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特异性克隆编码多肽合成酶还原结构域基因的PCR方法
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作者 张华 赵群飞 +2 位作者 虞沂 陆大年 刘文 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期189-192,共4页
目的采用基因组扫描的手段发现新型还原性多肽合成酶基因,并指导具有新型结构的还原性多肽抗生素的发现。方法根据NRPS的PCP和RE结构域的保守氨基酸序列设计引物,采用PCR扩增的方法克隆还原性多肽合成酶潜在基因。结果成功地克隆了与抗... 目的采用基因组扫描的手段发现新型还原性多肽合成酶基因,并指导具有新型结构的还原性多肽抗生素的发现。方法根据NRPS的PCP和RE结构域的保守氨基酸序列设计引物,采用PCR扩增的方法克隆还原性多肽合成酶潜在基因。结果成功地克隆了与抗肿瘤抗生素阿嗪霉素B生物合成相关的NRPS基因I;对实验室保存的15株不同细菌菌株进行了基因组扫描,获得了5个新型的还原性多肽合成酶潜在基因。结论建立了一种特异性克隆还原性多肽合成酶基因的PCR方法。 展开更多
关键词 核糖体合成酶 PCR克隆 阿嗪霉素B 基因组扫描
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非核糖体肽合成酶(NRPSs)作用机理与应用的研究进展 被引量:22
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作者 王世媛 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期734-737,共4页
许多微生物能利用非核糖体肽合成酶(NRPSs)合成结构复杂、种类繁多的的生物活性肽。非核糖体肽因其独特的理化特性和药理学特性已被广泛关注,极具商业开发潜力。NRPSs由多个模块组成,模块的不同空间排列顺序决定其多肽产物的氨基酸序列... 许多微生物能利用非核糖体肽合成酶(NRPSs)合成结构复杂、种类繁多的的生物活性肽。非核糖体肽因其独特的理化特性和药理学特性已被广泛关注,极具商业开发潜力。NRPSs由多个模块组成,模块的不同空间排列顺序决定其多肽产物的氨基酸序列特异性。NRPSs以多载体巯基化模板机理进行多肽合成,其底物特异性由腺苷酰化结构域和缩合结构域共同实现。目前,人们已经利用天然的NRPSs、某些特定结构域、将已知NRPSs的模块或特定结构域进行组合甚至杂合组合而构建成的新的NRPSs来合成目的多肽。 展开更多
关键词 核糖体 核糖体合成酶 模块 作用机理 应用
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多粘类芽孢杆菌及其脂肽化合物研究进展 被引量:20
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作者 郭赛赛 张敬泽 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期787-798,共12页
芽孢杆菌(Bacillus spp.)和类芽孢杆菌(Paenibacillus spp.)可产生丰富的代谢化合物,尤其是拮抗微生物类的脂肽化合物,是挖掘天然抗菌素的宝库,其中多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa最具有代表性。多粘类芽孢杆菌的生防机制与其脂... 芽孢杆菌(Bacillus spp.)和类芽孢杆菌(Paenibacillus spp.)可产生丰富的代谢化合物,尤其是拮抗微生物类的脂肽化合物,是挖掘天然抗菌素的宝库,其中多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa最具有代表性。多粘类芽孢杆菌的生防机制与其脂肽化合物相关。已发现与微生物拮抗作用相关的脂肽主要有杀镰孢菌素、多粘菌素和十三肽素,是由大的多酶复合体非核糖体肽合成酶(NRPSs)产生。本文在简介多粘类芽孢杆菌脂肽在植物病害防治和医疗应用的基础上,综述了其产生的脂肽化合物的类型和功能,并结合作者的研究工作,重点介绍了与抗菌作用相关的杀镰孢菌素、多粘菌素和十三肽素化合物的结构、生物活性、作用机制、类似物的合成和质谱检测等方面的研究进展,并展望了该领域的未来研究发展趋势,旨在为进一步发现、挖掘和利用脂肽化合物的自然资源提供参考。 展开更多
