78%、78%和 73%。结合蛋白质保守区、特征区以及进化树分析 ,证实该基因确为dxr基因 。 展开更多
关键词 中国红豆杉悬浮细胞 非甲羟戊酸途径 5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶 RT-PCR
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2,4-二硝基苯肼柱前衍生高效液相色谱法测定1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数 被引量：2
5
作者 胡玥 王雪娇 +1 位作者 李恒 高文运 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1859-1864,共6页
利用含羰基化合物与2,4-二硝基苯肼在酸性条件下反应得到的产物腙对紫外-可见光有吸收的特性,采用柱前衍生高效液相色谱法测定了1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数。酶反应产物1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸在碱性磷酸酶的作用下生成... 利用含羰基化合物与2,4-二硝基苯肼在酸性条件下反应得到的产物腙对紫外-可见光有吸收的特性,采用柱前衍生高效液相色谱法测定了1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数。酶反应产物1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸在碱性磷酸酶的作用下生成去磷酸化产物1-脱氧-D-木酮糖,然后与2,4-二硝基苯肼衍生成腙。衍生化反应的适宜条件为:HClO4浓度为1.5%,反应温度37℃,反应时间60 min,2,4-二硝基苯肼与1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸的摩尔比为6∶1。色谱条件:0～17 min,40%～80%甲醇;18～20 min,40%甲醇。结果表明,本方法具有较高的灵敏度和良好的线性关系,1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸的检出限为1.0 mg/L,在0.005～1.0 g/L范围内线性相关系数为0.999,相对标准偏差小于5.0%(n=3),标准回收率为102.22%。用本方法测得的1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数Km、Vmax和Kcat与文献报道一致。 展开更多
关键词 非甲羟戊酸途径 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶 动力学参数 2 4-二硝基苯肼 高效液相色谱法
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