关键词 多粘类芽孢杆菌 抗生素 杀镰孢菌素 多粘菌素 十三 拮抗微生物 核糖体合成酶 研究进展
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非核糖体肽合成酶结构研究进展 被引量:13
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作者 李红玲 《临床合理用药杂志》 2013年第28期180-181,共2页
非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthetases,NRPS)是一类多功能蛋白质复合体,能识别、激活、转运氨基酸底物并按特定顺序合成非核糖体肽(NRPS).NRPS构成天然生物活性产物的一大类,是细菌和霉菌等的次级代谢产物,具有结构... 非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthetases,NRPS)是一类多功能蛋白质复合体,能识别、激活、转运氨基酸底物并按特定顺序合成非核糖体肽(NRPS).NRPS构成天然生物活性产物的一大类,是细菌和霉菌等的次级代谢产物,具有结构多样性和重要的药用价值.目前发现的NRPS在微生物体内可能作为抗生素、铁载体、毒素、含氮物质的储存场所及调节生长等的信号分子等发挥各种功能[1],而其医药方面的开发应用主要集中于抗生素(如达托霉素)、抗癌药物(如博来霉素)、抗真菌药和免疫抑制剂(如环孢菌素A)等方面. 展开更多
关键词 核糖体合成酶 核糖体 结构 模块
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二酮哌嗪类化合物生物合成研究进展 被引量:13
5
作者 李文利 夏娟 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期111-121,共11页
二酮哌嗪类化合物(Diketopiperazines,DKPs)的特征结构是由两个氨基酸通过肽键缩合而成的环二肽(Cyclic dipeptides),稳定的六元环骨架结构使DKPs在药物化学中成为一个重要的药效团,表现出多种生物活性与药理活性,日益引起人们的极大关... 二酮哌嗪类化合物(Diketopiperazines,DKPs)的特征结构是由两个氨基酸通过肽键缩合而成的环二肽(Cyclic dipeptides),稳定的六元环骨架结构使DKPs在药物化学中成为一个重要的药效团,表现出多种生物活性与药理活性,日益引起人们的极大关注。随着现代生物技术和高通量测序技术的飞速发展,人们对DKPs生物合成的分子机制与酶学机理的认识不断深入,DKPs中氨基酸缩合的分子机制主要有两种:非核糖体肽合成酶(Non-ribosomal peptide synthases,NRPSs)途径和环二肽合成酶(Cycliodipeptide synthases,CDPSs)途径。本文就近年来DKPs的生物合成相关研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 二酮哌嗪类化合物 核糖体合成酶 环二合成酶
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非核糖体多肽合成酶研究进展 被引量:8
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作者 明镇寰 潘建伟 朱睦元 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第5期667-669,共3页
细菌和真菌采用非核糖体系统合成一些重要的多肽类物质 .近年来的研究表明 ,在该系统中发挥关键作用的是一类分子巨大的非核糖体多肽合成酶 .它们由顺序排列的组件构成 ,酶分子结构本身即蕴涵着多肽合成的信息 .对非核糖体多肽合成酶结... 细菌和真菌采用非核糖体系统合成一些重要的多肽类物质 .近年来的研究表明 ,在该系统中发挥关键作用的是一类分子巨大的非核糖体多肽合成酶 .它们由顺序排列的组件构成 ,酶分子结构本身即蕴涵着多肽合成的信息 .对非核糖体多肽合成酶结构和功能的了解 。 展开更多
关键词 核糖体合成酶 研究进展 结构 功能 细菌 真菌
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非核糖体肽合成酶的末端硫酯酶与多肽环化 被引量:9
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作者 方剑 朱鹏 严小军 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期612-618,共7页
非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthetases,NRPSs)能以多载体巯基化模板机制合成各种结构复杂、种类繁多的次生代谢非核糖体环肽.根据环肽末端环化的方式,可分为两大类:大环内酯型和内酰胺型.负责非核糖体环肽最终环化的硫酯... 非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthetases,NRPSs)能以多载体巯基化模板机制合成各种结构复杂、种类繁多的次生代谢非核糖体环肽.根据环肽末端环化的方式,可分为两大类:大环内酯型和内酰胺型.负责非核糖体环肽最终环化的硫酯酶(thioesterase,TE)属于α/β水解酶超家族.该家族包括:脂酶、蛋白酶、酯酶等,其共有特征是含有保守的催化三元件(Ser-His-Asp),起到终止反应和释放产物的功能.TE具有区域定向性(regiospecific)、化学定向性(chemospecific)及立体定向性(stereospecific)的特点,在非核糖体肽(nonribosomal peptide,NRP)的合成反应中具有决定性作用,直接影响到最终环肽的生成.同时,TE由于其特有的环化和水解的双重活性,在体外的线性多肽环化中越来越受到众多学者的关注.综合国内外相关文献,本文着重从TE介导下的产物释放机制和影响因素两个方面综述非核糖体末端硫酯酶的研究进展及其应用. 展开更多
关键词 核糖体合成酶 硫酯
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微生物非核糖体多肽的合成基因簇挖掘及其合成研究进展 被引量:8
8
作者 魏小雅 刘欣 +1 位作者 于宏伟 郭润芳 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期353-361,共9页
非核糖体多肽因其独特的生物活性受到关注,它结构复杂、种类繁多。许多微生物能利用非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthase,NRPSs)合成这些非核糖体多肽。NRPSs是一类分子巨大的蛋白复合物,由一系列催化结构域组成,能识别、... 非核糖体多肽因其独特的生物活性受到关注,它结构复杂、种类繁多。许多微生物能利用非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthase,NRPSs)合成这些非核糖体多肽。NRPSs是一类分子巨大的蛋白复合物,由一系列催化结构域组成,能识别、激活、转运氨基酸底物并按特定顺序合成非核糖体肽(non-ribosomal peptide,NRPs)。其模块化结构涉及的基因在基因组上成簇排列。基于基因组挖掘技术可以预测基因组上的次级代谢产物合成基因簇,并发现新的次级代谢产物。针对非核糖体多肽的生物合成基因簇的分布、挖掘、模块化结构以及合成等方面的研究进行分析,有望为理解非核糖体肽合成酶系统合成生物活性物质的机制和挖掘新型生物活性物质提供依据。 展开更多
关键词 核糖体 核糖体合成酶 基因簇 生物合成
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环肽的分析方法与研究 被引量:7
9
作者 孙雪文 邓洪渊 谭红 《世界科技研究与发展》 CSCD 2005年第4期72-78,共7页
环肽是一种较线性多肽更为稳定的具有多种生理功能和医药价值的环状多肽,在形成荷尔蒙、抗生素、离子载体系统、抗真菌素、癌制剂以及毒素等方面展现出丰富多样的生物活性,具有重大的应用价值。近年来随着生物技术以及生物学与化学领域... 环肽是一种较线性多肽更为稳定的具有多种生理功能和医药价值的环状多肽,在形成荷尔蒙、抗生素、离子载体系统、抗真菌素、癌制剂以及毒素等方面展现出丰富多样的生物活性,具有重大的应用价值。近年来随着生物技术以及生物学与化学领域的交叉发展,不断有新的环肽被分离并鉴定出来。本文综述了自然界存在的一些环肽及环肽的分离纯化、分析方法,并且对环肽的生物合成机制和化学合成进行了概述。 展开更多
关键词 分离 分析 鉴定 核糖体合成酶 生物合成机制 医药价值 分离纯化 生理功能 系统
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非核糖体肽合成酶研究进展 被引量:6
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作者 韩梦瑶 陈晶晶 +1 位作者 乔云明 朱平 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1080-1089,共10页
非核糖体肽合成酶催化合成结构和功能多样的非核糖体肽类化合物,包括20多种已上市的药物。本文重点对近年来在非核糖体肽合成酶结构域及其作用机制研究方面取得的进展,以及新发现的几种非常规装配模式,包括重复使用模块、模块跳跃、反... 非核糖体肽合成酶催化合成结构和功能多样的非核糖体肽类化合物,包括20多种已上市的药物。本文重点对近年来在非核糖体肽合成酶结构域及其作用机制研究方面取得的进展,以及新发现的几种非常规装配模式,包括重复使用模块、模块跳跃、反式上载和A结构域串联进行综述,为寻找新的非核糖体肽类化合物及其新药研发提供理论依据。 展开更多
关键词 核糖体 核糖体合成酶 功能结构域 装配机制
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非核糖体肽合成酶基因腺苷酰化结构域序列克隆及分析 被引量:7
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作者 薛永常 张成锁 李根 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2019年第1期20-25,共6页
微生物许多非核糖体肽类次生代谢产物主要是由非核糖体肽合成酶(NRPS)催化合成。参考Gontang发布的非核糖体肽合成酶(NRPS)通用引物设计扩增NRPS腺苷酰化结构域基因序列的特异引物,从海洋链霉菌L1的基因组DNA中扩增获得一个715 bp的NRP... 微生物许多非核糖体肽类次生代谢产物主要是由非核糖体肽合成酶(NRPS)催化合成。参考Gontang发布的非核糖体肽合成酶(NRPS)通用引物设计扩增NRPS腺苷酰化结构域基因序列的特异引物,从海洋链霉菌L1的基因组DNA中扩增获得一个715 bp的NRPS基因序列。测序结果及比对分析表明该片段属于NRPS腺苷酰化结构域部分序列。对其拟翻译的氨基酸序列组成成分、理化性质进行分析,显示其包含AFD class I超基因家族核心结合区,为NRPS腺苷酰化结构域(A结构域)所在区域。对氨基酸序列的二级结构预测和三级结构模拟,发现与数据库中肠菌素合酶F组分的结构相似。为后续研究A结构域的特异性及完整NRPS基因簇克隆提供了参考。 展开更多
关键词 核糖体合成酶 腺苷酰化结构域 生物信息
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环二肽合酶生物合成途径研究进展 被引量:7
12
作者 张京星 姚婷婷 +2 位作者 刘晶 李花月 李文利 《有机化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2019年第2期328-338,共11页
二酮哌嗪类化合物(DKPs)的特征结构是由两个α-氨基酸通过肽键缩合而成的环二肽(CDPs),稳定的六元环骨架结构使DKPs在药物化学中成为一个重要的药效团,表现出丰富的生物活性.合成可作为药物先导物的DKPs已日益引起人们的关注,其中,开展... 二酮哌嗪类化合物(DKPs)的特征结构是由两个α-氨基酸通过肽键缩合而成的环二肽(CDPs),稳定的六元环骨架结构使DKPs在药物化学中成为一个重要的药效团,表现出丰富的生物活性.合成可作为药物先导物的DKPs已日益引起人们的关注,其中,开展生物合成研究是拓宽其化学结构多样性的一个有效途径.与早期阐明的非核糖体肽合成酶(NRPSs)生物合成途径不同,环二肽合酶(CDPSs)以氨酰-tRNAs(aa-tRNAs)作为底物合成环二肽,其后修饰过程发生在环二肽形成之后.目前国内外已研究的经CDPS途径合成的二酮哌嗪类化合物报道了6例.对近年来环二肽合酶(CDPSs)生物合成途径相关研究进展进行了综述. 展开更多
关键词 二酮哌嗪类化合物 核糖体合成酶 环二 生物合成途径
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生物表面活性剂Surfactin生产菌株的定向改造策略 被引量:6
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作者 胡仿香 李霜 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1711-1721,共11页
表面活性素(Surfactin)是芽胞杆菌属(Bacillussp.)代谢产生的脂肽类生物表面活性剂,是由非核糖体肽合成酶(NRPS)催化而得的一种次级代谢产物。由于surfactin具有稳定性好、可被降解、表面活性好等理化性质以及抑菌、抗肿瘤等生物活性,... 表面活性素(Surfactin)是芽胞杆菌属(Bacillussp.)代谢产生的脂肽类生物表面活性剂,是由非核糖体肽合成酶(NRPS)催化而得的一种次级代谢产物。由于surfactin具有稳定性好、可被降解、表面活性好等理化性质以及抑菌、抗肿瘤等生物活性,在医药、农业、食品、化妆品、石油开采等方面都具有很大的应用潜力。但是,天然菌株产率低、生产成本高等特点限制了surfactin的规模化应用。本文对surfactin的合成机理进行了简要阐述,并针对目前提升surfactin产量和改变结构组分的4种定向改造策略(启动子工程、强化外排分泌、改造NRPS结构域和脂肪酸链合成酶系)进行了综述,最后对surfactin的研究方向进行了展望。 展开更多
关键词 SURFACTIN 核糖体合成酶(NRPS) 启动子工程 定向改造
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真菌源非核糖体肽类药物生物合成及代谢工程 被引量:1
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作者 陈锡玮 张华然 邹懿 《合成生物学》 CSCD 北大核心 2024年第3期571-592,共22页
真菌源非核糖体肽类(NRP)药物因其活性优异、结构多样而备受关注。至今美国食品药品监督管理局(FDA)已批准了数十种真菌NRP药物,包括环孢菌素、头孢菌素和棘白菌素等重磅药物。这些NRP药物均由非核糖体肽合成酶(NRPS)催化形成,其多样化... 真菌源非核糖体肽类(NRP)药物因其活性优异、结构多样而备受关注。至今美国食品药品监督管理局(FDA)已批准了数十种真菌NRP药物,包括环孢菌素、头孢菌素和棘白菌素等重磅药物。这些NRP药物均由非核糖体肽合成酶(NRPS)催化形成,其多样化的结构域和模块数量决定了产物骨架的多样性,从而为天然源活性NRP的开发提供了广阔的空间。此外,骨架结构上的特殊后修饰过程往往为NRP药物提供了强效的药效基团,进一步扩充了NRP结构与活性的多样性。本文综述了真菌NRP药物的研究进展,主要涵盖药物活性、生物合成途径、酶学机理和代谢工程改造等。深入了解真菌NRP药物生物合成途径不仅有助于理解相关的酶学组装机制,还有望为新型真菌NRP药物及其衍生物的深度开发提供重要的指导和参考。 展开更多
关键词 真菌核糖体 核糖体合成酶 生物合成 学组装机制 代谢工程
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非核糖体肽合成酶工程改造研究进展 被引量:6
15
作者 王辰 徐玉泉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1845-1857,共13页
非核糖体肽合成酶合成的非核糖体肽类天然产物具有丰富的结构和多样的功能,在医药、农业、工业等领域具有广泛的应用潜力。利用合成生物技术工程改造非核糖体肽合成酶,在微生物细胞工厂中组合生物合成新型非核糖体肽分子顺应绿色化学的... 非核糖体肽合成酶合成的非核糖体肽类天然产物具有丰富的结构和多样的功能,在医药、农业、工业等领域具有广泛的应用潜力。利用合成生物技术工程改造非核糖体肽合成酶,在微生物细胞工厂中组合生物合成新型非核糖体肽分子顺应绿色化学的发展理念,是国内外学者关注的热点。文中归纳了3种不同的非核糖体肽合成酶工程改造策略,并对近年来相关领域的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 核糖体合成酶 合成生物技术 工程改造 结构域交换 组合生物合成
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蜡样芽孢杆菌致吐毒素的毒性作用与生物合成研究进展 被引量:6
16
作者 崔一芳 郑敏 +1 位作者 丁双阳 朱奎 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期2666-2674,共9页
蜡样芽孢杆菌是一类兼性厌氧的革兰氏阳性杆菌,可以产生芽孢抵抗不良环境,并广泛存在于土壤、水、空气和多种食物中。致病性蜡样芽孢杆菌是常见的食源性条件致病菌之一,其引发的食物中毒主要是由其产生的毒素导致的。致吐毒素cereulide... 蜡样芽孢杆菌是一类兼性厌氧的革兰氏阳性杆菌,可以产生芽孢抵抗不良环境,并广泛存在于土壤、水、空气和多种食物中。致病性蜡样芽孢杆菌是常见的食源性条件致病菌之一,其引发的食物中毒主要是由其产生的毒素导致的。致吐毒素cereulide是致病性蜡样芽孢杆菌产生的重要毒素之一,是一种小分子亲脂性十二环肽,结构性质十分稳定。Cereulide能够引起恶心、呕吐等轻微的食物中毒症状,也可导致如肝性脑病、急性肝脏衰竭等严重致死的疾病。当前对于cereulide的毒性作用机制研究局限于其刺激传入迷走神经引起呕吐症状,以及作为钾离子载体,诱导线粒体膜电位丧失,并最终导致细胞死亡,而对于其导致的严重肝脏和脑部病变的毒性作用机制研究仍十分不足。Cereulide是由cereulide合成酶基因簇(ces)编码,非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide-synthetase,NRPS)系统控制合成的。Cereulide由两个羟基酸和两个氨基酸残基[-D-HIC-D-Ala-L-HIV-L-Val-]经3次迭代组成三聚体缩酚酞,其结构特殊并有很强的代表性,但因NRPS合成系统的灵活性会产生许多变体,因此cereulide的毒性与其生物合成过程息息相关。文章在现有文献报道和研究数据的基础上,总结并提出了cereulide的生物合成机理:首先,cereulide合成基因簇的CesA和CesB结构域分别识别D-α-酮羧酸、L-丙氨酸、L-α-酮异戊酸和L-缬氨酸,通过共价结合形成cereulide的主要合成单元二肽;其次,依照上述过程重复合成四肽;再通过重复反应合成第二个四肽,两个四肽通过酯化形成八肽;再次重复上述反应,形成三元络合的产物肽;最后,由于ces-NRPS的硫酯酶结构域活性中心表面结构阻止外部水分子进入,并诱导内部亲核攻击反应,最终释放出环状cereulide。目前,由产cereulide的蜡样芽孢杆菌引起的食物中毒风险被低估。并且,本团队前期研究发现部分芽孢� 展开更多
关键词 蜡样芽孢杆菌 致吐毒素cereulide 生物合成 核糖体合成酶 毒性
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非核糖体肽合成酶催化的非常规装配模式 被引量:6
17
作者 潘海学 唐功利 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1783-1795,共13页
非核糖体肽合成酶(NRPSs)催化形成复杂肽类天然产物,其中很多显示了很好的生物学活性和医疗价值。常规NRPSs具有模块化和线性催化的特点,然而在生物合成研究过程中也发现了很多具有非常规装配模式的NRPSs。本文针对其中4种非常规装配模... 非核糖体肽合成酶(NRPSs)催化形成复杂肽类天然产物,其中很多显示了很好的生物学活性和医疗价值。常规NRPSs具有模块化和线性催化的特点,然而在生物合成研究过程中也发现了很多具有非常规装配模式的NRPSs。本文针对其中4种非常规装配模式:重复使用、非线性、模块跳跃和非核糖体前肽模式,结合一些代表性例子做一小型综述。 展开更多
关键词 核糖体合成酶 生物合成 天然产物
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苹果树腐烂病菌非核糖体多肽合成酶基因VmNRPS12的功能 被引量:6
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作者 马晨琛 李正鹏 +2 位作者 戴青青 韩青梅 黄丽丽 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1273-1281,共9页
【目的】非核糖体多肽合成酶(NRPS)在植物病原真菌与其寄主互作过程中发挥着重要作用,明确Vm NRPS12基因在苹果树腐烂病菌致病过程中的功能,将为今后深入研究苹果树腐烂病菌NRPS作用机制提供理论依据。【方法】基于苹果树腐烂病菌全基... 【目的】非核糖体多肽合成酶(NRPS)在植物病原真菌与其寄主互作过程中发挥着重要作用,明确Vm NRPS12基因在苹果树腐烂病菌致病过程中的功能,将为今后深入研究苹果树腐烂病菌NRPS作用机制提供理论依据。【方法】基于苹果树腐烂病菌全基因组数据,得到VmNRPS12基因。运用qRT-PCR技术分析VmNRPS12在侵染初期的表达水平,利用Double-joint PCR和PEG介导的原生质体转化获得该基因抗潮霉素的突变体,对突变体进行PCR检测及Southern blot验证得到敲除突变体,进一步通过重新导入该基因全长片段获得互补突变体,最后对野生型、敲除突变体和互补突变体进行菌落、产孢及致病力观察,对检测数据用SPSS软件进行差异显著性分析。【结果】定量分析显示该基因在侵染初期显著上调表达,且接种48 h后的表达量是对照的138.6倍。该基因的敲除突变体在营养生长及产孢方面与野生型菌株03-8相比无显著性差异,但致病力与野生型菌株03-8相比显著减弱,且互补突变体致病力近似恢复至野生型水平。【结论】VmNRPS12基因与苹果树腐烂病菌致病性相关。 展开更多
关键词 Valsa MALI 核糖体合成酶 基因敲除 互补
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非核糖体肽合成酶体系设计和改造研究进展
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作者 黄婷 温赛 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期315-324,I0013,I0014,共12页
自然界中,微生物合成肽类化合物一般通过核糖体途径合成核糖体肽,而非核糖体肽(nonribosomal peptide,NP)是一类不通过核糖体途径、由非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthetase,NRPS)催化合成的肽类化合物。非核糖体肽合成酶... 自然界中,微生物合成肽类化合物一般通过核糖体途径合成核糖体肽,而非核糖体肽(nonribosomal peptide,NP)是一类不通过核糖体途径、由非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthetase,NRPS)催化合成的肽类化合物。非核糖体肽合成酶是一种模块化、线性化组装的酶,以类似流水装配线的方式发挥作用。它们产生的次生代谢物多肽通常具有非常复杂的结构,其中有许多是具有重要药理意义的天然产物。NRPS的模块化性质导致其可以通过模块重组实现产物多样化,基于这个发现,科学家们对其进行了深入研究,以期通过人为改造和重构等方式产生更多更有价值的产物。该文集中介绍近年来通过NRPS人工改造和重组等方式生产多肽的研究,为未来发现和生产新的生物活性化合物提供思路。 展开更多
关键词 核糖体合成酶 腺苷化结构域 核糖体合成酶改造 缩合结构域 模块化结构
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贝莱斯芽孢杆菌抗真菌能力及基因组分析 被引量:5
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作者 陈芳芳 余小妹 +4 位作者 韩晶晶 吴春 庞海月 张书迪 陈煜沛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期2292-2307,共16页
蛋白水解酶及脂肽类化合物具有广谱的抑菌活性,这些抑菌活性蛋白及物质拥有巨大的研究和开发潜力。本研究通过蛋白水解酶平板筛选到一株对6种不同病原真菌有较明显抑菌效果的菌株,命名为X49,对该菌株进行理化分析,并由16S rRNA基因测序... 蛋白水解酶及脂肽类化合物具有广谱的抑菌活性,这些抑菌活性蛋白及物质拥有巨大的研究和开发潜力。本研究通过蛋白水解酶平板筛选到一株对6种不同病原真菌有较明显抑菌效果的菌株,命名为X49,对该菌株进行理化分析,并由16S rRNA基因测序、API测试和电镜分析鉴定菌种,进一步分析其基因组序列,再利用偶氮酪蛋白方法分析蛋白水解酶活性及提取脂肽类化合物进行抗真菌测试。结果表明,该菌株在10–50℃、pH 4.0–9.0范围内均可以生长,对环境盐浓度的适应性较强,在10%NaCl浓度下仍然能够生长。菌种鉴定发现X49菌株属于贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。基因组分析则显示,B. velezensis X49菌株有11个编码的丝氨酸蛋白酶,其基因编号1_894属于S8枯草杆菌蛋白酶家族,与已知具有抗真菌能力的丝氨酸蛋白酶有高达99%的相似度。另外有多达30个编码的非核糖体肽合成酶,其中包含参与合成已知的表面活性素、伊枯草菌素、丰原素、杆菌肽及短杆菌肽脂肽类化合物。胞外蛋白水解酶活性分析发现其在高温下仍具有一定的活性。将B. velezensis X49菌株与中药干姜共发酵后,提取出的脂肽类化合物,其抑菌功效大大提高。由此可见,本研究筛选出的B. velezensis X49菌株对于植物及人类病原菌都有很显著的抑制作用。而与中药共发酵的活性物质可作为未来药物的研究开发。 展开更多
关键词 真菌 核糖体合成酶 蛋白 丝氨酸蛋白 芽孢杆菌 干姜
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